Иммуноцитохимические исследования клеток крови и костного мозга в диагностике В-линейных неходжкинских лимфом

Поражение костного мозга и появление неопластических клеток в периферической крови при В-клеточных неходжкинских лимфомах может быть одним из первых проявлений заболевания. Чаще же лейкемическую фазу отмечают при прогрессировании болезни. Изучены различные формы неходжкинских лимфом (лимфоцитарн...

Ausführliche Beschreibung

Gespeichert in:

Bibliographische Detailangaben
Datum:	2015
Hauptverfasser:	Глузман, Д.Ф., Скляренко, Л.М., Ивановская, Т.С., Украинская, Н.И., Коваль, С.В., Завелевич, М.П., Полудненко, Л.Ю., Джалилов, А.Ф., Зинченко, В.Н., Зубрицкая, Т.Б., Гартовская, И.Р., Лысая, Т.И., Пилипенко, Г.В., Дворак, Д.И.
Format:	Artikel
Sprache:	Russian
Veröffentlicht:	Інститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р.Є. Кавецького НАН України 2015
Schriftenreihe:	Онкологія
Schlagworte:	Прикладна генетика і селекція
Online Zugang:	http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/137968
Tags:	Tag hinzufügen Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
Назва журналу:	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Zitieren:	Иммуноцитохимические исследования клеток крови и костного мозга в диагностике В-линейных неходжкинских лимфом / Д.Ф. Глузман, Л.М. Скляренко, Т.С. Ивановская, Н.И. Украинская, С.В. Коваль, М.П. Завелевич, Л.Ю. Полудненко, А.Ф. Джалилов, В.Н. Зинченко, Т.Б. Зубрицкая, И.Р. Гартовская, Т.И. Лысая, Г.В. Пилипенко, Д.И. Дворак // Онкологія. — 2015. — Т. 17, № 1. — С. 25-30. — Бібліогр.: 12 назв. — рос.

Institution

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine

id	irk-123456789-137968
record_format	dspace
spelling	irk-123456789-1379682021-02-17T18:35:33Z Иммуноцитохимические исследования клеток крови и костного мозга в диагностике В-линейных неходжкинских лимфом Глузман, Д.Ф. Скляренко, Л.М. Ивановская, Т.С. Украинская, Н.И. Коваль, С.В. Завелевич, М.П. Полудненко, Л.Ю. Джалилов, А.Ф. Зинченко, В.Н. Зубрицкая, Т.Б. Гартовская, И.Р. Лысая, Т.И. Пилипенко, Г.В. Дворак, Д.И. Прикладна генетика і селекція Поражение костного мозга и появление неопластических клеток в периферической крови при В-клеточных неходжкинских лимфомах может быть одним из первых проявлений заболевания. Чаще же лейкемическую фазу отмечают при прогрессировании болезни. Изучены различные формы неходжкинских лимфом (лимфоцитарная, лимфоплазмоцитарная, из клеток мантии, В-крупноклеточная, ALK-положительная, плазмобластная, фолликулярная, лимфома Беркитта и др.) у 254 больных в соответствии с классификацией ВОЗ (2008). В результате проведенных исследований показано, что цитологический и иммунофенотипический анализ циркулирующих в крови и инфильтрирующих костный мозг лимфоидных клеток способствует в ряде случаев установлению диагноза при невозможности проведения биопсии лимфатического узла или других тканей и выполнения гистологического исследования. Bone marrow and peripheral blood involvement in B-cell non-Hodgkin’s lymphomas (NHL) may be disclosed at initial presentation. Furthermore, a leukemic phase may be evident in NHL progression. The different subtypes of NHL (lymphocytic, lymphoplasmocytic, mantle cell, marginal zone cell, diffuse B large cell, ALK-positive, Burkitt, plasmoblastic and follicular) were diagnosed in 254 patients to the WHO (2008) criteria. The careful cytological and immunocytoche mical analysis of lymphoma cells in peripheral blood and bone marrow is advantageous in providing a provisional diagnosis even if the tissues samples for histological examination are not available. 2015 Article Иммуноцитохимические исследования клеток крови и костного мозга в диагностике В-линейных неходжкинских лимфом / Д.Ф. Глузман, Л.М. Скляренко, Т.С. Ивановская, Н.И. Украинская, С.В. Коваль, М.П. Завелевич, Л.Ю. Полудненко, А.Ф. Джалилов, В.Н. Зинченко, Т.Б. Зубрицкая, И.Р. Гартовская, Т.И. Лысая, Г.В. Пилипенко, Д.И. Дворак // Онкологія. — 2015. — Т. 17, № 1. — С. 25-30. — Бібліогр.: 12 назв. — рос. http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/137968 ru Онкологія Інститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р.Є. Кавецького НАН України
institution	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection	DSpace DC
language	Russian
topic	Прикладна генетика і селекція Прикладна генетика і селекція
spellingShingle	Прикладна генетика і селекція Прикладна генетика і селекція Глузман, Д.Ф. Скляренко, Л.М. Ивановская, Т.С. Украинская, Н.И. Коваль, С.В. Завелевич, М.П. Полудненко, Л.Ю. Джалилов, А.Ф. Зинченко, В.Н. Зубрицкая, Т.Б. Гартовская, И.Р. Лысая, Т.И. Пилипенко, Г.В. Дворак, Д.И. Иммуноцитохимические исследования клеток крови и костного мозга в диагностике В-линейных неходжкинских лимфом Онкологія
description	Поражение костного мозга и появление неопластических клеток в периферической крови при В-клеточных неходжкинских лимфомах может быть одним из первых проявлений заболевания. Чаще же лейкемическую фазу отмечают при прогрессировании болезни. Изучены различные формы неходжкинских лимфом (лимфоцитарная, лимфоплазмоцитарная, из клеток мантии, В-крупноклеточная, ALK-положительная, плазмобластная, фолликулярная, лимфома Беркитта и др.) у 254 больных в соответствии с классификацией ВОЗ (2008). В результате проведенных исследований показано, что цитологический и иммунофенотипический анализ циркулирующих в крови и инфильтрирующих костный мозг лимфоидных клеток способствует в ряде случаев установлению диагноза при невозможности проведения биопсии лимфатического узла или других тканей и выполнения гистологического исследования.
