Особливості культивування та контактної взаємодії in vitro кріоконсервованих мультипотентних стромальних клітин тимуса з гемопоетичними клітинами
Вивчено особливості поведінки у культурі in vitro кріоконсервованих і свіжовиділених мультипотентних стро- мальних клітин (МСК) тимуса мишей лінії СВА. Даний тип клітин має певний поверхневий імунофенотип та високу здатність до диференціювання за остео- та адипогенним напрямками у спеціальних сере...
Збережено в:
| Дата: | 2018 |
|---|---|
| Автор: | |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Ukrainian |
| Опубліковано: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2018
|
| Назва видання: | Проблемы криобиологии и криомедицины |
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/138356 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Особливості культивування та контактної взаємодії in vitro кріоконсервованих мультипотентних стромальних клітин тимуса з гемопоетичними клітинами / К.І. Нікольська // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2018. — Т. 28, № 1. — С. 5-13. — Бібліогр.: 18 назв. — укр., англ. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
irk-123456789-138356 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
irk-123456789-1383562018-06-23T14:42:11Z Особливості культивування та контактної взаємодії in vitro кріоконсервованих мультипотентних стромальних клітин тимуса з гемопоетичними клітинами Нікольська, К.І. Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Вивчено особливості поведінки у культурі in vitro кріоконсервованих і свіжовиділених мультипотентних стро- мальних клітин (МСК) тимуса мишей лінії СВА. Даний тип клітин має певний поверхневий імунофенотип та високу здатність до диференціювання за остео- та адипогенним напрямками у спеціальних середовищах. Після культивування у скляних чашках Петрі, пластикових планшетах і на целофані свіжовиділені та кріоконсервовані клітини показували схожі властивості. При цьому свіжовиділені та кріоконсервовані МСК тимуса на скляній та пластиковій поверхнях формували фібробластні колонії, а на целофані спостерігався їх зливний рост. Встановлено, що МСК тимуса мають мембранну спорідненість до тимоцитів, лімфоцитів лімфатичних вузлів і клітин фетальної печінки. Це обумовлює їх здатність до контактної взаємодії з різними гемопоетичними клітинами з формуванням асоціацій у вигляді фібробласто-лімфоцитарних розеток (ФЛР). Найбільш ефективна контактна взаємодія (утворення ФЛР) здійснюється за участю МСК і тимоцитів, хоча значну кількість ФЛР утворюють також клітини лімфатичних вузлів і фетальної печінки мишей. Кріоконсервування МСК не впливає на їх здатність до контактної взаємодії, що підтверджує можливість використання кріоконсервування для створення відповідних клітинних трансплантатів. Изучены особенности поведения в культуре in vitro криоконсервированных и свежевыделенных мультипотентных стромальных клеток (МСК) тимуса мышей линии СВА. Данный тип клеток имеет определенный поверхностный иммунофенотип и высокую способность к дифференцировки в остео- и адипогенном направлениях в специальных средах. После культивирования в стеклянных чашках Петри, пластиковых планшетах и на целлофане свежевыделенные и криоконсервированные клетки показывали схожие свойства. При этом свежевыделенные и криоконсервированные МСК тимуса на стеклянной и пластиковой поверхностях формировали фибробластные колонии, а на целлофане наблюдался их сливной рост. Установлено, что МСК тимуса имеют мембранное сродство к тимоцитам, лимфоцитам лимфатических узлов и клеток фетальной печени. Это обусловливает их способность к контактному взаи- модействию с различными гемопоэтическими клетками с формированием ассоциаций в виде фибробласто-лимфоцитарных розеток (ФЛР). Наиболее эффективное контактное взаимодействие (образование ФЛР) осуществляется при участии МСК и тимоцитов, хотя значительное количество ФЛР образуют также клетки лимфатических узлов и фетальной печени мышей. Криоконсервирование МСК не влияет на их способность к контактному взаимодействию, что подтверждает возможность использования криоконсервирования для создания соответствующих клеточных трансплантатов. The cultural properties of cryopreserved and freshly isolated thymic multipotent stromal cells (MSCs) of CBA mice were investigated. This cell type has certain surface immune phenotype and high ability to differentiation in osteogenic and adipogenic directions in special media. Fresh and cryopreserved cells showed similar properties when cultured in glass petri dishes, plastic plates and cellophane. Both fresh and cryopreserved MSCs of thymus formed fibroblast colonies on glass and plastic surfaces. Cell growth was observed on cellophane. The thymus MSCs were found to have a membrane affinity for thymocytes, lymphocytes of lymph nodes and fetal liver cells. This determined their ability to interact with various hematopoietic cells with the formation of clusters in the form of fibroblast-lymphocytic rosettes (FLR). The most effective contact interaction (FLR formation) occured when the MSCs and thymocytes were involved, nevertheless the cells of mice lymph nodes and fetal liver also formed a significant number of FLRs. MSCs cryopreservation did no affect their ability to the contact interaction, that confirmed the possibility of using the cryopreservation to create appropriate cell transplants. 2018 Article Особливості культивування та контактної взаємодії in vitro кріоконсервованих мультипотентних стромальних клітин тимуса з гемопоетичними клітинами / К.І. Нікольська // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2018. — Т. 28, № 1. — С. 5-13. — Бібліогр.: 18 назв. — укр., англ. 0233-7673 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/138356 612.35.646: 612.017: 615.361 uk Проблемы криобиологии и криомедицины Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Ukrainian |
| topic |
Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология |
| spellingShingle |
Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Нікольська, К.І. Особливості культивування та контактної взаємодії in vitro кріоконсервованих мультипотентних стромальних клітин тимуса з гемопоетичними клітинами Проблемы криобиологии и криомедицины |
| description |
Вивчено особливості поведінки у культурі in vitro кріоконсервованих і свіжовиділених мультипотентних стро-
мальних клітин (МСК) тимуса мишей лінії СВА. Даний тип клітин має певний поверхневий імунофенотип та високу здатність
до диференціювання за остео- та адипогенним напрямками у спеціальних середовищах. Після культивування у скляних
чашках Петрі, пластикових планшетах і на целофані свіжовиділені та кріоконсервовані клітини показували схожі властивості.
