Особенности экспрессии целевого гена в составе вектора на основе бактериофага лямбда и изучение путей ее оптимизации

• Дата: 2003
• Автори: Славченко, И.Ю., Шмидт, В.А., Черных, С.И., Кордюм, В.А.
• Формат: Стаття
• Мова: Russian
• Опубліковано: Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 2003
• Назва видання: Біополімери і клітина
• Теми: Молекулярна та клітинна біотехнології
• Онлайн доступ: http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/156371
• Назва журналу: Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
• Цитувати: Особенности экспрессии целевого гена в составе вектора на основе бактериофага лямбда и изучение путей ее оптимизации / И.Ю. Славченко, В.А. Шмидт, С.И. Черных, В.А. Кордюм // Вiopolymers and Cell. — 2003. — Т. 19, № 1. — С. 81-88. — Бібліогр.: 19 назв. — рос.

Рекомбинантные молекулы на основе бактериофага лямбда отличаются высокой сегрегационной стабильностью в лизогенном состоянии и высоким уровнем амплификации фаговой ДНК и соответственно встроенного в нее целевого гена при литическом развитии фага, которое заканчивается лизисом бактериальной клетки и высвобождением целевого продукта в культуральную среду. Это делает перспективным использование фага лямбда для получения рекомбинантных белков. В данном сообщении описано конструирование фага λpIF, несущего две копии искусствен­ного гена интерферона (ИФН) человека под контролем тандема триптофановых промоторов. Экспрессию чужеродных генов осуществляли термоиндукцией клеток, несущих фаг с генами ИФН, а также инфекцией этим фагом реципиентных клеток. Показано, что выход рекомбинантного белка зависит от оптической плотности клеток при термоиндукции и последующего темпера­турного режима культивирования продуцента Увеличение содержания ИФН в лизатах после индукции также наблюдали при использовании Q–R– амбер-мутантов фага λpIF. Показано, что инфицирование реципиентных клеток фагом λpIF обеспечивало более высокий выход ИФН (около 40 мг/л), чем термоиндукция клеток Escherichia coli, несущих фаг с целевыми генами.