Кріоконсервовані мультипотентні мезенхімальні стромальні клітини у відновленні фертильності тварин із хронічним запаленням яєчників
У роботі досліджено вплив кріоконсервованих мультипотентних мезенхімальних стромальних клітин кісткового мозку за умов внутрішньовенного введення окремо та у комбінації з «Тималіном» (комплекс імунорегуляторних пептидів із тимуса великої рогатої худоби) на фертильність мишей із хронічним запалення...
Gespeichert in:
| Datum: | 2016 |
|---|---|
| Hauptverfasser: | , , , |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | Ukrainian |
| Veröffentlicht: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2016
|
| Schriftenreihe: | Проблемы криобиологии и криомедицины |
| Schlagworte: | |
| Online Zugang: | http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/137382 |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Zitieren: | Кріоконсервовані мультипотентні мезенхімальні стромальні клітини у відновленні фертильності тварин із хронічним запаленням яєчників / Н.О. Волкова, М.С. Юхта, Л.В. Степанюк, Л.Г. Чернишенко // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2016. — Т. 26, № 1. — С. 84–92. — Бібліогр.: 23 назв. — укр. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
irk-123456789-137382 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
irk-123456789-1373822018-06-18T03:03:53Z Кріоконсервовані мультипотентні мезенхімальні стромальні клітини у відновленні фертильності тварин із хронічним запаленням яєчників Волкова, Н.О. Юхта, М.С. Степанюк, Л.В. Чернишенко, Л.Г. Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология У роботі досліджено вплив кріоконсервованих мультипотентних мезенхімальних стромальних клітин кісткового мозку за умов внутрішньовенного введення окремо та у комбінації з «Тималіном» (комплекс імунорегуляторних пептидів із тимуса великої рогатої худоби) на фертильність мишей із хронічним запаленням яєчників. За контроль брали тварин, яким вводили фізіологічний розчин. Встановлено, що внутрішньовенне введення кріоконсервованих мультипотентних мезенхімальних стромальних клітин окремо та у комбінації з «Тималіном» мишам із хронічним запаленням яєчників на 21-шу добу сприяло збільшенню відносної кількості запліднених яйцеклітин під час суперовуляції (на 38 та 33% відповідно), частоти настання вагітності у природному естральному циклі (на 20 та 23% відповідно) та середньої величини послідів (на 98 та 83% відповідно) порівняно з показниками контрольних тварин. Застосування «Тималіну» окремо значуще не впливало на показники. Різниця маси тіла мишенят у дослідній та контрольній групах відмічалася лише на раніх строках спостереження, а на 15-ту добу вона нівелювалася. В работе исследовано влияние криоконсервированных мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток костного мозга при внутривенном введении отдельно и в комбинации с «Тималином» (комплекс иммунорегуляторных пептидов из тимуса крупного рогатого скота) на фертильность мышей с хроническим воспалением яичников. За контроль брали животных, которым вводили физиологический раствор. Установлено, что введение криоконсервированных мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток костного мозга отдельно и в комбинции с «Тималином» мышам с хроническим воспалением яичников на 21-е сутки способствовало увеличению относительного количества оплодотворенных яйцеклеток при суперовуляции (на 38 и 33% соответственно), частоты наступления беременности в естественном эстральном цикле (на 20 и 23% соответственно) и средней величины пометов (на 98 и 83% соответственно) по сравнению с показателями контрольных животных. Применение «Тималина» отдельно значимо не влияло на исследованные показатели. Разница массы тела мышат в экспериментальной и контрольной группах отмечалась только на ранних сроках наблюдения, а на 15-е сутки наблюдения она нивелировалась. The paper describes the influence of multipotent cryopreserved mesenchymal stromal bone marrow cells under conditions of intravenous administration alone and in combination with ‘Thymalinum’ (immune regulatory peptide complex from cattle thymus) on the fertility of mice with chronic inflammation of ovaries. The animals injected with a physiological saline were assumed as the control. To the day 21 following intravenous injection of cryopreserved multipotent mesenchymal stromal cells alone and in combination with ‘Thymalinum’ to the mice with chronic inflammation of ovaries an increase in a relative number of fertilized ova during superovulation (38 and 33%, respectively) was found, as well as in a pregnancy rate in natural estrous cycle (20 and 23% respectively) and the average litter number (98 and 83%, respectively) compared to the control animals. ‘Thymalinum’ application per se did not affect significantly the studied indices. The difference in body weight between the mice of experimental and control groups was observed only at early terms of observation, and to the day 15 it disappeared. 2016 Article Кріоконсервовані мультипотентні мезенхімальні стромальні клітини у відновленні фертильності тварин із хронічним запаленням яєчників / Н.О. Волкова, М.С. Юхта, Л.В. Степанюк, Л.Г. Чернишенко // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2016. — Т. 26, № 1. — С. 84–92. — Бібліогр.: 23 назв. — укр. 0233-7673 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/137382 611.018.2/.6:615.014.41:618.11-002.2 uk Проблемы криобиологии и криомедицины Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Ukrainian |
| topic |
Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология |
| spellingShingle |
Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Волкова, Н.О. Юхта, М.С. Степанюк, Л.В. Чернишенко, Л.Г. Кріоконсервовані мультипотентні мезенхімальні стромальні клітини у відновленні фертильності тварин із хронічним запаленням яєчників Проблемы криобиологии и криомедицины |
| description |
У роботі досліджено вплив кріоконсервованих мультипотентних мезенхімальних стромальних клітин кісткового
мозку за умов внутрішньовенного введення окремо та у комбінації з «Тималіном» (комплекс імунорегуляторних пептидів із
тимуса великої рогатої худоби) на фертильність мишей із хронічним запаленням яєчників. За контроль брали тварин, яким
вводили фізіологічний розчин. Встановлено, що внутрішньовенне введення кріоконсервованих мультипотентних
мезенхімальних стромальних клітин окремо та у комбінації з «Тималіном» мишам із хронічним запаленням яєчників на 21-шу
добу сприяло збільшенню відносної кількості запліднених яйцеклітин під час суперовуляції (на 38 та 33% відповідно), частоти
настання вагітності у природному естральному циклі (на 20 та 23% відповідно) та середньої величини послідів (на 98 та
83% відповідно) порівняно з показниками контрольних тварин. Застосування «Тималіну» окремо значуще не впливало на
показники. Різниця маси тіла мишенят у дослідній та контрольній групах відмічалася лише на раніх строках спостереження,
а на 15-ту добу вона нівелювалася. |
| format |
Article |
| author |
Волкова, Н.О. Юхта, М.С. Степанюк, Л.В. Чернишенко, Л.Г. |
| author_facet |
Волкова, Н.О. Юхта, М.С. Степанюк, Л.В. Чернишенко, Л.Г. |
| author_sort |
Волкова, Н.О. |
| title |
Кріоконсервовані мультипотентні мезенхімальні стромальні клітини у відновленні фертильності тварин із хронічним запаленням яєчників |