При цьому свіжовиділені та кріоконсервовані МСК тимуса на скляній та пластиковій поверхнях формували фібробластні
колонії, а на целофані спостерігався їх зливний рост. Встановлено, що МСК тимуса мають мембранну спорідненість до
тимоцитів, лімфоцитів лімфатичних вузлів і клітин фетальної печінки. Це обумовлює їх здатність до контактної взаємодії з
різними гемопоетичними клітинами з формуванням асоціацій у вигляді фібробласто-лімфоцитарних розеток (ФЛР). Найбільш
ефективна контактна взаємодія (утворення ФЛР) здійснюється за участю МСК і тимоцитів, хоча значну кількість ФЛР
утворюють також клітини лімфатичних вузлів і фетальної печінки мишей. Кріоконсервування МСК не впливає на їх здатність
до контактної взаємодії, що підтверджує можливість використання кріоконсервування для створення відповідних клітинних
трансплантатів. |
| format |
Article |
| author |
Нікольська, К.І. |
| author_facet |
Нікольська, К.І. |
| author_sort |
Нікольська, К.І. |
| title |
Особливості культивування та контактної взаємодії in vitro кріоконсервованих мультипотентних стромальних клітин тимуса з гемопоетичними клітинами |
| title_short |
Особливості культивування та контактної взаємодії in vitro кріоконсервованих мультипотентних стромальних клітин тимуса з гемопоетичними клітинами |
| title_full |
Особливості культивування та контактної взаємодії in vitro кріоконсервованих мультипотентних стромальних клітин тимуса з гемопоетичними клітинами |
| title_fullStr |
Особливості культивування та контактної взаємодії in vitro кріоконсервованих мультипотентних стромальних клітин тимуса з гемопоетичними клітинами |
| title_full_unstemmed |
Особливості культивування та контактної взаємодії in vitro кріоконсервованих мультипотентних стромальних клітин тимуса з гемопоетичними клітинами |
| title_sort |
особливості культивування та контактної взаємодії in vitro кріоконсервованих мультипотентних стромальних клітин тимуса з гемопоетичними клітинами |
| publisher |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| publishDate |
2018 |
| topic_facet |
Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология |
| url |
http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/138356 |
| citation_txt |
Особливості культивування та контактної взаємодії in vitro кріоконсервованих мультипотентних стромальних клітин тимуса з гемопоетичними клітинами / К.І. Нікольська // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2018. — Т. 28, № 1. — С. 5-13. — Бібліогр.: 18 назв. — укр., англ. |
| series |
Проблемы криобиологии и криомедицины |
| work_keys_str_mv |
AT níkolʹsʹkakí osoblivostíkulʹtivuvannâtakontaktnoívzaêmodííinvitrokríokonservovanihmulʹtipotentnihstromalʹnihklítintimusazgemopoetičnimiklítinami |
| first_indexed |
2025-07-10T05:38:23Z |
| last_indexed |
2025-07-10T05:38:23Z |
| _version_ |
1837237175812358144 |
| fulltext |
УДК 612.35.646: 612.017: 615.361
К.І. Нікольська
Особливості культивування та контактної взаємодії in vitro
кріоконсервованих мультипотентних стромальних клітин
тимуса з гемопоетичними клітинами
UDC 612.35.646: 612.017: 615.361
K.I. Nikolska
Peculiarities of Culture and In Vitro Contact Interaction
of Cryopreserved Thymic Multipotent Stromal Cells
and Hemopoietic Cells
Реферат: Вивчено особливості поведінки у культурі in vitro кріоконсервованих і свіжовиділених мультипотентних стро-
мальних клітин (МСК) тимуса мишей лінії СВА. Даний тип клітин має певний поверхневий імунофенотип та високу здатність
до диференціювання за остео- та адипогенним напрямками у спеціальних середовищах. Після культивування у скляних
чашках Петрі, пластикових планшетах і на целофані свіжовиділені та кріоконсервовані клітини показували схожі властивості.
При цьому свіжовиділені та кріоконсервовані МСК тимуса на скляній та пластиковій поверхнях формували фібробластні
колонії, а на целофані спостерігався їх зливний рост. Встановлено, що МСК тимуса мають мембранну спорідненість до
тимоцитів, лімфоцитів лімфатичних вузлів і клітин фетальної печінки. Це обумовлює їх здатність до контактної взаємодії з
різними гемопоетичними клітинами з формуванням асоціацій у вигляді фібробласто-лімфоцитарних розеток (ФЛР). Найбільш
ефективна контактна взаємодія (утворення ФЛР) здійснюється за участю МСК і тимоцитів, хоча значну кількість ФЛР
утворюють також клітини лімфатичних вузлів і фетальної печінки мишей. Кріоконсервування МСК не впливає на їх здатність
до контактної взаємодії, що підтверджує можливість використання кріоконсервування для створення відповідних клітинних
трансплантатів.
Ключові слова: кріоконсервування, мультипотентні стромальні клітини, тимус, клітини фетальної печінки, лімфоцити,
культури клітин, контактна клітинна взаємодія.
Реферат: Изучены особенности поведения в культуре in vitro криоконсервированных и свежевыделенных
мультипотентных стромальных клеток (МСК) тимуса мышей линии СВА. Данный тип клеток имеет определенный
поверхностный иммунофенотип и высокую способность к дифференцировки в остео- и адипогенном направлениях в
специальных средах. После культивирования в стеклянных чашках Петри, пластиковых планшетах и на целлофане
свежевыделенные и криоконсервированные клетки показывали схожие свойства. При этом свежевыделенные и
криоконсервированные МСК тимуса на стеклянной и пластиковой поверхностях формировали фибробластные колонии,
а на целлофане наблюдался их сливной рост. Установлено, что МСК тимуса имеют мембранное сродство к тимоцитам,
лимфоцитам лимфатических узлов и клеток фетальной печени. Это обусловливает их способность к контактному взаи-
модействию с различными гемопоэтическими клетками с формированием ассоциаций в виде фибробласто-лимфоцитарных
розеток (ФЛР). Наиболее эффективное контактное взаимодействие (образование ФЛР) осуществляется при участии МСК
и тимоцитов, хотя значительное количество ФЛР образуют также клетки лимфатических узлов и фетальной печени мышей.
Криоконсервирование МСК не влияет на их способность к контактному взаимодействию, что подтверждает возможность
использования криоконсервирования для создания соответствующих клеточных трансплантатов.
Ключевые слова: криоконсервирование, мультипотентные стромальные клетки, тимус, клетки фетальной печени,
лимфоциты, культуры клеток, контактное клеточное взаимодействие.
Abstract: The cultural properties of cryopreserved and freshly isolated thymic multipotent stromal cells (MSCs) of CBA mice
were investigated. This cell type has certain surface immune phenotype and high ability to differentiation in osteogenic and
adipogenic directions in special media. Fresh and cryopreserved cells showed similar properties when cultured in glass petri
dishes, plastic plates and cellophane. Both fresh and cryopreserved MSCs of thymus formed fibroblast colonies on glass and
plastic surfaces. Cell growth was observed on cellophane. The thymus MSCs were found to have a membrane affinity for
thymocytes, lymphocytes of lymph nodes and fetal liver cells. This determined their ability to interact with various hematopoietic
cells with the formation of clusters in the form of fibroblast-lymphocytic rosettes (FLR). The most effective contact interaction (FLR
formation) occured when the MSCs and thymocytes were involved, nevertheless the cells of mice lymph nodes and fetal liver also
formed a significant number of FLRs. MSCs cryopreservation did no affect their ability to the contact interaction, that confirmed the
possibility of using the cryopreservation to create appropriate cell transplants.
Key words: cryopreservation, multipotent stromal cells, thymus, fetal liver cells, lymphocytes, cell culture, cell contacts.
