Выделение гистидиновой тРНК из Thermus thermophilus и изучение ее первичной структуры и участков взаимодействия с гомологичной аминоацил-тРНК синтетазой

• Main Authors: Гудзера, О.И., Крикливый, И.А., Яремчук, А.Д., Тукало, М.А.
• Format: Article
• Language: Russian
• Published: Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 2006
• Series: Біополімери і клітина
• Subjects: Структура та функції біополімерів
• Online Access: http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/156580

Структура гистидиновых тРНК (тPHКʰᶦˢ) отличается от структур тРНК других аминокис­ лотных специфичностей наличием на 5'-конце дополнительного нуклеотида (G-J). Для изучения молекулярного механизма взаимодействия тPHКʰᶦˢ с гистидил-тРНК синтетзой разработан метод очистки тPHКʰᶦˢ из Т. thermophilus и изучена первичная структура изоакиепторной формы тPHКʰᶦˢ1. Индивидуальную тРНК выделяли из суммарной тРНК, используя комбинацию хроматографии низкого давления на бензоилированной ДЭАЭ-целлюлозе (БД-целлюлоза) и ДЭАЭ Toyopearl 650 с жидкостной хроматографией высокого давления на колонках DEAE 5PW и Ultrapore С8. Первичную структуру тPHКʰᶦˢ1 из Т. thermophilus определяли с использованием методов быстрого гель-секвенирования. Изученная структура отличается от тPHКʰᶦˢ из Escherichia coli по 23 положениям. Участки взаимодействия тPHКʰᶦˢ из 1Т. thermophilus с гистидил-тРНК синтетазой исследовали с помощью метода химической модификации нитрозоэтилмочевиной. Показано, что гистидил-тРНК синтетаза защищает от алкилирования этилнитрозомочевиной следующие фосфаты тPHКʰᶦˢ 8 — между акцепторным и D-стеблем; 27, 28, 29 — с 5'-стороны антикодонового стебля; фосфат 34 в антикодрне и фосфаты 67, 68 с 3'-стороны акцепторного стебля. Все обнаруженные участки тPHКʰᶦˢ локализованы на одной стороне пространственной структуры тРНК — там же, где и вариабельный стебель. D-стебель находит­ся с противоположной стороны и не взаимодействует с ферментом.