| title_short |
Кріоконсервовані мультипотентні мезенхімальні стромальні клітини у відновленні фертильності тварин із хронічним запаленням яєчників |
| title_full |
Кріоконсервовані мультипотентні мезенхімальні стромальні клітини у відновленні фертильності тварин із хронічним запаленням яєчників |
| title_fullStr |
Кріоконсервовані мультипотентні мезенхімальні стромальні клітини у відновленні фертильності тварин із хронічним запаленням яєчників |
| title_full_unstemmed |
Кріоконсервовані мультипотентні мезенхімальні стромальні клітини у відновленні фертильності тварин із хронічним запаленням яєчників |
| title_sort |
кріоконсервовані мультипотентні мезенхімальні стромальні клітини у відновленні фертильності тварин із хронічним запаленням яєчників |
| publisher |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| publishDate |
2016 |
| topic_facet |
Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология |
| url |
http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/137382 |
| citation_txt |
Кріоконсервовані мультипотентні мезенхімальні стромальні клітини у відновленні фертильності тварин із хронічним запаленням яєчників / Н.О. Волкова, М.С. Юхта, Л.В. Степанюк, Л.Г. Чернишенко // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2016. — Т. 26, № 1. — С. 84–92. — Бібліогр.: 23 назв. — укр. |
| series |
Проблемы криобиологии и криомедицины |
| work_keys_str_mv |
AT volkovano kríokonservovanímulʹtipotentnímezenhímalʹnístromalʹníklítiniuvídnovlennífertilʹnostítvarinízhroníčnimzapalennâmâêčnikív AT ûhtams kríokonservovanímulʹtipotentnímezenhímalʹnístromalʹníklítiniuvídnovlennífertilʹnostítvarinízhroníčnimzapalennâmâêčnikív AT stepanûklv kríokonservovanímulʹtipotentnímezenhímalʹnístromalʹníklítiniuvídnovlennífertilʹnostítvarinízhroníčnimzapalennâmâêčnikív AT černišenkolg kríokonservovanímulʹtipotentnímezenhímalʹnístromalʹníklítiniuvídnovlennífertilʹnostítvarinízhroníčnimzapalennâmâêčnikív |
| first_indexed |
2025-07-10T02:33:29Z |
| last_indexed |
2025-07-10T02:33:29Z |
| _version_ |
1837225543342227456 |
| fulltext |
УДК 611.018.2/.6:615.014.41:618.11-002.2
Н.О. Волкова*, М.С. Юхта, Л.В. Степанюк, Л.Г. Чернишенко
Кріоконсервовані мультипотентні мезенхімальні
стромальні клітини у відновленні фертильності
тварин із хронічним запаленням яєчників
UDC 611.018.2/.6:615.014.41:618.11-002.2
N.O. Volkova*, M.S. Yukhta, L.V. Stepanyuk, L.G. Chernyshenko
Cryopreserved Multipotent Mesenchymal Stromal Cells Restore
Fertility in Animals with Chronic Inflammation of Ovaries
Реферат: У роботі досліджено вплив кріоконсервованих мультипотентних мезенхімальних стромальних клітин кісткового
мозку за умов внутрішньовенного введення окремо та у комбінації з «Тималіном» (комплекс імунорегуляторних пептидів із
тимуса великої рогатої худоби) на фертильність мишей із хронічним запаленням яєчників. За контроль брали тварин, яким
вводили фізіологічний розчин. Встановлено, що внутрішньовенне введення кріоконсервованих мультипотентних
мезенхімальних стромальних клітин окремо та у комбінації з «Тималіном» мишам із хронічним запаленням яєчників на 21-шу
добу сприяло збільшенню відносної кількості запліднених яйцеклітин під час суперовуляції (на 38 та 33% відповідно), частоти
настання вагітності у природному естральному циклі (на 20 та 23% відповідно) та середньої величини послідів (на 98 та
83% відповідно) порівняно з показниками контрольних тварин. Застосування «Тималіну» окремо значуще не впливало на
показники. Різниця маси тіла мишенят у дослідній та контрольній групах відмічалася лише на раніх строках спостереження,
а на 15-ту добу вона нівелювалася.
Ключові слова: фертильність, хронічне запалення, яєчники, кріоконсервування, кістковий мозок, мультипотентні мезен-
хімальні стромальні клітини.
Реферат: В работе исследовано влияние криоконсервированных мультипотентных мезенхимальных стромальных
клеток костного мозга при внутривенном введении отдельно и в комбинации с «Тималином» (комплекс иммунорегуляторных
пептидов из тимуса крупного рогатого скота) на фертильность мышей с хроническим воспалением яичников. За контроль
брали животных, которым вводили физиологический раствор. Установлено, что введение криоконсервированных
мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток костного мозга отдельно и в комбинции с «Тималином» мышам с
хроническим воспалением яичников на 21-е сутки способствовало увеличению относительного количества
оплодотворенных яйцеклеток при суперовуляции (на 38 и 33% соответственно), частоты наступления беременности в
естественном эстральном цикле (на 20 и 23% соответственно) и средней величины пометов (на 98 и 83% соответственно)
по сравнению с показателями контрольных животных. Применение «Тималина» отдельно значимо не влияло на
исследованные показатели. Разница массы тела мышат в экспериментальной и контрольной группах отмечалась только
на ранних сроках наблюдения, а на 15-е сутки наблюдения она нивелировалась.
Ключевые слова: фертильность, хроническое воспаление, яичники, криоконсервирование , костный мозг,
мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки.
Abstract: The paper describes the influence of multipotent cryopreserved mesenchymal stromal bone marrow cells under
conditions of intravenous administration alone and in combination with ‘Thymalinum’ (immune regulatory peptide complex from cattle
thymus) on the fertility of mice with chronic inflammation of ovaries. The animals injected with a physiological saline were assumed
as the control. To the day 21 following intravenous injection of cryopreserved multipotent mesenchymal stromal cells alone and in
combination with ‘Thymalinum’ to the mice with chronic inflammation of ovaries an increase in a relative number of fertilized ova during
superovulation (38 and 33%, respectively) was found, as well as in a pregnancy rate in natural estrous cycle (20 and 23%
respectively) and the average litter number (98 and 83%, respectively) compared to the control animals. ‘Thymalinum’ application per
se did not affect significantly the studied indices. The difference in body weight between the mice of experimental and control groups
was observed only at early terms of observation, and to the day 15 it disappeared.
Key words: fertility, chronic inflammation, ovaries, cryopreservation, bone marrow, multipotent mesenchymal stromal cells.
*Автор, якому необхідно надсилати кореспонденцію:
вул. Переяславська, 23, м. Харків, Україна 61015;
тел.: (+38 057) 373-30-34, факс: (+38 057) 373-30-84,
електронна пошта: volkovanatali2006@yandex.ua
*To whom correspondence should be addressed:
23, Pereyaslavskaya str., Kharkov, Ukraine 61015;
tel.:+380 57 373 3034, fax: +380 57 373 3084,
e-mail: volkovanatali2006@yandex.ua
Department of Cryobiology of Reproduction System, Institute for
Problems of Cryobiology and Cryomedicine of the National Acad-
emy of Sciences of Ukraine, Kharkov, Ukraine
Відділ кріобіології системи репродукції, Інститут проблем
кріобіології і кріомедицини НАН України, м. Харків
Надійшла 09.11.2015
Прийнята до друку 01.12.2015
Проблеми кріобіології і кріомедицини. – 2016. – Т. 26, №1. – С. 84–92.
© 2016 Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН Україны
Received November, 11, 2015
Accepted December, 01, 2015
Probl Cryobiol Cryomed 2016; 26(1): 84–92.