Адреса для кореспонденції:
вул. Вишгородська, 67, м. Київ, Україна 04114;
тел.: (+38 044) 521-33-31
електронна пошта: nakato@bigmir.net
Corresponding address:
67, Vyshhorodska str., Kyiv, Ukraine 04114;
tel.:+380 44 521 3331
e-mail: nakato@bigmir.net
Institute of Genetic and Regenerative Medicine of the National Aca-
demy of Medical Sciences of Ukraine, Kyiv, Ukraine
ДУ «Інститут генетичної та регенеративної медицини НАМН Ук-
раїни», м. Київ
Надійшла 17.07.2017
Прийнята до друку 19.02.2018
Received July, 17, 2017
Accepted February, 19, 2018
оригінальне дослідження research article
Probl Cryobiol Cryomed 2018; 28(1): 005–013
https://doi.org/10.15407/cryo28.01.005
This is an Open Access article distributed under the terms of the Creative Commons Attribution License (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0),
which permits unrestricted reuse, distribution, and reproduction in any medium, provided the original work is properly cited.
© 2018 K.I. Nikolska. Published by the Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine
6 проблеми кріобІологІї і кріомедицини
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 28, №/issue 1, 2018
На сьогодні вивчення властивостей мультипо-
тентних стромальних клітин (МСК) у галузі клітин-
ної терапії є одним із основних напрямків наукових
досліджень. Такі клітини отримують із кісткового
мозку, тимуса, шкіри, жирової тканини, пуповини,
плаценти та інших тканин [13]. Це фібробластоїдні
клітини, які адгезують до пластика, мають певний
поверхневий імунофенотип і здатні до лінійного
диференціювання за остео-, хондро-, адипогенним
та іншими напрямками [11, 14, 17].
У кістковому мозку МСК залучені до структур-
но-функціональної організації ніш гемопоетичних
стовбурових клітин (ГСК) [2, 3]. Тимусні МСК бе-
руть участь у формуванні мікрооточення клітин-
попередників у тимусі, суттєво впливають на ди-
ференціацію, проліферацію та міграцію тимоцитів.
Тимусна мезенхіма відіграє значну роль також в
ембріональному розвитку органа [12]. Відомо, що
МСК різного походження володіють імуномоду-
люючою активністю [10, 18]. Метою чисельних
досліджень було вивчення властивостей кістково-
мозкових МСК. Незважаючи на важливість клітин-
них процесів у тимусі, властивості тимусних МСК
мало досліджені й потребують більш глибокого вив-
чення. Недостатньо з’ясовані їх культуральні влас-
тивості, знання яких має не тільки теоретичне, а й
практичне значення для створення клітинних пре-
паратів. У цьому сенсі особлива увага повинна при-
ділятися і дослідженню можливостей кріоконсер-
вування тимусних МСК із збереженням здатності
розморожених і культивованих клітин до контактної
взаємодії з гемопоетичними клітинами, яка відпо-
відає за функціональну підтримку останніх.
Мета роботи – вивчити особливості розвитку
in vitro нативних (некріоконсервованих) і кріокон-
сервованих МСК тимуса за різних умов культи-
вування і визначити вплив кріоконсервування на
здатність МСК тимуса до контактної взаємодії з
клітинами гемопоетичного ряду.
Матеріали та методи
Мультипотентні стромальні клітини тимуса ми-
шей лінії СВА культивували на поверхні целофа-
нових пластинок, скляній поверхні культуральних
матраців або чашок Петрі та на поверхні лунок плас-
тикових 6-лункових планшетів.
Для культивування застосовували живильне сере-
довище DMEM/F12 («Sigma», США) з 10% ембріо-
нальної телячої сироватки (ЕТС) («Sigma»), 2,5 мМ
L-глутаміну («Sigma»), 1мМ HEPES («Sigma»), а
також по 100 мкг/мл пеніциліну, стрептоміцину та
канаміцину («Дарниця», Україна). Перед викорис-
танням целофанові пластинки для знежирення
поверхні обробляли ефіром і спиртом [4].
Перед культивуванням на целофані тканину ти-
муса подрібнювали ножицями на шматочки роз-
Nowadays, the study of the properties of multi-
potent stromal cells (MSCs) is one of the main areas
of scientific research in cell therapy. These cells could
be derived from bone marrow, thymus, skin, adipose
tissue, umbilical cord, placenta and other tissues [8].
These are fibroblastoid cells, which adhere to plastic,
have a certain surface immunophenotype and are ca-
pable of linear differentiation into the osteo-, chondro-,
adipogenic and other directions [6, 11, 15].
Bone marrow MSCs support the structure and
function of niche for hematopoietic stem cells (HSCs)
[9, 10]. Thymic MSCs contribute to formation of the
microenvironment for thymus precursor cells, as well
as greatly affect the differentiation, proliferation and
migration of thymocytes. Thymic mesenchyma plays
a significant role in embryonic development of organ
too [7]. It is known that MSCs of various origins render
an immunomodulatory activity [10, 18]. The purpose
of numerous studies was to investigate the properties
of bone marrow MSCs. Due to the importance of
processes occurring in thymus cells, the properties of
thymic MSCs require a more detailed study. In parti-
cular, there is no clear understanding of their properties
in culture, that is not only of theoretical but also prac-
tical value to create the cell-based medical products. In
this regard a special attention should be paid to inves-
tigation of the possibility to cryopreserve the thymic
MSCs with preserving the ability of frozen-thawed and
cultured cells to implement the contact interaction with
hematopoietic cells, and in such a way to support the
function of the latter.
The research aim was to study the peculiarities of
in vitro development of native (i. e. non-cryopreserved)
and cryopreserved MSCs of thymus under various cul-
turing conditions and to determine the cryopreserva-
tion effect on the ability of thymic MSCs to the contact
interactions with hemopoietic cells.
Materials and methods
Multipotent stromal cells of CBA mice thymus were
cultured on a cellophane plates, glass surface of culture
flasks or Petri dishes, and in the plastic 6-well plates.
Culture was performed using DMEM/F12 nutrient
medium (Sigma, USA) supplemented with 10% fetal
bovine serum (FBS) (Sigma), 2.5 mM L-glutamine
(Sigma), 1 mM HEPES (Sigma), 100 µg/ml of Penicillin,
Streptomycin and Kanamycin (Darnitsa, Ukraine). Be-
fore using the cellophane plates were ungreased by
ether and alcohol [12].
Prior to culturing on cellophane plate, the thymus
tissue was cut with scissors to obtain the fragments
less than 1 mm3, then they were fixed in dissected cel-
lophane plates (1 cm2) and placed into penicillin vials
with culture medium (5 ml). The vials with the samp-
les were kept in a thermostat at 37°C. Every 5 days the
culture medium was changed.
проблеми кріобіології і кріомедицини
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 28, №/issue 1, 2018
7
міром не більше 1 мм3, фрагменти фіксували у роз-
різах целофанових пластинок (1 см2), які поміщали
у пеніцилінові флакони з культуральним середови-
щем (5 мл). Флакони з матеріалом витримували у
термостаті при температурі 37°С. Через кожні 5 діб
середовище культивування замінювали.