format	Article
author	Глузман, Д.Ф. Скляренко, Л.М. Ивановская, Т.С. Украинская, Н.И. Коваль, С.В. Завелевич, М.П. Полудненко, Л.Ю. Джалилов, А.Ф. Зинченко, В.Н. Зубрицкая, Т.Б. Гартовская, И.Р. Лысая, Т.И. Пилипенко, Г.В. Дворак, Д.И.
author_facet	Глузман, Д.Ф. Скляренко, Л.М. Ивановская, Т.С. Украинская, Н.И. Коваль, С.В. Завелевич, М.П. Полудненко, Л.Ю. Джалилов, А.Ф. Зинченко, В.Н. Зубрицкая, Т.Б. Гартовская, И.Р. Лысая, Т.И. Пилипенко, Г.В. Дворак, Д.И.
author_sort	Глузман, Д.Ф.
title	Иммуноцитохимические исследования клеток крови и костного мозга в диагностике В-линейных неходжкинских лимфом
title_short	Иммуноцитохимические исследования клеток крови и костного мозга в диагностике В-линейных неходжкинских лимфом
title_full	Иммуноцитохимические исследования клеток крови и костного мозга в диагностике В-линейных неходжкинских лимфом
title_fullStr	Иммуноцитохимические исследования клеток крови и костного мозга в диагностике В-линейных неходжкинских лимфом
title_full_unstemmed	Иммуноцитохимические исследования клеток крови и костного мозга в диагностике В-линейных неходжкинских лимфом
title_sort	иммуноцитохимические исследования клеток крови и костного мозга в диагностике в-линейных неходжкинских лимфом
publisher	Інститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р.Є. Кавецького НАН України
publishDate	2015
topic_facet	Прикладна генетика і селекція
url	http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/137968
citation_txt	Иммуноцитохимические исследования клеток крови и костного мозга в диагностике В-линейных неходжкинских лимфом / Д.Ф. Глузман, Л.М. Скляренко, Т.С. Ивановская, Н.И. Украинская, С.В. Коваль, М.П. Завелевич, Л.Ю. Полудненко, А.Ф. Джалилов, В.Н. Зинченко, Т.Б. Зубрицкая, И.Р. Гартовская, Т.И. Лысая, Г.В. Пилипенко, Д.И. Дворак // Онкологія. — 2015. — Т. 17, № 1. — С. 25-30. — Бібліогр.: 12 назв. — рос.
series	Онкологія
work_keys_str_mv	AT gluzmandf immunocitohimičeskieissledovaniâkletokkroviikostnogomozgavdiagnostikevlinejnyhnehodžkinskihlimfom AT sklârenkolm immunocitohimičeskieissledovaniâkletokkroviikostnogomozgavdiagnostikevlinejnyhnehodžkinskihlimfom AT ivanovskaâts immunocitohimičeskieissledovaniâkletokkroviikostnogomozgavdiagnostikevlinejnyhnehodžkinskihlimfom AT ukrainskaâni immunocitohimičeskieissledovaniâkletokkroviikostnogomozgavdiagnostikevlinejnyhnehodžkinskihlimfom AT kovalʹsv immunocitohimičeskieissledovaniâkletokkroviikostnogomozgavdiagnostikevlinejnyhnehodžkinskihlimfom AT zavelevičmp immunocitohimičeskieissledovaniâkletokkroviikostnogomozgavdiagnostikevlinejnyhnehodžkinskihlimfom AT poludnenkolû immunocitohimičeskieissledovaniâkletokkroviikostnogomozgavdiagnostikevlinejnyhnehodžkinskihlimfom AT džalilovaf immunocitohimičeskieissledovaniâkletokkroviikostnogomozgavdiagnostikevlinejnyhnehodžkinskihlimfom AT zinčenkovn immunocitohimičeskieissledovaniâkletokkroviikostnogomozgavdiagnostikevlinejnyhnehodžkinskihlimfom AT zubrickaâtb immunocitohimičeskieissledovaniâkletokkroviikostnogomozgavdiagnostikevlinejnyhnehodžkinskihlimfom AT gartovskaâir immunocitohimičeskieissledovaniâkletokkroviikostnogomozgavdiagnostikevlinejnyhnehodžkinskihlimfom AT lysaâti immunocitohimičeskieissledovaniâkletokkroviikostnogomozgavdiagnostikevlinejnyhnehodžkinskihlimfom AT pilipenkogv immunocitohimičeskieissledovaniâkletokkroviikostnogomozgavdiagnostikevlinejnyhnehodžkinskihlimfom AT dvorakdi immunocitohimičeskieissledovaniâkletokkroviikostnogomozgavdiagnostikevlinejnyhnehodžkinskihlimfom
first_indexed	2025-07-10T04:50:49Z
last_indexed	2025-07-10T04:50:49Z
_version_	1837234182287261696
fulltext	ÎÁÌÅÍ ÎÏÛÒÎÌ 25ÎÍÊÎËÎÃÈß • Ò. 17 • ¹ 1 • 2015 25 ВВЕДЕНИЕ Неходжкинские лимфомы (НХЛ) — гетероген- ная группа опухолей, возникающих из различных типов клеток лимфоидной ткани. НХЛ относятся к тем немногим формам новообразований, заболе- ваемость которыми продолжает неуклонно возрас- тать. В Украине число впервые зарегистрированных больных с НХЛ в 2012 г. составило 2571, в 2013 г. (по неполным данным) — 2333. По данным Нацио- нального канцер-регистра Украины, согласно стан- дартизованному показателю (мировой стандарт) за- болеваемость НХЛ мужчин в 2012 г. составила 4,8, женщин — 3,2 на 100 000 населения, а смертность соответственно — 2,6 и 1,4 на 100 000 населения [1]. Анализ статистических данных 2005–2007 гг. по- казывает, что на протяжении первого года после установления диагноза погибают 28,0% пациентов, а 5-летняя выживаемость больных составляет 48,8%. В основе диагностики лимфоидных