© 2016 Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine
оригінальне дослідження research article
Основна причина порушення репродуктивної
функції у жінок – запалення органів малого таза.
Хронічне запалення яєчників є частим захворюван-
ням, яке може супроводжуватися різними гінеколо-
гічними патологіями. За даними МОЗ України
The main cause of disorders in reproductive function
in women is pelvic inflammation. Chronic inflammation
of ovaries is a common disease, which could be accom-
panied by various gynecological pathologies. According
to the Ministry of Health Care of Ukraine data
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 26, №/issue 1, 2016
85
частота запалень органів малого тазу досягає
60–65% від загальної кількості гінекологічних пато-
логій [8]. Довготривалий та рецидивний перебіг
цього захворювання може призводити до безпліддя
у 60% випадків [6].
Не викликає сумніву, що розробка нових підходів
до лікування жіночого безпліддя, у тому числі
асоційованого з хронічними запальними процесами
у внутрішніх статевих органах, є актуальним зав-
данням сучасної медицини. Слід зазначити, що
хронічне запалення зумовлене первинним імуноде-
фіцитом, що провокує перехід гострого запального
процесу в хронічну стадію. У той же час тривалий
запальний процес приводить до зниження імуноло-
гічної реактивності організму, зміненню цитокіно-
вого профілю, що обумовлює статистично значуще
зниження результативності лікування [5]. Під час
вибору схем лікування хронічного запалення яєчни-
ків використовують імуномодулюючі препарати.
Зокрема, у нашому дослідженні був використаний
«Тималін» (ВАТ «Біофарма», Україна) – комплекс
імунорегуляторних пептидів, екстрагованих із ти-
муса великої рогатої худоби, який здійснює стиму-
люючий вплив на клітинний імунітет, процеси
фагоцитозу та продукцію цитокінів. Результати ана-
лізу літератури свідчать про актуальність вивчення
можливості покращення репродуктивної функції
людини та тварин за допомогою кріоконсервованих
клітинних препаратів. Так, наприклад, введення
кріоекстракту плаценти самкам мишей із синдро-
мом реактивного запалення яєчників має виражену
терапевтичну дію та сприяє ефективнішій індукції
суперовуляції під впливом екзогенних гонадотроп-
них гормонів [4].
Важливе значення має вивчення корекції імунної
та гормональної дисфункцій людини та тварин за
допомогою препаратів, до складу яких входять
мультипотентні мезенхімальні стромальні клітини
(ММСК) [17, 20, 23]. Незважаючи на те, що первин-
ний інтерес до ММСК пов’язаний із потенційною
здатністю до регенерації тканин, відкриття їх
імуномодулюючих властивостей дозволяє розши-
рити напрямки клінічного застосування. Під час
активації сигналами запального мікрооточення
ММСК здатні комплексно впливати на клітини
імунної системи за допомогою контактних і гумо-
ральних механізмів та опосередковано коригувати
протікання запального процесу [21].
У попередніх роботах [3, 22] показано, що
внутрішньовенне введення кріоконсервованих
ММСК (кММСК) кісткового мозку тваринам із
хронічним запаленням яєчників чинить модулюючу
дію на перебіг запалення та сприяє відновленню
фолікулогенезу без генерації процесів апоптозу в
ооцитах. Однак залишається відкритим питання
the incidence of inflammation of pelvic organs reaches
60–65% of all the gynecological pathologies [14]. Long-
term and recurrent course of this disease can lead to
infertility in 60% of cases [4].
There is no doubt that the development of new
approaches to treat female infertilities, including those
associated with chronic inflammation of internal geni-
tals, is an urgent task of current medicine. It should be
noted that chronic inflammation is caused largely by
primary immune deficiency and provokes a transition
of an acute inflammation into a chronic phase. At the
same time, a long-lasting inflammation leads to a
reduced immunological reactivity of an organism, and
modification of cytokine profile, which stipulates a
statistically significant reduction in the treatment
efficiency [3]. The protocols of ovarian chronic inflam-
mation treatment involve immune modulating drugs.
In particular, in the present study we used ‘Thymali-
num’ (Biofarma, Ukraine), representing the complex
of immune regulatory peptides extracted from the cattle
thymus, possessing a stimulating effect on a cell
immunity, processes of phagocytosis and production
of cytokines. Analysis of the reported data testified
the relevance of exploring the possible improving of
human and animal reproductive function using the
cryopreserved cell preparations. For example, the
introduction of placenta cryoextract to female mice
with syndrome of ovarian reactive inflammation had a
pronounced therapeutic the effect and promoted more
effective induction of the superovulation influenced by
exogenous gonadotropin hormones [6].
No less important is the study of correction of
immune and hormonal dysfunction of humans and
animals using the medical products, comprising the
multipotent mesenchymal stromal cells (MMSCs) [11,
18, 23]. Despite the fact that the primary interest to
the MMSCs was associated with the potential ability
to tissue regeneration, exploring their immune modu-
latory properties could extend the areas of clinical
application. Signals of inflammatory microenvironment
activate the MMSCs which affect diversely the cells
of immune system through the contact or humoral
mechanisms and thus indirectly correct the inflam-
mation course [19].
Previous papers [21, 22] demonstrated that an intra-
venous injection of cryopreserved MMSCs (cMMSCs)
of bone marrow to the animals with chronic inflam-
mation of the ovaries had a modulating effect on the
course of inflammation and helped to restore a follicle
genesis without initiation of apoptosis in oocytes.
However, there is still a question about the influence
of cell therapy on fertility, which is reduced during
chronic inflammation, as well as the possible use of
cMMSCs for the combined therapy of chronic
inflammation of the ovaries.
86 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 26, №/issue 1, 2016
щодо впливу клітинної терапії на фертильність, яка
знижена на тлі хронічного запалення, а також
можливість використання кММСК для комплексної
терапії хронічного запалення яєчників.
Метою даної роботи було дослідження впливу
кріоконсервованих мультипотентних мезенхімаль-
них стромальних клітин кісткового мозку на фер-
тильність тварин із хронічним запаленням яєчників
при внутрішньовенному введені окремо та у комбі-
нації з «Тималіном».
Матеріали та методи
Усі маніпуляції здійснювали відповідно до вимог
«Європейської конвенції про захист хребетних
тварин, які використовуються для експеримен-
тальних та інших наукових цілей» (Страсбург, 1986),
«Загальних принципів експериментів на тваринах»,
схвалених V Національним конгресом із біоетики
(Київ, 2013) та норм Комісії з біоетики ІПКіК НАН
України. Всі тварини до початку та в процесі
дослідження перебували в умовах віварію на зви-
чайному харчовому раціоні.
У роботі використовували ММСК кісткового
мозку мишей (n = 5), які отримували зі стегнових
кісток. Клітини виділяли шляхом вимивання за
допомогою розчину Хенкса («РАА», Австрія) з
наступним пропусканням крізь голки з поступово
зменшуваним діаметром. Наступний етап вклю-
чав центрифугування при 1500 об/хв (834g) протя-
гом 5 хв. Отриману суспензію клітин ресуспен-
дували в живильному середовищі та висівали зі
щільністю 103 кл/см2 у культуральні флакони
(«РАА»). Живильне середовище культивування
містило: середовище IMDM («PAA»), 10% ембріо-
нальної сироватки (ЕС) великої рогатої худоби
(«HyClone», США), 150 мкг/мл «Гентаміцину»
(«Фармак», Україна) та 10 мкг/мл «Амфотері-
цину Б» («РАА»). Живильне середовище зміню-
вали кожні три доби. Клітини культивували у
стандартних умовах при 37°С в атмосфері 5% СО2.
