Study of the activity of DNA polymerases β and λ using 5-formyluridine containing DNA substrates

• Дата: 2012
• Автори: Belousova, E.A., Lavrik, O.I.
• Формат: Стаття
• Мова: English
• Опубліковано: Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 2012
• Назва видання: Вiopolymers and Cell
• Теми: Structure and Function of Biopolymers
• Онлайн доступ: http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/156849
• Назва журналу: Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
• Цитувати: Study of the activity of DNA polymerases β and λ using 5-formyluridine containing DNA substrates / E.A. Belousova, O.I. Lavrik // Вiopolymers and Cell. — 2012. — Т. 28, № 3. — С. 218–222. — Бібліогр.: 21 назв. — англ.

Цель. Исследовать TLS-активность ДНК-полимераз β и λ человека на ДНК-дуплексах, содержащих 5-формилуридин (5-foU) и имитирующих интермедиаты репликации лидирующей цепи геномной ДНК, а также влияние на нее репликативных факторов hRPA и hPCNA. Методы. «Задержка в геле» (EMSA), ферментативная кинетика. Результаты. Изучена способность ДНК-полимераз β и λ катализировать синтез ДНК через 5-foU. Определены кинетические характеристики этого процесса в отсутствие и в присутствии белковых факторов hRPA и hPCNA. Выводы. Показано, что: 1) оба фермента способны вести TLS на использованных ДНК-субстратах независимо от условий реакции, однако ДНК-полимераза λ оказалась более точным ферментом; 2) hRPA стимулирует эффективность немутагенного TLS, катализируемого ДНК-полимеразой λ, непосредственно при встраивании нуклеотида напротив 5-foU и не влияет на эффективность этого процесса в том случае, когда повреждение сдвинуто в дуплексную часть ДНК; 3) hPCNA не влияет на эффективность TLS, катализируемого обоими ферментами. Kлючевые слова: синтез ДНК через повреждение, ДНК-полимеразы β и λ, 5-формилуридин.