Основні валідаційні критерії методу "OCHRAPREP® кількісне визначення охратоксину А з використанням високоефективної рідинної хроматографії"
Проведено оцінку валідаційних критеріїв "повернення" та "коефіцієнт варіації" згідно Рішення 2002/657/EC для охратоксину А, вміст якого визначався методом високоефективної рідинної хроматографії із застосуванням при пробопідготовці імуноафінних колонок OCHRAPREP®. Доведено, що ве...
Збережено в:
| Дата: | 2008 |
|---|---|
| Автори: | , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Ukrainian |
| Опубліковано: |
Інститут геохімії навколишнього середовища НАН України та МНС України
2008
|
| Назва видання: | Журнал Хроматографічного товариства |
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/140308 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Основні валідаційні критерії методу "OCHRAPREP® кількісне визначення охратоксину А з використанням високоефективної рідинної хроматографії" / Л.Г. Бережна, В.І. Цвіліховський, Л.В. Климентьєва // Журнал хроматографічного товариства. — 2008. — Т. VIII, № 3-4. — С. 34-38. — Бібліогр.: 7 назв. — укр. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
irk-123456789-140308 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
irk-123456789-1403082018-07-05T01:23:08Z Основні валідаційні критерії методу "OCHRAPREP® кількісне визначення охратоксину А з використанням високоефективної рідинної хроматографії" Бережна, Л.Г. Цвіліховський, В.І. Климентьєва, Л.В. Основні публікації Проведено оцінку валідаційних критеріїв "повернення" та "коефіцієнт варіації" згідно Рішення 2002/657/EC для охратоксину А, вміст якого визначався методом високоефективної рідинної хроматографії із застосуванням при пробопідготовці імуноафінних колонок OCHRAPREP®. Доведено, що величина повернення та коефіцієнту варіації відповідають Рішенню EC 65732002, а отже даний метод є придатним до використання. Проведена оценка валидационных критериев "возврат" и "коефициент вариации" согласно Решения 2002/657/EC для охратоксина А, содержание которого определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием для пробоподготовки иммуноафинных колонок OCHRAPREP®. Доказано, что возврат и коефициент вариации соответствуют Решению 2002/657/EC, таким образом можно сделать вывод, что данный метод пригоден к использованию. The estimation of such validation characteristics as "recovery" and "coefficient of variation" agrees Decisions 2002/657/EC was carry out for ochratoxin A, which maintenance defined a method of a high performance liquid chromatography with use for sample preparation an immunoaffinity columns OCHRAPREP®. It is shown that return and coefficient of variation correspond to Decision 2002/657/EC, thus it is possible to draw a conclusion that this method is suitable to use. 2008 Article Основні валідаційні критерії методу "OCHRAPREP® кількісне визначення охратоксину А з використанням високоефективної рідинної хроматографії" / Л.Г. Бережна, В.І. Цвіліховський, Л.В. Климентьєва // Журнал хроматографічного товариства. — 2008. — Т. VIII, № 3-4. — С. 34-38. — Бібліогр.: 7 назв. — укр. 1729-7192 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/140308 577.1:614.75 uk Журнал Хроматографічного товариства Інститут геохімії навколишнього середовища НАН України та МНС України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Ukrainian |
| topic |
Основні публікації Основні публікації |
| spellingShingle |
Основні публікації Основні публікації Бережна, Л.Г. Цвіліховський, В.І. Климентьєва, Л.В. Основні валідаційні критерії методу "OCHRAPREP® кількісне визначення охратоксину А з використанням високоефективної рідинної хроматографії" Журнал Хроматографічного товариства |
| description |
Проведено оцінку валідаційних критеріїв "повернення" та "коефіцієнт варіації" згідно Рішення 2002/657/EC для охратоксину А, вміст якого визначався методом високоефективної рідинної хроматографії із застосуванням при пробопідготовці імуноафінних колонок OCHRAPREP®. Доведено, що величина повернення та коефіцієнту варіації відповідають Рішенню EC 65732002, а отже даний метод є придатним до використання. |