Після утворення моношару культури пасивували.
Кріоконсервування культур здійснювали під
захистом 10% ДМСО («РАА») з додаванням 20%
ЕС на живильному середовищі. Отриману суспен-
зію поміщали по 1 мл у кріопробірки («Nunc»,
США). Охолодження зразків проводили зі швидкіс-
тю 1 град/хв до –80°С у парах рідкого азоту в умо-
вах кріосховища з подальшим зануренням у рідкий
азот [2]. Зразки зберігали в умовах низькотемпе-
ратурного банка протягом 4 місяців, відігрівали на
водяній бані при 40°С до появи рідкої фази. Кріо-
протектор видаляли повільним додаванням над-
лишкового (1:9) об’єму розчину Хенкса («РАА») з
наступним центрифугуванням при 1500 об/хв (834g)
протягом 5 хв. Цілісність мембрани клітин оціню-
The aim of this research was to study the influence
of cryopreserved multipotent mesenchymal stromal
cells of bone marrow on the fertility of animals with
chronic inflammation of the ovaries during an intra-
venous administration per se and in combination with
‘Thymalinum’.
Materials and methods
All the manipulations with animals were carried out
in accordance with the requirements of the European
Convention for the Protection of Vertebrate Animals
Used for Experimental and Other Scientific Purposes
(Strasbourg, 1986), General Principles of Experiments
in Animals, approved by the 5th National Congress of
Bioethics (Kyiv, 2013) and regulations of the Commis-
sion in Bioethics of the IPC&C of the National
Academy of Sciences of Ukraine. All the animals
before and during the study were under the animals’
house conditions with a standard diet.
The research was performed in murine bone mar-
row MMSCs (n = 5) derived from the femur bones.
The cells were isolated by washing-out with Hanks
solution (PAA, Austria), followed with a passage
through a needle with a gradually decreasing diameter.
The next stage included the centrifugation at 1,500 rpm
(834g) for 5 min. The resulted cell suspension was re-
suspended in culture medium and plated with the
density of 103 cells/cm2 in culture flasks (PAA). The
nutrient culture medium contained: IMDM (PAA), 10%
fetal bovine serum (FBS) (HyClone, USA), Gentamy-
cinum (150 µg/ml) (Farmak, Ukraine) and Ampho-
tericin B (10 µg/ml) (PAA). Nutrient medium was
changed every three days. The cells were cultured
under standard conditions at 37°C in 5% CO2
atmo-
sphere. The cultures were passaged after the formation
of monolayer.
The cultures were cryopreserved under the
protection of 10% DMSO (PAA) supplemented with
20% FBS in culture medium. The resulted suspension
was placed into 1 ml cryovial (Nunc,USA). The
samples were cooled at a rate of 1 deg/min down to
–80°C in liquid nitrogen vapors in a cryotank, and then
immersed into liquid nitrogen [20]. The samples were
stored under conditions of low temperature bank over
4 months, then thawed in a water bath at 40°C till the
appearance of a liquid phase. Cryoprotective agents
were removed by slow addition of excessive (1:9)
volume of Hanks solution (PAA) followed by
centrifugation at 1,500 rpm (834g) for 5 min. The
integrity of cell membranes was evaluated by the test
of Trypan blue supravital dye exclusion (Sigma, USA).
Experimental animals were 100 mature outbred
female white mice weighing of 18–20 g. In order to
simulate a chronic inflammation of the ovaries the mice
were once intraperitoneally injected with inactivated
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 26, №/issue 1, 2016
87
вали за тестом на виключення суправітального
барвника трипанового синього («Sigma», США).
У якості експериментальних тварин було
використано 100 безпорідних статевозрілих білих
мишей-самок із масою тіла 18–20 г. Із метою
виклику хронічного запалення яєчників мишам
одноразово внутрішньочеревинно вводили інактиво-
вану вакцину Staphylococcus aureus штам 209
(50×106 мікробних тіл у 0,3 мл фізіологічного
розчину на тварину), після чого мишей тримали в
умовах віварію 21 добу без лікування.
Для отримання вакцини готували добову
культуру S. aureus за стандартним методом [7],
яку змивали з агару 5 мл фізіологічного розчину,
визначали титр методом стандартних розведень
та інкубували за температури 75°С протягом
години. Після інкубації суспензію клітин розводили
до необхідної концентрації та використовували в
експерименті.
На 22-гу добу з моменту введення інактивованої
вакцини S. aureus тварин розділили на групи:
контрольна група – з внутрішньовенним введенням
фізіологічного розчину (0,2 мл); дослідна група 1 –
з п’ятикратним підшкірним введенням 0,25 мг
«Тималіну» з інтервалом у добу; дослідна група 2 –
з одноразовим внутрішньовенним введенням
кММСК кісткового мозку (0,5×105 життєздатних
клітин у 0,2 мл розчину Хенкса на тварину);
дослідна група 3 – з одноразовим внутрішньовен-
ним введенням кММСК кісткового мозку (0,5×105
життєздатних клітин у 0,2 мл розчину Хенкса на
тварину) у комбінації з п'ятиразовим підшкірним
введенням 0,25 мг «Тималіну» з інтервалом у добу.
Дозу «Тималіну» розраховували за методом
дозування речовин для ссавців із урахуванням
констант біологічної активності та коефіцієнта
видової стійкості. Також була сформована група
інтактних тварин аналогічної маси та віку.
На 21-шу добу від початку терапії у мишей ви-
кликали суперовуляцію за стандартною схемою [1]:
внутрішньом’язово вводили 5 МО гонадотропіну
сироватки жеребних кобил («Intervet», Нідерланди)
та з інтервалом 46–48 годин 7,5 МО людського
хоріонічного гонадотропіну («Organon», Нідерлан-
ди). Одразу після ін’єкції людського хоріонічного
гонадотропіну самок підсаджували до фертильних
самців тієї ж лінії на ніч. Факт спарювання встанов-
лювали за наявністю копулятивної пробки. Ооцити/
ембріони отримували не раніше ніж через 48 годин
після ін'єкції людського хоріонічного гонадотропіну
з відпрепарованих яйцеводів піддослідних тварин,
тричі відмивали в середовищі Дюльбекко з
додаванням 10% ЕС при 35...37°С та підраховували
загальну кількість ооцитів/ембріонів.
vaccine of Staphylococcus aureus strain 209 (50×106
microbial bodies in 0.3 ml saline per animal) after which
the mice were kept under animals house conditions
21 days without any treatment.
To obtain the vaccines a daily S. aureus culture
was prepared by standard method [5], which was
washed-off from agar with 5 ml saline, the titer was
determined by standard dilution and incubated at 75°C
for one hour. Following incubation, the cell suspension
was diluted to the desired concentration and used in
the experiment.