Перед культивуванням клітин на скляній або
пластиковій поверхнях тканину тимуса подрібню-
вали на шматочки розміром не більше 1 мм3. При
цьому велика кількість тимоцитів, що не адгезують
до поверхні, переходила в середовище. Фрагменти
тканини двічі промивали розчином Хенкса, відми-
вали від тимоцитів і потім переносили у судини для
культивування. До скляного культурального мат-
рацу (50 см2) або до чашки Петрі (діаметр 10 см)
переносили фрагменти цілого тимуса, до ячейки
6-лункового пластикового планшета – фрагменти
половини органа в мінімальному об’ємі живиль-
ного середовища, щоб поверхня дна матрацу, чашки
або лунки була трохи змоченою. Культури перено-
сили в СО2-інкубатор («Jouan», Франція) з 5% СО2
при 37°С. Через 2 години, коли шматочки тимуса
вже прикріпилися до поверхні, додавали живильне
середовище. Через кожні 3–4 доби половину сере-
довища замінювали на свіже. За виходом клітин із
експлантатів та їх ростом спостерігали у світловому
інвертованому мікроскопі, фіксуючи активність
клітинного росту на всіх термінах спостереження.
Прикріплені експлантати видаляли із культури
через 7–10 діб механічним шляхом. У кожному
експерименті вивчали по 5–6 культур. Через 15–
30 діб клітини тимуса, які культивувалися на цело-
фанових пластинках, та колонії, що сформувалися
на пластиковій або скляній поверхнях, фіксували
розчином Май-Грюнвальда та забарвлювали азурІІ-
еозином.
З метою ідентифікування МСК вивчали їх здат-
ність до диференціювання за остео- та адипоген-
ним напрямками. Остеогенне диференціювання
клітин індукували культивуванням у середовищі
DMEM/F12, 1:1 із додаванням 15% ЕТС; 10 мМ L-
глютаміну; 50 мкг/мл L-аскорбінової кислоти; 10 мМ
L-гліцерофосфату; 0,1 мкМ дексаметазону (все від
«Sigma») та по 100 мкг/мл пеніциліну і стрептомі-
цину («Дарниця», Україна). Адипогенне диферен-
ціювання клітин індукували культивуванням у сере-
довищі DMEM-HG («РАА», Німеччина) з високим
вмістом глюкози (4,5 г/л) і додаванням 10% конячої
сироватки («РАА»); 10 мМ L-глютаміну («Sigma»);
0,5 мкМ дексаметазону («Sigma»), 6 мкг/мл інсу-
ліну («Sigma») та по 100 мкг/мл пеніциліну і стреп-
томіцину («Дарниця»). Культивування проводили в
CO2-інкубаторі («Jouan») при 37°С і 5% CO2 про-
тягом 10 діб.
Ефективність диференціювання клітин визна-
чали фарбуванням індукованих в остеогенному
Before cell culturing on glass or plastic surfaces,
the thymus tissue was fragmented to pieces less than
1 mm3. Thereat a large number of thymocytes was
released into the medium. Tissue fragments were wa-
shed twice with Hanks solution, washed free of thy-
mocytes and then transferred to culturing vials. The
fragments of the whole thymus were transferred either
into a glass culture flask (50 cm2) or a Petri dish (10 cm
diameter). The fragments of a half of the organ in the
nutrient medium were placed into the cell of 6-well
plastic plate, the amount of the medium was enough
to slightly moisten the culture surface of the flask, pla-
te or well. The specimens were transferred into CO2
incubator (Jouan, France) with 5% CO2 at 37°C. After
2 hours the fragments of thymus were attached to the
surface and a nutrient medium was introduced. Every
3–4 days a half of the medium was replaced with a
fresh one. The migration of cells from the explants
and their growth were observed using an inverted light
microscope, the activity of cell growth was recorded
within all the observation terms. The attached explants
were mechanically removed from the culture after 7–
10 days. In each experiment, 5–6 cultures were studied.
After 15–30 days the thymus cells cultured on cello-
phane plates and the colonies formed on plastic or glass
surfaces were fixed with May-Grunwald solution and
stained by AzureII-Eosin.
To identify the MSCs, their ability to differentiate
in osteo- and adipogenic directions was studied. Osteo-
genic cell differentiation was induced by culturing in
DMEM/F12 medium, 1:1 with addition of 15% ETC;
10 mM L-glutamine (Sigma); 50 µg/ml of L-ascorbic
acid; 10 mM L-glycerophosphate; 0.1 mM dexametha-
sone (all from Sigma) and 100 µg/ml of Penicillin and
Streptomycin (Darnitsa, Ukraine). Adipogenic cell dif-
ferentiation was induced by culturing in DMEM-HG
medium (PAA, Germany) with a high glucose content
(4.5 g/L) and addition of 10% horse serum (PAA);
10 mM L-glutamine; 0.5 mM dexamethasone, 6 µg/ml
insulin (all from Sigma) and 100 µg/ml Penicillin and
Streptomycin (Darnitsa). Culturing was performed in a
CO2-incubator (Jouan) at 37°C and 5% CO2 for 10 days.
The efficiency of cell differentiation was determi-
ned by staining the calcium salts deposits in the cul-
tures induced in osteogenic direction using 1% Alizarin
Red S, and the cells developing in adipogenic direc-
tion were treated with 0.2% Oil Red O (both dyes
from Sigma) to reveal lipid vacuoles [13]. Alizarin Red
and Oil Red were extracted with 10% acetic acid or
isopropyl alcohol, respectively. Optical density of obtai-
ned solutions was assessed in 96-well plate containing
200 µl of extract with spectrophotometer Sunrise (Tecan,
Austria) at a wavelength of 520 nm.
Considering the fact that the experimental study
of cell sensitivity to cryopreservation requires quite a
large number of standardized cells, some of the second
8 проблеми кріобІологІї і кріомедицини
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 28, №/issue 1, 2018
напрямку культур на відкладення солей кальцію
1%-м розчином алізаринового червоного S («Sigma»)
та індукованих в адипогенному напрямку культур
на ліпідні вакуолі 0,2%-м розчином масляного чер-
воного О («Sigma») [15]. Алізариновий червоний
та масляний червоний екстрагували 10%-м роз-
чином оцтової кислоти або ізопропіловим спиртом
відповідно. Інтенсивність забарвлення отриманих
розчинів оцінювали в ячейках 96-лункового план-
шета, які містили по 200 мкл екстракту, вимірюючи
оптичну густину на спектрофотометрі «Sunrise»
(«Tecan», Австрія) при довжині хвилі 520 нм.
Враховуючи, що для постановки експеримен-
тів і вивчення чутливості клітин до кріоконсерву-
вання потрібна достатня кількість клітин із бажано
більш стандартизованими властивостями, ми отри-
мували пул МСК 2-го пасажу, накопичували і збе-
рігали кріоконсервуванням, використовуючи прог-
рамний заморожувач «KRYO 560 16» («Planer», Велика
Британія) і ДМСО в кінцевій концентрації 5%. Клі-
тини заморожували в три етапи: перший етап – від
кімнатної температури до (–3,5 ± 0,5)°С зі швид-
кістю охолодження (1 ± 0,5) град/хв; другий етап –
швидкість охолодження (0,4 ± 0,1) град/хв до
температури –9°С; третій етап – до температури –
80°С зі швидкістю охолодження 10 град/хв. Потім
пробірки з клітинами занурювали у рідкий азот.
Зразки розморожували безпосередньо перед засто-
суванням при температурі (40 ± 0,5)°С до появи в
кріопробірці рідкої фази. Після повного розморо-
жування клітини відмивали від кріопротектора
шляхом центрифугування при 250g протягом 5 хв
із подальшим ресуспендуванням у живильному
середовищі.
