Криоконсервирование фетальных фибробластоподобных клеток человека методом витрификации
Збережено в:
| Дата: | 2006 |
|---|---|
| Автор: | |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Russian |
| Опубліковано: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2006
|
| Назва видання: | Проблемы криобиологии и криомедицины |
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/137297 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Криоконсервирование фетальных фибробластоподобных клеток человека методом витрификации / Н.А. Горохова // Проблемы криобиологии. — 2006. — Т. 16, № 4. — С. 423. — рос. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
irk-123456789-137297 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
irk-123456789-1372972018-06-18T03:02:48Z Криоконсервирование фетальных фибробластоподобных клеток человека методом витрификации Горохова, Н.А. Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология 2006 Article Криоконсервирование фетальных фибробластоподобных клеток человека методом витрификации / Н.А. Горохова // Проблемы криобиологии. — 2006. — Т. 16, № 4. — С. 423. — рос. http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/137297 ru Проблемы криобиологии и криомедицины Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Russian |
| topic |
Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология |
| spellingShingle |
Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Горохова, Н.А. Криоконсервирование фетальных фибробластоподобных клеток человека методом витрификации Проблемы криобиологии и криомедицины |
| format |
Article |
| author |
Горохова, Н.А. |
| author_facet |
Горохова, Н.А. |
| author_sort |
Горохова, Н.А. |
| title |
Криоконсервирование фетальных фибробластоподобных клеток человека методом витрификации |
| title_short |
Криоконсервирование фетальных фибробластоподобных клеток человека методом витрификации |
| title_full |
Криоконсервирование фетальных фибробластоподобных клеток человека методом витрификации |
| title_fullStr |
Криоконсервирование фетальных фибробластоподобных клеток человека методом витрификации |
| title_full_unstemmed |
Криоконсервирование фетальных фибробластоподобных клеток человека методом витрификации |
| title_sort |
криоконсервирование фетальных фибробластоподобных клеток человека методом витрификации |
| publisher |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| publishDate |
2006 |
| topic_facet |
Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология |
| url |
http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/137297 |
| citation_txt |
Криоконсервирование фетальных фибробластоподобных клеток человека методом витрификации / Н.А. Горохова // Проблемы криобиологии. — 2006. — Т. 16, № 4. — С. 423. — рос. |
| series |
Проблемы криобиологии и криомедицины |
| work_keys_str_mv |
AT gorohovana kriokonservirovaniefetalʹnyhfibroblastopodobnyhkletokčelovekametodomvitrifikacii |
| first_indexed |
2025-07-10T03:35:24Z |
| last_indexed |
2025-07-10T03:35:24Z |
| _version_ |
1837229436981739520 |
| fulltext |
423
Криоконсервирование фетальных фибробластоподобных клеток человека
методом витрификации
Н.А. ГОРОХОВА
Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины, г.Харьков
Cryopreservation of Human Fetal Fibroblast-like Cells by Vitrification
N.A. GOROKHOVA
Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine of the National Academy of Sciences of Ukraine, Kharkov
Витрификация является одним из альтернативных
способов криоконсервирования. В настоящее время
успешно витрифицируют образцы тканей небольшого
размера, яйцеклетки, зиготы, эмбрионы ранних стадий,
колонии эмбриональных стволовых клеток. Однако
вопросы оптимизации данного метода и разработки
технологических этапов для витрификации клеточных
суспензий остаются актуальными.
Цель работы – определить возможность исполь-
зования метода витрификации для криоконсервирования
суспензии фетальных фибробластоподобных клеток
человека.
В состав витрифицирующих растворов (ВР) включали
ДМСО 10%; ЭГ (10, 15, 20, 25%); 1,2-ПД (10, 15, 20, 25%)
и сахарозу (0,5, 1, 1,5, 2 М), комбинируя их различные
концентрации. Скрининг растворов проводили с учетом
прозрачности стекла, устойчивости к растрескиванию в
азоте и парах азота, а также по отсутствию рекристал-
лизации при отогреве. Для витрификации фиброблас-
топодобных клеток к клеточной суспензии добавляли в
два этапа маточный ВР, затем полученные образцы
объемом 0,5 мл в пластиковых криоконтейнерах
помещали в жидкий азот. Отогрев образцов проводили
на водяной бане при +37°С. Отогретую суспензию
отмывали в 0,5М растворе сахарозы и среде 199,
дополненной 10%-й эмбриональной телячьей сыво-
роткой. Для удаления криопротекторов использовали
двух- и трехступенчатую отмывку. Жизнеспособность
клеток оценивали по трипановому синему и способ-
ности клеток к адгезии в условиях культивирования.