To day 22 from the moment of introduction of inacti-
vated S. aureus vaccine the animals were separated
into groups: the control group represented an intrave-
nous injection of saline (0.2 mL); experimental group 1
had the five-fold subcutaneous introduction of 0.25 mg
‘Thymalinum’ (JSC ‘Biofarma’, Ukraine) with one day
interval; experimental group 2 animals were once
intravenously injected with bone marrow cMMSCs
(0.5×105 of viable cells in 0.2 ml Hanks solution per
animal); experimental group 3 had a single intravenous
injection of bone marrow cMMSCs (0.5×105 of viable
cells in 0.2 ml Hanks solution per animal) in combi-
nation with five-fold subcutaneous administration of
0.25 mg ‘Thymalinum’ with one day interval. Dose of
‘Thymalinum’ was counted by the method of the dose
proportion of substances for mammals, taking into
account biological activity constants and coefficient
of species sustainability. In addition, there was formed
the group of intact animals of similar weight and age.
To day 21 following the therapy start a superovu-
lation was provoked in mice according to the standard
procedure [13]: 5 IU pregnant mare serum gonadotro-
pin (Intervet, the Netherlands) and 7.5 IU human
chorionic gonadotropin (Organon, the Netherlands)
with an interval of 46–48 hrs were intramuscularly
injected. Just after the injection of human chorionic
gonadotropin the females were placed overnight with
fertile males of the same line. The fact of occurred
mating was established by the presence of copulation
plugs. Oocytes/embryos were obtained not earlier than
48 hrs later the injection of human chorionic gonado-
tropin from the prepared oviducts of experimental
animals, thrice washed in Dulbecco medium supple-
mented with 10% FBS at 35...37°C and total number
of oocytes/embryos was counted.
To perform fertilization in natural estrous cycle each
female in 21 days from the beginning of therapy was
placed to a fertile male for the period of 5 days (1
estrous cycle). The frequency of fertilization was
calculated as the ratio of females which became
pregnant in each series of experiments to the total
number of placed animals in the group multiplied by
100%. After birth of pups their average number was
88 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 26, №/issue 1, 2016
Для запліднення у природному естральному
циклі кожну самку через 21 добу від початку терапії
підсаджували до фертильного самця терміном на
5 діб (1 естральний цикл). Частоту запліднення
розраховували як співвідношення кількості самок,
які завагітніли у кожній серії експериментів, до
загальної кількості підсаджених тварин у групі
помножене на 100%. Після народження мишенят
визначали їхню середню кількість на 1 самку,
обчислювали виживаність з 0 по 5-ту добу життя
(відношення числа мишенят, які дожили до 5-ї доби,
до народжених живими) та оцінювали динаміку
маси тіла протягом 15 діб життя.
Під час статистичної обробки результатів вико-
ристовували однофакторний дисперсійний аналіз,
t-критерій Стьюдента та програму «Statistica 8»
(«StatSoft», США). Критичний рівень значущості
дорівнював 0,05. Результати представлені у вигля-
ді середніх значень та їх похибок (M ± m).
Результати та обговорення
Першим етапом дослідження була проведена
порівняльна оцінка кількості ембріонів і незаплід-
нених ооцитів після циклу гормональної стимуляції
яєчників. Під час запліднення самок за умов супер-
овуляції було визначено, що у інтактних тварин від-
носна кількість запліднених яйцеклітин, що розви-
валися до стадії двоклітинних ембріонів, складала
(98,8 ± 0,7)% (рис. 1). У групі контролю з введенням
фізіологічного розчину цей показник не перевищу-
вав (56,5 ± 5,5)%. У тварин із терапією «Тималіном»
спостерігали тенденцію до збільшення кількості
запліднених яйцеклітин (61,4 ± 7,1)% порівняно з
контрольною групою, але ця різниця була статистич-
но незначущою. Найкращі показники були отримані
у дослідних групах із введенням кММСК окремо
та у комбінації з «Тималіном» (відносна кількість
запліднених яйцеклітин, що розвивалися до стадії
двоклітинних ембріонів, була значуще вищою від
контролю та складала (77,9 ± 6,3) та (75,3 ± 4,9)%
відповідно). Виходячи з вищенаведеного, можна
стверджувати про зниження відповіді яєчників
тварин із хронічним запаленням яєчників на гормо-
нальну стимуляцію. Клітинна терапія сприяла від-
новленню оваріального резерву та збільшенню
відносної кількості ембріонів за умов суперовуляції.
Схожа тенденція спостерігалася й у серіях екс-
периментів із заплідненням самок у природному
естральному циклі. Частота настання вагітності у
інтактних тварин у середньому склала (86,6 ± 5,4)%
(рис. 2), що знаходиться у межах норми для мишей
даного віку [14]. На фоні хронічного запалення
яєчників та введення фізіологічного розчину або
«Тималіну» частота настання вагітності у природ-
ному естральному циклі знижувалася порівняно з
Рис. 1. Середня кількість ембріонів ( ) та незаплідне-
них яйцеклітин ( ) у яйцеводах дослідних тварин під
час запліднення за умов суперовуляції після різних
методів лікування хронічного запалення яєчників.
Fig. 1. Average number of embryos ( ) and unfertilized
oocytes ( ) in oviducts of experimental animals following
fertilization under superovulation conditions after different
treatments of chronic inflammation of ovaries.
determined per one female, survival was calculated
from 0 to 5th day of life (the ratio of mice survived up
to the 5th day to those which were living at birth) and
there was evaluated the dynamics of body weight
during 15 days of life.
For statistical analysis of the results there was used
a single-factor analysis of variance and t-Student test
with the software Statistica 8 (Statsoft, USA). The
critical level of significance equals to 0.05. Results are
presented as the means and their errors (M ± m).
Results and discussion
The first research stage was to comparatively
estimate the number of embryos and unfertilized
oocytes after a cycle of hormonal stimulation of the
ovaries. Fertilization of intact females under super-
ovulation conditions gave a relative number of fertilized
eggs, developing up to the stage of two-cell embryos,
equal to (98.8 ± 0.7)% (Fig. 1). In the control group
with a physiological saline administration this index did
not exceed (56.5 ± 5.5)%. Animals treated with
‘Thymalinum’ showed a tendency of an increased
number of fertilized eggs (61.4 ± 7.1)% if compared
with the control group, but this difference was
statistically insignificant. The highest values were
obtained in experimental groups with the introduced
cMMSCs alone and in combination with ‘Thymalinum’
(relative number of fertilized eggs, developed up to
the stage of two-cell embryos was significantly higher
vs. the control and made (77.9 ± 6.3)% and (75.3 ±
4.9)%, respectively). Based on the above, one can
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Інтакт/Intact Контроль
Control
«Тималін»
Thymalinum
кММСК
cMMSC
кММСК +
«Тималін»
cMMSC +
Thymalinum
Вм
іс
т,
%
C
on
te
nt
, %
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Інтакт/Intact Контроль
Control
«Тималін»
Thymalinum
кММСК
cMMSC
кММСК +
«Тималін»
cMMSC +
Thymalinum
*
* *
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 26, №/issue 1, 2016
89
інтактними тваринами. Проте внутрішньовенне
введення кММСК окремо та у комбінації з «Тима-
ліном» сприяло збільшенню цього показника
порівняно з контролем (на 20 та 23% відповідно).
Середня кількість мишенят у потомстві інтакт-
них тварин знаходилася у межах фізіологічних
значень (рис. 3). У контрольній групі цей показник
був у 2,2 рази нижче відносно інтакту. У групах із
терапією кММСК окремо та у комбінації з «Тима-
ліном» середня кількість мишенят у потомстві була
вірогідно вижчою, ніж у контролі (на 98 та 83%
відповідно). Представлені результати в цілому
узгоджуються з даними літератури, які вказують
на позитивну кореляцію між показниками плідності
та фізичного стану вагітних тварин [9].