Тимоцити і клітини лімфатичних вузлів дорос-
лих мишей та клітини фетальної печінки 14-ден-
них ембріонів мишей линії СВА отримували дис-
пергуванням органів в середовищі препаруваль-
ними голками, фільтрацією суспензії через нейлонове
сито і відмиванням у такому ж середовищі.
Постановку реакції утворення фібробластолім-
фоцитарних розеток (ФЛР) здійснювали наступним
чином, при цьому за розетку вважали асоціацію
МСК із трьома і більше лімфоцитами. У мікро-
пробірку вносили 1 × 104 МСК у 0,1 мл живильного
середовища. Потім в 0,1 мл середовища додавали
1 × 106 тимоцитів, клітин лімфатичних вузлів або
фетальної печінки (1:100). Перемішану суспензію
клітин центрифугували при 250g протягом 5 хв. Осад
негайно ресуспендували піпетуванням в об’ємі
0,1 мл. Для забарвлювання МСК краплю суспензії
наносили на покрите нейтральним червоним пред-
метне скло. Потім суспензію переносили в камеру
Горяєва, в якій підраховували кількість ФЛР. Кожну
пробу дублювали і обчислювали середнє значення.
Результати виражали в процентах.
passage cells were frozen with controlled rate free-
zer KRYO-560 16 (Planer, UK) using DMSO in a
final concentration of 5%. The cells were frozen by
three step procedure: the first step was the freezing
from room temperature down to (–3.5 ± 0.5)°С with a
cooling rate of (1 ± 0.5) deg/min; the second step
involved the cooling rate (0.4 ± 0.1) deg/min down to
–9°С; the third stage comprised freezing down to –
80°С with a cooling rate of 10 deg/min. After that, the
tubes with cells were immersed into liquid nitrogen.
The samples were thawed immediately prior to further
use at a temperature of (40 ± 0.5)°С up to the liquid
phase appearance in the cryovial. After complete
thawing, the cells were washed from cryoprotectant
using centrifugation at 250g for 5 min and following
resuspending in the nutrient medium.
Thymocytes and cells of lymph nodes of adult mice
and fetal liver cells of 14-day-old CBA mice embryos
were obtained by means of dispersing the organs in
the medium with preparation needles, filtration of the
suspension through nylon sieve and washing in the
similar medium.
The assessment of fibroblast-lymphocyte rosettes
(FLRs) formation was performed as follows. Herewith
cluster of MSCs with three or more lymphocytes was
considered as a rosette. Microtube was filled with 0.1
ml of nutrient medium and 1 × 104 MSCs was added.
Then 1 × 106 thymocytes, cells of lymph nodes or fetal
liver (1:100) were added to 0.1 ml of the medium. The
suspension of cells was stirred and centrifuged at 250g
for 5 min. The sediment was immediately resuspended
by pipetting in a 0.1 ml volume. To stain the MSCs, a
drop of suspension was put to a glass slide coated with
Neutral Red. Thereafter suspen-sion was transferred
to Goryaev’s counting chamber, and the number of
FLRs was calculated. Each sample was duplicated
and a mean value was calculated. The results were
expressed as a percentage.
The results were statistically processed according
to Chauvenet’s criteria (to identify abnormal results of
measurements), Student (t) and non-parametric Wil-
coxon-Mann-Whitney (U) criterion (to determine the
significance of differences).
Results and discussion
Results of culturing of thymus MSCs under diffe-
rent conditions. Culturing on cellophane plates in the
first two days resulted in adaptation of the explants to
new culturing conditions, herewith they looked like
dense fragments. Noticeable start of the cell prolife-
ration and their migration from the explants were
observed for 3–4 days. The fibroblastoid cells be-
gan to migrate beyond the explants and adhered on
the surface of the cellophane plate. Thereafter their
active propagation began: the number of cells was
increased on both surfaces of the foil and in some cases
проблеми кріобіології і кріомедицини
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 28, №/issue 1, 2018
9
Статистичну обробку результатів проводили за
критеріями Шовене (для виявлення аномальних
результатів вимірювань), Стьюдента (t) та непа-
раметричним критерієм Вілкоксона-Манна-Уїтні
(U) (для визначення значущості відмінностей).
Результати та обговорення
Результати культивування МСК тимуса в
різних умовах. Під час культивування на целофа-
нових пластинках у перші дві доби експлантати
адаптувалися до нових умов культивування, при
цьому вони мали вигляд щільних шматочків. По-
мітний початок розмноження клітин та їх вихід із
експлантатів відмічалися на 3–4 добу. Фіброблас-
тоїдні клітини починали мігрувати за межі експлан-
татів і адгезували в зоні контакту з поверхнею цело-
фанової плівки. Надалі розпочиналося їх активне
розмноження: кількість клітин збільшувалася на
обох поверхнях плівки, а в деяких випадках вони
займали всю її площу. Найбільше зосередження
клітин спостерігалося в зонах, наближених до
експлантатів, поступово їх кількість зменшувалася
пропорційно віддаленості від експлантата. Щіль-
ність фібробластоїдних клітин у зоні росту була
неоднакова: клітини, що наближені до експлантата,
тісно контактували між собою, мали менший роз-
мір, із збільшенням відстані від експлантата до
краю пласта їх розміри збільшувалися, між ними
з’являлися щілини та різної величини порожнини.
Найбільш активна проліферація цих клітин відмі-
чалася на 12–13-ту добу культивування і суттєво
зменшувалася до 30-ї доби.
Під час культивування на скляній або пласти-
ковій поверхні в перші 2–3 доби навколо фрагментів
тимуса густим шаром лежали тимоцити, які вихо-
дили із цих фрагментів. Вони не прикріплялися до
поверхні, і тому кількість тимоцитів зменшувалася
з кожною заміною середовища, на 10–12-ту добу
культивування вони практично повністю зникали.
На 3–4 добу культивування серед дрібних округ-
лих тимоцитів виявлялися окремі більші за розмі-
рами клітини, які, на відміну від тимоцитів, прикріп-
лялися до поверхні. На 5–6-ту добу на цьому місці
формувалися кластери і колонії великих овальних
клітин, які у подальшому мали вигляд блідої білої
плями. У складі колоній поступово з’являлися менші
за розміром клітини типового фібробластоподіб-
ного типу, при цьому їх кількість збільшувалася.
Великі овальні клітини, які, можливо, повільно реа-
гують на контакт із поверхнею і затримують зви-
чайне формування виростів, залишалися у складі
сформованих колоній, але їх кількість була значно
меншою (1:20 –1:40). В окремих експериментах
кількість колоній складала від 2–3 до 50 на культу-
ральну поверхню. Ця розбіжність у кількості утво-
рених колоній фібробластів, можливо, відображає
they occupied the entire area. The highest concent-
ration of cells was observed in the zones close to the
explants, their number decreased gradually directly
depending on the distance from the explant. The den-
sity of fibroblastoid cells in the growth zone was not
equal: the cells being close to the explant had the mu-
tual contacts, were of a smaller size; the bigger was
the distance from the explant to the plate edge the lar-
ger were the cells; there were appeared the gaps and
cavities of different sizes between the cells. The most
active proliferation of these cells was observed to days
12–13 of culturing and significantly decreased to the
day 30.