| format |
Article |
| author |
Бережна, Л.Г. Цвіліховський, В.І. Климентьєва, Л.В. |
| author_facet |
Бережна, Л.Г. Цвіліховський, В.І. Климентьєва, Л.В. |
| author_sort |
Бережна, Л.Г. |
| title |
Основні валідаційні критерії методу "OCHRAPREP® кількісне визначення охратоксину А з використанням високоефективної рідинної хроматографії" |
| title_short |
Основні валідаційні критерії методу "OCHRAPREP® кількісне визначення охратоксину А з використанням високоефективної рідинної хроматографії" |
| title_full |
Основні валідаційні критерії методу "OCHRAPREP® кількісне визначення охратоксину А з використанням високоефективної рідинної хроматографії" |
| title_fullStr |
Основні валідаційні критерії методу "OCHRAPREP® кількісне визначення охратоксину А з використанням високоефективної рідинної хроматографії" |
| title_full_unstemmed |
Основні валідаційні критерії методу "OCHRAPREP® кількісне визначення охратоксину А з використанням високоефективної рідинної хроматографії" |
| title_sort |
основні валідаційні критерії методу "ochraprep® кількісне визначення охратоксину а з використанням високоефективної рідинної хроматографії" |
| publisher |
Інститут геохімії навколишнього середовища НАН України та МНС України |
| publishDate |
2008 |
| topic_facet |
Основні публікації |
| url |
http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/140308 |
| citation_txt |
Основні валідаційні критерії методу "OCHRAPREP® кількісне визначення охратоксину А з використанням високоефективної рідинної хроматографії" / Л.Г. Бережна, В.І. Цвіліховський, Л.В. Климентьєва // Журнал хроматографічного товариства. — 2008. — Т. VIII, № 3-4. — С. 34-38. — Бібліогр.: 7 назв. — укр. |
| series |
Журнал Хроматографічного товариства |
| work_keys_str_mv |
AT berežnalg osnovnívalídacíjníkriteríímetoduochraprepkílʹkísneviznačennâohratoksinuazvikoristannâmvisokoefektivnoírídinnoíhromatografíí AT cvílíhovsʹkijví osnovnívalídacíjníkriteríímetoduochraprepkílʹkísneviznačennâohratoksinuazvikoristannâmvisokoefektivnoírídinnoíhromatografíí AT klimentʹêvalv osnovnívalídacíjníkriteríímetoduochraprepkílʹkísneviznačennâohratoksinuazvikoristannâmvisokoefektivnoírídinnoíhromatografíí |
| first_indexed |
2025-07-10T10:15:41Z |
| last_indexed |
2025-07-10T10:15:41Z |
| _version_ |
1837254621054107648 |
| fulltext |
34
2008 – Журнал Хроматографічного товариства – т. VІІI – № 3, 4
УДК 577.1:614.75
БЕРЕЖНА Л.Г., ЦВІЛІХОВСЬКИЙ В.І., КЛИМЕНТЬЄВА Л.В.
ОСНОВНІ ВАЛІДАЦІЙНІ КРИТЕРІЇ МЕТОДУ "OCHRAPREP®
КІЛЬКІСНЕ ВИЗНАЧЕННЯ ОХРАТОКСИНУ А З ВИКОРИСТАННЯМ
ВИСОКОЕФЕКТИВНОЇ РІДИННОЇ ХРОМАТОГРАФІЇ"
Проведено оцінку валідаційних критеріїв "повернення" та "коефіцієнт варіації" згід3
но Рішення 2002/657/EC для охратоксину А, вміст якого визначався методом високое3
фективної рідинної хроматографії із застосуванням при пробопідготовці імуноафінних
колонок OCHRAPREP®. Доведено, що величина повернення та коефіцієнту варіації від3
повідають Рішенню EC 65732002, а отже даний метод є придатним до використання.
Проведена оценка валидационных критериев "возврат" и "коефициент вариации"
согласно Решения 2002/657/EC для охратоксина А, содержание которого определяли
методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием для про3
боподготовки иммуноафинных колонок OCHRAPREP®. Доказано, что возврат и кое3
фициент вариации соответствуют Решению 2002/657/EC, таким образом можно
сделать вывод, что данный метод пригоден к использованию.
The estimation of such validation characteristics as "recovery" and "coefficient of variation"
agrees Decisions 2002/657/EC was carry out for ochratoxin A, which maintenance defined a
method of a high performance liquid chromatography with use for sample preparation an im3
munoaffinity columns OCHRAPREP®. It is shown that return and coefficient of variation cor3
respond to Decision 2002/657/EC, thus it is possible to draw a conclusion that this method is
suitable to use.