Наявні осередки запалення в органах малого
тазу безсумнівно впливають на внутрішньоут-
робний розвиток плода та перебіг постнатального
періоду онтогенезу [11]. Саме тому необхідною
стала оцінка рівня виживання та динаміки маси тіла
мишенят, народжених від самок із хронічним
запаленням яєчників після різних методів терапії.
Постнатальний розвиток потомства в усіх гру-
пах тварин характеризувався високою виживаніс-
тю. Так, у період від народження по 5-ту добу
виживання потомства інтактних тварин складало
(97,4 ± 1,2)%, контрольної групи – (96,5 ± 1,1)%,
тварин із терапією «Тималіном» і кММСК окремо
та у комбінації – (97,3 ± 1,5), (95,9 ± 0,9) і (98,2 ±
0,6)% відповідно.
Динаміка маси тіла мишенят упродовж перших
15-ти діб дещо відрізнялася між групами (таблиця).
Рис. 2. Частота настання вагітності у мишей після різних
методів терапії хронічного запалення яєчників; * – різ-
ниця статистично значуща з відповідним показником
у групі контролю (p < 0,05).
Fig. 2. Pregnancy onset rate in mice after various therapies
of chronic inflammation of ovaries; * – statistically
significant difference with corresponding index in the
control group (p < 0.05).
argue about lower ovarian response to hormonal
stimulation in the animals with chronic inflammation.
Cell therapy contributed to the restoration of ovarian
reserve and increasing in the relative number of
embryos under superovulation conditions.
A similar trend was observed in the series of
experiments with insemination of females in natural
estrous cycle. The incidence of pregnancy in intact
animals was in average (86.6 ± 5.4)% (Fig. 2), being
within the normal range for mice of this age [2].
Under a chronic inflammation of the ovaries and
introduction of either saline or ‘Thymalinum’ a preg-
nancy rate in natural estrous cycle decreased if
compared to the intact animals. However, intravenous
injection of cMMSCs per se and in combination with
‘Thymalinum’ contributed to an increase in this index
if compared with the controls (20 and 23%, respec-
tively).
The average number of pups in offspring of intact
animals was within physiological values (Fig. 3). In
the control group, this value was 2.2 times lower vs.
the intact one. In the groups with cMMSCs therapy
alone and in combination with ‘Thymalinum’ an ave-
rage number of offspring of the mice was significantly
higher than in the controls (98 and 83%, respectively).
The results are generally consistent with the reported
data, pointing to a positive correlation between fertility
rates and physical condition of pregnant animals [15].
Existing inflammation foci in pelvic organs surely
affect an intrauterine fetal development and the course
of ontogenesis postnatal period [10]. Therefore an
assessment of the survival rate and body weight
0
2
4
6
8
10
12
Інтакт/Intact Контроль
Control
«Тималін»
Thymalinum
кММСК
cMMSC
кММСК +
«Тималін»
cMMSC +
Thymalinum
*
*
*
Ча
ст
от
а
на
ст
ан
ня
в
аг
іт
но
ст
і,
%
Pr
eg
na
nc
y
on
se
t r
at
e,
%
С
ер
ед
ня
к
іл
ьк
іс
ть
м
иш
ен
ят
у
п
от
ом
ст
ві
Av
er
ag
e
nu
m
be
r o
f p
up
s
in
th
e
lit
te
r
Рис. 3. Середня кількість мишенят у потомстві мишей
після різних методів терапії хронічного запалення
яєчників; * – різниця статистично значуща з відповідним
показником у групі контролю (p < 0,05).
Fig. 3. Average number of pups in offspring of mice after
various therapies of chronic inflammation of ovaries;
* – statistically significant difference with corresponding
index in the control group (p < 0.05).
ниравтапурГ
fopuorG
slamina
абод,яннежеретсопскортС
syad,mretnoitavresbO
1 5 01 51
ткатнІ
tcatnI 75,0±43,2 35,0±12,3 73,1±71,5 37,1±36,6
ьлортноK
lortnoC 91,0±52,1 09,0±42,2 11,1±82,4 04,1±67,6
»ніламиТ«
'munilamyhT' 83,0±97,1 *55,0±50,3 *33,1±00,5 94,1±33,6
КСММк
CSMMc *82,0±77,1 94,0±30,3 *12,1±68,4 80,1±35,6
+КСММк
»ніламиТ«
+CSMMc
'munilamyhT'
*33,0±09,1 86,0±29,2 *31,1±33,5 71,1±98,6
90 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 26, №/issue 1, 2016
Приріст маси тіла мишенят в інтактній групі впро-
довж усього терміну спостереження знаходився у
межах фізіологічної норми для мишей даного віку
[14]. Приріст маси тіла інтактних тварин і тварин
із дослідних груп незначущо відрізнявся. У групі
контролю з введенням фізіологічного розчину на
ранніх строках спостерігався уповільнений набір
маси тіла мишенят на відміну від решти тварин,
проте на 15-ту добу ця різниця нівелювалася.
Таким чином, внутрішньовенне введення
кММСК кісткового мозку позитивно впливає на
фертильність, яка знижена на тлі хронічного запа-
лення яєчників, а саме під час суперовуляції поси-
люється відповідь яєчників на гормональні стимули
та збільшується відносна кількість запліднених
яйцеклітин, частота настання вагітності та середня
величина послідів у природному естральному циклі.
Оваріальний резерв, тобто здатність яєчників
відповідати на гормональну стимуляцію зростан-
ням повноцінних фолікулів, які містять здорові
яйцеклітини, є базовим показником жіночої фер-
тильності [10, 12]. У тварин із клітинною терапією
під час стимуляції суперовуляції відбувалося
дозрівання набагато більшої кількості фолікулів у
порівнянні з контрольною групою. Під впливом
клітинної терапії вдалося не тільки отримати ооцити
потрібної якості, а й домогтися високої частости
настання вагітності.
Коригуючий вплив внутрішньовенного введення
кММСК кісткового мозку на протікання запального
observation terms a slow rise of pups body weight was
observed unlike other animals, but to day 15 the
difference disappeared.
Thus, intravenous injection of cMMSCs of bone
marrow positively affected the fertility, which was
reduced on a background of chronic inflammation of
the ovaries, i. e. an ovarian response to hormonal stimuli
strengthened and the relative number of fertilized
oocytes increased during superovulation, as well as
the frequency of pregnancy onset and average number
of litters in natural estrous cycle.
An ovarian reserve, i. e. the ability of ovaries to
respond to hormonal stimulation by a growth of fully
functional follicles, containing healthy oocytes is a basic
measure of female fertility [9, 16]. In the animals
underwent cell therapy the stimulation of superovulation
resulted in the maturation of much more follicles as
compared to the control group. Under the influence of
cell therapy we succeded to get not only the desired
oocyte quality but also a high frequency of pregnancy
incidence.
