Полимеразная цепная реакция (ПЦР) для диагностики вирусной инфекции: цитомегаловирус человека

• Дата: 1991
• Автори: Виноградская, Г.Р., Горышин, И.Ю., Новикова, Л.Н., Плуталов, О.В., Башмакова, М.А., Берлин, Ю.А., Цинзерлинг, В.А., Шварц, Е.И., Ланцов, В.А.
• Формат: Стаття
• Мова: Russian
• Опубліковано: Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 1991
• Назва видання: Биополимеры и клетка
• Онлайн доступ: http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/153530
• Назва журналу: Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
• Цитувати: Полимеразная цепная реакция (ПЦР) для диагностики вирусной инфекции: цитомегаловирус человека / Г.Р. Виноградская, И.Ю. Горышин, Л.Н. Новикова, О.В. Плуталов, М.А. Башмакова, Ю.А. Берлин, В.А. Цинзерлинг, Е.И. Шварц, В.А. Ланцов // Биополимеры и клетка. — 1991. — Т. 7, № 3. — С. 31-35. — Бібліогр.: 13 назв. — рос.

Описана процедура быстрого, чувствительного а точного определения цитомегаловируса (ЦМВ) в тканях и биологических жидкостях человека с помощью термофильной ДНК-по ли ме разы из Thermus thermophilus. Процедура состоит из двух последовательных ПЦР. Первая включает 40 циклов (денатурация ДНК, отжиг праймеров и ДНК-полимеризация), выполняемых с двумя праймерами по 20 оснований, консервативная последовательность которых взята из гена MIE (major immediate early) ЦВМ. Вторая реакция включает от 20 до 50 циклов, аналогичных первым, но на основе 20-членных праймеров, фланкирующих внутреннюю часть фрагмента ДНК, намноженного ранее. Конечный фрагмент обнаруживается по окрашиванию бромистым этидием после электрофореза в полиакриламидном геле. Верификация искомой полосы включает ее рестрикционный анализ. С помощью плазмиды рСМ5018, несущей ген MIE вируса, показано, что предлагаемая процедура может выявлять столь малые количества ДНК, как несколько (от 1 до 5) плазмидных молекул.