Для определения комбинации наименьших эффек-
тивных концентраций ЭГ, 1,2-ПД и сахарозы, позво-
ляющих ВР сохранить необходимые витрификационные
свойства, проводили скрининг растворов. Из серии
растворов выбрали два, образующие в жидком азоте
прозрачное и стойкое стекло, которое плавилось без
девитрификации при отогреве. Растворы обозначили ВР-1
(10% ДМСО, 20% ЭГ, 20% ПД и 0,5М сахарозы) и ВР-2
(10% ДМСО, 15% ЭГ, 15% ПД и 1М сахарозы).
Жизнеспособность фибробластоподобных клеток
после контакта с ВР и отмывки при двух- и трехступен-
чатой отмывке составляла соответственно для ВР-1:
77,5±4,7 и 68,9±3,7%; ВР-2: 74,8±4,8 и 68,8±2,8%; после
замораживания-отогрева для ВР-1: 65,5±2,7 и 59±3,6%;
для ВР-2: 47,1±1,9 и 33,6±3,8%. Клетки сохраняли
способность прикрепляться к пластику, при этом после
двухступенчатой отмывки они проявляли большую
способность к распластыванию.
Таким образом, была показана возможность приме-
нения метода витрификации для криоконсервирования
клеточных суспензий под защитой ДМСО, ЭГ, 1,2-ПД и
сахарозы.
Vitrification is one of the alternative cryopreservation
methods. Nowadays, small tissue samples, oocytes,
zygotes, embryos at early stages, colonies of embryonic
stem cells are sucessfully vitrified. However, optimizations
tasks of this method and development of technological
stages for vitrification of cell suspensions are still actual.
Purpose of work is to find possibility of using the
vitrification method for cryopreservation suspension of
human fetal fibroblast-like cells.
In composition of vitrifying solutions (VS) included 10%
DMSO, EG (10, 15, 20, 25 %); 1,2 – PD (10, 15, 20, 25%); and
sucrose (0.5, 1, 1.5, 2 M), with combination of their different
concentrations. Solution screening was performed on glass
transparency, resistance to cracking in nitrogen and its
vapours, as well as on absence of recrystalisation during
warming. For vitrification of fibroblast-like cells to cell
suspension the stock VS was added in two stages, after
that the obtained 0.5 ml samples in plastic cryocontainers
were placed into liquid nitrogen. Sample thawing was
performed on water bath at +37°С. The thawed suspension
was washed-out in 0.5 M solution of sucrose and in medium
199, supplemented with 10 % fetal calf serum. For removal
of cryoprotectants two- and three-stage washing-outs were
used. The viability of cells was assessed with trypane blue
staining and adhesion ability of cells during culturing.
For determination of combination the least effective
concentrations of EG, 1.2-PD and sucrose, enabling VS to
keep essential vitrifying properties, solution screening was
performed. Among the series of solutions two were chosen,
those forming in liquid nitrogen the transparent and stable
glass, which melted with no devitrification during warming.
The solutions were defined as VS-1 (10% DMSO, 20% EG,
20% PD and 0.5 sucrose) and VS-2 (10% DMSO, 15% EG,
15% PD and 1M sucrose).
Viability of fibroblast-like cells after the contact with
VS and washing-out during two- and three-step washing-
outs made correspondingly to VS-1:77.5± 4.7 and 68.9± 3.7%;
VS-2: 74.8±4.8 and 68.8± 2.8%; after freezing-thawing – for
VS-1: 65.5±2.7 and 59±3.6%; for VS-2: 47.1±1.9 and 33.6±3.8%.
Cells kept the ability of adhering to plastic, herewith after
two-step washing-out they showed higher ability to
flattening.
In such a way, there was shown the ability to use
vitrification method for cryopreservation of cell suspensions
under protection of DMSO, EG, 1.2-PD and sucrose.
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 16, 2006, №4
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 16, 2006, №4
|