Corrective effect of intravenous injection of bone
marrow cMMSCs on the course of inflammation in
ovaries is likely associated with immune modulatory
properties of MMSCs. As there was reported [7, 8,
19] activation of the MMSCs immunosuppressive
function in the body follows the launch IFN-γ alone or
together with TNFα, IL-1α and IL-1β. It has been
shown [1] that among many growth factors, produced
by bone marrow MMSCs, in particular VEGF, HGF
Динаміка середньої маси тіла мишенят у потомстві мишей після
різних методів терапії хронічного запалення яєчників
Dynamics of average body weight in mice offspring after various
therapies of chronic inflammation of ovaries
Примітка: * – різниця статистично значуща з відповідним показником у
групі контролю (р < 0,05).
Note: * – statistically significant difference with corresponding index in the con-
trol group (p < 0.05).
dynamics of pups born by the females with
chronic inflammation of the ovaries after
various therapies became necessary.
Postnatal development of offspring in
all the groups of animals was charac-
terized with a high survival. In particular,
within the period from the birth to the 5th
day of life the offspring survival in intact
animals made (97.4 ± 1.2)%, for the
control group it was (96.5 ± 1.1)%, for
those having therapy with ‘Thymalinum’
and cMMSCs alone and in combination
were (97.3 ± 1.5), (95.9% ± 0.9) and
(98.2 ± 0.6)%, respectively.
Dynamics of body weight of pups
during the first 15 days of life slightly
differed in varios groups (Table). An in-
crease in a body weight in pups of the
intact group throughout the observation
period was within physiological norm for
mice of this age [2]. An increase in body
weight of intact animals and those from
experimental groups differed insigni-
ficantly. In the control group with the
introduced physiological saline at early
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 26, №/issue 1, 2016
91
and IGF-1 help restore the structure and function of
the ovaries. Due to these findings we can assume that
the ability of MMSCs to secrete the cytokines and
growth factors causes the regenerative changes at
tissue and organ levels.
Due to ‘homing’, the existence of which is proven
in many experimental studies, there is a migration of
cells to a damaged tissue [18, 19], providing the
implementation of the effects of cell therapy at the
level of organs. Importantly, that the method of intra-
venous injection is safe and non-invasive, and therefore
a systemic administration of MMSCs can be one of
the areas to treat chronic ovarian inflammation.
Conclusions
Thus, an intravenous injection of cryopreserved
bone marrow mesenchymal stromal cells to the animals
with chronic inflammation of ovaries contributes to
increased ovarian response to hormonal stimuli, a
relative number of fertilized eggs during superovulation
and frequency of pregnancy onset rate as well as an
average size of litters in natural estrous cycle. Based
on the presented results of the conducted research
the possibility of using the cryopreserved MMSCs as
reparative and immune modulating material in cell
therapy of gynecology diseases could be suggested.
процесу в яєчниках ймовірно пов’язаний з імуномо-
дулюючими властивостями ММСК. За даними
деяких авторів [15, 16, 21] для активації імуносупре-
сивної функції ММСК в організмі відбувається
запуск механізмів дії IFN-γ окремо або разом із
TNF-α, IL-1α та IL-1β. Було показано [13], що
серед багатьох факторів росту, які продукують
ММСК кісткового мозку, саме VEGF, HGF і IGF-1
спри-яють відновленню функції та структури
яєчників. Згідно з отриманими результатами можна
вважати, що здатність ММСК до секреції цитокінів
та ростових факторів обумовлює регенераторні
зміни на тканинному та органному рівнях.
Завдяки процесу «хомінгу», існування якого
доведено в багатьох експериментальних роботах,
відбувається міграція клітин до ушкоджених тканин
[18, 19], що забезпечує реалізацію ефектів клітинної
терапії на рівні органів. Важливо, що методика
внутрішньовенного введення – безпечна та неінва-
зивна, а отже, системне введення ММСК може
бути одним із напрямків терапії хронічного запа-
лення яєчників.
Висновки
Таким чином, внутрішньовенне введення кріо-
консервованих мезенхімальних стромальних клітин
кісткового мозку тваринам із хронічним запаленням
яєчників сприяє збільшенню відповіді яєчників на
гормональні стимули, відносної кількості заплід-
нених яйцеклітин під час суперовуляції, а також час-
тоти настання вагітності та середньої величини по-
слідів у природному естральному циклі. На основі
представлених результатів проведеного досліджен-
ня можна припустити можливість застосування
кріоконсервованих ММСК у якості репаративного
та імуномоделюючого матеріалу в галузі клітин-
ної терапії гінекологічних захворювань.
Література
1. Биология развития млекопитающих. Методы/ Под ред.
М. Манк. – М.: Мир, 1990. – 406 с.
2. Волкова Н.О. Дослідження морфофункціональних характе-
ристик кріоконсервованих культур клітин стромального
походження // Проблемы криобиологии. – 2012. – Т. 22,
№2. – С. 118–125.
3. Волкова Н.О., Юхта М.С., Юрчук Т.О. та ін. Показники крові
тварин з хронічним запаленням яєчників та введенням
мультипотентних мезенхімальних стромальних клітин
кісткового мозку // Вісник проблем біології і медицини. –
2015. – Вип. 2, Т. 3 (120). – С. 109–112.
4. Грищенко Н.Г., Грищенко В.И., Смольянинова Е.И. и др.
Влияние криоэкстракта плаценты на индукцию суперову-
ляции у лабораторных мышей с хроническим воспале-
нием яичников // Проблемы криобиологии. – 2010. – Т. 20,
№3. – С. 327–337.
References
1. Abd-Allah S.H., Shalaby S.M., Pasha H.F. et al. Mechanistic
action of mesenchymal stem cell injection in the treatment of
chemically induced ovarian failure in rabbits. Cytotherapy 2013;
15: 64–75.
2. Bailey M.M., Boohaker J.G., Sawyer R.D. et al. Exposure of
pregnant mice to chromium picolinate results in skeletal defects
in their offspring. Birth Defects Research. Part B, Deve-
lopmental and Reproductive Toxicology 2006; 77(3): 244–249.
3. Drannik G.N. Clinical Immunology and allerhology. Moscow:
Med. Inform. Agentstvo; 2003.
4. Dubossarskaya Z.M., Mylyanovskyy A.I., Kolyadenko V.G.
Chronic inflammatory processes in women sexual organs.
Kiev: Zdorovye; 2003.
5. Egorov N.S. Practical microbiology. Moscow: Moscow State
University; 1976.
6. Grischenko N.G., Grischenko V.I., Smoljaninova E.I. et al. Effect
of placental cryoextract on superovulation induction in mice
with chronic ovary inflammation. Problems of Cryobiology and
Cryomedicine 2010; 20 (3): 327–337.
7. Frenette P.S., Pinho S., Lucas D., Scheiermann C. Mesenchymal
stem cell: keystone of the hematopoietic stem cell niche and a
stepping-stone for regenerative medicine. Ann Rev Immunol
2013; 31: 285–316.
8. Fu X., He Y., Xie C. et al. Bone marrow mesenchymal stem cell
transplantation improves ovarian function and structure in rats
with chemotherapy-induced ovarian damage. Cytotherapy
2008; 10: 353–363.
9. Hruleva N.V., Csherbatjuk T.G., Potekhina Ju.P. Peculiarities of
a female reproductive system response to the superovulation
stimulation in the IVF cycle. Sovremennye Tehnologii v
Meditsine 2011; 1: 20–23.
92 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 26, №/issue 1, 2016
5. Дранник Г.Н. Клиническая иммунология и аллергология. –
М. : ООО «Мед. информ. агентство», 2003. – 604 с.