Culturing either on a glass or plastic surface resul-
ted in the migration of vast amount of thymocytes from
thymus fragments in the first 2–3 days. They were not
attached to the surface, and therefore the number of
thymocytes decreased with each replacement of the
medium, they disappeared almost completely to the
10–12th day of culturing.
To the 3–4th days of culturing among small roun-
ded thymocytes the single larger cells appeared, which
attached to the surface unlike thymocytes. To the 5–
6th day, the clusters and colonies of large oval cells were
formed, and later appeared as pale white spots. The
colonies which included smaller cells of fibroblast
like type appeared, their number increased gradually.
Large oval cells, which likely slowly respond to con-
tact with the surface and inhibit the normal forma-
tion of the processes, remained in the formed colonies,
but their number was significantly lower (1:20 – 1:40).
In some experiments, the number of colonies was from
2–3 up to 50 per culture surface. This diversity in the
number of the formed fibroblast colonies may reflect
the differences of growth conditions in certain culture
plates or individual properties of MSCs of various tis-
sue samples [3].
The stained cell colonies on the surface of glass
flask, glass surface of Petri dish, as well as in the cells of
the plastic 6-well plate were easy to observe (Fig. 1).
Analysis of the colonies of thymic MSCs with mic-
roscope revealed the cells of fibroblastoid morpho-
logy, with different size and distribution in the area
(Fig. 2). In the cultures on cellophane plates the cells
were ‘crowding’ without formation of colonies. This
likely testified to a strong effect of culture surface cha-
racteristics on the features of cell culture development.
Thus, culturing of the CBA mice thymus fragments
on glass and plastic surfaces resulted in the almost
the same dynamics of culture development and for-
mation of the colonies containing different morpho-
logical types of adhesive fibroblastoid cells. Culturing
of the cells on cellophane surface was accompanied
with cell crowding.
In the following experiments we have used the cryo-
preserved thymic MSCs of the second passage with
10 проблеми кріобІологІї і кріомедицини
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 28, №/issue 1, 2018
відмінності умов нарощування у певних культу-
ральних посудинах або індивідуальні властивості
МСК із різних зразків тканини [7].
Забарвлені колонії клітин на поверхні скляного
матраца, скляній поверхні чашки Петрі, а також у
комірках пластикового 6-лункового планшета було
видно неозброєним оком (рис. 1).
Мікроскопічний аналіз встановив, що в колоніях
МСК тимуса клітини мають різну фібробластопо-
дібну морфологічну структуру, розмір та характер
розподілу по площі (рис. 2). У культурах на цело-
фанових пластинках для клітин характерні ознаки
зливного росту без формування колоній. Можливо,
це свідчить про суттєвий вплив культуральної по-
верхні на характер розвитку клітинної культури.
Таким чином, у процесі культивування фрагмен-
тів тимуса мишей лінії СВА на скляній та пластико-
вій поверхнях отримано схожі результати з практично
однаковою динамікою розвитку культур та утво-
ренням колоній, які містять різні морфологічні типи
адгезуючих фібробластоїдних клітин. Під час куль-
тивування клітин на поверхні целофанових плас-
тинок спостерігався їх зливний ріст.
82–86% viability. The dynamics and peculiarities of
growth, as well as their ability to colony formation after
thawing corresponded to the norm.
Fibroblastolymphocytic clusters. Taking into ac-
count the data on the membrane interaction of MSCs
and hematopoietic cells, we have examined if this pro-
cess is possible in vitro at a short-term contact. The
frozen-thawed thymic MSCs were suspended, washed
and used to react with thymocytes, lymph nodes, or
fetal liver cells.
The suspension contained the formed groups with
centrally located MSCs and hemopoietic cells around,
i. e. FLRs (Fig. 3). A relative number of MSCs that
formed FLRs was counted.
Non-frozen and cryopreserved thymic MSCs for-
med a high number of FLRs with thymocytes (Table).
Significantly lower number of FLRs was formed by
the cells of the lymph nodes and fetal liver, that ge-
nerally corresponded to the published data on a higher
affinity to MSCs of immature T-lymphocytes [9]. It
is also known that mature lymphocytes have a memb-
rane affinity to MSCs [8, 16], which is the feature
of fetal liver precursor cells as well [2, 3]. It is impor-
Рис. 1. Утворення колоній МСК тимуса мишей лінії СВА на поверхні скляного матрацу (A), пластикового 6-лункового
планшета (B), скляної чашки Петрі (C) через 15 діб культивувння. Забарвлювання азур ІІ-еозином.
Fig. 1. Formation of colonies of CBA murine thymic MSCs on surface of glass culture flask (A), plastic 6-well plate (B),
Petri dish (C) after 15 days of culturing. Stained with Azure II-Eosin.
A
B
C
проблеми кріобіології і кріомедицини
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 28, №/issue 1, 2018
11
Отримані у зазначених умовах МСК тимуса
ефективно диференціювалися у спеціальних сере-
довищах за остео- та адипогеним напрямками. По-
казник їх життєздатності за ексклюзією трипа-
нового синього становив 82–86%. Динаміка і особ-
ливості росту клітин, а також їх здатність до коло-
нієутворення після розморожування відповідали
нормі.
Фібробластолімфоцитарні асоціації. Врахо-
вуючи дані щодо мембранної взаємодії МСК і
гемопоетичних клітин, ми визначили можливість
реалізації цього процесу в умовах in vitro при ко-
роткочасному їх контакті. Деконсервовані МСК
тимуса суспендували, відмивали і використовували
для реакції з тимоцитами, клітинами лімфатичних
вузлів або фетальної печінки
У суспензії утворювалися асоціації з централь-
но розташованої МСК і приєднаних до неї гемопое-
тичних клітин, тобто ФЛР (рис. 3). Підраховували
відносну кількість МСК, які формували ФЛР.
Встановлено, що нативні та кріоконсервовані
МСК тимуса утворювали велику кількість ФЛР із
тимоцитами (таблиця). Значно меншу кількість
ФЛР утворювали клітини лімфатичних вузлів і
фетальної печінки, що в цілому відповідає літера-
турним даним про більш високу спорідненість до
МСК незрілих Т-лімфоцитів [8]. Крім того відомо,
що і зрілі лімфоцити мають мембранну спорід-
неність до МСК [9, 16], яка притаманна клітинам-
попередникам фетальної печінки [2, 3]. Однак
важливим є той факт, що у нефракціонованій сус-
пензії останніх присутня велика кількість еритро-
цитів, а це може заважати утворенню ФЛР кліти-
нами фетальної печінки лімфоїдного і мієлоїдного
ряду.
Таким чином, встановлено, що в результаті ко-
роткочасного контакту МСК тимуса з лімфоцитами
і клітинами фетальної печінки в суспензії in vitro
формуються їх асоціації у вигляді ФЛР. Більш ви-
ражена здатність до контактної взаємодії з МСК ти-
муса притаманна тимоцитам, що, можливо, свідчить
tant to note that the unfractionated suspension of the-
se cells contain a large amount of erythrocytes. This
may complicate the formation of FLRs by fetal liver
cells of lymphoid and myeloid series.
