Synthesis and characterization of fluorogenic peptide substrate of HIV-1 protease based on fluorescence resonance energy transfer

Synthesis of fluorogenic peptide substrate of HIV-I protease Dns-SQNYPIVWL which corresponds to the p17/p24 cleavage site for HIV-l protease have been performed. This fluorogenic substrate was based on the fluorescence resonance energy transfer between donor – Trp residue, and acceptor – dansyl grou...

Повний опис

Збережено в:

Бібліографічні деталі
Видавець:	Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
Дата:	1995
Автори:	Kornelyuk, A.I., Terentiev, A.G., Fisher, S., Porter, T.
Формат:	Стаття
Мова:	English
Опубліковано:	Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 1995
Назва видання:	Биополимеры и клетка
Онлайн доступ:	http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/156188
Теги:	Додати тег Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
Цитувати:	Synthesis and characterization of fluorogenic peptide substrate of HIV-1 protease based on fluorescence resonance energy transfer / A.L. Kornelyuk, A.G. Terentiev, S. Fisher, T. Porter // Биополимеры и клетка. — 1995. — Т. 11, № 6. — С. 57-61. — Бібліогр.: 18 назв. — англ.

Репозиторії

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine

id	irk-123456789-156188
record_format	dspace
spelling	irk-123456789-1561882019-06-19T01:31:23Z Synthesis and characterization of fluorogenic peptide substrate of HIV-1 protease based on fluorescence resonance energy transfer Kornelyuk, A.I. Terentiev, A.G. Fisher, S. Porter, T. Synthesis of fluorogenic peptide substrate of HIV-I protease Dns-SQNYPIVWL which corresponds to the p17/p24 cleavage site for HIV-l protease have been performed. This fluorogenic substrate was based on the fluorescence resonance energy transfer between donor – Trp residue, and acceptor – dansyl group in the intact peptide. Hydrolysis of substrate by recombinant HIV-I protease resulted in the time-dependent increase of Trp fluorescence and decrease of dansyl fluorescence measured at 350 and 500 nm, respectively, due to the break of resonance energy transfer between donor and acceptor fluorophors. Hydrolysis of fluorogenic peptide substrate was studied also by reversed phase HPLC and two peptide fragments after cleavage of substrate have been detected. Kinetic constants of hydrolysis for this fluorogenic peptide substrate by HIV-I protease were calculated from Lineweaver – Burk plots: KM - 29mkM, kcat =5.4 s⁻¹ and kcat / KM -180000 M⁻¹s⁻¹. Проведено хімічний синтез флюорогенного пептидного субстрату ВІЛ-1 протеази, що має структуру Dns-SQNYPIVWL і відповідає сайту розщеплення р17/р24 у gag-поліпротеіні вірусу імунодефіциту людини.Принцип використання даного субстрату базується на резонансному переносі енергії збудження між донором – залишком Trp і акцептором – дансильною групою. Встановлено, що гідроліз флюорогенного пептидного субстрату рекомбінантною ВІЛ-1 протеазою призводить до падіння інтенсивності флюоресценції дансильної групи і одночасного зростання триптофанової флюоресценції внаслідок порушення резонансного переносу енергії між донором і акцептором. За допомогою високоефективної рідинної хроматографії в оберненій фазі зафіксовано появу пептидів, які є продуктами гідролізу субстрату. Визначено кінетичні параметри гідролізу флюорогенного пептидного субстрату ВІЛ-1 протеазою: КМ – 29 мкМ, kcat– 5,4 с⁻¹ та kcat/KM – 180 000 M⁻¹c⁻¹. Проведен химический синтез флюорогенного пептидной субстрата ВИЧ -1 протеазы , имеющей структуру Dns – SQNYPIVWL и соответсвует сайтурасщепления р17/р24 в gag – полипротеини вируса иммунодефицита людини. Принцип использования данного субстрата базируется на резонансном переносе энергии возбуждения между донором - остатком Trp и акцептором – дансильною группой. Установлено, что гидролиз флюорогенного пептидной субстрата рекомбинантной ВИЧ -1 протеазой приводит к падению интенсивности флюоресценции дансильнои группы и одновременного роста триптофановой флюоресценции вследствие нарушения резонансного переноса энергии между донором и акцептором. С помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии в обратной фазе зафиксировано появление пептидов, которые являются продуктами гидролиза субстрата. Определены кинетические параметры гидролиза флюорогенного пептидной субстрата ВИЧ -1 протеазой : КМ – 29 мкм , kcat - 5,4 с ⁻¹ и kcat / KM – 180 000 M⁻¹c ⁻¹. 1995 Article Synthesis and characterization of fluorogenic peptide substrate of HIV-1 protease based on fluorescence resonance energy transfer / A.L. Kornelyuk, A.G. Terentiev, S. Fisher, T. Porter // Биополимеры и клетка. — 1995. — Т. 11, № 6. — С. 57-61. — Бібліогр.: 18 назв. — англ. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.000404 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/156188 577.325 en Биополимеры и клетка Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
institution	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection	DSpace DC
language	English
description	Synthesis of fluorogenic peptide substrate of HIV-I protease Dns-SQNYPIVWL which corresponds to the p17/p24 cleavage site for HIV-l protease have been performed. This fluorogenic substrate was based on the fluorescence resonance energy transfer between donor – Trp residue, and acceptor – dansyl group in the intact peptide. Hydrolysis of substrate by recombinant HIV-I protease resulted in the time-dependent increase of Trp fluorescence and decrease of dansyl fluorescence measured at 350 and 500 nm, respectively, due to the break of resonance energy transfer between donor and acceptor fluorophors. Hydrolysis of fluorogenic peptide substrate was studied also by reversed phase HPLC and two peptide fragments after cleavage of substrate have been detected. Kinetic constants of hydrolysis for this fluorogenic peptide substrate by HIV-I protease were calculated from Lineweaver – Burk plots: KM - 29mkM, kcat =5.4 s⁻¹ and kcat / KM -180000 M⁻¹s⁻¹.
format	Article
author	Kornelyuk, A.I. Terentiev, A.G. Fisher, S. Porter, T.
spellingShingle	Kornelyuk, A.I. Terentiev, A.G. Fisher, S. Porter, T. Synthesis and characterization of fluorogenic peptide substrate of HIV-1 protease based on fluorescence resonance energy transfer Биополимеры и клетка
author_facet	Kornelyuk, A.I. Terentiev, A.G. Fisher, S. Porter, T.
author_sort	Kornelyuk, A.I.
title	Synthesis and characterization of fluorogenic peptide substrate of HIV-1 protease based on fluorescence resonance energy transfer
title_short	Synthesis and characterization of fluorogenic peptide substrate of HIV-1 protease based on fluorescence resonance energy transfer
title_full	Synthesis and characterization of fluorogenic peptide substrate of HIV-1 protease based on fluorescence resonance energy transfer
title_fullStr	Synthesis and characterization of fluorogenic peptide substrate of HIV-1 protease based on fluorescence resonance energy transfer
title_full_unstemmed	Synthesis and characterization of fluorogenic peptide substrate of HIV-1 protease based on fluorescence resonance energy transfer
title_sort	synthesis and characterization of fluorogenic peptide substrate of hiv-1 protease based on fluorescence resonance energy transfer
publisher	Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
publishDate	1995
url	http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/156188
citation_txt	Synthesis and characterization of fluorogenic peptide substrate of HIV-1 protease based on fluorescence resonance energy transfer / A.L. Kornelyuk, A.G. Terentiev, S. Fisher, T. Porter // Биополимеры и клетка. — 1995. — Т. 11, № 6. — С. 57-61. — Бібліогр.: 18 назв. — англ.
series	Биополимеры и клетка
work_keys_str_mv	AT kornelyukai synthesisandcharacterizationoffluorogenicpeptidesubstrateofhiv1proteasebasedonfluorescenceresonanceenergytransfer AT terentievag synthesisandcharacterizationoffluorogenicpeptidesubstrateofhiv1proteasebasedonfluorescenceresonanceenergytransfer AT fishers synthesisandcharacterizationoffluorogenicpeptidesubstrateofhiv1proteasebasedonfluorescenceresonanceenergytransfer AT portert synthesisandcharacterizationoffluorogenicpeptidesubstrateofhiv1proteasebasedonfluorescenceresonanceenergytransfer
first_indexed	2023-05-20T17:49:08Z
last_indexed	2023-05-20T17:49:08Z
_version_	1796154159217508352

Synthesis and characterization of fluorogenic peptide substrate of HIV-1 protease based on fluorescence resonance energy transfer

Репозиторії

Схожі ресурси