На сьогоднішній, день у зв'язку зі вступом України до СОТ, в нашій країні все
більшої актуальності набуває налагодження принципів системи якості на вітчизня$
них підприємствах і в лабораторіях. Безперечно, це впритул стосується хіміко$ана$
літичних випробувальних лабораторій, які займаються контролем якості сільсько$
господарської сировини та харчової продукції. Враховуючи достатньо жорсткі ви$
моги в країнах Європейського Союзу до вмісту чужорідних та токсичних сполук в
продуктах харчування [1], має бути доведена ефективність та відтворюваність кож$
ного методу, який застосовується для аналізу цих продуктів. Досягнути цього мож$
на, провівши валідацію методу згідно загальноприйнятих та перевірених підходів,
які, зокрема, представлено в Рішенні 2002/657/ЕС [2]. Даний документ містить пра$
вила для хіміко$аналітичних методик, що використовуються при дослідженні зраз$
ків, відібраних відповідно до другого положення Статті 15 Директиви 96/23/EC, і
визначає загальні критерії інтерпретації отриманих результатів у лабораторіях, які
здійснюють офіційний контроль залишків фармакологічно$активних речовин у
пробах тваринного походження. При цьому, враховуючи досить докладне та чітке
представлення процедури валідації, підбір її критеріїв та опрацювання отриманих
35
даних. Рішення 2002/657/ЕС загалом можна використати як основу для проведен$
ня валідації будь$якого аналітичного методу досліджень.
Варто відмітити, що серед найважливіших напрямків хімічного аналізу безпеки
продукції агропромислового комплексу є дослідження вмісту мікотоксинів в сіль$
ськогосподарській сировині та продуктах харчування з огляду на їх токсичність та
розповсюдженість [3]. Одним з найбільш поширених та токсичних мікотоксинів є
охратоксин А, продукт пліснявих грибів родів Aspergillus та Penicilium [4]. Плісня$
вими грибами, а отже і їх токсичними метаболітами, можуть бути уражені горіхи,
пряності, зернові культури, корми, призначені для сільськогосподарських тварин
тощо [5]. З огляду на вищезазначене, очевидною і нагальною є потреба наявності
ефективних і точних методів визначення вмісту охратоксину А в харчових продук$
тах, сировині та кормах для сільськогосподарських тварин. Одним з таких методів є
високоефективна рідинна хроматографія з флуоресцентним детектуванням, що
дозволяє виявити охратоксину А в достатньо низьких концентраціях [5].
Метою даної роботи було визначити валідаційні критерії "повернення" та "коефі$
цієнт варіації" методу "OCHRAPREP® Кількісне визначення охратоксину А з вико$
ристанням високоефективної рідинної хроматографії для його метрологічної оцін$
ки згідно Рішення 2002/657/ЕС.
Матеріали та методика дослідження
Дослідження проводили при середній температурі оточуючого середовища 25 °С
та вологості не більшій за 80 %.
В роботі було використано імуноафінні колонки OCHRAPREP®, призначені для
виділення охратоксину А зі злаків, кави та пива, виробництва компанії R$BIO$
PHARM RHONE LTD [6].
Для визначення вмісту охратоксину А, як матрицю було обрано зерно ячменю.
Проби зерна ячменю грубого помелу масою по 50 г збагачували розчином охраток$
сину А (0,2 мкг/мл в рухомій фазі), відбираючи при цьому наступні аліквоти: для
концентрації 1,5 мкг/кг – 375 мкл; для концентрації 3 мкг/кг – 750 мкл; для кон$
центрації 4,5 мкг/кг – 1125 мкл. Екстракцію охратоксину А проводили 60 % розчи$
ном ацетонітрилу, перемішуючи на шейкері при високій швидкості протягом 2 хв,
після чого екстракт фільтрували через паперовий фільтр. Відбирали 4 мл фільтрату
(що, згідно методу досліджень, відповідає 1 г зразку) та розводили 44 мл фосфатно$
го буферу (рН 7,2). За допомогою вакуумної установки твердофазної екстракції роз$
ведений фільтрат пропускали через імуноафінну колонку OCHRAPREP® для за$
кріплення молекул охратоксину А у фазі моноклональних антитіл колонки. Колон$
ку промивали 20 мл фосфатного буферу, після чого елюювали зв'язаний охратоксин
А пропусканням через колонку 1,5 мл десорбційного розчину, що містив 98 об'ємів
метанолу та 2 об'єми оцтової кислоти, після чого імуноафінну колонку промивали
1,5 мл деіонізованої води. Елюат загальним об'ємом 3 мл збирали у пляшечку для
аналізу на рідинному хроматографі Shimadzu LC 20A з флуоресцентним детектором
RF$10A XL. Умови хроматографічного аналізу:
1. швидкість потоку 1 мл/хв;
2. об'єм уведення: 20 мкл;
3. температура термостата колонки: 40 °С;
4. довжини хвиль: λex = 333 нм; λem = 443 нм;
5. рухома фаза: ацетонітрил/вода/оцтова кислота (51:47:2 об:об:об);
6. хроматографічна колонка з оберненою фазою Agilent Zorbax ODS – довжина
250 мм; внутрішній діаметр 4,6 мм; розмір часток 5,0 мкм.
