Клонирование и экспрессия гена SPAА Еrysipelothrix rhusiopathiae в Еscherichia coli

Клонирование и экспрессия гена SPAА Еrysipelothrix rhusiopathiae в Еscherichia coli

Цель. Клонировать ген SPAА – поверхностный антиген Er. rhusiopathiae – в плазмидный вектор и экспрессировать белок SpaА в E. coli. Методы. Расчет и синтез олигонуклеотидных праймеров, полиме - разная цепная реакция, клонирование, экспрессия рекомбинантных белков в E. coli, электрофорез в агарозе и...

Повний опис

Збережено в:
Бібліографічні деталі
Дата:2011
Автори: Дерябин, О.Н., Дерябина, Е.Г., Гильчук, П.В.
Формат: Стаття
Мова:Russian
Опубліковано: Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 2011
Назва видання:Вiopolymers and Cell
Теми:
Short Communications
Онлайн доступ:http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/156390
Теги: Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
Назва журналу:Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Цитувати:Клонирование и экспрессия гена SPAА Еrysipelothrix rhusiopathiae в Еscherichia coli / О.Н. Дерябин, Е.Г. Дерябина, П.В. Гильчук // Вiopolymers and Cell. — 2011. — Т. 27, № 4. — С. 310-313. — Бібліогр.: 11 назв. — рос.

