Суперсинтез α-2b интерферона человека в клетках Escherichia coli в растворимой форме с использованием системы экспрессии на основе РНК-полимеразы фага Т7

• Дата: 2003
• Автори: Славченко, И.Ю., Борейко, Е.В., Воробей, Н.В., Черных, С.И., Кордюм, В.А
• Формат: Стаття
• Мова: Russian
• Опубліковано: Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 2003
• Назва видання: Біополімери і клітина
• Теми: Молекулярна та клітинна біотехнології
• Онлайн доступ: http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/156590
• Назва журналу: Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
• Цитувати: уперсинтез α-2b интерферона человека в клетках Escherichia coli в растворимой форме с использованием системы экспрессии на основе РНК-полимеразы фага Т7 / И.Ю. Славченко, Е.В. Борейко, Н.В. Воробей, С.И. Черных, В.А. Кордюм // Вiopolymers and Cell. — 2003. — Т. 19, № 4. — С. 367-373. — Бібліогр.: 14 назв. — рос.

Разработана эффективная технология получения растворимого альфа-2b интерферона человека (ИФН) с использованием системы экспрессии на основе РНК-полимеразы фага Т7. Синтезирован­ный для этой цели искусственный ген ИФН клонировали в экспрессионный вектор рЕТ-24а, содержащий Т7 промотор и терминатор. Рекомбинантную плазмиду, обозначенную как рЕТ-αИФН, трансформировали в клетки Escherichia coli BL (DE3) и синтез ИФН индуцировали изопропил-β-D-тиогалактозидом. Изучали влияние температуры (37 и 21 °С) культивирования клеток Е. coli BL (рЕТ-αИФН) на уровень синтеза и выход растворимого ИФН. Установлено, что уровень синтеза рекомбинантного белка в первые часы после индукции при температуре 37 °С выше, чем при 21 °С. Так, через 4 ч после индукции выход ИФН при культивировании продуцента при 37 °С составляет до 20 %, а при 21 °С – только 7 % от суммарных белков клетки. Однако, если ИФН экспрессируется при температуре 37 °С, то он накапливается в клетках в виде нерастворимых телец включений. Показано, что снижение температуры культивирования проду­ цента после индукции способствует накоплению целевого белка в растворимой форме. Увеличение продолжительности культивирования продуцента при температуре 21 °С до 18 ч позволяет получать растворимый ИФН в большем количестве. Разработанная нами технология получения ИФН предусматривает инфицирование фагом лямбда клеток Е. coli BL21 (DE3), содержащих плазмиду с целевым геном под контролем промотора фага Т7. В результате лизиса клеток штамма-продуцента синтезированный целевой белок высвобождается в ростовую среду, где и накапливается в растворимой форме. При оптимальных условиях культивирования 1 л фаголизата содержит около 200 мг растворимого ИФН. Полученный выход ИФН более чем в 2,5 раза выше по сравнению с ранее достигнутым нами выходом растворимого ИФН при использовании в качестве продуцента клеток Е. coli SG30 (pIF-16), несущих плазмиду с двумя копиями искусст­венного гена ИФН под контролем тандема триптофановых промоторов.