Bioaffinity sorbent based on immobilized protein A Staphylococcus aureus: development and application

Bioaffinity sorbent based on immobilized protein A Staphylococcus aureus: development and application

Цель. Создание биоаффинного сорбента на основе ориентированно иммобилизованного белка А Staphylococcus aureus (SPA) через два целлюлозосвязывающих домена (СBD) Clostridium thermocellum и его применение для очистки антител. Методы. С использованием последовательностей ДНК, кодирующих SPA и два СBD, с...

Повний опис

Збережено в:
Бібліографічні деталі
Дата:2012
Автори: Gorbatiuk, O.B., Tsapenko, M.V., Pavlova, M.V., Okunev, O.V., Kordium, V.A.
Формат: Стаття
Мова:English
Опубліковано: Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 2012
Назва видання:Вiopolymers and Cell
Теми:
Molecular and Cell Biotechnologies
Онлайн доступ:http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/156828
Теги: Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
Назва журналу:Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Цитувати:Bioaffinity sorbent based on immobilized protein A Staphylococcus aureus: development and application / O.B. Gorbatiuk, M.V. Tsapenko, M.V. Pavlova, O.V. Okunev, V.A. Kordium // Вiopolymers and Cell. — 2012. — Т. 28, № 2. — С. 141–148. — Бібліогр.: 21 назв. — англ., рос.

