Structural dissection of human translation elongation factor 1Bγ (eEF1Bγ): expression of full-length protein and its truncated forms

Structural dissection of human translation elongation factor 1Bγ (eEF1Bγ): expression of full-length protein and its truncated forms

Aim. To gain more insights into properties of the human translation elongation factor eEF1Bγ and its interaction with partners we intended to produce the full-length protein and its truncated forms. Methods. cDNAs encoding truncated forms of eEF1Bγ were generated by PCR amplification with respective...

Повний опис

Збережено в:
Бібліографічні деталі
Дата:2014
Автори: Trosiuk, T.V., Liudkovska, V.V., Shalak, V.F., Negrutskii, B.S., El’skaya, A.V.
Формат: Стаття
Мова:English
Опубліковано: Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 2014
Назва видання:Вiopolymers and Cell
Теми:
Structure and Function of Biopolymers
Онлайн доступ:http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/153741
Теги: Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
Назва журналу:Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Цитувати:Structural dissection of human translation elongation factor 1Bγ (eEF1Bγ): expression of full-length protein and its truncated forms / T.V. Trosiuk, V.V. Liudkovska, V.F. Shalak, B.S. Negrutskii, A.V. El’skaya // Вiopolymers and Cell. — 2014. — Т. 30, № 2. — С. 96-106. — Бібліогр.: 18 назв. — англ.