36
Результати та обговорення
Перш ніж розпочинати оцінку будь$яких валідаційних критеріїв чи параметрів,
необхідно визначити тип обраного методу. В даному випадку, метод є кількісним,
так як згідно Рішення 2002/657/ЕС [2] це аналітичний метод, який визначає кіль$
кість або масову частку речовини таким чином, що вона може бути виражена у виг$
ляді числового значення відповідних одиниць. Одним з найважливіших критеріїв
кількісного аналітичного методу є правильність – ступінь близькості між середнім
значенням, що отримано з серії результатів досліджень та прийнятим значенням.
Даний критерій відображає, наскільки отриманий результат відповідає фактичному
значенню, і для його визначення дослідники зобов'язані використовувати сертифі$
кований референтний матеріал. В разі його відсутності дозволено використовувати
спосіб додавання стандартів до чистої матриці з наступним визначенням аналізу, та
відповідним розрахунком відсотку повернення (П). Згідно рекомендацій вищезаз$
наченого рішення [2], для речовин зі встановленим максимально допустимим рів$
нем (МДР), проби потрібно збагатити аналітом у трьох концентраціях, що станов$
лять 0,5; 1 та 1,5 від МДР по шість зразків для кожної. МДР охратоксину А, згідно
Регламенту EC No 1881/2006 [1], для цільного зерна становить 5 мкг/кг, та 3 мкг/кг
для продуктів його переробки. Не дивлячись на токсичність та шкідливість для здо$
ров'я людей і тварин, охратоксин А в Україні не нормується, тому підбір досліджу$
ваних концентрацій здійснювався відповідно до європейських норм. В роботі було
використано 18 проб зерна ячменю грубого помелу, збагаченого охратоксином А у
концентраціях: 1,5 мкг/кг, 3 мкг/кг та 4,5 мкг/кг по шість проб для кожної.
З таблиці 1 видно, що для доданої концентрації охратоксину А 1,5 мкг/кг, фак$
тична отримана концентрація становила 1,38 ± 0,15 мкг/кг, при цьому величина по$
вернення складала 92,0 ± 10,4 %, що відповідає мінімально допустимим значенням
згідно Рішення 2002/657/ЕС [2], а саме від 70 % до 110 %.
Таблиця 1
Концентрація та величина повернення від доданого значення
(1,5 мкг/кг або 100 %) охратоксину А в пробах зерна ячменю грубого помелу
* – стандартне квадратичне відхилення.
( )
1 2 3 4 5 6
1 0,38 0,36 0,37 0,32 0,38 0,36
2 0,36 0,38 0,31 0,23 0,37 0,31
*
,
/ 0,37 0,37 0,34 0,27 0,38 0,34 0,34 0,04
,
/ 1,48 1,49 1,35 1,09 1,51 1,35 1,38 0,15
, % 98,9 99,3 90,3 73,2 100,8 89,7 92,0 10,4
37
В таблиці 2 подано дані аналізу проб, збагачених охратоксином А в концентрації
МДР – 3 мкг/кг. Відповідно, отримано середнє значення концентрації 3,11 ± 0,06
мкг/кг, що становило 103,7 ± 1,9 % від фактичної і відповідає вимогам Рішення
2002/657/ЕС.
