Bioaffinity sorbent based on immobilized protein A Staphylococcus aureus: development and application

• Дата: 2012
• Автори: Gorbatiuk, O.B., Tsapenko, M.V., Pavlova, M.V., Okunev, O.V., Kordium, V.A.
• Формат: Стаття
• Мова: English
• Опубліковано: Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 2012
• Назва видання: Вiopolymers and Cell
• Теми: Molecular and Cell Biotechnologies
• Онлайн доступ: http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/156828
• Назва журналу: Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
• Цитувати: Bioaffinity sorbent based on immobilized protein A Staphylococcus aureus: development and application / O.B. Gorbatiuk, M.V. Tsapenko, M.V. Pavlova, O.V. Okunev, V.A. Kordium // Вiopolymers and Cell. — 2012. — Т. 28, № 2. — С. 141–148. — Бібліогр.: 21 назв. — англ., рос.

Цель. Создание биоаффинного сорбента на основе ориентированно иммобилизованного белка А Staphylococcus aureus (SPA) через два целлюлозосвязывающих домена (СBD) Clostridium thermocellum и его применение для очистки антител. Методы. С использованием последовательностей ДНК, кодирующих SPA и два СBD, сконструирован ген слитного белка SPA-CBD2 и обеспечено его получение в растворимой форме экспрессией в клетках Escherichia coli. Целевой белок иммобилизовали методом биоаффинного связывния на микрокристаллической целлюлозе. Результаты. Установлены такие характеристики биоаффинного сорбента, как емкость (1 мг SPA-CBD2 /1 мл целлюлози), динамическая емкость (3 мг иммуноглобулинов мыши/1 мл сорбента) и продуктивность, а также показана его стабильность при долгосрочном хранении. С помощью биоаффинного сорбента выделены фракции иммуноглобулинов с чистотой более 95 %. Определено, что очищенные таким способом антитела с высокой чувствительностью выявляют соответствующие антигены. Выводы. Предложенный биоаффинный сорбент позволяет получать очищенные функционально активные полии моноклональные антитела, а также проводить фракционирование на подклассы иммуноглобулинов G мыши. Ключевые слова: антитела, белок А, целлюлозосвязывающий домен, иммобилизация белка, аффинная хроматография.