Thus, it was established that a short-term contact
of thymic MSCs with lymphocytes and fetal liver cell
suspension in vitro, resulted in their grouping in the
form of FLRs. A more pronounced ability to the con-
tact interaction with thymic MSCs was inherent to thy-
mocytes, that might indicate the importance of memb-
rane affinity of the studied cells in thymus functio-
ning and in the thymic niches of stem cells. The activity
of the CBA mice thymic MSCs in forming the FLRs
had not been changed after cryopreservation (Table).
This testifies to the resistance to cryoeffect of the cell-
to-cell contact interaction function in MSCs. The abi-
lity of cryopreserved MSCs to form the colonies also
did not change significantly. The previous results of
the experiments in human fetal MSCs had shown that
Рис. 2. Культури МСК тимуса мишей лінії СВА на целофані (A), пластиковій (B) та скляній (C) поверхнях.
Забарвлювання азур ІІ-еозином, ×200.
Fig. 2. Cultures of CBA murine thymic MSCs on cellophane (A), plastic (B) and glass surfaces (C). Stained with Azure
II-Eosin, ×200.
Рис. 3. Фібробластолімфоцитарні розетки, утворені
МСК тимуса та тимоцитами мишей лінії СВА. Фазовий
контраст, ×320.
Fig. 3. Fibroblast-lymphocyte rosettes, formed by thymic
MSCs and thymocytes of CBA mice, ×320. Phase contrast.
A B C
12 проблеми кріобІологІї і кріомедицини
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 28, №/issue 1, 2018
рення) важко співставити з огляду на різне видове
та тканинне походження МСК, використаних у
роботі, та клітин, досліджених у приведених вище
джерелах. Ймовірно також, що різні прояви функ-
ціональної активності МСК (здатність до контакт-
ної міжклітинної взаємодії та колонієутворення)
опосередковані окремими механізмами, що відріз-
няються за чутливістю до кріоконсервування.
Висновки
1. Показано, що свіжовиділені та кріоконсерво-
вані МСК тимуса мишей лінії СВА, які здатні до
диференціювання за остео- і адипогенним напрям-
ками, можна однаково ефективно культивувати на
скляній і пластиковій поверхнях, чашках Петрі та
лунках планшетів (утворення колоній), а також на
целофанових пластинах (формування моношару з
обох сторін целофану). Нарощені та кріоконсер-
вовані МСК тимуса другого пасажу мають вижи-
ваність 80–90%. Методи нарощування МСК тимуса
in vitro та накопичення необхідної їх кількості
шляхом кріоконсервування можуть бути перспек-
тивними для використання у клінічній практиці.
2. Встановлено, що змішування суспензій
свіжовиділених і розморожених МСК тимуса з
тимоцитами або клітинами лімфатичних вузлів
та фетальної печінки мишей із наступним цент-
рифугуванням та ресуспендуванням сприяє фор-
муванню асоціацій МСК і названих гемопоетич-
них клітин у вигляді ФЛР. Це свідчить про наявність
у цих клітин мембранної спорідненості та про її
збереження у взаємодіючих клітин після кріо-
консервування. Найбільшою здатністю до кон-
тактної взаємодії з МСК тимуса володіють тимо-
цити.
3. Одержані результати дозволяють рекомен-
дувати розроблений експериментальний підхід для
cryopreservation of MSCs, in particular under the pro-
tection of DMSO, affected their ability to differentiate
[1, 5, 6]. These differences as for cryopreservation in
two types of functional activity of MSCs: the ability to
membrane interaction, on the one hand, and colony
formation on another, could be hardly compared due
to different species and tissue, which were the sources
of MSCs used in our work and studied in the resear-
ches mentioned above. It is also likely that various
manifestations of functional activity of MSCs such as
the ability to the cell-to-cell contact interaction and
colony formation, are mediated by certain mechanisms,
varying in cryopreservation sensitivity.
Conclusions
1. It has been shown that freshly isolated and
cryopreserved CBA mice thymic MSCs, capable to
differentiate by osteo- and adipogenic directions, can
be equally efficiently cultured on a glass and plastic
surface, Petri dishes and plate wells (in terms of
colonies formation), as well as on cellophane plates
(formation of a monolayer on both sides of cellophane).
Grown and cryopreserved thymic MSCs of the second
passage had a survival rate of 80–90%. The methods
of growing of thymic MSCs in vitro and reaching their
required number are promising to be used in clinical
practice.
2. It was found that mixing the suspensions of
freshly isolated and frozen-thawed thymic MSCs with
thymocytes or cells of lymph nodes and murine fetal
liver followed by centrifugation and re-suspending
resulted in the grouping of MSCs and hematopoietic
cells in the form of FLRs. This testifies to the presence
of membrane affinity in these cells and its preservation
in interacting cells after cryopreservation. The thymo-
cytes possessed the highest ability to the contact inte-
raction with thymic MSCs.
Кількість ФЛР, утворених свіжовиділеними і кріоконсервованими
МСК тимуса з клітинами тимуса, лімфатичних вузлів та фетальної
печінки мишей СВА
Number of FLRs formed by freshly isolated and cryopreserved thymic
MSCs with thymus, lymph nodes and fetal liver cells of CBA mice
Примітка: * – відмінності значущі в порівнянні з клітинами тимуса, р < 0,05.
Note: * – differences are significant compared to the thymus cells, p < 0.05.
про важливість мембранної спорідне-
ності вивчених клітин у функціонуванні
тимуса та в тимусних нішах стовбуро-
вих клітин. Активність МСК тимуса
мишей лінії СВА при формуванні ФЛР у
результаті кріоконсервування не зміни-
лася (таблиця). Це свідчить про стійкість
до кріовпливу контактної міжклітинної
взаємодії у МСК. Здатність кріоконсер-
вованих МСК до колонієутворення теж
суттєво не змінилася. Результати експе-
риментів на фетальних МСК людини до-
вели, що кріоконсервування МСК, зок-
рема під захистом ДМСО, впливає на
їх здатність до диференціювання [1, 5,
6]. Ці розбіжності кріоконсервування по
відношенню до двох видів функціо-
нальної активності МСК (здатності до
мембранної взаємодії та колонієутво-
КСМ
sCSM
)%(иманитілкатKСМінеровтуилубікя,РЛФьтсікьліK
)%(sllecdnasCSMybdemrofsRLFforebmuN
асумит
sumyht
хинчитафміл
вілзув
sedonhpmyl
икнічепїоньлатеф
revillatef
інелідивожівС
detalosiylhserF
5,51±14,27 *7,71±1,83 *9,31±3,42
9 9 8
інавовреснокоірK
devreserpoyrC
2,31±4,47 *5,61±2,73 *3,21±3,22
01 9 01
проблеми кріобіології і кріомедицини
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 28, №/issue 1, 2018
13
Література
1. Грищенко В.И., Петренко А.Ю., Волкова Н.А., Скоро-
богатова Н.Г. Колониеобразующая активность фибро-
бластоподобных клеток-предшественников из эмбрио-
нальной печени человека в условиях in vitro. Доповіді
НАН України 2005; 2: 128–141.
2. Никольская Е.И. Клеточная композиция костномозговых
ниш гемопоэтических стволовых клеток. Журнал НАМН Ук-
раїни 2015; 21(3–4): 272–286.
