Роль криоконсервирования в определении компонентного состава и иммунореактивности костного мозга
Представлены данные, характеризующие развитие РТПХ после трансплантации модифицированного по компонентному составу аллогенного костного мозга. Показано, что определенные условия криоконсервирования костного мозга позволяют вследствие ингибиции функции акцессорно-регуляторных элементов снизить иммуно...
Збережено в:
| Дата: | 2006 |
|---|---|
| Автори: | , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Russian |
| Опубліковано: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2006
|
| Назва видання: | Проблемы криобиологии и криомедицины |
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/136653 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Роль криоконсервирования в определении компонентного состава и иммунореактивности костного мозга / И.Ю. Мацевитая, М.В. Останков, А.Н. Гольцев // Проблемы криобиологии. — 2006. — Т. 16, № 1. — С. 66-75. — Бібліогр.: 36 назв. — рос. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
irk-123456789-136653 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
irk-123456789-1366532018-06-17T03:07:52Z Роль криоконсервирования в определении компонентного состава и иммунореактивности костного мозга Мацевитая, И.Ю. Останков, М.В. Гольцев, А.Н. Теоретическая и экспериментальная криобиология Представлены данные, характеризующие развитие РТПХ после трансплантации модифицированного по компонентному составу аллогенного костного мозга. Показано, что определенные условия криоконсервирования костного мозга позволяют вследствие ингибиции функции акцессорно-регуляторных элементов снизить иммунореактивность миелотрансплантата и, как следствие, выраженность РТПХ, повышая его защитный потенциал. Представлено дані, які характеризують розвиток РТПХ після трансплантації модифікованого по компонентному складу алогенного кісткового мозку. Показано, що певні умови кріоконсервування кісткового мозку дозволяють внаслідок інгібіції функції акцесорно-регуляторних елементів знизити імунореактивність мієлотрансплантата і, як наслідок, вираженість РТПХ, підвищуючи його захисний потенціал. The data, characterising GVHR development after transplantation of allogenic bone marrow, modified by component composition, are shown. Certain conditions of bone marrow cryopreservation were demonstrated as enabling to decrease a myelotransplant’s immune reactivity due to inhibiting accessory-regulatory elements function and as a result GVHR manifestation rate by increasing its protective potential. 2006 Article Роль криоконсервирования в определении компонентного состава и иммунореактивности костного мозга / И.Ю. Мацевитая, М.В. Останков, А.Н. Гольцев // Проблемы криобиологии. — 2006. — Т. 16, № 1. — С. 66-75. — Бібліогр.: 36 назв. — рос. http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/136653 615.014.41:616.419-089.873:612.017.1 ru Проблемы криобиологии и криомедицины Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Russian |
| topic |
Теоретическая и экспериментальная криобиология Теоретическая и экспериментальная криобиология |
| spellingShingle |
Теоретическая и экспериментальная криобиология Теоретическая и экспериментальная криобиология Мацевитая, И.Ю. Останков, М.В. Гольцев, А.Н. Роль криоконсервирования в определении компонентного состава и иммунореактивности костного мозга Проблемы криобиологии и криомедицины |
| description |
Представлены данные, характеризующие развитие РТПХ после трансплантации модифицированного по компонентному составу аллогенного костного мозга. Показано, что определенные условия криоконсервирования костного мозга позволяют вследствие ингибиции функции акцессорно-регуляторных элементов снизить иммунореактивность миелотрансплантата и, как следствие, выраженность РТПХ, повышая его защитный потенциал. |
| format |
Article |
| author |
Мацевитая, И.Ю. Останков, М.В. Гольцев, А.Н. |
| author_facet |
Мацевитая, И.Ю. Останков, М.В. Гольцев, А.Н. |
| author_sort |
Мацевитая, И.Ю. |
| title |
Роль криоконсервирования в определении компонентного состава и иммунореактивности костного мозга |
| title_short |
Роль криоконсервирования в определении компонентного состава и иммунореактивности костного мозга |
| title_full |
Роль криоконсервирования в определении компонентного состава и иммунореактивности костного мозга |
| title_fullStr |
Роль криоконсервирования в определении компонентного состава и иммунореактивности костного мозга |
| title_full_unstemmed |
Роль криоконсервирования в определении компонентного состава и иммунореактивности костного мозга |
| title_sort |
роль криоконсервирования в определении компонентного состава и иммунореактивности костного мозга |
| publisher |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| publishDate |
2006 |
| topic_facet |
Теоретическая и экспериментальная криобиология |
| url |
http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/136653 |
| citation_txt |
Роль криоконсервирования в определении компонентного состава и иммунореактивности костного мозга / И.Ю. Мацевитая, М.В. Останков, А.Н. Гольцев // Проблемы криобиологии. — 2006. — Т. 16, № 1. — С. 66-75. — Бібліогр.: 36 назв. — рос. |
| series |
Проблемы криобиологии и криомедицины |
| work_keys_str_mv |
AT macevitaâiû rolʹkriokonservirovaniâvopredeleniikomponentnogosostavaiimmunoreaktivnostikostnogomozga AT ostankovmv rolʹkriokonservirovaniâvopredeleniikomponentnogosostavaiimmunoreaktivnostikostnogomozga AT golʹcevan rolʹkriokonservirovaniâvopredeleniikomponentnogosostavaiimmunoreaktivnostikostnogomozga |
| first_indexed |
2025-07-10T01:48:45Z |
| last_indexed |
2025-07-10T01:48:45Z |
| _version_ |
1837222728698953728 |
| fulltext |
66 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 16, 2006, №1
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 16, 2006, №1
УДК 615.014.41:616.419-089.873:612.017.1
И.Ю. МАЦЕВИТАЯ, М.В. ОСТАНКОВ*, А.Н. ГОЛЬЦЕВ
Роль криоконсервирования в определении компонентного состава
и иммунореактивности костного мозга
UDC 615.014.41:616.419-089.873:612.017.1
I.YU. MATSEVITAYA, M.V. OSTANKOV*, A.N. GOLTSEV
Role of Cryopreservation in Determining Component Composition and
Immune Reactivity of Bone Marrow
Представлены данные, характеризующие развитие РТПХ после трансплантации модифицированного по компонентному
составу аллогенного костного мозга. Показано, что определенные условия криоконсервирования костного мозга позволяют
вследствие ингибиции функции акцессорно-регуляторных элементов снизить иммунореактивность миелотрансплантата и, как
следствие, выраженность РТПХ, повышая его защитный потенциал.
Ключевые слова: криоконсервирование, костный мозг, иммунореактивность, трансплантация, РТПХ.
Представлено дані, які характеризують розвиток РТПХ після трансплантації модифікованого по компонентному складу
алогенного кісткового мозку. Показано, що певні умови кріоконсервування кісткового мозку дозволяють внаслідок інгібіції
функції акцесорно-регуляторних елементів знизити імунореактивність мієлотрансплантата і, як наслідок, вираженість РТПХ,
підвищуючи його захисний потенціал.
Ключові слова: кріоконсервування, кістковий мозок, імунореактивність, трансплантація, РТПХ.
The data, characterising GVHR development after transplantation of allogenic bone marrow, modified by component composition,
are shown. Certain conditions of bone marrow cryopreservation were demonstrated as enabling to decrease a myelotransplant’s
immune reactivity due to inhibiting accessory-regulatory elements function and as a result GVHR manifestation rate by increasing its
protective potential.
Key-words: cryopresevation, bone marrow, immunoactivity, transplantation, GVHR.
