2025-02-22T17:03:41-05:00 DEBUG: VuFindSearch\Backend\Solr\Connector: Query fl=%2A&wt=json&json.nl=arrarr&q=id%3A%22irk-123456789-156513%22&qt=morelikethis&rows=5
2025-02-22T17:03:41-05:00 DEBUG: VuFindSearch\Backend\Solr\Connector: => GET http://localhost:8983/solr/biblio/select?fl=%2A&wt=json&json.nl=arrarr&q=id%3A%22irk-123456789-156513%22&qt=morelikethis&rows=5
2025-02-22T17:03:41-05:00 DEBUG: VuFindSearch\Backend\Solr\Connector: <= 200 OK
2025-02-22T17:03:41-05:00 DEBUG: Deserialized SOLR response
Суперсинтез и очистка метионинаминопептидазы Escherichia coli

Суперсинтез и очистка метионинаминопептидазы Escherichia coli

Метионинаминопептидазы (MAP) играют важную роль в процессинге белка. Они избирательно удаляют N-концевой метионин у растущего полипептида как в эу-, так и прокариотических клетках. Однако при получении гетерологичных белков в бактериях дополнительный N-концевой метионин часто не отщепляется. Если ре...

Full description

Saved in:
Bibliographic Details
Main Authors: Славченко, И.Ю., Борейко, Е.В., Воробей, Н.В., Гавриш, Т.Г., Пехота, Е.Н., Кордюм, В.А.
Format: Article
Language:Russian
Published: Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 2003
Series:Біополімери і клітина
Subjects:
Молекулярна та клітинна біотехнології
Online Access:http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/156513
Tags: Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
id irk-123456789-156513
record_format dspace
institution Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection DSpace DC
language Russian
topic Молекулярна та клітинна біотехнології
Молекулярна та клітинна біотехнології
spellingShingle Молекулярна та клітинна біотехнології
Молекулярна та клітинна біотехнології
Славченко, И.Ю.
Борейко, Е.В.
Воробей, Н.В.
Гавриш, Т.Г.
Пехота, Е.Н.
Кордюм, В.А.
Суперсинтез и очистка метионинаминопептидазы Escherichia coli
Біополімери і клітина
description Метионинаминопептидазы (MAP) играют важную роль в процессинге белка. Они избирательно удаляют N-концевой метионин у растущего полипептида как в эу-, так и прокариотических клетках. Однако при получении гетерологичных белков в бактериях дополнительный N-концевой метионин часто не отщепляется. Если рекомбинантные белки предназначены для клинического применения, то очень важно, чтобы конечный продукт был идентичен природному аналогу, иначе он может обладать антигенными свойствами. Поэтому дополнительный N-концевой остаток метионина желательно удалить, что можно осуществить in vitro обработкой рекомбинантного белка препаратом очищенной MAP Е. coli. В настоящей работе разработан эффективный метод получения данного фермента с использованием системы экспрессии на основе РНК-полимеразы фага Т7. Показано, что при культивировании продуцента MAP BL (рЕТ-МАР) при температуре 37 °С целевой белок накапливается преимущественно в нерастворимой форме с выходом 17 % от суммарных клеточных белков. Однако если клетки штамма-продуцента инфицировать фагом лямбда, то полученный лизат будет содержать МАР в растворимой форме в значительно большем количестве, чем не инфицированные клетки. В результате оптимизации таких парамет­ров, как оптическая плотность культуры при заражении и последующая температура культиви­ рования продуцента, достигнут выход целевого белка в количестве, превышающем 40 % от растворимых белков, или 0,8 г/л. Рекомбинантный белок очищен с использованием ионообменной хроматографии до гомогенности более 90 %.
format Article
author Славченко, И.Ю.
Борейко, Е.В.
Воробей, Н.В.
Гавриш, Т.Г.
Пехота, Е.Н.
Кордюм, В.А.
author_facet Славченко, И.Ю.
Борейко, Е.В.
Воробей, Н.В.
Гавриш, Т.Г.
Пехота, Е.Н.
Кордюм, В.А.
author_sort Славченко, И.Ю.
title Суперсинтез и очистка метионинаминопептидазы Escherichia coli
title_short Суперсинтез и очистка метионинаминопептидазы Escherichia coli
title_full Суперсинтез и очистка метионинаминопептидазы Escherichia coli
title_fullStr Суперсинтез и очистка метионинаминопептидазы Escherichia coli
title_full_unstemmed Суперсинтез и очистка метионинаминопептидазы Escherichia coli
title_sort суперсинтез и очистка метионинаминопептидазы escherichia coli
publisher Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
publishDate 2003
topic_facet Молекулярна та клітинна біотехнології
url http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/156513
citation_txt Суперсинтез и очистка метионинаминопептидазы Escherichia coli / И.Ю. Славченко, Е.В. Борейко, Н.В. Воробей, Т.Г. Гавриш, Е.Н. Пехота, В.А. Кордюм // Вiopolymers and Cell. — 2003. — Т. 19, № 3. — С. 274-280. — Бібліогр.: 21 назв. — рос.
series Біополімери і клітина
work_keys_str_mv AT slavčenkoiû supersinteziočistkametioninaminopeptidazyescherichiacoli
AT borejkoev supersinteziočistkametioninaminopeptidazyescherichiacoli
AT vorobejnv supersinteziočistkametioninaminopeptidazyescherichiacoli
AT gavrištg supersinteziočistkametioninaminopeptidazyescherichiacoli
AT pehotaen supersinteziočistkametioninaminopeptidazyescherichiacoli
AT kordûmva supersinteziočistkametioninaminopeptidazyescherichiacoli
first_indexed 2023-05-20T17:50:00Z
last_indexed 2023-05-20T17:50:00Z
_version_ 1796154197485289472