3. Никольская Е.И., Бутенко Г.М. Структурно-функциональная
организация костномозговых ниш гемопоэтических ство-
ловых клеток. Клітинна та органна трансплантологія 2016;
4(1): 82–100.
4. Пол Д. Культура клеток и тканей. Москва: Медицина; 1963.
5. Скоробогатова Н.Г., Волкова Н.А., Петренко А.Ю. Остео-
генные и адипогенные свойства фибробластоподобных
клеток-предшественников фетальной печени человека.
Цитология 2008; 4: 317–322.
6. Тарасов А.И., Петренко А.Ю., Грищенко В.И., Джонс Д.Р.Е.
Жизнеспособность клеток эмбриональной печени чело-
века различного фенотипа после криоконсервирования.
Проблемы криобиологии 2002; 3: 36–41.
7. Чертков И.Л., Гуревич О.А. Стволовая кроветворная клетка
и ее микроокружение. Москва: Медицина; 1984.
8. Anderson G., Anderson K.L., Tchilian E.Z. et al. Fibroblast
dependency during early thymocyte development maps to the
CD25+ CD44+ stage and involves interactions with fibroblast
matrix molecules. Eur J Immunol 1997; 27(5): 1200–1206.
9. Anderson G., Moore N.C., Owen J.J., Jenkinson E.J. Cellular
interactions in thymocyte development. Annu Rev Immunol
1996; 14: 73–99.
10.Kassis I., Vaknin-Dembinsky A., Karussis D. Bone marrow me-
senchymal stem cells: agents of immunomodulation and neuro-
protection. Curr Stem Cell Res Ther 2011; 6(1): 63–68.
11.Le Blanc K., Mougiakakos D. Multipotent mesenchymal stromal
cells and the innate immune system. Nat Rev Immunol 2012;
12(5): 383–396.
12.Mouiseddine M., Mathieu N., Stefani J. et al. Characterization
and histological localization of multipotent mesenchymal stro-
mal cells in the human postnatal thymus. Stem Cells Dev 2008;
17(6); 1165–1174.
13.Musina R.A., Bekchanova E.S., Sukhikh G.T. Comparison of
mesenchymal stem cells obtained from different human tis-
sues. Bull Exp Biol Med 2005; 139(4): 504–509.
14.Osada M., Singh V.J., Wu K. et al. Label retention identifies a
multipotent mesenchymal stem cell-like population in the post-
natal thymus. PLoS One 2013; 8(12): e83024.
15.Prockop D.J., Phinney D.G., Bunnell B.A. Mesenchymal stem cells:
methods and protocols. Totowa, NJ: Humana Press; 2008.
16.Sawada M., Nagamine J., Takeda K. et al. Expression of VLA-4
on thymocytes. Maturation stage-associated transition and its
correlation with their capacity to adhere to thymic stromal cells.
J Immunol 1992; 149(11): 3517–3524.
17.Siepe M., Thomsen A.R., Duerkopp N. et al. Human neonatal
thymus-derived mesenchymal stromal cells: characterization,
differentiation, and immunomodulatory properties. Tissue Eng
Part A 2009; 15(7): 1787–1796.
18.Spaggiari G.M., L. Moretta. Cellular and molecular interactions of
mesenchymal stem cells in innate immunity. Immunol Cell Biol
2013; 91(1): 27–31.
References
1. Anderson G., Anderson K.L., Tchilian E.Z. et al. Fibroblast
dependency during early thymocyte development maps to the
CD25+ CD44+ stage and involves interactions with fibroblast matrix
molecules. Eur J Immunol 1997; 27(5): 1200–1206.
2. Anderson G., Moore N.C., Owen J.J., Jenkinson E.J. Cellular
interactions in thymocyte development. Annu Rev Immunol 1996;
14: 73–99.
3. Chertkov I.L., Gurevich O.A. Stem hematopoietic cell and its
microenvironment. Moscow: Meditsyna; 1984.
4. Grischenko V.I., Petrenko A.Yu., Volkova N.A., Skorobogatova
N.G. Colony-forming activity of fibroblast-like precursor cells
from human embryonic liver under in vitro conditions. Dopov Nac
Akad Nauk Ukr 2005; 2: 128–141.
5. Kassis I., Vaknin-Dembinsky A., Karussis D. Bone marrow
mesenchymal stem cells: agents of immunomodulation and
neuroprotection. Curr Stem Cell Res Ther 2011; 6(1): 63–68.
6. Le Blanc K., Mougiakakos D. Multipotent mesenchymal stromal
cells and the innate immune system. Nat Rev Immunol 2012;
12(5): 383–396.
7. Mouiseddine M., Mathieu N., Stefani J. et al. Characterization and
histological localization of multipotent mesenchymal stromal cells
in the human postnatal thymus. Stem Cells Dev 2008; 17(6);
1165–1174.
8. Musina R.A., Bekchanova E.S., Sukhikh G.T. Comparison of
mesenchymal stem cells obtained from different human tissues.
Bull Exp Biol Med 2005; 139(4): 504–509.
9. Nikolskaya E. I., Butenko G. M. Structural-functional organisation
of the bone marrow hematopoietic stem cells niches. Cell and
Organ Transplantology 2016; 4(1): 82–100.
10.Nikolskaya E.I. The cellular composition of bone marrow of
hematopoietic stem cells niches. Zhurnal Natsionalnoi Akademіi
Medychnykh Nauk Ukrainy 2015; 21(3–4): 272–286.
11.Osada M., Singh V.J., Wu K. et al. Label retention identifies a
multipotent mesenchymal stem cell-like population in the postnatal
thymus. PLoS One 2013; 8(12): e83024.
12.Pol D. Culture of cells and tissues. Moscow: Meditsyna; 1963.
13.Prockop D.J., Phinney D.G., Bunnell B.A. Mesenchymal stem cells:
methods and protocols. Totowa, NJ: Humana Press; 2008.
14.Sawada M., Nagamine J., Takeda K. et al. Expression of VLA-4
on thymocytes. Maturation stage-associated transition and its
correlation with their capacity to adhere to thymic stromal cells.
J Immunol 1992; 149(11): 3517–3524.
15.Siepe M., Thomsen A.R., Duerkopp N. et al. Human neonatal
thymus-derived mesenchymal stromal cells: characterization,
differentiation, and immunomodulatory properties. Tissue Eng
Part A 2009; 15(7): 1787–1796.
16.Skorobogatova N.G., Volkova N.A., Petrenko A.Yu. Osteogenic
and adipogenic capacity of fibroblast-like progenitor cells derived
frow human fetal liver. Tsitologiya 2008; 4: 317–322.
17.Spaggiari G.M., L. Moretta. Cellular and molecular interactions of
mesenchymal stem cells in innate immunity. Immunol Cell Biol
2013; 91(1): 27–31.
18.Tarasov A.I., Petrenko A.Yu., Grischenko V.I., Jones D.R.E. Post-
thaw viability of human fetal liver cells of different phenotype.
Probl Cryobiol 2002; 3: 36–41.
вивчення механізмів міжклітинної взаємодії з ме-
тою подальшого використання у кріобіології.
3. The findings allow to recommend the developed
experimental approach for studying the mechanisms
of cell-to-cell interaction and its application in cryobio-
logical studies.
|