новообра- зований лежит гистологическое изучение получен- ных при биопсии лимфатических узлов или мате- риала из экстранодальных очагов поражения. Со- временная классификация НХЛ основывается на анализе клинических данных, результатов мор- фологического, иммуногистохимического, цито- генетического и молекулярно-биологического ис- следований [2]. Приблизительно 85% НХЛ имеют В-клеточное происхождение, остальные возника- ют из Т- или ЕК-клеток. ИММУНОЦИТОХИМИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ КЛЕТОК КРОВИ И КОСТНОГО МОЗГА В ДИАГНОСТИКЕ В-ЛИНЕЙНЫХ НЕХОДЖКИНСКИХ ЛИМФОМ Поражение костного мозга и появление неопластических клеток в перифе- рической крови при В-клеточных неходжкинских лимфомах может быть одним из первых проявлений заболевания. Чаще же лейкемическую фазу отмечают при прогрессировании болезни. Изучены различные формы не- ходжкинских лимфом (лимфоцитарная, лимфоплазмоцитарная, из кле- ток мантии, В-крупноклеточная, ALK-положительная, плазмобластная, фолликулярная, лимфома Беркитта и др.) у 254 больных в соответствии с классификацией ВОЗ (2008). В результате проведенных исследований показано, что цитологический и иммунофенотипический анализ цирку- лирующих в крови и инфильтрирующих костный мозг лимфоидных клеток способствует в ряде случаев установлению диагноза при невозможности проведения биопсии лимфатического узла или других тканей и выполнения гистологического исследования. Д.Ф. Глузман1 Л.М. Скляренко1 Т.С. Ивановская1 Н.И. Украинская1 С.В. Коваль1 М.П. Завелевич1 Л.Ю. Полудненко1 А.Ф. Джалилов1 В.Н. Зинченко2 Т.Б. Зубрицкая2 И.Р. Гартовская3 Т.И. Лысая4 Г.В. Пилипенко5 Д.И. Дворак6 1Институт экспериментальной патологии, онкологии и радиобиологии им. Р.Е. Кавецкого НАН Украины, Киев 2Киевская городская клиническая больница № 9, Киев 3КУ КОС «Киевский областной онкологический диспансер», Киев 4Житомирская областная клиническая больница им. А.Ф. Гербачевского, Житомир 5КУ ЧОС «Черкасский областной онкологический диспансер», Черкассы 6КЛ ПЗ «Черниговский областной онкологический диспансер», Чернигов, Украина Ключевые слова: неходжкинская лимфома, лейкемическая фаза, иммунофенотипический анализ. ÎÍÊÎËÎÃÈß • Ò. 17 • ¹ 1 • 2015 ÎÁÌÅÍ ÎÏÛÒÎ Ì 26 К числу наиболее часто встречающих- ся В-клеточных НХЛ относятся хронический лимфолейкоз/лимфома из малых лимфоцитов (ЛМЛ), фолликулярная лимфома, диффузная В-крупноклеточная лимфома (ДBККЛ). Реже встре- чаются такие виды новообразований, как лимфома маргинальной зоны, высокоагрессивная лимфома Беркитта и др. [3]. У многих больных В-клеточной НХЛ в момент установления диагноза или при прогрессировании заболевания определяют очаги поражения в кост- ном мозгу (КМ) и/или наличие патологических клеток, циркулирующих в периферической крови (ПК). Частота развития лейкемической фазы раз- ная при различных гистологических формах лим- фом [4–6]. Вопросам лейкемизации лимфом посвящены немногочисленные исследования [4, 7, 8]. В пер- вую очередь, это касается количественных крите- риев лейкемизации процесса. Если по аналогии ос- новываться на количестве бластов, необходимых для диагностики острых лейкозов, то для верифи- кации фазы лейкемизации, по нашему мнению, до- статочно выявления в КМ и/или ПК не менее 20% лимфоидных клеток, относящихся по своим им- мунофенотипическим характеристикам к одному клону. Возможно, следует воспользоваться крите- риями, применяемыми для диагностики хрониче- ского лимфолейкоза (не менее 5•109/л лимфоци- тов в крови или КМ). Лейкемизацию лимфом, если исключить лим- фобластную лимфому и лимфому Беркитта, чаще регистрируют при опухолях с низкой степенью злокачественности, чем при высокозлокачествен- ных [5, 9, 10]. Определение циркулирующих клеток лимфом может быть использовано для установления предва- рительного диагноза тех или иных форм НХЛ в слу- чаях, когда затруднено получение биопсийного ма- териала для гистологического исследования (лим- фома селезенки, опухоли средостения, кишечника и т.д.). Для уточнения природы патологических кле- ток, определяющихся в ПК или инфильтрирующих КМ, могут быть применены иммуноцитохимиче- ские (ИЦХ) методы и панель моноклональных ан- тител (МкАТ) к линейноспецифическим и диффе- ренцировочным антигенам лимфоцитов. Изучается набор антигенов поверхностных мембран, по экс- прессии которых установлены различия нормаль- ных В-лимфоцитов и трансформированных клеток при различных формах В-клеточных НХЛ. Подоб- ный же подход может быть использован для вери- фикации клеток лимфом и очаговых инфильтратов из нормальных лимфоцитов при изучении стерналь- ных пунктатов КМ. Задачей нашего исследования было цитоморфо- логическое и ИЦХ изучение клеток ПК и КМ у боль- ных НХЛ из зрелых (периферических) В-клеток. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ С 2012 по 2014 г. обследовано до начала лечения 254 больных с различными формами В-линейных НХЛ, находящихся в онкогематологических клини- ках Киева, АР Крым и 20 областей Украины. У боль- шинства из них диагноз установлен на основе гисто- логического и иммуногистохимического исследо- вания, а у части — посредством цитогенетического и молекулярно-биологического анализа (канди- дат медицинских наук С.В. Андреева). Проводили исследование мазков ПК и стернального пунктата КМ, цитоцентрифужных препаратов мононукле- аров, выделенных из венозной крови в градиенте плотности фиколл-урографина. Исследуемый ма- териал окрашивали по Май-Грюнвальду — Рома- новскому — Гимзе. Выполняли цитохимические (ЦХ) реакции опре- деления активности кислой фосфатазы (КФ 3.1.3.2) по Goldberg, Barka, кислой неспецифической эсте- разы (КФ 3.1.1.6) по Müeller, содержания гликоге- на с помощью PAS-реакции по McManus, Hotchkiss. ИЦХ реакции (LSAB-AP) выполняли в цитоло- гических препаратах из выделенных мононуклеа- ров венозной крови и КМ, приготовленных по типу «высушенной капли», а также непосредственно в на- тивных мазках ПК и пунктата КМ грудины [10–12]. При необходимости ИЦХ исследование также про- водили в цитоцентрифужных препаратах из моно- нуклеаров, выделенных из спинномозговой жидко- сти. Применяли МкАТ к широкому спектру антиге- нов, которые используют во многих лабораториях для микроскопической диагностики В-клеточной НХЛ в парафиновых срезах лимфатических уз- лов и других тканей: CD19, CD20, CD22, CD23, CD10, CD38, CD43, CD103, CD45, CD5, CD3, CD4, CD30, CD57, CD11c, EMA, HLA-DR, к циклину D1, цитокератинам. Подобным образом был оха- рактеризован иммунофенотип лимфоидных кле- ток ПК и КМ пациентов с ЛМЛ, лимфоплазмоци- тарной лимфомой (ЛПЛ), фолликулярной лимфо- мой, лимфомой из клеток мантийной зоны (ЛКМЗ), лимфомой маргинальной зоны селезенки (ЛМЗС) и лимфомой из клеток маргинальной зоны лим- фатических узлов, MALT-лимфомой, первичной В-крупноклеточной лимфомой средостения (тиму- са), ALK-положительной В-крупноклеточной лим- фомой, ДВККЛ, неспецифицированной иным спо- собом, лимфомой Беркитта спорадического типа. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Изучение иммунофенотипа нормальных В-лимфоцитов ПК и КМ у здоровых людей (доно- ров) дало следующие результаты. В норме в крови, по нашим данным, выявляли 8–22% лимфоцитов с экспрессией на поверхностных мембранах анти- гена CD19, 8–19% — CD20-положительных лимфо- цитов. Экспрессию антигена CD23 регистрировали на 6–12% клеток, а антигена CD22 — на 18–20%. ÎÁÌÅÍ ÎÏÛÒÎÌ 27ÎÍÊÎËÎÃÈß • Ò. 17 • ¹ 1 • 2015 27 Т-лимфоциты (CD3-положительные клетки) в крови у доноров составили 55–75%, лимфоци- ты с фенотипом Т-клеток-хелперов/индукторов (CD3+CD4+) — 45–55%, Т-клеток-супрессоров/ цитотоксических клеток (CD3+CD8+) — 20–37%. CD3+CD16+ клетки достигли 3–7%, CD3−CD16+ клетки — 5–15%. С помощью использовавшихся нами МкАТ выявлен антиген CD25 на 13–24% ак- тивированных Т-лимфоцитов. Антиген CD43 так- же отмечен на мембранах Т-клеток. В мазках из пунктата КМ грудины, по данным С.А. Луговской и соавт. [12], использовавших метод проточной цитофлуориметрии, в норме определя- ли 7–20% СD19-положительных клеток, 3–10% — лимфоидных клеток с экспрессией антигена CD20, 17–29% — с экспрессией антигена CD22, а также 0,5–15% клеток, на поверхностных мембранах кото- рых выявляли антиген CD10. Экспрессию антигена CD23 регистрировали на единичных клетках. Сре- ди лимфоцитов КМ здоровых людей CD3+ лимфо- циты составили 21–51%, CD4+ — 14–30%, CD8+ — 11–28%, CD7+ — 17–31%. Лимфома из малых лимфоцитов (ЛМЛ) по цито- морфологическим признакам не отличается от хро- нического лимфолейкоза, оба заболевания между собой тесно связаны. Переход в лейкемическую фазу в процессе прогрессирования заболевания отмеча- ют только у некоторых больных. С учетом цитоло- гических особенностей субстратных клеток 38 па- циентов с ЛМЛ, включенных в исследование, были подразделены на 3 группы. У больных 1-й группы в ПК и КМ определяли преимущественно клетки типа малых лимфоцитов. У пациентов 2-й группы, наряду с малыми лимфоцитами, выявляли 30–40% лимфоидных клеток среднего размера с более неж- ной структурой ядерного хроматина и