* Автор, которому необходимо направлять корреспонденцию:
ул. Переяславская, 23, г. Харьков, Украина 61015; тел.:+38
(057) 373-31-04, факс:+38(057)373-30-84, электронная почта:
cryo@online.kharkov.ua
* To whom correspondence should be addressed: 23, Pereyas-
lavskaya str., Kharkov, Ukraine 61015; tel.:+380 57 373 3104, fax:
+380 57 373 3084, e-mail: cryo@online.kharkov.ua
Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine of the Na-
tional Academy of Sciences of Ukraine, Kharkov, Ukraine
Институт проблем криобиологии и криомедицины
НАН Украины, г. Харьков
Ученые и клиницисты всего мира внесли
существенный вклад в разработку теоретических
основ трансплантологии, в том числе трансплан-
тационной иммунологии, иммуносупрессии, но
многие аспекты этой проблемы требуют даль-
нейшего изучения. Особое место среди них
занимают те, которые касаются трансплантации
КМ, в частности пересадка гистонесовместимого
(аллогенного) материала [16, 29]. Применение
аллогенных миелокариоцитов связано с развитием
иммунного конфликта в виде реакции трансплан-
тата против хозяина (РТПХ) [15, 16, 18, 22, 29].
Установление основного субстрата индукции этой
реакции, а именно иммунокомпетентных Т-лим-
фоцитов [2, 4, 5, 16, 19], обусловило необходимость
поиска тех методических подходов, с помощью
которых можно было бы эти клетки элиминировать
из миелотрансплантата или минимизировать их
активность [24, 26-28]. Однако полученные данные
свидетельствуют о том, что иммунореактивность
антигенраспознающих клеток в миелотранс-
плантате реализуется при участии ряда вспо-
могательных акцессорно-регуляторных элементов
кроветворного микроокружения не только реципи-
Researchers and clinicians all over the world made
a significant contribution in developing theoretical bases
of transplantology, including transplantation immu-
nology, immune suppression, but many aspects of this
problem need further studying. A special place is taken
by those, relating to BM transplantation, in particular,
histoincompatible (allogenic) material engraftment [16,
29]. Application of allogenic myelokaryocytes is
associated with immune conflict development in the
form of graft-versus-host reaction (GVHR) [15, 16,
18, 22, 29]. Establishing the principle substrate of this
reaction induction, namely immune-competent
T-lymphocytes [2, 4, 5, 16, 19], stipulated the necessity
to search for those methodical approaches, using which
we could eliminate these cells out of myelotransplant
or minimise their activity [24, 26-28]. However the
data obtained testify to the fact, that immune reactivity
of antigen-recognising cells in myelotransplant is
realised with participation of some auxiliary, accessory-
regulatory elements of hemopoietic microenvironment
not only of recipient, but transplanted BM as well [4,
5, 19]. Consequently, there are the premises, that
modification of qualitative and quantitative characte-
ristics of component composition of hemopoietic
67 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 16, 2006, №1
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 16, 2006, №1
ента, но и трансплантируемого КМ [4, 5, 19].
Следовательно, есть предпосылки, что мо-
дификация качественных и количественных
характеристик компонентного состава клеток
кроветворного микроокружения может обусловить
изменение иммунореактивности миелотранс-
плантата. Обоснованность такого предположения
подтверждается полученными ранее данными о
возможности модификации функции кроветворных
предшественников КМ изменением его компо-
нентного состава, а именно количественного
содержания акцессорно-регуляторных клеток [5, 6].
Манипуляции с аллогенным КМ iv vitro (фрак-
ционирование, воздействие различных физико-
химических факторов и т.д.) с целью элиминации
тех или иных клеточных популяций представляют
собой основные методические подходы (наряду с
обработкой донора и реципиента алломиело-
трансплантата) снижения иммунореактивности
КМ [4, 20]. Учитывая факт изменения ряда
структурно-функциональных характеристик
биологических объектов после криоконсер-
вирования [5, 7, 19], вполне вероятно криоконсер-
вирование можно считать фактором пред-
обработки КМ in vitro, а следовательно моди-
фикации иммунореактивности при трансплантации
[3, 4, 19, 36]. В связи с этим цель данной работы –
изучение активности РТПХ криоконсервированного
при различных условиях аллогенного КМ.
Материалы и методы
Эксперименты выполнены на 294 мышах линии
СВА и (СВА×С57Вl)F1 массой 22-23 г. Все
манипуляции с животными проводили согласно
принципам “Европейской конвенции о защите
позвоночных животных, используемых для экспери-
ментальных и других целей” (Страсбург, 1985).
Костный мозг получали из бедренных костей
мышей-доноров на среде 199 с соответствующими
добавками. Адгезивные клетки удаляли из
суспензии КМ экспонированием в чашках Петри
при температуре 20-22°С 2 раза по 40 мин.
Для изучения активности РТПХ нативный или
криоконсервированный КМ мышей линии СВА
трансплантировали мышам линии (СВА×С57Вl)F1
внутривенно в дозе 1×106 на 0,3 мл через 4 ч после
облучения в дозе 8 Гр. Условия облучения:
установка РУМ 17; мощность дозы – 38,6 рад/мин,
напряжение – 220 кВ, сила тока – 10 А, фильтры –
1 мм Cu + 1 мм Al. Фокусно-дорзальное расстоя-
ние составляло 45 см. Признаки развития РТПХ
идентифицировали по таким показателям, как
изменение массы тела, выживаемость животных,
оценка индекса лимфоузлов и тимуса. Индекс
рассчитывали делением относительной массы
органа мышей опытных групп на относительную
microenvironment cells can stipulate a change in
myelotransplant’s immune reactivity. The substantiation
of such supposition is confirmed by previously obtained
data about the possibility to modify the functions of
BM hemopoietic precursors by changing its component
composition, namely quantitative content of accessory-
regulatory cells [5,6]. Manipulations with allogenic BM
in vitro (fractionation, effect of various physical and
chemical factors etc.) with the aim to eliminate these
or those cell populations, are the main methodical
approaches (along with allomyelotransplant’s donor
and recipient treatment) to reduce BM immune
reactivity [4, 20]. Taking into consideration the fact of
change in some structural and functional characteristics
of biological objects after cryopreservation [5, 7, 19],
the latter quite probably may act as a factor of BM
preliminary treatment in vitro, and, consequently,
immune reactivity modification at transplantation [3,
4, 19, 36]. In this connection this work was aimed to
study the GVHR activity of allogenic BM, cryo-
preserved under different conditions.
Materials and methods
Experiments were carried-out in 294 mice of CBA
and (CBA×C57B1) F1 lines with 22-23 g weight. All
manipulations with animals were carried-out according
to the principles of European Convention for the
Protection of Vertebrate Animals Used for Experi-
mental and Other Scientific Purposes” (Strasbourg,
1985). Bone marrow was procured from femur bones
of mice-donors on 199 medium with corresponding
additives. Adhesive cells were removed from BM
suspension by double exposure in Petri dishes for 40
min at 20-22°C.
To study GVHR activity the native or cryopreserved
BM of CBA mice was transplanted to the
(CBA×C57B1)F1 mice intravenously in 1×106 dose in
0.3 ml volume in 4 hours after irradiation in 8 Gr dose.