Таблиця 2
Концентрація та величина повернення від доданого значення
(3 мкг/кг або 100 %) охратоксину А в пробах зерна ячменю грубого помелу
Аналогічно було проаналізовано проби, які містили охратоксин А в концентрації
4,5 мкг/кг. Згідно отриманих обрахунків (табл. 3), величина повернення склала
86,7 ± 7,1 %, що відповідає абсолютній величині 3,90 ± 0,32 мкг/кг.
Таблиця 3
Концентрація та величина повернення від доданого значення
(4,5 мкг/кг або 100 %) охратоксину А в пробах зерна ячменю грубого помелу
( )
1 2 3 4 5 6
1 0,76 0,75 0,73 0,81 0,77 0,81
2 0,80 0,75 0,81 0,76 0,77 0,79
,
/ 0,78 0,75 0,77 0,78 0,77 0,80 0,77 0,01
,
/ 3,12 3,03 3,09 3,14 3,09 3,20 3,11 0,06
, % 104,0 100,8 103,0 104,6 103,2 106,7 103,7 1,9
( )
1 2 3 4 5 6
1 0,81 0,92 0,96 0,98 0,99 1,14
2 0,86 1,02 0,96 1,12 0,95 0,97
,
/ 0,83 0,97 0,96 1,05 0,97 1,05 0,97 0,08
,
/ 3,34 3,89 3,85 4,21 3,89 4,22 3,90 0,32
, % 74,3 86,5 85,5 93,6 86,5 93,9 86,7 7,1
38
Для більш повної оцінки отриманих даних було обчислено коефіцієнт варіації,
що характеризує відносний ступінь відхилення виміряних значень від середнього
арифметичного. Для доданої концентрації 1,5 мкг/кг охратоксину А коефіцієнт ва$
ріації становив 11 %. Згідно загальноприйнятих статистичних підходів [7], це свід$
чить про середню мінливість варіаційного ряду і є прийнятним. Для концентрації
охратоксину А на рівні МДР – 3 мкг/кг даний коефіцієнт склав всього 1,9 %, що го$
ворить про незначну мінливість варіаційного ряду і відповідає вимогам Рішення
2002/657/ЕС [2]. Так само в допустимих межах знаходився коефіцієнт варіації для
концентрації 4,5 мкг/кг – 8,2 %.
Висновок
Згідно отриманих даних, для всіх проаналізованих концентрацій охратоксину А
середня величина повернення склала 94,1 ± 8,7 %, що відповідає мінімально допус$
тимим значенням Рішення 2002/657/EC, при цьому коефіцієнт варіації становить
7,1 %, який згідно вищезазначеного документу не повинен перевищувати 20 %, а
отже є відповідним. Таким чином, за отриманими валідаційними критеріями, да$
ний метод аналізу вмісту охратоксину А є придатним до використання.
ЛІТЕРАТУРА
1. COMMISSION REGULATION (EC) No 1881/2006 of 19 December 2006 setting maximum
levels for certain contaminants in foodstuffs // Official Journal of the European Union. –
20.12.2006. – L 364/5.
2. COMMISSION DECISION of 14 August 2002 implementing Council Directive 96/23/EC
concerning the performance of analytical methods and the interpretation of results (notified un$
der document number C(2002) 3044), тext with EEA relevance 2002/657/EC. // Official Jour$
nal of the European Union. – 17.08.2002. – L 221. – Р. 8.
3. Папазян Т. Микотоксины: экономический риск и контроль. // Животноводство России.
– 2002. – № 8. – С. 16 – 20.
4. Смирнов В.В., Зайченко А.М., Рубежняк И.Г. Микотоксины: фундаментальные и прик$
ладные аспекты // Современные проблемы токсикологии. – 2000. – № 1. – С. 10 – 15.
5. Маркс Г., Шустер Р., Ротханпт М. ВЭЖХ$Анализ Микотоксинов с их автоматической
идентификацией при помощи библиотеки электронных спектров поглощения // Hew$
lett$Packard Comp. – № 12. – Р. 5091$8692.
6. OCHRAPREP® Quantitative detection of Ochratoxin A using HPLC // R$BIOPHARM. –
Version: P14/v9/26.01.05. – P. 1 – 6.
7. С.Н. Лапач, А.В. Чубенко, П.Н. Бабич "Статистика в науке и бизнесе" // Киев, "Морион"
2002. – С. 104.
Національний університет біоресурсів і природокористування,
Українська лабораторія якості та безпеки продукції АПК
м. Київ
Надійшло до редакції 24.01.2009
|