Репозитарії

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
id irk-123456789-156828
record_format dspace
institution Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection DSpace DC
language English
topic Molecular and Cell Biotechnologies
Molecular and Cell Biotechnologies
spellingShingle Molecular and Cell Biotechnologies
Molecular and Cell Biotechnologies
Gorbatiuk, O.B.
Tsapenko, M.V.
Pavlova, M.V.
Okunev, O.V.
Kordium, V.A.
Bioaffinity sorbent based on immobilized protein A Staphylococcus aureus: development and application
Вiopolymers and Cell
description Цель. Создание биоаффинного сорбента на основе ориентированно иммобилизованного белка А Staphylococcus aureus (SPA) через два целлюлозосвязывающих домена (СBD) Clostridium thermocellum и его применение для очистки антител. Методы. С использованием последовательностей ДНК, кодирующих SPA и два СBD, сконструирован ген слитного белка SPA-CBD2 и обеспечено его получение в растворимой форме экспрессией в клетках Escherichia coli. Целевой белок иммобилизовали методом биоаффинного связывния на микрокристаллической целлюлозе. Результаты. Установлены такие характеристики биоаффинного сорбента, как емкость (1 мг SPA-CBD2 /1 мл целлюлози), динамическая емкость (3 мг иммуноглобулинов мыши/1 мл сорбента) и продуктивность, а также показана его стабильность при долгосрочном хранении. С помощью биоаффинного сорбента выделены фракции иммуноглобулинов с чистотой более 95 %. Определено, что очищенные таким способом антитела с высокой чувствительностью выявляют соответствующие антигены. Выводы. Предложенный биоаффинный сорбент позволяет получать очищенные функционально активные полии моноклональные антитела, а также проводить фракционирование на подклассы иммуноглобулинов G мыши. Ключевые слова: антитела, белок А, целлюлозосвязывающий домен, иммобилизация белка, аффинная хроматография.
format Article
author Gorbatiuk, O.B.
Tsapenko, M.V.
Pavlova, M.V.
Okunev, O.V.
Kordium, V.A.
author_facet Gorbatiuk, O.B.
Tsapenko, M.V.
Pavlova, M.V.
Okunev, O.V.
Kordium, V.A.
author_sort Gorbatiuk, O.B.
title Bioaffinity sorbent based on immobilized protein A Staphylococcus aureus: development and application
title_short Bioaffinity sorbent based on immobilized protein A Staphylococcus aureus: development and application
title_full Bioaffinity sorbent based on immobilized protein A Staphylococcus aureus: development and application
title_fullStr Bioaffinity sorbent based on immobilized protein A Staphylococcus aureus: development and application
title_full_unstemmed Bioaffinity sorbent based on immobilized protein A Staphylococcus aureus: development and application
title_sort bioaffinity sorbent based on immobilized protein a staphylococcus aureus: development and application
publisher Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
publishDate 2012
topic_facet Molecular and Cell Biotechnologies
url http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/156828
citation_txt Bioaffinity sorbent based on immobilized protein A Staphylococcus aureus: development and application / O.B. Gorbatiuk, M.V. Tsapenko, M.V. Pavlova, O.V. Okunev, V.A. Kordium // Вiopolymers and Cell. — 2012. — Т. 28, № 2. — С. 141–148. — Бібліогр.: 21 назв. — англ., рос.
series Вiopolymers and Cell
work_keys_str_mv AT gorbatiukob bioaffinitysorbentbasedonimmobilizedproteinastaphylococcusaureusdevelopmentandapplication
AT tsapenkomv bioaffinitysorbentbasedonimmobilizedproteinastaphylococcusaureusdevelopmentandapplication
AT pavlovamv bioaffinitysorbentbasedonimmobilizedproteinastaphylococcusaureusdevelopmentandapplication
AT okunevov bioaffinitysorbentbasedonimmobilizedproteinastaphylococcusaureusdevelopmentandapplication
AT kordiumva bioaffinitysorbentbasedonimmobilizedproteinastaphylococcusaureusdevelopmentandapplication
first_indexed 2023-05-20T17:50:38Z
last_indexed 2023-05-20T17:50:38Z
_version_ 1796154221350879232
spelling irk-123456789-1568282019-06-20T01:29:31Z Bioaffinity sorbent based on immobilized protein A Staphylococcus aureus: development and application Gorbatiuk, O.B. Tsapenko, M.V. Pavlova, M.V. Okunev, O.V. Kordium, V.A. Molecular and Cell Biotechnologies Цель. Создание биоаффинного сорбента на основе ориентированно иммобилизованного белка А Staphylococcus aureus (SPA) через два целлюлозосвязывающих домена (СBD) Clostridium thermocellum и его применение для очистки антител. Методы. С использованием последовательностей ДНК, кодирующих SPA и два СBD, сконструирован ген слитного белка SPA-CBD2 и обеспечено его получение в растворимой форме экспрессией в клетках Escherichia coli. Целевой белок иммобилизовали методом биоаффинного связывния на микрокристаллической целлюлозе. Результаты. Установлены такие характеристики биоаффинного сорбента, как емкость (1 мг SPA-CBD2 /1 мл целлюлози), динамическая емкость (3 мг иммуноглобулинов мыши/1 мл сорбента) и продуктивность, а также показана его стабильность при долгосрочном хранении. С помощью биоаффинного сорбента выделены фракции иммуноглобулинов с чистотой более 95 %. Определено, что очищенные таким способом антитела с высокой чувствительностью выявляют соответствующие антигены. Выводы. Предложенный биоаффинный сорбент позволяет получать очищенные функционально активные полии моноклональные антитела, а также проводить фракционирование на подклассы иммуноглобулинов G мыши. Ключевые слова: антитела, белок А, целлюлозосвязывающий домен, иммобилизация белка, аффинная хроматография. Мета. Створення біоафінного сорбента на основі орієнтовано іммобілізованого білка А Staphylococcus aureus (SPA) через два целюлозозв’язувальних домени (СBD) Clostridium thermocellum та його застосування для очищення антитіл. Методи. З використанням послідовностей ДНК, кодуючих SPA і два СBD, сконструйовано ген злитого білка SPA-CBD2 та забезпечено його отримання в розчинній формі експресією у клітинах Escherichia coli. Цільовий білок іммобілізовано методом біоафінного зв’язування на мікрокристалічній целюлозі. Результати. Встановлено такі характеристики біоафінного сорбента, як ємність (1 мг SPACBD2/1 мл целюлози), динамічна ємність (3 мг імуноглобулінів миші/1 мл сорбента) і продуктивність, а також показано його стабільність при тривалому зберіганні. За допомогою біоафінного сорбента виділено фракції імуноглобулінів з чистотою понад 95 %. Визначено, що очищені у такий спосіб антитіла з високою чутливістю виявляють відповідні антигени. Висновки. Запропонований біоафінний сорбент дозволяє отримувати очищені функціонально активні поліі моноклональні анттіла, а також проводити фракціонування на підкласи імуноглобулінів G миші. Ключові слова: антитіла, білок А, целюлозозв’язувальний домен, іммобілізація білка, афінна хроматографія. Aim. The obtaining of bioaffinity sorbent based on the immobilized protein A of S. aureus (SPA) using two cellulose-binding domains (CBD), and its application for purification of antibodies. Methods. The DNA sequences encoding SPA and two CBD were genetically fused, expressed in the high-productive Escherichia coli system and the protein SPA-CBD2 was obtained in a soluble form. The SPA-CBD2 fusion protein was affinity immobilized on the microcrystalline cellulose. Results. Capacity of bioaffinity sorbent (1 mg SPA-CBD2/1 ml CC31-cellulose), dynamic capacity (3 mg mouse IgG/1 ml bioaffinity sorbent), efficiency and stability during prolonged storage were determined. The bioffinity sorbent was used for purification of antibodies. The purity of antibodies in eluted fractions was more than 95 %. The purified antibodies detected target antigens with a high sensitivity. Conclusions. The designed bioaffinity sorbent provides obtaining pure poly- and monoclonal antibodies in functionally active form and can be useful for the fractionation of mouse immunoglobulin G. Keywords: antibodies, protein A, cellulose-binding domain, protein immobilization, affinity chromatography. 2012 Article Bioaffinity sorbent based on immobilized protein A Staphylococcus aureus: development and application / O.B. Gorbatiuk, M.V. Tsapenko, M.V. Pavlova, O.V. Okunev, V.A. Kordium // Вiopolymers and Cell. — 2012. — Т. 28, № 2. — С. 141–148. — Бібліогр.: 21 назв. — англ., рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.000041 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/156828 579.69 +577.112 en Вiopolymers and Cell Інститут молекулярної біології і генетики НАН України

Схожі ресурси