Irradiation conditions were as follows: RUM 17 device;
38.6 rad/min dose power, 220 kV voltage, 10A
amperage, 1 mm Cu + 1 mm Al filters. Focus-dorsal
distance was 45 cm. Signs of GVHR development were
identified by such indices as a change in body weight,
animal survival, estimation of index of lymph nodes
and thymus. Index was calculated by dividing a relative
organ weight of experimental groups’ animals by that
of control group’s ones. Irradiated in the same dose
mice with the syngeneic BM transplant served as the
control. Indices less than 0.7 and higher than 1.3
testified to GVHR development [4, 12, 19].
BM cryopreservation was carried-out with UOP-
06 device, using 2 regimens, we defined as C-I and
C-II. The C-I regimen was as follow: BM cells were
frozen under dimethyl sulfoxide (DMSO) protection
in 10% concentration, C-II regimen comprised PEO-
400 in the same concentration instead of DMSO. In
68 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 16, 2006, №1
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 16, 2006, №1
Рис. 1. Изменение массы тела летально облученных мышей после трансплантации
КМ: – интактного (1-я группа); 123123
123 – интактного аллогенного без АККМ (2-я
группа); – сингенного (3-я группа); 123123 – аллогенного К-II (4-я группа); –
аллогенного К-I (5-я группа);
1234
1234
1234 – аллогенного К-II+АККМ (6-я группа). За 100%
(сплошная линия) приняты показатели интактных животных.
Fig.1. Change in body weight of lethally irradiated mice after BM transplantation: –
intact (1st group);
1234
1234
1234 – intact allogenic without BMAC (2ndgroup); – syngeneic (3rd
group);
1234
1234
1234 – allogenic C-II (4thgroup) ; – allogenic C-I (5th group);
123
123
123 – allogenic C-
II+BMAC (6th group). Indices of intact animals were assumed as 100% (solid line).
Сутки Days
М
ас
са
те
ла
, %
о
т к
он
тр
ол
я
Bo
dy
w
ei
gh
t,
%
o
f c
on
tro
l
массу органа мышей контрольной группы.
Контролем служили облученные в аналогичной
дозе мыши с трансплантатом сингенного КМ.
Индексы меньше 0,7 и больше 1,3 свидетельст-
вовали о развитии РТПХ [4, 12, 19].
Криоконсервирование КМ проводили на уста-
новке УОП-06, используя 2 режима, названные нами
К-I и К-II. Режим К-I: клетки КМ замораживали
под защитой криопротектора диметилсульфоксида
(ДМСО) в концентрации 10%, режим К-II – вместо
ДМСО использовали ПЭО-400 в аналогичной
концентрации. В обоих случаях скорость замора-
живания составляла 1°С/мин от комнатной
температуры до –25°С с последующим погруже-
нием ампул в жидкий азот. Суспензии отогревали
на водяной бане при температуре 39-40°С в
течение минуты с постоянным шутелированием
ампулы.
Содержание в КМ Т-лимфоцитов определяли с
помощью моноклональных антител (МАТ) к
антигенам Thy-1,2, LyT2 и L3T4 в цитотоксическом
тесте прямым пеннинг-методом [2, 8]. Для
постановки пеннинг-метода МАТ к Thy-1,2
антигену вносили в планшеты с ячейками 16 мм в
разведении 1:300 и выдерживали 120 мин при
комнатной температуре. Неприкрепившиеся
антитела удаляли вместе со средой разведения.
После этого в ячейки вносили суспензию КМ в
объеме 0,5 мл с концентрацией 4×106/мл ядросо-
держащих клеток, из которой предварительно
удаляли фракцию адгезивных клеток костного
both cases freezing rate made 1°C/min from room
temperature down to –25°C with following ampoules
immersion into liquid nitrogen. Suspensions were
thawed on water bath at 39-40°C for 1 min with
constant ampoule shuttling.
T-lymphocyte content in BM was determined using
monoclonal antibodies (MAB) to Thy-1,2, LyT2 and
L3T4 antigens in cytotoxic test and by direct penning-
method [2, 8]. To perform penning-method the MAB
to Thy-1,2 antigen were introduced to the plate with
16 mm wells in 1:300 dilution and exposed 120 min at
room temperature. Non-adhered antibodies were
removed together with dilution medium. Afterwards
BM suspension was introduced into the wells in 0.5 ml
volume with 4×106/ml concentration of nucleated cells,
where bone marrow adhesive cells (BMAC) fraction
was preliminarily removed. BMAC fraction was
introduced in a similar way into the wells with adhered
MAB. Cells of both suspensions were exposed at 4°C
for 70 min, cells, the non-adhered to MAB, i.e.
Thy-1,2-cells, were removed. Percentage content of
Thy-1,2+-cells was calculated by difference in the
amount of non-adhered cells and the initial concen-
tration in suspension.
Results of all experiments were statistically
processed by Student-Fisher method [1].
Results and discussion
Using penning-method with Thy-1,2 MAB, we
established that in BM of CBA mice there was not
more than 2% of Thy-1,2+-cells. Along with this, in all
population of BM cells about
15% had adhesive capability,
where Thy-1,2+-cells were
revealed in 3.5 times more in
comparison with non-fractiona-
ted BM (7.25±0.25%). Conse-
quently, allogenic BM of mice
contains insignificant amount of
Thy-1,2+ immune reactive cells
of T-series, potentially capable
to initiate acute form of
GVHR. In fact, during allogenic
BM trans-plantation not acute
form of immune conflict, but
the chro-nic one in the form of
“secon-dary disease” develops
in mice [10, 12].
The main symptoms of
secondary disease begin to be
manifested in mice-recipients
from the 4th week after trans-
plantation of histoincompatible
BM [4, 12]. It is mostly mani-
fested in a constant decrease
of body weight and atrophy of
N
69 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 16, 2006, №1
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 16, 2006, №1
Сутки Days
Рис. 2. Изменение индекса лимфоузлов летально облученных мышей после
трансплантации КМ: – интактного (1-я группа);
1234
1234
1234 – интактного аллогенного без
АККМ (2-я группа); – сингенного (3-я группа);
123
123
123 – аллогенного К-II (4-я группа);
– аллогенного К-I (5-я группа);
123
123
123 – аллогенного К-II+АККМ (6-я группа). За 100%
(сплошная линия) приняты показатели интактных животных.
Fig. 2. Change in lymph nodes index of lethally irradiated mice after BM transplantation:
– intact (1st group); 123123
123 – intact allogenic without BMAC (2ndgroup); – syngeneic (3rd
group); 123123 – allogenic C-II (4thgroup) ; – allogenic C-I (5th group); 123123 – allogenic C-
II+BMAC (6th group). Indices of intact animals were assumed as 100% (solid line).
И
нд
ек
с,
%
к
ко
нт
ро
лю
In
de
x,
%
to
th
e
co
nt
ro
l
мозга (АККМ). Фракцию АККМ аналогичным
образом вносили в лунки с прикрепившимися МАТ.
Клетки обеих суспензий экспонировали при 4°С в
течение 70 мин, неприкрепившиеся к МАТ клетки,
т.е. Thy-1,2-клетки, удаляли. Процентное содер-
жание Thy-1,2+-клеток рассчитывали по разнице
количества неприкрепившихся клеток и исходной
концентрации в суспензии.
Результаты всех экспериментов обрабатывали
статистически по методу Стьюдента-Фишера [1].
Результаты и обсуждение
Используя пеннинг-метод с Thy-1,2 МАТ,
установили, что в КМ мышей линии СВА содер-
жится не более 2% Thy-1,2+-клеток. Наряду с этим,
во всей популяции клеток КМ около 15% обладали
адгезивной способностью, среди которых Thy-1,2+-
клеток было выявлено в 3,5 раза больше по срав-
нению с нефракционированным КМ (7,25±0,25%).