Репозитарії

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
id irk-123456789-153741
record_format dspace
institution Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection DSpace DC
language English
topic Structure and Function of Biopolymers
Structure and Function of Biopolymers
spellingShingle Structure and Function of Biopolymers
Structure and Function of Biopolymers
Trosiuk, T.V.
Liudkovska, V.V.
Shalak, V.F.
Negrutskii, B.S.
El’skaya, A.V.
Structural dissection of human translation elongation factor 1Bγ (eEF1Bγ): expression of full-length protein and its truncated forms
Вiopolymers and Cell
description Aim. To gain more insights into properties of the human translation elongation factor eEF1Bγ and its interaction with partners we intended to produce the full-length protein and its truncated forms. Methods. cDNAs encoding truncated forms of eEF1Bγ were generated by PCR amplification with respective primers and cloned into vectors providing polyhistidine, glutathione S-transferase or maltose binding protein tags. The recombinant proteins were expressed in Escherichia coli and purified by affinity chromatography. An aggregation state of the proteins was analyzed by analytical gel filtration. Results. The expression, purification and storage conditions for the full-length recombinant His-eEF1Bγ were optimized. Several truncated forms of eEF1Bγ were also expressed and purified to homogeneity. Two short variants of C-terminal domain comprising amino acids 263–437 or 228–437 were obtained in monomeric state. Two short variants of N-terminal domain comprising amino acids 1–33 or 1–230, fused with glutathione S-transferase, were obtained and estimated to be dimers by gel filtration. The mutants of N-terminal domain comprising amino acids 1–93 or 1–165, fused with maltose binding protein, were obtained as soluble high molecular weight aggregates only. Conclusions. The purified recombinant His-eEF1Bγ and several truncated forms of the protein were obtained and characterized. These protein variants will be used for further studies on the protein-protein interaction.
format Article
author Trosiuk, T.V.
Liudkovska, V.V.
Shalak, V.F.
Negrutskii, B.S.
El’skaya, A.V.
author_facet Trosiuk, T.V.
Liudkovska, V.V.
Shalak, V.F.
Negrutskii, B.S.
El’skaya, A.V.
author_sort Trosiuk, T.V.
title Structural dissection of human translation elongation factor 1Bγ (eEF1Bγ): expression of full-length protein and its truncated forms
title_short Structural dissection of human translation elongation factor 1Bγ (eEF1Bγ): expression of full-length protein and its truncated forms
title_full Structural dissection of human translation elongation factor 1Bγ (eEF1Bγ): expression of full-length protein and its truncated forms
title_fullStr Structural dissection of human translation elongation factor 1Bγ (eEF1Bγ): expression of full-length protein and its truncated forms
title_full_unstemmed Structural dissection of human translation elongation factor 1Bγ (eEF1Bγ): expression of full-length protein and its truncated forms
title_sort structural dissection of human translation elongation factor 1bγ (eef1bγ): expression of full-length protein and its truncated forms
publisher Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
publishDate 2014
topic_facet Structure and Function of Biopolymers
url http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/153741
citation_txt Structural dissection of human translation elongation factor 1Bγ (eEF1Bγ): expression of full-length protein and its truncated forms / T.V. Trosiuk, V.V. Liudkovska, V.F. Shalak, B.S. Negrutskii, A.V. El’skaya // Вiopolymers and Cell. — 2014. — Т. 30, № 2. — С. 96-106. — Бібліогр.: 18 назв. — англ.
series Вiopolymers and Cell
work_keys_str_mv AT trosiuktv structuraldissectionofhumantranslationelongationfactor1bgeef1bgexpressionoffulllengthproteinanditstruncatedforms
AT liudkovskavv structuraldissectionofhumantranslationelongationfactor1bgeef1bgexpressionoffulllengthproteinanditstruncatedforms
AT shalakvf structuraldissectionofhumantranslationelongationfactor1bgeef1bgexpressionoffulllengthproteinanditstruncatedforms
AT negrutskiibs structuraldissectionofhumantranslationelongationfactor1bgeef1bgexpressionoffulllengthproteinanditstruncatedforms
AT elskayaav structuraldissectionofhumantranslationelongationfactor1bgeef1bgexpressionoffulllengthproteinanditstruncatedforms
first_indexed 2023-05-20T17:42:55Z
last_indexed 2023-05-20T17:42:55Z
_version_ 1796153923649667072
spelling irk-123456789-1537412019-06-15T01:30:57Z Structural dissection of human translation elongation factor 1Bγ (eEF1Bγ): expression of full-length protein and its truncated forms Trosiuk, T.V. Liudkovska, V.V. Shalak, V.F. Negrutskii, B.S. El’skaya, A.V. Structure and Function of Biopolymers Aim. To gain more insights into properties of the human translation elongation factor eEF1Bγ and its interaction with partners we intended to produce the full-length protein and its truncated forms. Methods. cDNAs encoding truncated forms of eEF1Bγ were generated by PCR amplification with respective primers and cloned into vectors providing polyhistidine, glutathione S-transferase or maltose binding protein tags. The recombinant proteins were expressed in Escherichia coli and purified by affinity chromatography. An aggregation state of the proteins was analyzed by analytical gel filtration. Results. The expression, purification and storage conditions for the full-length recombinant His-eEF1Bγ were optimized. Several truncated forms of eEF1Bγ were also expressed and purified to homogeneity. Two short variants of C-terminal domain comprising amino acids 263–437 or 228–437 were obtained in monomeric state. Two short variants of N-terminal domain comprising amino acids 1–33 or 1–230, fused with glutathione S-transferase, were obtained and estimated to be dimers by gel filtration. The mutants of N-terminal domain comprising amino acids 1–93 or 1–165, fused with maltose binding protein, were obtained as soluble high molecular weight aggregates only. Conclusions. The purified recombinant His-eEF1Bγ and several truncated forms of the protein were obtained and characterized. These protein variants will be used for further studies on the protein-protein interaction. Мета. Для детального вивчення властивостей фактора елонгації трансляції eEF1Bγ людини і його взаємодії з партнерами оптимізувати експресію кДНК повнорозмірного білка та його вкорочених форм. Методи. кДНК, які кодують вкорочені форми eEF1Bγ, синтезували методом ПЛР-ампліфікації з відповідними праймерами і клонували у вектори, що містять які афінну мітку полігістидинову послідовність, глутатіон S-трансферазу або білок, який зв’язує мальтозу. Рекомбінантні білки експресували в бактеріях і очищували афінною хроматографією. Агрегатний стан отриманих білків аналізували з використанням аналітичної гель-фільтрації. Результати. Оптимізовано експресію, очищення та умови зберігання повнорозмірного рекомбінантного His-eEF1Bγ. Також експресовано і очищено до гомогенного стану кілька вкорочених форм eEF1Bγ. Дві вкорочені форми С-кінцевого домену, які містять амінокислотні залишки 263–437 і 228–437, отримано у вигляді розчинних мономерних білків. Дві вкорочені форми N-кінцевого домену, що містять амінокислотні залишки 1–33 і 1–230, злиті з глутатіон S-трансферазою, одержано у вигляді димерів згідно з результатами гель-фільтрації. Інші делеційні мутанти, які містять амінокислотні залишки 1–93 і 1–165 N-кінцевого домену та злиті з білком, що зв’язує мальтозу, можуть бути отримані лише у вигляді розчинних високомолекулярних агрегатів. Висновки. Отримано і охарактеризовано рекомбінантний білок His-eEF1Bγ та його чотири вкорочені форми. Ці форми в подальшому буде використано для вивчення білково-білкових взаємодій. Цель. Для более детального изучения свойств человеческого фактора элонгации трансляции eEF1Bγ и его взаимодействия с партнерами оптимизировать експрессию кДНК полноразмерного белка, а также его усеченных форм. Методы. кДНК, кодирующие укороченные формы eEF1Bγ, генерировали методом ПЦР-амплификации с соответствующими праймерами и клонировали в векторы, содержащие в качестве аффинной метки полигистидиновую последовательность, глутатион S-трансферазу или белок, связывающий мальтозу. Рекомбинантные белки экспрессировали в бактериях и очищали аффинной хроматографией. Агрегатное состояние полученных белков анализировали с помощью аналитической гель-фильтрации. Результаты. Оптимизированы экспрессия, очистка и условия хранения полноразмерного рекомби- нантного His-eEF1Bγ. Также експрессированы и очищены до гомогенного состояния несколько усеченных форм eEF1Bγ. Две укороченные формы С-концевого домена, содержащие аминокис- лотные остатки 263–437 и 228–437, получены в виде растворимых мономерных белков. Две укороченные формы N-концевого домена, содержащие аминокислотные остатки 1–33 и 1–230, слитые с глутатион S-трансферазой, получены в виде димеров по результатам гель-фильтрации. Другие делеционные мутанты, содержащие аминокислотные остатки 1–93 и 1–165 N-концевого домена и слиты с белком, связывающим мальтозу, могут быть получены только в виде растворимых высокомолекулярных агрегатов. Выводы. Получены и охарактеризованы рекомбинантный фактор элонгации трансляции His-eEF1B и его четыре усеченные формы, которые в дальнейшем будут использованы для изу- чения белково-белковых взаимодействий. 2014 Article Structural dissection of human translation elongation factor 1Bγ (eEF1Bγ): expression of full-length protein and its truncated forms / T.V. Trosiuk, V.V. Liudkovska, V.F. Shalak, B.S. Negrutskii, A.V. El’skaya // Вiopolymers and Cell. — 2014. — Т. 30, № 2. — С. 96-106. — Бібліогр.: 18 назв. — англ. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.000887 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/153741 577.217 577.112.7 en Вiopolymers and Cell Інститут молекулярної біології і генетики НАН України

Схожі ресурси