Клонирование и экспрессия гена SPAА Еrysipelothrix rhusiopathiae в Еscherichia coli

• Дата: 2011
• Автори: Дерябин, О.Н., Дерябина, Е.Г., Гильчук, П.В.
• Формат: Стаття
• Мова: Russian
• Опубліковано: Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 2011
• Назва видання: Вiopolymers and Cell
• Теми: Short Communications
• Онлайн доступ: http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/156390
• Назва журналу: Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
• Цитувати: Клонирование и экспрессия гена SPAА Еrysipelothrix rhusiopathiae в Еscherichia coli / О.Н. Дерябин, Е.Г. Дерябина, П.В. Гильчук // Вiopolymers and Cell. — 2011. — Т. 27, № 4. — С. 310-313. — Бібліогр.: 11 назв. — рос.

Цель. Клонировать ген SPAА – поверхностный антиген Er. rhusiopathiae – в плазмидный вектор и экспрессировать белок SpaА в E. coli. Методы. Расчет и синтез олигонуклеотидных праймеров, полиме - разная цепная реакция, клонирование, экспрессия рекомбинантных белков в E. coli, электрофорез в агарозе и полиакриламидном геле. Результаты. Полноразмерный и усеченный ген SPAА Er. rhusiopathiae клонирован в экспрессирующую плазмиду рЕТ24а(+). Экспрессия полного гена не сопровождается наработкой значительного количества рекомбинантного белка, предположительно, вследствие его токсичности для клеток E. coli. Элиминация из полноразмерного гена фрагмента, кодирующего насыщенную пролином область, и домена тандемных повторов, а также получение усеченного варианта гена приводят к устойчивому синтезу рекомбинантного продукта с ожидаемой молекулярной массой. Выводы. Получена рекомбинантная плазмида, содержащая фрагмент гена SPAА Er. rhusiopathiae, что позволяет выделять в препаративних количествах в E. coli рекомбинантный белок с м. м. 47 кДа. Ключевые слова: Erysipelothrix rhusiopathiae, ген SPAА, рекомбинантный белок.