Следовательно, аллогенный КМ мышей содержит
незначительное количество потенциально способ-
ных инициировать острую форму РТПХ Thy-1,2+
иммунореактивных клеток Т-ряда. Действительно,
при трансплантации аллогенного КМ у мышей
развивается не острая форма иммунного конф-
ликта, а хроническая в виде “вторичной болезни”
[10, 12].
Основные симптомы “вторичной болезни”
начинают проявляться у мышей-реципиентов с 4-й
недели после трансплантации гистонесовмес-
тимого КМ [4, 12]. Преж-
де всего это выражается
в постоянном снижении
массы тела и атрофии
структур лимфоидной
ткани, что, по всей види-
мости, является основ-
ной причиной гибели
реципиентов. Получен-
ные данные свидетель-
ствуют о том, что у
облученных животных,
вне зависимости от вида
трансплантируемого
КМ, резкое снижение
массы тела наблюда-
лось на протяжении пер-
вой недели (рис. 1).
К 15-м суткам масса
тела животных всех
групп восстанавлива-
лась почти до уровня
контроля, оставаясь прак-
тически без изменений
до 21-х суток посттранс-
плантационного периода.
lymphoid tissue structures, that is apparently the main
cause of recipient death. Data obtained testify to the
fact the in irradiated animals independently on type of
transplanted BM a sharp decrease in body weight was
observed within first week (Fig. 1).
To the 15th day the body weight in all groups of
animals recovered almost to the control level,
remaining practically without changes to the 21st day
of post- transplantation period. Further the character
of body weight change depended on myelotransplant
type. Thus, a stable keeping of body weight at the level
of control values to the end of observation term was
observed only during syngenic BM transplantation.
A distinct tendency of animals’ body weight
decrease during histoincompatible BM transplantation
was observed in 1st , 5th and 6th groups, beginning from
21st-30th days, by achieving the minimum values to the
70th day of post-transplantation period. Animals for
this period lost to 30-35% of initial body weight. Later
beginning and less manifested decrease in body weight
was noted in animals of the 2nd and 4th groups (with
transplant of allogenic BM, deprived of adhesive cells
and cryopreserved with C-II regimen). From 30th and
70th days the body weight of these groups of animals
was significantly higher than in 5th and 6th ones. Of
importance is that since the 70th day a gradual increase
in body weight of survived animals independently on
myelotransplant type was noted.
Hypoplasia of lymphoid structures of organism is
characteristic for “secondary disease” development
N
70 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 16, 2006, №1
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 16, 2006, №1
Рис. 3. Изменение индекса тимуса летально облученных мышей после
трансплантации КМ: – интактного (1-я группа);
123
123
123 – интактного аллогенного
без АККМ (2-я группа); – сингенного (3-я группа);
1234
1234
1234 – аллогенного К-II (4-я
группа); – аллогенного К-I (5-я группа); 123123 – аллогенного К-II+АККМ (6-я
группа). За 100% (сплошная линия) приняты показатели интактных животных.
Fig. 3. Change in thymus index in lethally irradiated mice after BM transplantation:
– intact (1st group);
123
123
123
123 – intact allogenic without BMAC (2ndgroup); – synge-
neic (3rd group);
123
123
123 – allogenic C-II (4thgroup) ; – allogenic C-I (5th group);
123
123
123 –
allogenic C-II+BMAC (6th group). Indices of intact animals were assumed as 100%
(solid line).
Сутки Days
И
нд
ек
с,
%
к
ко
нт
ро
лю
In
de
x,
%
to
th
e
co
nt
ro
l
В дальнейшем характер изменения массы тела
зависел от вида миелотрансплантата. Так, ста-
бильное сохранение массы тела на уровне конт-
рольных величин до конца срока наблюдения отме-
чали только при трансплантации сингенного КМ.
Четкую тенденцию снижения массы тела
животных при трансплантации гистонесов-
местимого КМ прослеживали в группах 1, 5 и 6,
начиная с 21-30-х суток, достигая минимальных
величин к 70-м суткам посттрансплантационного
периода. Животные за это время теряли до 30-35%
исходной массы тела. Более позднее начало и
менее выраженное снижение массы тела было
отмечено у животных групп 2 и 4 (с трансплан-
татом аллогенного КМ, лишенного адгезивных
клеток и криоконсервированного в режиме К-II).
С 30-х и до 70-х суток масса тела животных этих
групп была достоверно выше, чем животных групп
5 и 6. Важно, что с 70-х суток наблюдалось
постепенное увеличение массы тела выживших
животных вне зависимости от вида миелотранс-
плантата.
Характерным признаком развития “вторичной
болезни” [4, 12, 32, 33] является гипоплазия лимфо-
идных структур организма, что соответствует
полученным данным. Так, у облученных животных
с трансплантатом интактного аллогенного КМ
(группа 1) индекс лимфоузлов и тимуса был
существенно ниже по сравнению с данными,
полученными при трансплантации сингенного КМ
(группа 3 – контрольная). При
этом важно отметить разли-
чие во времени начала сниже-
ния индекса лимфоузлов и
тимуса. Выраженное сниже-
ние данного показателя в
тимусе начиналось с 21-х
суток у всех опытных групп,
что свидетельствует о разви-
тии “вторичной болезни”.
Следует отметить, что
при оценке степени изменения
индекса лимфоузлов в срав-
ниваемых группах просле-
живалась та же закономер-
ность, что и при оценке массы
тела (рис. 2).
На протяжении всего сро-
ка наблюдения были более
выражены изменения индекса
тимуса, чем лимфоузлов. В
течение первого месяца
постлучевого периода в
тимусе не было отмечено
восстановление количества
клеток в органе (рис. 3).
[4, 12, 32, 33], that corresponds to the data obtained.
Thus, in irradiated animals with intact allogenic BM
transplant (1st group) the index of lymph nodes and
thymus was significantly lower in comparison with data,
obtained during syngeneic BM transplantation (3rd
group). At the same time of note is a time difference
in of decrease beginning of lymph nodes and thymus
index A manifested reduction of this index in thymus
began from the 21st day in all experimental groups,
that testified to ”secondary” disease development.
We should note, that when evaluating the degree
of change in lymph nodes index the same regularity
was traced in the compared groups as during body
weigh estimation (Fig. 2).
Within whole observation term the changes in
thymus index were more manifested than those in
lymph nodes. Within first month of post-irradiation
period no recovery of cell amount was observed in
thymus (Fig. 3). In addition, thymus regeneration began
in later post-transplantation terms, being significantly
less manifested. Finally, the minimum values of
absolute values of thymus index were lower than in
lymph nodes. Central immunity organ: thymus can be
considered as being the most sensitive indicator of both
immune conflict beginning at histoincompatible BM
transplantation, and the degree of its manifestation rate.
Of note is that namely by thymus index one manages
ivery properly to determine the less extent of index
deviation in animals of 2nd and 4th groups from 30th till
70th days (Fig. 3).
N
71 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 16, 2006, №1
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 16, 2006, №1
Рис. 4. Выживаемость летально облученных мышей после трансплантации КМ:
– интактного (1-я группа);
123
123
123 – интактного аллогенного без АККМ (2-я
группа); – сингенного (3-я группа);
123
123
123 – аллогенного К-II (4-я группа); –
аллогенного К-I (5-я группа);
123
123
123 – аллогенного К-II + АККМ (6-я группа). За
100% (сплошная линия) приняты показатели интактных животных.