широкой ци- топлазмой и до 10% пролимфоцитов. У 3-й группы обследованных больных в мазках ПК и КМ реги- стрировали малые и среднего размера лимфоидные клетки, нередко с умеренно базофильной цитоплаз- мой, более 10% пролимфоцитов и немногочислен- ные бластоподобные клетки. При ЦХ определении активности КФ в лимфо- идных клетках выявляли слабую мелкогрануляр- ную реакцию, которая не ингибировалась ионами тартрата только в 3–5% клеток у больных 2-й и 3-й групп. При ИЦХ исследовании у 60% обследован- ных пациентов с ЛМЛ выявили стандартный им- мунофенотип субстратных клеток — CD19+ CD20+ CD23+ CD5+ CD43+ циклин D1− с преобладанием на поверхностных мембранах κ-легких цепей им- муноглобулинов. У 20% пациентов дополнитель- но выявляли антиген CD22 и активационный ан- тиген CD38. У 10% больных на поверхностных мембра- нах лимфоцитов не отмечена экспрессия антиге- на CD23. В таких случаях проводили дифферен- циальную диагностику с морфологически сходны- ми В-клеточными НХЛ из клеток мантийной зоны, на поверхностных мембранах которых выявляли циклин D1. Также у 10% пациентов на лимфоцитах не вы- явлена экспрессия антигена CD5. При этом ЛМЛ приходилось дифференцировать с редкими CD5− и CD23+ случаями ЛКМЗ, реагировавшими с МкАТ к циклину D1. Лимфоплазмоцитарная лимфома (ЛПЛ). Цир- кулирующие в крови клетки представляют собой малые лимфоциты с признаками плазматизации. По данным цитологического исследования стер- нального пунктата КМ, 23 больных ЛПЛ разделе- ны на две группы. У пациентов 1-й группы (10 чело- век) в мазках КМ определяли 40–60% лимфоцитов с плазматизированной цитоплазмой; плазматиче- ских клеток не было, или их содержание не превы- шало 1–2%. У 13 больных 2-й группы в КМ выяв- ляли 30–50% лимфоцитов малого и среднего разме- ра и 10–20% плазматических клеток. При ИЦХ исследовании на поверхностных мем- бранах субстратных клеток в ПК и КМ обнаружива- ли экспрессию антигенов CD19 и CD20. Отмечали варьирующую экспрессию антигенов CD22, CD23 и CD38. В некоторых случаях наблюдали слабое окрашивание мембран клеток при взаимодействии с МкАТ к антигену CD25. На основании изучения поверхностного иммунофенотипа проводили так- же дифференциальную диагностику с лимфомой из клеток маргинальной зоны, аутоиммунными про- цессами и реактивными изменениями в КМ, сопро- вождавшимися увеличением количества плазмати- ческих клеток и лимфоцитов у больных с солидны- ми опухолями. Лимфома из клеток мантийной зоны (ЛКМЗ). При лимфоме данного типа субстратные клетки, определявшиеся в мазках ПК и КМ у 36 больных, в 60% случаев имели признаки малых и средне- го размера лимфоцитов. У 30% пациентов клеточ- ный состав отличался полиморфизмом: преобла- дали клетки среднего и несколько более крупно- го размера с рыхлой структурой хроматина и узким ободком цитоплазмы, часть клеток была с расще- пленным ядром. При ЦХ исследовании в клетках ЛКМЗ актив- ность КФ, ингибировавшаяся ионами тартрата, определялась в виде мелких гранул или слабой диф- фузной окраски цитоплазмы. Иммунофенотип кле- ток ЛКМЗ у большинства больных был следующим: CD19+ CD20+ CD22+ CD5+/− CD43+ CD10− циклин D1+. Лимфому данного типа в случаях отсутствия экспрессии антигена CD5 приходилось дифферен- цировать с лимфомой маргинальной зоны лимфа- тического узла. Различить эти два типа лимфоид- ных новообразований позволяло наличие цикли- на D1 на поверхностных мембранах клеток ЛКМЗ. В группе обследованных нами больных с поли- морфным клеточным составом и значительным ко- личеством клеток с расщепленным ядром было 3 па- циента с CD5−CD10+-клетками. В этих случаях на- ÎÍÊÎËÎÃÈß • Ò. 17 • ¹ 1 • 2015 ÎÁÌÅÍ ÎÏÛÒÎ Ì 28 личие экспрессии циклина D1 на клетках ЛКМЗ при бластноидном варианте позволяло отличить их от клеток при соответствующем варианте фоллику- лярной лимфомы. У 7 больных ЛКМЗ в стадии лейкемизации (ко- личество лейкоцитов в крови в пределах 9–20•109/л, лимфоцитов — 50–60%) приходилось дифферен- цировать с атипичным В-клеточным хроническим лимфолейкозом (CD5+CD23-). Лимфома маргинальной зоны селезенки (ЛМЗС) диагностирована у 98 больных, в основном среднего и пожилого возраста. У большинства из них отмеча- ли признаки анемии и тромбоцитопении, наличие спленомегалии при отсутствии лимфаденопатии. В ПК и КМ выявляли неопластические лимфоид- ные клетки небольшого и среднего размера. Часть клеток была с ворсинчатыми отростками. При ЦХ исследовании в значительной части кле- ток ЛМЗС определяли слабую или умеренную ак- тивность КФ, сохранявшуюся при добавлении