Невирусная доставка гена ароА1 человека в клетки млекопитающих in vitro и in vivo

• Main Authors: Топорова, Е.К., Новикова, С.Н., Лихачева, Л.И., Сухорада, Е.М., Рубан, Т.А., Козел, Ю.Н., Иродов, Д.М.
• Format: Article
• Language: Russian
• Published: Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 2004
• Series: Біополімери і клітина
• Subjects: Ювілеї
• Online Access: http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/154964

Исследованы подходы к генной терапии атеросклероза путем невирусного переноса гена аполипопротеина A1 (ароА1) – основного белкового компонента антиатерогенных липопротеинов – в клетки печени. Сконструирован плазмидный вектор для экспрессии полноразмерного гена ароА1 человека в клетках млекопитающих. Конструкция содержит последовательности бактериальной плазмиды, позволяющие ей реплицироваться в клетках Escherihia coli, и кассету для экспрессии гена ароА1, фланкированную инвертированными терминальными повторами аденоассоциированного вируса человека. Для доставки векторной ДНК использован синтетический полимер полиэтиленимин (ПЭИ, 25 кДа). Показано>, что в результате ПЭИ-опосредованной трансфекции клеток в культуре аналогичным вектором, содержащим репортерный ген зеленого флуоресцирующего белка, 50–70 % клеток экспрессируют введенный ген. На экспериментальных животных, которым вводили конструкцию с геном ароА1 человека прямой инъекцией в печень, продемонст­рировано, что белок АроАІ человека тестируется в плазме крови в течение 15 сут после доставки гена. ПЦР-анализ суммарной ДНК печени подопытных животных показал наличие расчетного фрагмента гена apoA1 человека у крыс через 15 дней после введения гена