Fig. 4. Survival of lethally irradiated mice after BM transplantation: – intact (1st
group);
1234
1234
1234 – intact allogenic without BMAC (2ndgroup); – syngeneic (3rd group);
123
123
123 – allogenic C-II (4thgroup); – allogenic C-I (5th group);
123
123
123 – allogenic C-II +
BMAC (6th group). Indices of intact animals were assumed as 100% (solid line).
Вы
жи
ва
ем
ос
ть
, %
к
ко
нт
ро
лю
Su
rv
iv
al
, %
to
th
e
co
nt
ro
l
Кроме того, регенерация тимуса начиналась в
более поздние сроки после трансплантации и была
менее выражена. Минимальные значения абсо-
лютных величин индекса тимуса были ниже, чем
в лимфоузлах. Можно считать, что центральный
орган иммунитета – тимус – является наиболее
чувствительным индикатором как начала им-
мунного конфликта при трансплантации гистоне-
совместимого КМ, так и степени его выра-
женности. Важно отметить, что именно по индексу
тимуса наиболее манифестно удается определить
меньшую степень отклонения показателя у
животных групп 2 и 4 с 30-х по70-е сутки (рис. 3).
Оценивая интегральный показатель степени
развития “вторичной болезни”, а именно выжива-
емость реципиентов КМ (рис. 4), следует отме-
тить, что он является четким подтверждением осо-
бенностей проявления синдрома в виде изменения
массы тела реципиентов и индексов органов
иммунной системы. Наименьшая выживаемость
реципиентов отмечена в группах 1, 5, 6 во все сроки
наблюдения.
При сопоставлении данных, представленных на
рис. 3 и 4, установлено, что независимо от вида
трансплантируемого КМ наиболее выраженная
гипоплазия тимуса отмечена на 50-е сутки.
Именно с этого времени резко повышается смерт-
ность реципиентов, что можно характеризовать как
развитие “следовой” реакции на развивающееся
дисфункциональное состояние тимуса – регуля-
тора многих структур нейроиммуноэндокринной
сферы организма [32].
Сутки Days
Феноменология клиничес-
кого применения КМ, а также
полученные в последнее время
данные о механизме развития
“вторичной болезни”, в основе
которой лежит РТПХ, ориенти-
руют нас на то, что основное
звено каскадно развивающей-
ся реакции данного типа – дис-
баланс продукции цитокинов
воспалительного и противовос-
палительного паттернов им-
муновоспалительной реакции
[13, 17, 18, 23, 25, 33]. При этом
важно, что такого рода дисба-
ланс является следствием не
только дисрегуляторного сос-
тояния иммуно-реактивных Т-
лимфоцитов, но и ряда других
фактор-продуцирующих кле-
ток лимфогемопоэтического
микроокружения реципиента и
трансплантата КМ [11, 31, 35],
выступающих в роли акцессор-
When evaluating the integral index of “secondary”
disease development degree, namely the BM recipients
survival (Fig. 4), it should be noted its distinct
confirmation of syndrome manifestation peculiarities
in the form of a change in recipient’s body weight and
immune system organs’ indices. The lowest survival
of recipients was noted in 1st, 5th, 6th groups within all
observation terms.
When comparing the data in Fig. 3 and 4 there was
established that independently on a type of transplanted
BM the most manifested thymus hypoplasia was noted
to the 50th day. It is from that time there was a sharp
increase in recipient’s death rate, that can be
characterised as the development of “trace” response
on progressing dysfunctional state of thymus: regulator
of many structures of neuroimmunoendocrine sphere
of organism [32].
Phenomenology of clinical application, as well as
the recent data about the mechanism of secondary
disease development, which base is GVHD, orient us
to the fact, that the main link of cascade-like
developing reaction of this type is the dysbalance in
cytokine production of inflammatory and anti-
inflammatory patterns of immune inflammatory
reaction [13, 17, 18, 23, 25, 33]. At the same time it is
important that such a dysbalance is a result of not only
dysregulatory state of immune reactive T-lymphocytes,
but some other factor-producing cells of lympho-
hemopoietic microenvironment of BM recipient and
transplant [11, 31, 35], acting as accessory-regulatory
elements [5, 36]. For example, an increased elimination
of these cells from BM or their hyperplasia in this organ
N
72 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 16, 2006, №1
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 16, 2006, №1
was shown to stipulate a change in its hemopoietic
function, which was indirectly affected by T-cells [5,
9, 30, 33, 34]. It proceeds that its component com-
position plays a significant role in manifestation of BM
transplant immune reactivity. The data obtained confirm
the fact, that the manifestation rate of “secondary”
disease development depend in a significant extent by
all selected estimation criteria on a transplant’s com-
ponent composition. Thus, similar results were obtained
in groups of animals with modified allogenic BM
transplanted using different ways. For example,
GVHR-activity of native BM was close to the cryo-
preserved one with C-I regimen, and native without
BMAC – with C-II regimen. Addition into bone
marrow, cryopreserved by C-II regimen, of AC in the
concentration, corresponding to the native BM (15-
18%), “recover” GVHR-activity up to the native one.
Consequently, C-II regimen acts in this case as the
factor of selective elimination from BM transplant of
AC fraction, that was confirmed when determining
colony-forming activity of cryopreserved BM [4, 7].
In addition, this fact confirms the importance of
transplant’s component composition, by proving the
“transplantability” of BMAC, which presence in
allogenic BM “provides” its immune reactivity. It is
not excluded that an increase in BM GVHR-activity
after being “returned” in AC suspension is stipulated
by the augmentation of immune reactive T-cells content
in this fraction. For example, BMAC fraction streng-
thens the induction of acute GVHR at mutual intro-
duction with splenocytes [17, 32]. However, the data
obtained allow to assume that important cells in this
fraction are those, relating to accessory-regulatory
cytokine-producing elements of BM stroma, which
significant role in GVHR initiation was often indicated
[22, 27, 28]. Namely these cells participate in the
development of so-called “cytokine storm” during
histoincompatible BM grafting and acute GVHS form.
Consequently, these cells presence in BM has a certain
importance at chronic GVHR form development as
well, i.e. “secondary” disease.
Conclusions
Thus, the approved cryopreservation regimens act
as eliminative factor or, at least, inhibition of function
of accessory-regulatory BM elements, being a part of
BMAC fraction. By other words, with alteration of
the certain parameters of cryopreservation conditions,
moreover not only of freeze-thawing process, we can
select those, which can reduce immune reactivity of
BM allotransplant, i.e. GVHR manifestation extent.
Data, characterising peculiarities of GVHR
development after transplantation of BM, modified by
component composition confirm this pathology being
a complex multistep process. Cell elements of both
myelotransplant and recipient’s organism participate
но-регуляторных элементов [5, 36]. Показано, на-
пример, что повышенная элиминация данных кле-
ток из КМ или их гиперплазия в этом органе
обусловливают изменение его гемопоэтической
функции, опосредованное влияние на которую
оказывают Т-клетки [5, 9, 30, 33, 34]. Из этого сле-
дует, что в проявлении иммунореактивности
трансплантата КМ существенную роль играет его
компонентный состав. Полученные данные под-
тверждают то, что по всем выбранным критериям
оценки выраженность развития “вторичной болез-
ни” в значительной степени зависит от компонент-
ного состава трансплантата. Так, сходные резуль-
таты получены в группах животных, которым
трансплантировали модифицированный аллоген-
ный КМ. Например, РТПХ-активность нативного
КМ была близка криоконсервированному в режиме
К-I, а нативного без АККМ – в режиме К-II.
