Optimization of transfection methods for Huh­7 and Vero cells: a comparative study

Optimization of transfection methods for Huh­7 and Vero cells: a comparative study

Availability of an efficient transfection protocol is the first determinant in success of gene transferring studies in mammalian cells which is accomplished experimentally for every single cell type. Herein, we provide data of a comparative study on optimization of transfection condition by electrop...

Повний опис

Збережено в:
Бібліографічні деталі
Дата:2012
Автори: Hashemi, A., Roohvand, F., Ghahremani, M.H., Aghasadeghi, M.R., Vahabpour, R., Motevali, F., Memarnejadian, A.
Формат: Стаття
Мова:English
Опубліковано: Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України 2012
Назва видання:Цитология и генетика
Теми:
Оригинальные работы
Онлайн доступ:http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/126499
Теги: Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
Назва журналу:Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Цитувати:Optimization of transfection methods for Huh­7 and Vero cells: a comparative study / A. Hashemi, F. Roohvand, M.H. Ghahremani, M.R. Aghasadeghi, R. Vahabpour, F. Motevali, A. Memarnejadian // Цитология и генетика. — 2012. — Т. 46, № 6. — С. 19-27. — Бібліогр.: 37 назв. — англ.

Репозитарії

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
id irk-123456789-126499
record_format dspace
spelling irk-123456789-1264992017-11-26T03:02:34Z Optimization of transfection methods for Huh­7 and Vero cells: a comparative study Hashemi, A. Roohvand, F. Ghahremani, M.H. Aghasadeghi, M.R. Vahabpour, R. Motevali, F. Memarnejadian, A. Оригинальные работы Availability of an efficient transfection protocol is the first determinant in success of gene transferring studies in mammalian cells which is accomplished experimentally for every single cell type. Herein, we provide data of a comparative study on optimization of transfection condition by electroporation and chemical methods for Huh-7 and Vero cells. Different cell confluencies, DNA/reagent ratios and total transfection volumes were optimized for two chemical reagents including jetPEI™ and Lipofectamine™ 2000. Besides, the effects of electric field strength and pulse length were investigated to improve electroporation efficiency. Transfection of cells by pEGFP-N1 vector and tracking the expression of GFP by FACS and Fluorescence Microscopy analysis were the employed methods to evaluate transfection efficiencies. Optimized electroporation protocols yielded 63.73 ± ± 2.36 and 73.9 ± 1.6 % of transfection in Huh-7 and Vero cells respectively, while maximum achieved level of transfection by jetPEI™ was respectively 14.2 ± 0.69 and 28 ± 1.11 % for the same cells. Post transfectional chilling of the cells did not improve electrotransfection efficiency of Huh-7 cells. Compared to chemical based reagents, electroporation showed the superior levels of transfection in both cell lines. The presented protocols should satisfy most of the experimental applications requiring high transfection efficiencies of these two cell lines. Наличие эффективного протокола трансфекции является первым условием успешных исследований по переносу генов в клетки млекопитающих, что достигается экспериментально для каждого конкретного типа клеток. Здесь мы приводим данные сравнительного исследования по оптимизации условий трансфекции клеток Huh-7 и Vero с помощью электропорации и химическими методами. Для двух химических соединений, jetPEI™ и Lipofectamine™ 2000, были оптимизированы сочетания различных клеток, соотношения ДНК/реагент и общие объемы трансфекции. Кроме того, для улучшения эффективности электропорации было изучено влияние силы электрического поля и длины импульса. Трансфекция клеток с помощью вектора pEGFP-N1, определение экспрессии GFP с помощью FACS и флюоресцентная микроскопия были использованы для оценки эффективности трансфекции. В оптимизированных протоколах достигалась трансфекция на уровне 63.73 ± 2.36 и 73.9 ± 1.6 % в клетках Huh-7 и Vero соответственно, в то время как максимальный уровень трансфекции с помощью jetPEI™ составлял 14.2 ± 0.69 и 28 ± 1.11 % для тех же клеток. Охлаждение клеток после трансфекции не улучшало эффективность электротрансфекции клеток Huh-7. В обеих клеточных линиях электропорация позволила достичь более высокого уровня трансфекции по сравнению с использованием химических реагентов. Представленный протокол может быть пригодным для большинства экспериментальных манипуляций, которые требуют высокого уровня трансфекции исследуемых клеточных линий. 2012 Article Optimization of transfection methods for Huh­7 and Vero cells: a comparative study / A. Hashemi, F. Roohvand, M.H. Ghahremani, M.R. Aghasadeghi, R. Vahabpour, F. Motevali, A. Memarnejadian // Цитология и генетика. — 2012. — Т. 46, № 6. — С. 19-27. — Бібліогр.: 37 назв. — англ. 0564-3783 DOI: 10.3103/S0095452712060035 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/126499 en Цитология и генетика Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України