6. Дубоссарская З.М., Миляновский А.И., Коляденко В.Г. Хро-
нические воспалительные процессы внутренних женских
половых органов. – К.: Здоровье, 2003. – 151 c.
7. Егоров Н.С. Практикум по микробиологии. – М.: МГУ, 1976. –
307 с.
8. Медико-демографічна ситуація та організація медичної
допомоги населенню у 2010 році: підсумки діяльності
системи охорони здоров'я та реалізація Програми еконо-
мічних реформ на 2010–2014 роки «Заможне суспільство,
конкурентоспроможна економіка, ефективна держава». –
К.: МОЗ України, 2011. – 104 с.
9. Назарова Г.Г., Евсиков В.И. Эволюционная экология плодо-
витости животных: адаптивные возможности потомков
предопределяются условиями их пренатального разви-
тия (на примере водяной полевки, Arvicola terrestris L.) //
Вавиловский журнал генетики и селекции. – 2011. – Т. 15,
№3. – С. 485–492.
10.Хрулева Н.В., Щербатюк Т.Г., Потехина Ю.П. Особенности
реакции женской репродуктивной системы на стимуля-
цию суперовуляции в цикле ЭКО // Современные техно-
логии в медицине. – 2011. – №1. – С. 20–23.
11.Хурасева А.Б. Роль наследственного фактора в формиро-
вании массы плода // Системный анализ и управление в
биомед. системах. – 2008. – Т. 7, №2. – С. 375–378.
12.Щербина Н.А., Градиль О.Г. Оценка возрастных изменений
овариального резерва у женщин с бесплодием // Таври-
ческий медико-биологический вестник. – 2013. – Т. 16,
№2, Ч. 2. – С. 140–144.
13.Abd-Allah S.H., Shalaby S.M., Pasha H.F. et al. Mechanistic
action of mesenchymal stem cell injection in the treatment of
chemically induced ovarian failure in rabbits // Cytotherapy. –
2013. – Vol. 15. – P. 64–75.
14.Bailey M.M., Boohaker J.G., Sawyer R.D.et al. Exposure of
pregnant mice to chromium picolinate results in skeletal defects
in their offspring // Birth Defects Research. Part B, Develop-
mental and Reproductive Toxicology. – 2006. – Vol. 77, №3. –
Р. 244–249.
15.Frenette P.S., Pinho S., Lucas D., Scheiermann C. Mesenchymal
stem cell: keystone of the hematopoietic stem cell niche and
a stepping-stone for regenerative medicine // Ann. Rev.
Immunol. – 2013. – Vol. 31. – P. 285–316.
16.Fu X., He Y., Xie C. et al. Bone marrow mesenchymal stem cell
transplantation improves ovarian function and structure in rats
with chemotherapy-induced ovarian damage // Cytotherapy. –
2008. – Vol. 10. – P. 353–363.
17.Komarova S., Roth J., Alvarez R. et al. Targeting of mesen-
chymal stem cells to ovarian tumors via an artificial receptor //
Journal of Ovarian Research. – 2010. – Vol. 3, №12. – P. 12–18.
18.Liu J., Zhang H., Zhang Y. et al. Homing and restorative effects
of bone marrow-derived mesenchymal stem cells on cisplatin
injured ovaries in rats // Mol. Cells. – 2014. – Vol. 37, №12. –
Р. 865–872.
19.Sohni A., Verfaillie C.M. Mesenchymal stem cells migration
homing and tracking // Stem Cells Int. – 2013. – ID 130763.
20.Takehara Y., Yabuuchi A., Ezoe K. et al. The restorative effects
of adipose-derived mesenchymal stem cells on damaged
ovarian function // Laboratory Investigation. – 2013. – Vol. 93. –
P. 181–193.
21.Vijayalakshmi V., Soundarya L. Promise(s) of using mesen-
chymal stem cells in reproductive disorders // Indian J. Med.
Res. – 2014. – Vol. 140, №1. – P. 98–105.
22.Volkova N.А., Yukhta M.S., Yurchuk Т.А. et al. Multipotent
mesenchymal stromal cells of bone marrow in therapy of
chronic inflammation of the murine ovaries // Biotechnologia
Acta. – 2014. – Vol. 7, №5. – P. 35–42.
23.Weina L., Qixuan X., Junwen Q. et al. Effect of mesenchymal
stem cell transplantation on immunological injury of the ovary
in mice // J. South Med. Univ. – 2011. – Vol. 31, №5. – P. 825–829.
10.Huraseva A.B. The role of hereditary factors in the formation
of fetal weight. System Analisis and Management in Biomedical
Systems 2008; 7(2): 375–378.
11.Komarova S., Roth J., Alvarez R. et al. Targeting of mesen-
chymal stem cells to ovarian tumors via an artificial receptor.
Journal of Ovarian Research 2010; 3(12): 12–18.
12. Liu J., Zhang H., Zhang Y. et al. Homing and restorative effects
of bone marrow-derived mesenchymal stem cells on cisplatin
injured ovaries in rats. Mol Cells 2014; 37(12): 865–872.
13.Mank M., editor. Developmental biology of mammals. Methods.
Moscow; 1990.
14.Medical and demographic situation and organization of medical
care in 2010: results of the health system and implementation
of the Program of Economic Reforms in 2010–2014 "Prosperous
Society, Competitive Economy, Effective State". Kiev: Ministry
of Health of Ukraine; 2011.
15.Nazarova G.G., Evsikov V.I. Evolutionary ecology of animal
fertility: the fitness of the progeny is determined by their
prenatal development (by the example of the european water
vole, Arvicola Terrestris L.). Vavilov Journal of Genetics and
Breeding 2011; 15 (3): 485–492.
16.Scherbina N.A., Gradil O.G. Assessment of age changes of
ovarian reserve in infertile women. Tavricheskiy Mediko-
Biologicheskiy Vestnik 2013; 16 (2): 140–144.
17.Sohni A., Verfaillie C.M. Mesenchymal stem cells migration,
homing and tracking. Stem Cells Int 2013; 2013: 130763.
18.Takehara Y., Yabuuchi A., Ezoe K. et al. The restorative effects
of adipose-derived mesenchymal stem cells on damaged ova-
rian function. Laboratory Investigation 2013; 93: 181–193.
19.Vijayalakshmi V., Soundarya L. Promise(s) of using mesen-
chymal stem cells in reproductive disorders. Indian J Med Res
2014; 140 (1): 98–105.
20.Volkova N.O. Study of morphological characteristics of cryo-
preserved cell cultures of stromal origin. Problems of Cryo-
biology and Cryomedicine 2012; 22 (2): 118–125.
21.Volkova N.O., Yukhta M.S., Yurchuk T.O. et al. Haematological
parameters of animals with chronic inflammation of the ovaries
and bone marrow multipotent mesenchymal stromal cells
administration. Vіsnyk Problem Bіologii i Medytsyny 2015;
2(120): 109–112.
22.Volkova N.А., Yukhta M.S., Yurchuk Т.А. et al. Multipotent
mesenchymal stromal cells of bone marrow in therapy of
chronic inflammation of the murine ovaries. Biotechnologia
Acta 2014; 7(5): 35–42.
23.Weina L., Qixuan X., Junwen Q. et al. Effect of mesenchymal
stem cell transplantation on immunological injury of the ovary
in mice. J South Med Univ 2011: 31(5): 825–829.
|