Добавление к криоконсервированному в режиме
К-II костному мозгу АК в концентрации, соответ-
ствующей нативному КМ (15-18%), “восстанав-
ливает” РТПХ-активность до уровня нативного.
Следовательно, режим К-II выступает в данном
случае как фактор селективной элиминации из
трансплантата КМ фракции АК, что было под-
тверждено при определении колониеобразующей
активности криоконсервированного костного мозга
[4, 7]. Кроме того, этот факт подтверждает важ-
ность компонентного состава трансплантата, дока-
зывая “трансплантабильность” АККМ, присут-
ствие которых в аллогенном КМ “обеспечивает”
его иммунореактивность. Не исключено, что
повышение РТПХ-активности КМ после “возвра-
щения” в суспензию АК обусловлено повышенным
содержанием в этой фракции иммунореактивных
Т-клеток. Например, фракция АККМ усиливает
индукцию острой РТПХ при их совместном вве-
дении со спленоцитами [17, 32]. Однако полученные
данные позволяют предполагать, что важными в
этой фракции являются клетки, относящиеся к
акцессорно-регуляторным цитокин-продуцирую-
щим элементам стромы КМ, на важную роль
которых в инициации РТПХ неоднократно ука-
зывалось [22, 27, 28]. Именно эти клетки участ-
вуют в развитии так называемого “цитокинного
шторма” и острой формы РТПХ при пересадке
гистонесовместимого КМ. Следовательно, присут-
ствие этих клеток в КМ имеет определенную
значимость и при развитии хронической формы
РТПХ, т.е. “вторичной болезни”.
Выводы
Таким образом, апробированные режимы крио-
консервирования выступают в роли фактора
элиминации или, по крайней мере, ингибиции
функции акцессорно-регуляторных элементов КМ,
73 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 16, 2006, №1
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 16, 2006, №1
входящих в состав фракции АККМ. Другими
словами, варьируя определенными параметрами
условий криоконсервирования, причем не только
процессом замораживания-оттаивания, можно
подобрать те из них, которые могут снижать имму-
нореактивность аллотрансплатата КМ, т.е. степень
проявления РТПХ.
Данные, характеризующие особенности раз-
вития РТПХ после трансплантации модифици-
рованного по компонентному составу КМ, под-
тверждают, что эта патология является сложным
многоступенчатым процессом. В ее индукции и
поддержании течения участвуют клеточные
элементы как миелотрансплантата, так и орга-
низма реципиента. Как отмечено в [14, 28],
важность изменения содержания в трансплантате
АККМ отражается в той или иной степени
практически на всех оцененных показателях. Но
важно и другое, что у животных, перенесших
“вторичную болезнь”, практически до конца срока
наблюдения эти показатели оставались изме-
ненными в сравнении с контролем. Это свидетель-
ствует о том, что даже после минимизации степени
проявления РТПХ выбранным нами путем ее
хронически текущая форма приводит к существен-
ным и длительным нарушениям состояния
“бодигомеостаза” [19] и требует специальной
поддерживающей терапии, включающей и иммуно-
модулирующий компонент [28]. Такое заключение
принято на основании полученных данных о
состоянии центральных и периферических лимфо-
идных структур организма опытных животных.
Действительно, полученные экспериментальные
результаты подтверждают факт развития гипо-
плазии лимфоидных органов при РТПХ как
обязательного компонента данной патологии [12].
Следует подчеркнуть, что такая феноменология
является результатом ответной реакции лимфо-
идных структур на развитие мощного стрессорного
фактора в виде РТПХ [10, 12]. На этом фоне в
органотканевых структурах с высоким содер-
жанием Т-лимфоцитов (в первую очередь, тимусе),
чувствительных к глюкокортикоидам, имеются все
предпосылки развития выраженной инволюции. В
этих условиях в тимусе, как основной структуре,
продуцирующей широчайший спектр регуляторных
субстанций (хемокины, цитомедины и т.д.) [13, 14,
18], меняется сбалансированный спектр их
продукции, что также существенно влияет на
разбалансировку состояния “бодигомеостаза”
[21]. Этот тезис подтверждается четкой корреля-
цией начала периода выраженной инволюции
тимуса и гибели мышей-реципиентов. Данный
факт, по-видимому, имеет прикладное значение для
проведения соответствующей терапии в опреде-
ленные сроки развития синдрома РТПХ, но
in its induction and course maintaining. As noted in
papers [14, 28] a significance of content change in
BMAC transplant affect more or less practically all
estimated indices. But the fact, that in animals, which
had “secondary” disease these indices remained
changed in comparison with the control was also
important. This testifies to the fact, that even after
minimising the extent of GVHR manifestation rate by
the way we chosen, its chronically proceeding form
results in considerable and long-term disorders in “body
homeostasis” state [19] and requires special
maintaining therapy, including immune-modulating
component as well [28]. This was concluded basing
on the data obtained about state of central and
peripheral lymphoid structures of experimental animals’
organism. In fact, the obtained experimental results
confirm the fact of lymphoid organ hypoplasia
development at GVHR as an obligatory component of
this pathology [12]. It should be emphasised that such
phenomenology is a result of lymphoid structure
response on the strong stress factor development in
the form of GVHR [10, 12]. At this background in
organ-tissue structures with a high T-lymphocyte
content (primarily thymus), being sensitive to
glucocorticoids there are all premises for manifested
involution development. Under these conditions in
thymus, as the main structure producing wide range
of regulatory substances (chemokines, cytomedines
etc.) [13, 14, 18] there is a change in balanced range
of their production, that affects in a considerably extent
the misbalancing of “body homeostasis” state as well
[21]. This thesis is confirmed by a distinct correlation
of manifested thymus involution period beginning and
mice-recipients death. Apparently, this fact has an
applied value in performing corresponding therapy
within certain terms of GVHR syndrome development,
but needs further experimental approval.
References
Ashmarin I.P., Vorobiev A.A. Statistical methods for
microbiological research.– Leningrad: Meditsina, 1972.– 180 p.
Belokrylov G.A. Thy-antigen and its functions // Uspekhi sovr.
biologii.– 1986.– 102, N1.– P. 39-51.
Belous A.M., Grischenko V.I. Cryobiology.– Kiev: Naukova
dumka, 1994.– 431 p.
Goltsev A.N. Effect of cryopreservation factors on immune
biological properties and bone marrow hemopoietic cells:
Author’s abstract of thesis for doctor of medical sciences
degree.– Kharkov, 1988.– 35 p.
Goltsev A.N., Ostankova L.V., Dubrava T.G., Lutsenko E.D.
Functional activity of cryopreserved hemopoietic cells (CFUs)
depending on myelotransplant component composition //
Problems of Cryobiology.– 1993.– N3.– P.34-40.
Dygay A.T., Shakhov V.P. Role of intercellular interactions in
hemopoiesis regulation.– Tomsk: Publishing House of Tomsk
University.– 1989.– 224 p.
Cryopreservation of cell suspensions // Edited by A.A.
Tsutsayeva.– Kiev: Naukova dumka, 1983.– 240 p.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
74 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 16, 2006, №1
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 16, 2006, №1
Lymphocytes: Methods // Edited by J. Claus.– Moscow: Mir,
1990.– 386 p.
Semenkov V.F. GVHR usage for specific suppression of
hematotransplantation immunity in adult mice // Bull eksperim,
biol. i med.– 1970.– N7.– P. 78-81.
