Суперсинтез и очистка метионинаминопептидазы Escherichia coli

• Дата: 2003
• Автори: Славченко, И.Ю., Борейко, Е.В., Воробей, Н.В., Гавриш, Т.Г., Пехота, Е.Н., Кордюм, В.А.
• Формат: Стаття
• Мова: Russian
• Опубліковано: Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 2003
• Назва видання: Біополімери і клітина
• Теми: Молекулярна та клітинна біотехнології
• Онлайн доступ: http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/156513
• Назва журналу: Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
• Цитувати: Суперсинтез и очистка метионинаминопептидазы Escherichia coli / И.Ю. Славченко, Е.В. Борейко, Н.В. Воробей, Т.Г. Гавриш, Е.Н. Пехота, В.А. Кордюм // Вiopolymers and Cell. — 2003. — Т. 19, № 3. — С. 274-280. — Бібліогр.: 21 назв. — рос.

Метионинаминопептидазы (MAP) играют важную роль в процессинге белка. Они избирательно удаляют N-концевой метионин у растущего полипептида как в эу-, так и прокариотических клетках. Однако при получении гетерологичных белков в бактериях дополнительный N-концевой метионин часто не отщепляется. Если рекомбинантные белки предназначены для клинического применения, то очень важно, чтобы конечный продукт был идентичен природному аналогу, иначе он может обладать антигенными свойствами. Поэтому дополнительный N-концевой остаток метионина желательно удалить, что можно осуществить in vitro обработкой рекомбинантного белка препаратом очищенной MAP Е. coli. В настоящей работе разработан эффективный метод получения данного фермента с использованием системы экспрессии на основе РНК-полимеразы фага Т7. Показано, что при культивировании продуцента MAP BL (рЕТ-МАР) при температуре 37 °С целевой белок накапливается преимущественно в нерастворимой форме с выходом 17 % от суммарных клеточных белков. Однако если клетки штамма-продуцента инфицировать фагом лямбда, то полученный лизат будет содержать МАР в растворимой форме в значительно большем количестве, чем не инфицированные клетки. В результате оптимизации таких парамет­ров, как оптическая плотность культуры при заражении и последующая температура культиви­ рования продуцента, достигнут выход целевого белка в количестве, превышающем 40 % от растворимых белков, или 0,8 г/л. Рекомбинантный белок очищен с использованием ионообменной хроматографии до гомогенности более 90 %.