institution Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection DSpace DC
language English
topic Оригинальные работы
Оригинальные работы
spellingShingle Оригинальные работы
Оригинальные работы
Hashemi, A.
Roohvand, F.
Ghahremani, M.H.
Aghasadeghi, M.R.
Vahabpour, R.
Motevali, F.
Memarnejadian, A.
Optimization of transfection methods for Huh­7 and Vero cells: a comparative study
Цитология и генетика
description Availability of an efficient transfection protocol is the first determinant in success of gene transferring studies in mammalian cells which is accomplished experimentally for every single cell type. Herein, we provide data of a comparative study on optimization of transfection condition by electroporation and chemical methods for Huh-7 and Vero cells. Different cell confluencies, DNA/reagent ratios and total transfection volumes were optimized for two chemical reagents including jetPEI™ and Lipofectamine™ 2000. Besides, the effects of electric field strength and pulse length were investigated to improve electroporation efficiency. Transfection of cells by pEGFP-N1 vector and tracking the expression of GFP by FACS and Fluorescence Microscopy analysis were the employed methods to evaluate transfection efficiencies. Optimized electroporation protocols yielded 63.73 ± ± 2.36 and 73.9 ± 1.6 % of transfection in Huh-7 and Vero cells respectively, while maximum achieved level of transfection by jetPEI™ was respectively 14.2 ± 0.69 and 28 ± 1.11 % for the same cells. Post transfectional chilling of the cells did not improve electrotransfection efficiency of Huh-7 cells. Compared to chemical based reagents, electroporation showed the superior levels of transfection in both cell lines. The presented protocols should satisfy most of the experimental applications requiring high transfection efficiencies of these two cell lines.
format Article
author Hashemi, A.
Roohvand, F.
Ghahremani, M.H.
Aghasadeghi, M.R.
Vahabpour, R.
Motevali, F.
Memarnejadian, A.
author_facet Hashemi, A.
Roohvand, F.
Ghahremani, M.H.
Aghasadeghi, M.R.
Vahabpour, R.
Motevali, F.
Memarnejadian, A.
author_sort Hashemi, A.
title Optimization of transfection methods for Huh­7 and Vero cells: a comparative study
title_short Optimization of transfection methods for Huh­7 and Vero cells: a comparative study
title_full Optimization of transfection methods for Huh­7 and Vero cells: a comparative study
title_fullStr Optimization of transfection methods for Huh­7 and Vero cells: a comparative study
title_full_unstemmed Optimization of transfection methods for Huh­7 and Vero cells: a comparative study
title_sort optimization of transfection methods for huh­7 and vero cells: a comparative study
publisher Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України
publishDate 2012
topic_facet Оригинальные работы
url http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/126499
citation_txt Optimization of transfection methods for Huh­7 and Vero cells: a comparative study / A. Hashemi, F. Roohvand, M.H. Ghahremani, M.R. Aghasadeghi, R. Vahabpour, F. Motevali, A. Memarnejadian // Цитология и генетика. — 2012. — Т. 46, № 6. — С. 19-27. — Бібліогр.: 37 назв. — англ.
series Цитология и генетика
work_keys_str_mv AT hashemia optimizationoftransfectionmethodsforhuh7andverocellsacomparativestudy
AT roohvandf optimizationoftransfectionmethodsforhuh7andverocellsacomparativestudy
AT ghahremanimh optimizationoftransfectionmethodsforhuh7andverocellsacomparativestudy
AT aghasadeghimr optimizationoftransfectionmethodsforhuh7andverocellsacomparativestudy
AT vahabpourr optimizationoftransfectionmethodsforhuh7andverocellsacomparativestudy
AT motevalif optimizationoftransfectionmethodsforhuh7andverocellsacomparativestudy
AT memarnejadiana optimizationoftransfectionmethodsforhuh7andverocellsacomparativestudy
first_indexed 2023-10-18T20:50:57Z
last_indexed 2023-10-18T20:50:57Z
_version_ 1796151267534307328

Схожі ресурси