Romanova O.A. Role of lymphoid cell pool in hemopoiesis
reconstruction of irradiated recipients of lymphomyelotransplant //
Ukr. radiologichny zhurnal.– 2004.– Vol.12, Issue 1.- P.53-57.
Fridenshtein A.Ya., Chajlakhyan R.K., Gerasimov Yu.V. Stem
stromal cells of bone marrow//Stem cells and tumour growth.-
Kiev: Naukova dumka, 1985.– P. 80-87.
Shevelev A.S. “Graft versus host” reaction and transplantation
disease.- Moscow: Meditsina.– 1976.– 237 p.
Antin J.H., Ferrara J.L. Cytokine dysregulation and acute
graft-versus-host disease // Blood.– 1992.– Vol. 80, N12.–
P. 2964-2968.
Bhalla K.S., Foltz R.J. Idiopathic pneumonia syndrome after
syngeneic bone marrow transplant in mice // J. Respir. Crit.
Care. Med.– 2002.– Vol. 15, N166.– P.1579-1589.
Bobe P., Benihoud K., Grandjon D. et al. Nitric oxide mediation
of active immunosuppression associated with graft-versus-
host reaction // Blood.– 1999.– Vol. 94.– N3.– P. 1028-1037.
Cavazzana-Calvo M., Andre-Schmutz I., Hacein-Bey S. et al.
T-cell-depleted HLA non-identical bone marrow trans-
plantation in the child: prevention of graft-versus-host reaction
by administration of donor T lymphocyte alloreactive against
the recipient // J Soc Biol.– 2001.– Vol. 195, N1.– P. 65-68.
Das H., Imoto S. Murayama T. et al. Kinetic analysis of
cytokine gene expression in patients with GVHD after donor
lymphocyte infusion // Bone Marrow Transplant.– 2001.–
Vol. 27, N4.– P. 373-380.
Ferrara J.L.M., Krender W. Role of cytokines in the
immunopathophysiology of acute GVH Disease // Stem cells.–
1996.– Vol. 14, N5.– P. 473-489.
Goltsev A.N., Ostankova L.V., Lutsenko E.D. et al. Usage of
cryopreservation as a proof of the role of cells monocytic-
phagocytic system in modulation of myelotransplant’s GVHR-
activity // Abstr. of 38th Annual Meeting of the Society of
Cryobiology.– Edinburgh, 2001.– P.158.
Greenberg P., Baker S. Immunologic selection of hemopoietic
precursor cells utilising antibody-mediated plate binding
(“penning”) // Blood.– 1985.– Vol. 65, N1.– P. 190-197.
Harada M., Tanigaki S., Akashi K. Cytokine monitoring after
bone marrow transplantation // Exp. Hem.– 1990.– Vol. 18,
N6.– P. 221-229.
Hartwig U.F., Robbers M., Wickenhauser C., Huber C. Murine
acute graft-versus-host disease can be prevented by
depletion of alloreactive T lymphocytes using activation-induced
cell death // Blood.– 2002.– Vol. 99, N8.– P. 3041-3049.
Holler E., Kolb H.J., Moller A. et al. Increased serum levels
of tumor necrosis factor alpha precede major complications
of bone marrow transplantation // Blood.– 1990.– Vol. 75,
N4.– P. 1011-1016.
Irschick E.U., Hladik F., Niederwieser D. et al. Studied of the
mechanism of tolerance of graft-versus-host disease in allogenic
bone marrow recipients at the level of cytotoxic T-cell precursor
frequencies // Blood.– 1979.– Vol. 76, N6.– P. 1622-1629.
Klimpel G.R., Annable C.R., Cleveland M.G. et al.
Immunosuppression and lymphoid hypoplpasia associated with
chronic graft versus host disease is dependent upon IFN-gamma
production // J. Immunol.– 1990.– Vol. 144, N1.– P. 84-93.
Krender W., Ferrara J.L.M. Graft-versus-host disease and
the Th1/Th2 // J. Immunol. Res.– 1996.– N15.– P. 50-73.
Lin T.S., Zahrieh D., Weller E. et al. Risk factors for
cytomegalovirus reactivation after CD6+ T-cell-depleted
allogeneic bone marrow transplantation // Transplantation. –
2002.– Vol. 74, N1.– P. 49-54.
Meijer E., Dekker A.W., Rozenberg-Arska M. et al. Influence
of cytomegalovirus seropositivity on outcome after T cell-
Литература
Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы
микробиологических исследований.– Л.: Медицина, 1972.–
180 с.
Белокрылов Г.А. Thy-антиген и его функции // Успехи совр.
биологии.– 1986.– 102, №1.– С. 39-51.
Белоус А.М., Грищенко В.И. Криобиология.– Киев: Наук.
думка, 1994.– 431 с.
Гольцев А.Н. Влияние факторов криоконсервирования
на иммунобиологические свойства кроветворных клеток
костного мозга: Автореф. дис….д-ра мед. наук.– Харьков,
1988.– 35 с.
Гольцев А.Н., Останкова Л.В., Дубрава Т.Г., Луценко Е.Д.
Функциональная активность криоконсервированных
кроветворных клеток (КОЕс) в зависимости от компо-
нентного состава миелотрансплантата // Пробл.
криобиологии.– 1993.– №3.– С.34-40.
Дыгай А.Т., Шахов В.П. Роль межклеточных взаимо-
действий в регуляции гемопоэза.– Томск: Изд-во Томск.
ун-та.– 1989.– 224 с.
Криоконсервирование клеточных суспензий / Под ред.
А.А. Цуцаевой.– Киев: Наук. думка, 1983.– 240 с.
Лимфоциты: Методы / Под ред. Дж. Клауса.– М.: Мир,
1990.– 386 с.
Семенков В.Ф. Использование РТПХ для специфического
подавления гематотрансплантационного иммунитета у
взрослых мышей // Бюл. эксперим. биол. и мед.– 1970.–
№7.– С. 78-81.
Романова О.А. Роль лімфоїдного пулу клітин у реконституції
кровотворення опромінених реципієнтів лімфомієло-
трансплантату // Укр. радіологічний журнал.– 2004.– Т.12,
Вып. 1.– С. 53-57.
Фриденштейн А.Я., Чайлахян Р.К., Герасимов Ю.В.
Стволовые стромальные клетки костного мозга //
Стволовые клетки и опухолевый рост.– Киев: Наук.
думка, 1985.– С. 80-87.
Шевелев А.С. Реакция “трансплантат против хозяина” и
трансплантационная болезнь.– М.: Медицина, 1976.–
237 с.
Antin J.H., Ferrara J.L. M. Cytokine dysregulation and acute
graft-versus-host disease // Blood.– 1992.– Vol. 80, N12.–
P. 2964-2968.
Bhalla K.S., Foltz R.J. Idiopathic pneumonia syndrome after
syngeneic bone marrow transplant in mice // J. Respir. Crit.
Care. Med.– 2002.– Vol. 15, N166.– P.1579-1589.
Bobe P., Benihoud K., Grandjon D. et al. Nitric oxide mediation
of active immunosuppression associated with graft-versus-
host reaction // Blood.– 1999.– Vol. 94, N3.– P. 1028-1037.
Cavazzana-Calvo M., Andre-Schmutz I., Hacein-Bey S. et al.
T-cell-depleted HLA non-identical bone marrow trans-
plantation in the child: prevention of graft-versus-host reaction
by administration of donor T lymphocyte alloreactive against
the recipient // J Soc Biol.– 2001.– Vol. 195, N1.– P. 65-68.