Репозитарії

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
id irk-123456789-156390
record_format dspace
spelling irk-123456789-1563902019-06-19T01:25:11Z Клонирование и экспрессия гена SPAА Еrysipelothrix rhusiopathiae в Еscherichia coli Дерябин, О.Н. Дерябина, Е.Г. Гильчук, П.В. Short Communications Цель. Клонировать ген SPAА – поверхностный антиген Er. rhusiopathiae – в плазмидный вектор и экспрессировать белок SpaА в E. coli. Методы. Расчет и синтез олигонуклеотидных праймеров, полиме - разная цепная реакция, клонирование, экспрессия рекомбинантных белков в E. coli, электрофорез в агарозе и полиакриламидном геле. Результаты. Полноразмерный и усеченный ген SPAА Er. rhusiopathiae клонирован в экспрессирующую плазмиду рЕТ24а(+). Экспрессия полного гена не сопровождается наработкой значительного количества рекомбинантного белка, предположительно, вследствие его токсичности для клеток E. coli. Элиминация из полноразмерного гена фрагмента, кодирующего насыщенную пролином область, и домена тандемных повторов, а также получение усеченного варианта гена приводят к устойчивому синтезу рекомбинантного продукта с ожидаемой молекулярной массой. Выводы. Получена рекомбинантная плазмида, содержащая фрагмент гена SPAА Er. rhusiopathiae, что позволяет выделять в препаративних количествах в E. coli рекомбинантный белок с м. м. 47 кДа. Ключевые слова: Erysipelothrix rhusiopathiae, ген SPAА, рекомбинантный белок. Aim. Cloning of Er. rhusiopathiae surface antigen – SPAА gene into plasmid vector and its expression in E. coli. Methods. Oligonucleotide primers design and synthesis, polymerase chain reaction, cloning, recombinant proteins expression in E. coli, electrophoresis in agarose, PAGE. Results. The full-size and truncated Er. rhusiopathiae SPAА genes were cloned into expression plasmid рЕТ24а(+). The expression of full-size gene didn't result in significant recombinant protein production, presumably due to its toxicity for E. coli cells. The elimination of fragment coding for proline-rich region and tandem repeats domain from full-size gene led to production truncated variant of recombinant protein with expected molecular mass. Conclusions. The recombinant plasmid containing fragment of Er. rhusiopathiae SPAА gene was constructed. It allows obtaining preparative amount recombinant protein with m. m. 47 kDa in E. coli. Keywords: Erysipelothrix rhusiopathiae, SPAА gene, recombinant protein. Мета. Клонувати ген SPAА – поверхневий антиген Er. rhusiopathiae – у плазмідний вектор та експресувати білок SpaА в E. coli. Методи. Розрахунок і синтез олігонуклеотидних праймерів, полімеразна ланцюгова реакція, клонування, експресія рекомбінантних білків у Е.coli, електрофорез в агарозі та поліакриламідному гелі. Результати. Повнорозмірний і усічений ген SPAА Er. rhusiopathiae клоновано в експресуючу плазміду рЕТ24а(+). Експресія повного гена не супроводжується синтезом значної кількості рекомбінантного білка, очевидно, внаслідок його токсичності для клітин E. coli. Елімінація з повнорозмірного гена фрагмента, що кодує насичену проліном ділянку, і домену тандемних повторів, а також одержання усіченого варіанта гена призводять до стабільного синтезу рекомбінантного продукту з очікуваною молекулярною масою. Висновки. Отримано рекомбінантну плазміду, яка містить фрагмент гена SPAА Er. rhusiopathiae, що дозволяє виділяти у препаративних кількостях в E. coli рекомбінантний білок з м. м. 47 кДа. Ключові слова: Erysipelothrix rhusiopathiae, ген SPAА, рекомбінантний білок 2011 Article Клонирование и экспрессия гена SPAА Еrysipelothrix rhusiopathiae в Еscherichia coli / О.Н. Дерябин, Е.Г. Дерябина, П.В. Гильчук // Вiopolymers and Cell. — 2011. — Т. 27, № 4. — С. 310-313. — Бібліогр.: 11 назв. — рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.00010D http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/156390 619:616.988:616-076 ru Вiopolymers and Cell Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
institution Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection DSpace DC
language Russian
topic Short Communications
Short Communications
spellingShingle Short Communications
Short Communications
Дерябин, О.Н.
Дерябина, Е.Г.
Гильчук, П.В.
Клонирование и экспрессия гена SPAА Еrysipelothrix rhusiopathiae в Еscherichia coli
Вiopolymers and Cell
description Цель. Клонировать ген SPAА – поверхностный антиген Er. rhusiopathiae – в плазмидный вектор и экспрессировать белок SpaА в E. coli. Методы. Расчет и синтез олигонуклеотидных праймеров, полиме - разная цепная реакция, клонирование, экспрессия рекомбинантных белков в E. coli, электрофорез в агарозе и полиакриламидном геле. Результаты. Полноразмерный и усеченный ген SPAА Er. rhusiopathiae клонирован в экспрессирующую плазмиду рЕТ24а(+). Экспрессия полного гена не сопровождается наработкой значительного количества рекомбинантного белка, предположительно, вследствие его токсичности для клеток E. coli. Элиминация из полноразмерного гена фрагмента, кодирующего насыщенную пролином область, и домена тандемных повторов, а также получение усеченного варианта гена приводят к устойчивому синтезу рекомбинантного продукта с ожидаемой молекулярной массой. Выводы. Получена рекомбинантная плазмида, содержащая фрагмент гена SPAА Er. rhusiopathiae, что позволяет выделять в препаративних количествах в E. coli рекомбинантный белок с м. м. 47 кДа. Ключевые слова: Erysipelothrix rhusiopathiae, ген SPAА, рекомбинантный белок.
format Article
author Дерябин, О.Н.
Дерябина, Е.Г.
Гильчук, П.В.
author_facet Дерябин, О.Н.
Дерябина, Е.Г.
Гильчук, П.В.
author_sort Дерябин, О.Н.
title Клонирование и экспрессия гена SPAА Еrysipelothrix rhusiopathiae в Еscherichia coli
title_short Клонирование и экспрессия гена SPAА Еrysipelothrix rhusiopathiae в Еscherichia coli
title_full Клонирование и экспрессия гена SPAА Еrysipelothrix rhusiopathiae в Еscherichia coli
title_fullStr Клонирование и экспрессия гена SPAА Еrysipelothrix rhusiopathiae в Еscherichia coli
title_full_unstemmed Клонирование и экспрессия гена SPAА Еrysipelothrix rhusiopathiae в Еscherichia coli
title_sort клонирование и экспрессия гена spaа еrysipelothrix rhusiopathiae в еscherichia coli
publisher Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
publishDate 2011
topic_facet Short Communications
url http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/156390
citation_txt Клонирование и экспрессия гена SPAА Еrysipelothrix rhusiopathiae в Еscherichia coli / О.Н. Дерябин, Е.Г. Дерябина, П.В. Гильчук // Вiopolymers and Cell. — 2011. — Т. 27, № 4. — С. 310-313. — Бібліогр.: 11 назв. — рос.
series Вiopolymers and Cell
work_keys_str_mv AT derâbinon klonirovanieiékspressiâgenaspaaerysipelothrixrhusiopathiaevescherichiacoli
AT derâbinaeg klonirovanieiékspressiâgenaspaaerysipelothrixrhusiopathiaevescherichiacoli
AT gilʹčukpv klonirovanieiékspressiâgenaspaaerysipelothrixrhusiopathiaevescherichiacoli
first_indexed 2023-05-20T17:42:31Z
last_indexed 2023-05-20T17:42:31Z
_version_ 1796153898425122816

Схожі ресурси