Изучение влияния различных концентраций индуктора на выход альфа-2b интерферона человека в системе экспрессии на основе РНК-полимеразы фага Т7 в клетках Escherichia coli

• Дата: 2003
• Автори: Славченко, И.Ю., Борейко, Е.В., Воробей, Н.В.
• Формат: Стаття
• Мова: Russian
• Опубліковано: Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 2003
• Назва видання: Біополімери і клітина
• Теми: Молекулярна та клітинна біотехнології
• Онлайн доступ: http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/156621
• Назва журналу: Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
• Цитувати: Изучение влияния различных концентраций индуктора на выход альфа-2b интерферона человека в системе экспрессии на основе РНК-полимеразы фага Т7 в клетках Escherichia coli / И.Ю. Славченко, Е.В. Борейко, Н.В. Воробей // Вiopolymers and Cell. — 2003. — Т. 19, № 5. — С. 457-462. — Бібліогр.: 13 назв. — рос.

Биосинтез альфа-2b интерферона человека (ИФН) в іслетках Е. coli BL21 (DE3), несущих плазмиду рЕТ-аИФН, индуцировали различными (от 0,01 до 10 мМ) концентрациями изопропил-β-D-тиогалактозида (ИПТГ). Плазмида рЕТ-аИФН содержит искусственный ген ИФН под контролем промотора гена 10 фага Т7. Ген РНК-полимеразы фага Т7 находится в хромосоме клеток Е. coli BL21 (DE3) под контролем lac-UV5 промотора Е. coli. Обнаружено, что значение минимальной концентрации ИПТГ, обеспечивающей эффективную экспрессию целевого белка, возрастает с понижением температуры культивирования продуцента после индукции. Так, при 37 °С полная индукция достигается внесением в среду ИПТГ в конечной концентрации 0,06 мМ, а при 21 °С –0,1 мМ. Показано, что снижение концентрации индуктора до 0,01 мМ не способствует накоплению ИФН в растворимой форме при культивировании продуцента при температуре 37 °С. Также установлено, что ИПТГ в конечной концентрации до 2 мМ не оказывает негативного влияния на литическое развитие бактериофага лямбда и инфицированные им плазмидосодержащие клетки лизируются, в результате чего рекомбинантный белок в растворимой форме накапливается непосредственно в культуральной среде. Минимальная концен­трация ИПТГ, обеспечивающая максимальный выход ИФН при данном способе его получения, составляет 0,2 мМ.