Das H., Imoto S. Murayama T. et al. Kinetic analysis of
cytokine gene expression in patients with GVHD after donor
lymphocyte infusion // Bone Marrow Transplant.– 2001.–
Vol. 27, N4.– P. 373-380.
Ferrara J.L.M., Krender W. Role of cytokines in the
immunopathophysiology of acute GVH Disease // Stem cells.–
1996.– Vol. 14, N5.– P. 473-489.
Goltsev A.N., Ostankova L.V., Lutsenko E.D. et al. Usage of
cryopreservation as a proof of the role of cells monocytic-
phagocytic system in modulation of myelotransplant’s GVHR-
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
24.
25.
26.
27.
28.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
требует дальнейшего экспериментального под-
тверждения.
75 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 16, 2006, №1
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 16, 2006, №1
depleted bone marrow transplantation: contrasting results
between recipients of grafts from related and unrelated
donors // Clin Infect Dis.– 2002.– Vol. 35, N6.– P. 703-712.
Nagler A., Bishara A., Brautbar C., Barak V. Dysregulation
of inflammatory cytokines in unrelated bone marrow
transplantation // Cytokines Cell Mol.– Vol. 4, N3.– P. 161-167.
Oluwole S.F., Oluwole O.O., DePaz H.A. et al. CD4 CD25
regulatory T cells mediate acquired transplant tolerance //
Transplant Immonology.– 2003.– N11.– P. 287-293.
Pakkala I., Taskinen E., Pakkala S., Raisanen-Sokolowski A.
MC 1288, a vitamin D analog, prevents acute graft-versus-
host disease in rat bone marrow transplantation // Bone
Marrow Transplant.– 2001.– Vol. 8.– P. 869-867.
Rakozy C.K., Mohamed A.N., Vo T.D. et al. CD56+/CD4+
lymphomas and morphologically, immunophenotypically,
cytogenetically and clinically diverse // J. Clin. Pathol.– 2001.–
Vol. 116, N2.– P.168-176.
Serodi J.S., Cooc D.N., Kirby S.L. et al. T-lymphocytes
incapable of producing macrophag inhibitory protein are
impaired in causing graft-versus host disease across a class I
but not class II major histocompatibility complex barrier //
Blood.– 1999.– Vol. 93, N1.– P. 43-50.
Small T.N., Papadopoulos E.B., Boulad F. et. al. Comparison
of immune reconstitution after unrelated and related T-cell-
depleted bone marrow transplantation: effect of patient age
and donor leukocyte infusion // Blood.– 1999.– Vol. 93, N2.–
P. 467-480.
Till S.P., McCulloch E.A. A direct measurement of radiation
sensitivity of normal mouse bone marrow cells // Radiat. Res.–
1961.– N14.– P. 213-222.
Venkataraman M. Cryopreservation-induced enhancement
of interlekin-2 productioning human peripheral blood mononuclear
cells // Cryobiology.– 1992.– Vol. 29, N2.– P.165-175.
Accepted in 22.02.2005
29.
30.
31.
32.
33.
34.
35.
36.
activity // Abstr. of 38th Annual Meeting of the Society of
Cryobiology.– Edinburgh, 2001.– P.158.
Greenberg P., Baker S. Immunologic selection of hemopoietic
precursor cells utilising antibody-mediated plate binding
(“penning”) // Blood.– 1985.– Vol. 65, N1.– P. 190-197.
Harada M., Tanigaki S., Akashi K. Cytokine monitoring after
bone marrow transplantation // Exp. Hem.– 1990.– Vol. 18,
N6.– P. 221-229.
Hartwig U.F., Robbers M., Wickenhauser C., Huber C. Murine
acute graft-versus-host disease can be prevented by
depletion of alloreactive T lymphocytes using activation-induced
cell death // Blood.– 2002.– Vol. 99, N8.– P. 3041-3049.
Holler E., Kolb H.J., Moller A. et al. Increased serum levels
of tumor necrosis factor alpha precede major complications
of bone marrow transplantation // Blood.– 1990.– Vol. 75,
N4.– P. 1011-1016.
Irschick E.U., Hladik F., Niederwieser D. et al. Studied of the
mechanism of tolerance of graft-versus-host disease in allogenic
bone marrow recipients at the level of cytotoxic T-cell precursor
frequencies // Blood.– 1979.– Vol. 76, N6.– P. 1622-1629.
Klimpel G.R., Annable C.R., Cleveland M.G. et al.
Immunosuppression and lymphoid hypoplpasia associated with
chronic graft versus host disease is dependent upon IFN-gamma
production // J. Immunol.– 1990.– Vol. 144, N1.– P. 84-93.
Krender W., Ferrara J.L.M. Graft-versus-host disease and
the Th1/Th2 // J. Immunol. Res.– 1996.– N15.– P. 50-73.
Lin T.S., Zahrieh D., Weller E. et al. Risk factors for
cytomegalovirus reactivation after CD6+ T-cell-depleted
allogeneic bone marrow transplantation // Transplantation. –
2002.– Vol. 74, N1.– P. 49-54.
Meijer E., Dekker A.W., Rozenberg-Arska M. et al. Influence
of cytomegalovirus seropositivity on outcome after T cell-of
cytomegalovirus seropositivity on outcome after T cell-
depleted bone marrow transplantation: contrasting results
between recipients of grafts from related and unrelated
donors // Clin Infect Dis.– 2002.– Vol. 35, N6.– P. 703-712.
Nagler A., Bishara A., Brautbar C., Barak V. Dysregulation
of inflammatory cytokines in unrelated bone marrow
transplantation // Cytokines Cell Mol.– Vol. 4, N3.– P. 161-167.
Oluwole S.F., Oluwole O.O., DePaz H.A. et al. CD4 CD25
regulatory T cells mediate acquired transplant tolerance //
Transplant Immonology.– 2003.– N11.– P. 287-293.
Pakkala I., Taskinen E., Pakkala S., Raisanen-Sokolowski A.
MC 1288, a vitamin D analog, prevents acute graft-versus-
host disease in rat bone marrow transplantation // Bone
Marrow Transplant.– 2001.– Vol. 8.– P. 863-867.
Rakozy C.K., Mohamed A.N., Vo T.D. et al. CD56+/CD4+
lymphomas and morphologically, immunophenotypically,
cytogenetically and clinically diverse // J. Clin. Pathol.– 2001.–
Vol. 116, N2.– P.168-176.
Serodi J.S., Cooc D.N., Kirby S.L. et al. T-lymphocytes
incapable of producing macrophag inhibitory protein are
impaired in causing graft-versus host disease across a class I
but not class II major histocompatibility complex barrier //
Blood.– 1999.– Vol. 93, N1.– P. 43-50.
Small T.N., Papadopoulos E.B., Boulad F. et. al. Comparison
of immune reconstitution after unrelated and related T-cell-
depleted bone marrow transplantation: effect of patient age
and donor leukocyte infusion // Blood.– 1999.– Vol. 93, N2.–
P. 467-480.
Till S.P., McCulloch E.A. A direct measurement of radiation
sensitivity of normal mouse bone marrow cells // Radiat. Res.–
1961, N14.– P. 213-222.
Venkataraman M. Cryopreservation-induced enhancement
of interlekin-2 productioning human peripheral blood mononuclear
cells // Cryobiology.– 1992.– Vol. 29, N2.– P.165-175.
Поступила 22.02.2005
20.
21.
22.
23.
24.
25.
26.
27.
28.
29.
30.
31.
32.
33.
34.
35.
36.
|