в ин- кубационную среду ингибитора (ионов тартрата) в 10–30% клеток. Классический иммунофенотип клеток ЛМЗС был следующим: CD19+ CD20+ CD22+ CD5− CD10− CD23− CD43− CD25− CD103− циклин D1−. Лишь в редких случаях на клетках отмечали экспрессию антигена CD5. В этих случаях проводили дифферен- циальный диагноз с циклин D1+-ЛКМЗ. В выпол- нении дифференциальной диагностики с вариантом волосатоклеточного лейкоза помогало определение на клетках последнего антигенов CD103 и CD11c. MALT-лимфома. У 8 больных (6 мужчин с опу- холью желудка и 2 женщины с опухолью молочной железы) с MALT-лимфомой в ПК и КМ преобла- дали малые и среднего размера лимфоциты, моно- цитоидные В-клетки, клетки типа центробластов, иммунобластов, плазматические клетки. Иммунофенотип неопластических клеток у па- циентов с MALT-лимфомой желудка был следу- ющим: CD19+ CD20+ CD22+ CD5− CD23− CD10−. У 5 из них реакция при выявлении антигена CD43 была отрицательной, а у 1 — положительной. Экс- прессию антигена CD43 отмечали также при MALT- лимфоме, диагностированной при исследовании биоптата опухоли молочной железы. Определяемая при ЦХ исследовании активность КФ была слабой и ингибировалась ионами тартра- та. Дифференциальный диагноз MALT-лимфомы (как CD5+ CD43+, так и CD5−CD43+) проводили с CD23-отрицательной ЛКМЗ. Когда при CD5+ CD43− MALT-лимфоме в КМ больных было уве- личено количество пролимфоцитов и бластоподоб- ных форм, возникала необходимость дифференци- ации с ЛМЛ. Для последней была характерна экс- прессия антигена CD23. Лимфома маргинальной зоны лимфатическо- го узла. У 2 из 4 больных с этой формой лимфомы, у которых отмечали поражение только лимфатиче- ских узлов, субстратные клетки выявлены не только в КМ, но и в ПК. Они были представлены малыми и среднего размера лимфоцитами с моноцитоподоб- ными ядрами и широкой голубого цвета цитоплаз- мой (моноцитоидные В-клетки), визуализировались немногочисленные плазматические клетки. При ЦХ исследовании в цитоплазме клеток опре- деляли мелкогранулярную реакцию, ингибировав- шуюся ионами тартрата. У 3 больных фенотип нео- пластических клеток был следующим: CD19+ CD20+ CD22+ CD5- CD10− CD43+ CD23−. У 1 пациента на лимфоцитах с базофильной цитоплазмой не на- блюдали экспрессии антигена CD43. В этом случае проводили дифференциальную диагностику с ЛПЛ. Первичная В-крупноклеточная лимфома средо- стения (тимуса). Исследования проведены у 2 жен- щин пожилого возраста, у которых диагностирован синдром сдавления верхней полой вены. В мазках КМ определяли полиморфные по форме и размеру лимфоидные клетки типа центробластов и центро- цитов, немногочисленные иммунобласты, а также крупные клетки с трехлопастными ядрами с глыб- чатой структурой хроматина, узким ободком цито- плазмы с признаками базофилии. При ИЦХ иссле- довании фенотип субстратных клеток был таким: CD19+ CD20+ CD22+ CD23+ CD79a+. В обоих слу- чаях отмечали крайне слабую экспрессию антигена CD30, в одном, кроме этого, определялась экспрес- сия антигена CD15, в другом, при отсутствии это- го антигена, клетки были CD10-положительными. Дифференциальный диагноз (наличие антигенов CD30, CD23 и цитоморфологических особенностей субстратных клеток) проводили с ДВККЛ и пораже- нием КМ при лимфоме Хо джкина. ALK-положительная В-крупноклеточная лимфо- ма. Обследованы 3 пациента — 1 женщина и 2 муж- чины, у одного из которых выявлены множествен- ные поражения костей. В мазках КМ больных об- наружены лимфоидные клетки среднего и крупного размера с умеренно базофильной цитоплазмой. Фе- нотип субстратных клеток был следующим: ALK+ EMA+ CD20− CD22− CD79a− CD19− CD23− CD3− CD4+ CD57+. Антиген CD45 выявлен только в 1 слу- чае. Проводили дифференциальную диагности- ку с плазмобластной лимфомой (наличие экспрес- сии ALK и антигенов CD4 и CD57). Отсутствие В-клеточных антигенов на ALK+ EMA+-клетках по- зволило дифференцировать опухоль данного типа от ДВККЛ. Диффузная В-крупноклеточная лимфома (ДВККЛ). Обследованы 15 больных в фазе лейке- мизации. У 7 пациентов была выявлена ДВККЛ с экстранодальной локализацией (кожа, почки, ор- ганы желудочно-кишечного тракта, кости). Опре- делявшиеся в стернальном пунктате КМ крупные, полиморфные клетки были немногочисленными и по цитоморфологическим признакам напоминали центробласты, иногда иммунобласты. При ЦХ ис- следовании активность КФ проявлялась в виде сла- ÎÁÌÅÍ ÎÏÛÒÎÌ 29ÎÍÊÎËÎÃÈß • Ò. 17 • ¹ 1 • 2015 29 бого диффузного окрашивания цитоплазмы клеток. В мазках ПК клетки лимфомы не выявляли. В большинстве случаев (у 10 пациентов) на по- верхностных мембранах субстратных клеток выяв- ляли экспрессию антигенов CD19 и CD22 и не опре- деляли антиген CD20. У 5 пациентов клетки были только CD20-положительными. В 8 случаях наблю- дали экспрессию антигена CD10 (у 2 больных была проведена дифференциальная диагностика с лим- фомой Беркитта), у 3 пациентов — CD5 и у 2 — CD38. Дифференциальный диагноз проводили с дру- гими В-линейными лимфомами, представленными крупными клетками, с лимфомой Ходжкина (в КМ выявлены CD30+CD15+-клетки), с мезотелиомой (наличие цитокератинов и отсутствие В-клеточных антигенов). При ДВККЛ с наличием клеток типа иммунобластов дифференциальный диагноз про- водили с плазмобластной лимфомой и множествен- ной миеломой. Лимфома Беркитта спорадического типа. Кли- нические проявления лимфомы Беркитта варьи- ровали в зависимости от локализации опухоли. У 23 пациентов при прогрессировании заболева- ния развилась лейкемическая фаза с поражени- ем КМ и наличием неопластических клеток в ПК (10 больных). Опухолевые клетки при лимфоме Беркитта средних размеров с интенсивно базо- фильной вакуолизированной цитоплазмой. В не- которых из них выявляли признаки апоптоза. В со- ставе очагов поражения в КМ определяли немно- гочисленные макрофаги. При PAS-реакции и ЦХ определении КФ клетки лимфомы Беркитта оста- вались неокрашенными. На поверхностных мембранах клеток лимфомы Беркитта выявляли легкие κ- и λ-цепи IgM и отме- чали экспрессию ассоциированных с В-клетками антигенов (CD19, CD20, CD22), а также антигенов CD10, CD38, CD43. Фолликулярная лимфома. При исследовании маз- ков из КМ у 3 больных (с поражением Вальдейеро- ва кольца и органов желудочно-кишечного тракта; с поражением селезенки и лимфатических узлов; с вовлечением в патологический процесс кожи и се- лезенки) установлено, что половину клеток в пре- паратах составляли лимфоидные клетки. При этом у больных со спленомегалией лимфоциты были не- большого размера, со светло-голубой цитоплазмой. Часть клеток имели расщелину в ядре. При ЦХ ис- следовании реакция на КФ была отрицательной или слабой мелкогранулярной. Фенотип клеток был следующим: CD19+ CD20+ CD22+ CD10+ CD5− CD43− CD23−. В ПК субстратные клетки не визуа- лизировались. У пациента с поражением органов желудочно- кишечного тракта неопластические лимфоидные клетки выявлены в ПК и КМ. По цитоморфологи- ческим признакам клетки были бластоподобными, среднего и несколько более крупного размера. В ча- сти клеток в ядре было небольшое ядрышко. Око- ло 10% субстратных клеток были с глубокой расще- линой в ядре. Цитоплазма клеток — с некоторыми признаками базофилии. При ИЦХ исследовании фенотип патологиче- ских лимфоидных клеток был следующим: CD19+ CD20+ CD22+ CD10− CD5− CD43− CD23+ циклин D1+. Дифференциальный диагноз проводили с «бла- стоидным» типом ЛКМЗ (CD5− CD23+ циклин D1+). Плазмобластная лимфома диагностирована у по- жилого мужчины, у которого в анамнезе отмеча- ли изменения, обусловленные иммунными нару- шениями. В мазках из стернального пунктата КМ определялись полиморфные клетки типа иммуно- бластов, плазмобластов. В единичных клетках вы- являли признаки апоптоза. Иммунофенотип суб- стратных клеток был следующим: CD38+ CD30+ EMA+ CD56+. Дифференциальный диагноз прово- дили с ДВККЛ, плазмобластным вариантом мно- жественной миеломы. В таблице представлены сводные данные, полу- ченные при ИЦХ исследовании клеток КМ и ПК у пациентов с различными формами В-линейных НХЛ в фазе лейкемизации. Таблица Результаты иммунофенотипирования клеток КМ и ПК у больных с различными формами В-линейных НХЛ Формы НХЛ Количество больных, n Экспрессия антигенов на поверхностных мембранах ЛМЛ 38 CD19+ CD20+ CD22+ CD23+ CD5+ CD43+ (иногда CD22− CD38+ CD23−) ЛПЛ 23 CD19+ CD20+ CD22+ CD5− CD23− (в 50% случаев CD25+ CD38+, ино- гда CD22−, CD23+) ЛКМЗ 36 CD19+ CD20+ CD22+ CD5+ CD10− CD23− CD43+ циклин D1+ (иногда CD5− CD10+/− CD23+) ЛМЗС 98 CD19+ CD20+ CD22+ CD5− CD10− CD23− CD43− CD25− CD103− циклин D1− (изредка CD5+) MALT-лимфома 8 CD19+ CD20+ CD22+ CD5− CD10− CD23− CD43− циклин D1− (изредка CD5+, CD43+) НХЛ маргинальной зоны лимфатиче- ского узла 4 CD19+ CD20+ CD22+ CD5− CD10− CD23− CD43− циклин D1− (в 50% — CD43+) Первичная В-крупноклеточная лимфома средо- стения (тимуса) 2 CD19+ CD20+ CD22+ CD30+ CD23+ CD10− CD15− (иногда CD30− CD23− CD10+ CD15+) ALK-положи- тельная В-крупноклеточная лимфома 3 ALK+ EMA+ CD3− CD19− CD20− CD22− CD30− CD10− CD4+ CD57+ CD45+ (иногда CD45− CD30+) ДВККЛ 15 CD19+ CD20+ CD22+ CD38− CD5− CD10+ CD30− Лимфома Беркит- та спорадическо- го типа 23 CD19+ CD20+ CD22+ CD10+ CD34− CD38+ Фолликулярная лимфома 3 CD19+ CD20+ CD22+ CD10+ CD5− CD43− CD23− (иногда CD10− CD23+ и/или CD43+) Плазмобластная лимфома 1 CD19− CD20− CD38+ CD45− EMA+ CD79+ CD56− CD30+ (иногда CD79− CD20+ CD30− CD56+ EMA− CD45+) ÎÍÊÎËÎÃÈß • Ò. 17 • ¹ 1 • 2015 ÎÁÌÅÍ ÎÏÛÒÎ Ì 30 ВЫВОДЫ Основным методом диагностики НХЛ было и остается гистологическое (иммуногистохимиче- ское) изучение срезов лимфатических узлов и био- птатов из экстранодальных очагов поражения. При ряде форм В-линейных НХЛ уже в началь- ной стадии заболевания или при прогрессирова- нии процесса неопластические клетки могут выяв- ляться в составе инфильтратов в КМ или циркули- ровать в ПК. Их определение основано на использова- нии классических цитологических, ЦХ и новых иммунофенотипических признаков, ставших из- вестными после широкого применения МкАТ — специфических реагентов для выявления линей- носпецифических и дифференцировочных антиге- нов В-лимфоцитов. Данные цитологического и ИЦХ исследования клеток ПК и пунктатов КМ, как свидетельствуют полученные результаты, могут быть использованы для установления предварительного диагноза тех или иных форм В-клеточных НХЛ. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 1. Рак в Україні, 2012–2013. Захворюваність, смертність, показники діяльності онкологічної служби. Бюл Нац канцер- реєстру України 2014; (15). 124 c. 2. Swerdlow SH, Campo E, Harris NL, et al. (eds). WHO classi- fication of tumours of haematopoietic and lymphoid tissues. Lyon: IARC Press, 2008. 439 p. 3. Kimby E. Leukemic phase of B-lineagе NHL. Exp Oncol 2012; 34 (4): 384–5. 4. Bain BJ, Catovsky D. The leukaemic phase of non-Hodg- kin’s lymphoma. J Clin Pathol 1995; 48: 189–93. 5. Wong KF, Chan JK, So JC, Yu PH. Mantle cell lymphoma in leukemic phase: characterization of its broad cytologic spectrum with emphasis on the importance of distinction from chronic lym- phoproliferative disorders. Cancer 1999; 86: 850–7. 6. Vizcarra E, Martinez-Climent JA, Benet J, et al. Identifica- tion of WHO subgroups of mantle cell leukemia with distinct cli- nical and biological features. Hematol J 2001; 2: 234–41. 7. Onciu M, Schlette E, Bueso-Ramos C, Medeiros LJ. Leu- kemic mantle cell lymphoma with cells resembling prolympho- cytes. Am J Clin Pathol 2002; 118: 305–6. 8. Ferrer A, Salaverria I, Bosh F, et al. Leukemic involvement is a common feature in mantle cell lymphoma. Cancer 2007; 109: 2473–80. 9. Nelson BP, Variakojis D, Peterson L-A. Leukemic phase of B-cell lymphomas mimicking chronic lymphocytic leukemia and variants at presentation. Mod Pathol 2002; 15 (11): 1111–20. 10. Глузман ДФ, Скляренко ЛМ, Надгорная ВА. Диагно- стическая онкогематология. Киев: ДИА, 2011. 256 с. 11. Глузман ДФ, Скляренко ЛМ, Надгорная ВА, Кря- чок ИА. Диагностическая иммуноцитохимия опухолей. Киев: Морион, 2003. 156 с. 12. Луговская СА, Почтарь МЕ, Тупицын НН. Иммуно- фенотипирование в диагностике гемобластозов. М.: Триа- да, 2005. 166 с. IMMUNOCYTOCHEMICAL STUDYING OF BLOOD AND BONE MARROW CELLS IN DIAGNOSING B-CELL LINEAGE NON-HODGKIN’S LYMPHOMAS D.F. Gluzman, L.M. Sklyarenko, T.S. Ivanovskaya, N.I. Ukrainskaya, S.V. Koval, M.P. Zavelevich, L.Yu. Poludnenko, A.F. Jalilov, V.N. Zinchenko, T.B. Zubritskaya, I.R. Gartovskaya, T.I. Lysaya, G.V. Pilipenko, D.I. Dvorak Summary. Bone marrow and peripheral blood involve- ment in B-cell non-Hodgkin’s lymphomas (NHL) may be disclosed at initial presentation. Furthermore, a leukemic phase may be evident in NHL progression. The different subtypes of NHL (lymphocytic, lym- phoplasmocytic, mantle cell, marginal zone cell, dif- fuse B large cell, ALK-positive, Burkitt, plasmoblas- tic and follicular) were diagnosed in 254 patients to the WHO (2008) criteria. The careful cytological and immunocytoche mical analysis of lymphoma cells in pe- ripheral blood and bone marrow is advantageous in pro- viding a provisional diagnosis even if the tissues samples for histological examination are not available. Key Words: non-Hodgkin’s lymphoma, leukemic phase, immunocytochemical analysis. Адрес для переписки: Глузман Д.Ф. 03022, Киев, ул. Васильковская, 45 Институт экспериментальной патологии, онкологии и радиобиологии им. Р.Е. Кавецкого НАН Украины E-mail: gluzman@onconet.kiev.ua Получено: 19.02.2015

Иммуноцитохимические исследования клеток крови и костного мозга в диагностике В-линейных неходжкинских лимфом

Institution

Ähnliche Einträge