spelling irk-123456789-1565132019-06-19T01:27:22Z Суперсинтез и очистка метионинаминопептидазы Escherichia coli Славченко, И.Ю. Борейко, Е.В. Воробей, Н.В. Гавриш, Т.Г. Пехота, Е.Н. Кордюм, В.А. Молекулярна та клітинна біотехнології Метионинаминопептидазы (MAP) играют важную роль в процессинге белка. Они избирательно удаляют N-концевой метионин у растущего полипептида как в эу-, так и прокариотических клетках. Однако при получении гетерологичных белков в бактериях дополнительный N-концевой метионин часто не отщепляется. Если рекомбинантные белки предназначены для клинического применения, то очень важно, чтобы конечный продукт был идентичен природному аналогу, иначе он может обладать антигенными свойствами. Поэтому дополнительный N-концевой остаток метионина желательно удалить, что можно осуществить in vitro обработкой рекомбинантного белка препаратом очищенной MAP Е. coli. В настоящей работе разработан эффективный метод получения данного фермента с использованием системы экспрессии на основе РНК-полимеразы фага Т7. Показано, что при культивировании продуцента MAP BL (рЕТ-МАР) при температуре 37 °С целевой белок накапливается преимущественно в нерастворимой форме с выходом 17 % от суммарных клеточных белков. Однако если клетки штамма-продуцента инфицировать фагом лямбда, то полученный лизат будет содержать МАР в растворимой форме в значительно большем количестве, чем не инфицированные клетки. В результате оптимизации таких парамет­ров, как оптическая плотность культуры при заражении и последующая температура культиви­ рования продуцента, достигнут выход целевого белка в количестве, превышающем 40 % от растворимых белков, или 0,8 г/л. Рекомбинантный белок очищен с использованием ионообменной хроматографии до гомогенности более 90 %. Метіонінамінопептидази (МАР) відіграють важливу роль у процесінгу білка. Вони вибірково видаляють N-кінцевий ме­тіонін у поліпептиду як в еу-, так і прокаріотичних клітинах. Однак при отриманні гетерологічних білків у бактеріях до­датковий N-кінцевий метіонін часто не відщеплюється. Якщо рекомбінантні білки передбачається застосовувати у клініці, то дуже важливо, щоб кінцевий продукт був ідентичним природному аналогу, инакше в нього можуть бути антигенні властивості. Тому додатковий N-кіниевий залишок метіоніну бажано видалити, що можна здійснити in vitro, обробивши рекомбінантний білок препаратом очищеної МАР Е. coli. У цій роботі розроблено ефективний метод отримання даного фер­менту з використанням системи експресії на основі РНК-полімерази фага Т7. Показано, що при культивуванні проду­цента MAP BL (рЕТ-МАР) за температури 37 °С цільовий білок накопичується переважно в нерозчинній формі з виходом 17 % від сумарних клітинних білків. Однак якщо клітини штам у-продуцента інфікувати фагом лямбда, то одержаний лізат буде вміщувати МАР у розчинній формі в значно більшій кількості, ніж неінфіковані клітини. В результаті оптимізації таких параметрів, як оптична густина культури при зара­женні і наступна температура культивування продуцента, досягнуто вихід цільового білка в кількості, що перевищує 40 % від розчинних білків, або 0,8 г/л. Рекомбінантний білок очищено з використанням іонообмінної хроматографії до го­могенності більше 90 %. Methionine aminopeptidases (MAPs) play an important role in protein processing. In both eukaryotic and prokaryotic cells MAPs selectively remove methionine residue from the N-termini of a nascent polypeptide. However, an extra N-terminal methionyl residue frequently remains in heterologous proteins being produced in bacteria. In case of recombinant proteins destined for clinical application, it is utmost important that the final product has an N-terminal identical to that of a natural counterpart, as otherwise it may possess antigenic properties. An extra N-terminal methionine residue of a recombinant polypeptide may be removed in vitro by treatment with methionine aminopeptidase from E. coli. In the present work, an effective method of this enzyme production has been developed using an expression system based on the bacteriophage T7 polymerase. It was shown, that upon the cultivation of the MAP producer BL (pET-MAP) at 37 °C the target protein mainly accumulated in an insoluble form with a yield 17 % of the total cellular protein. However, if the producer cells are infected by phage λ, a lysate obtained contains MAP in a soluble form with higher yield compared with non infected cells. Optimization of the conditions such as cells density at the phage infection and temperature of the producer cultivation resulted in the target product yield exceeding 40 % of the soluble cell proteins, or 0,8 g/1. The recombinant protein has been purified by ion-exchange chromatography to homogeneity not less than 90 %. 2003 Article Суперсинтез и очистка метионинаминопептидазы Escherichia coli / И.Ю. Славченко, Е.В. Борейко, Н.В. Воробей, Т.Г. Гавриш, Е.Н. Пехота, В.А. Кордюм // Вiopolymers and Cell. — 2003. — Т. 19, № 3. — С. 274-280. — Бібліогр.: 21 назв. — рос. 0233-7657 DOI:http://dx.doi.org/10.7124/bc.00065C http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/156513 579.25 8 + 577.12 4 ru Біополімери і клітина Інститут молекулярної біології і генетики НАН України

Similar Items