Ренатурація химерного білка ScFv-CBD з тілець включення Escherichia соli
Запропоновано ефективний і недорогий метод ренатурації химерного білка ScFv-CBD із тілець включення E. coli. Метод грунтується на ступінчастому розведенні солюбілізованого в розчині 6 М гуанідингідрохлориду ScFv-CBD буфером для ренатурації, який містить L-аргінін та глутатіон. Досліджено вплив вихід...
Збережено в:
| Дата: | 2008 |
|---|---|
| Автори: | , , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Ukrainian |
| Опубліковано: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
2008
|
| Назва видання: | Біополімери і клітина |
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/157663 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Ренатурація химерного білка ScFv-CBD з тілець включення Escherichia соli / О.Б. Горбатюк, Ю.С. Ніколаєв, Д.М. Іродов, І.Я. Дубей, П.В. Гільчук // Біополімери і клітина. — 2008. — Т. 24, № 1. — С. 51-59. — Бібліогр.: назв. — укр. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
irk-123456789-157663 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
irk-123456789-1576632019-06-21T01:25:43Z Ренатурація химерного білка ScFv-CBD з тілець включення Escherichia соli Горбатюк, О.Б. Ніколаєв, Ю.С. ІродовІродов, Д.М. Дубей, І.Я. Гільчук, П.В. Молекулярна та клітинна біотехнології Запропоновано ефективний і недорогий метод ренатурації химерного білка ScFv-CBD із тілець включення E. coli. Метод грунтується на ступінчастому розведенні солюбілізованого в розчині 6 М гуанідингідрохлориду ScFv-CBD буфером для ренатурації, який містить L-аргінін та глутатіон. Досліджено вплив вихідної концентрації білка та різного співвідношення реагентів окисно-відновної пари GSSG:GSН, які додавали на певних стадіях ренатурації, на вихід функціонально активного ScFv-CBD і його агрегацію. Показано, що зниження виходу активного ScFv-CBD відбувається за рахунок формування значної кількості його розчинних агрегатів при вихідній концентрації, вищій за 0,53 мг/мл. Визначено умови ренатурації, які забезпечують найбільший вихід розчинного ScFv-CBD у мономерній формі, та найвищу функціональну активність його антигензв’язувального (ScFv) і целюлозозв’язувального (CBD) компонентів (відповідно ~63 і ~96 %). An inexpensive and effective refolding method for ScFv-CBD fusion protein recovery from E. coli inclusion bodies has been developed. The principle of the proposed method is the stepwise dilution of solubilized ScFv-CBD in the presence of 6 M guanidine hydrochloride with refolding buffer containing L-arginine and glutathione. The influence of initial protein concentration and the molar ratio of oxidized and reduced form of glutathione that was introduced at certain refolding stages has been carefully investigated. It was shown that the decrease in the yield of functional ScFv-CBD and formation of significant amount of soluble aggregates take place when the initial protein concentration is higher then 0.53 mg/ml. The optimal refolding conditions providing highest yield of soluble monomeric ScFv-CBD as well as the highest functional activity of antigen-binding (ScFv) and cellulose-binding (CBD) moieties (~63 % and ~96 %, respectively) have been found. Предложен эффективный и недорогой метод ренатурации химерного белка ScFv-CBD из телец включения E. coli, основанный на ступенчатом разведении солюбилизированного в растворе 6 М гуанидингидрохлорида ScFv-CBD буфером для ренатурации, содержащим L-аргинин и глутатион. Исследовано влияние исходной концентрации белка и разного соотношения реагентов окислительно-восстановительной пары GSSG/GSH, вносимых на определенных стадиях ренатурации, на выход функционально активного ScFv-CBD и его агрегацию. Показано, что снижение выхода активного ScFv-CBD происходит из-за формирования значительного количества его растворимых агрегатов при исходной концентрации выше 0,53 мг/мл. Определены условия ренатурации, обеспечивающие наибольший выход растворимого ScFv-CBD в мономерной форме, а также наивысшую активность его антигенсвязывающего (ScFv) и целлюлозосвязывающего (CBD) компонентов (соответственно ~63 и ~96 %). 2008 Article Ренатурація химерного білка ScFv-CBD з тілець включення Escherichia соli / О.Б. Горбатюк, Ю.С. Ніколаєв, Д.М. Іродов, І.Я. Дубей, П.В. Гільчук // Біополімери і клітина. — 2008. — Т. 24, № 1. — С. 51-59. — Бібліогр.: назв. — укр. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.000790 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/157663 579.69 + 577.112 uk Біополімери і клітина Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Ukrainian |
| topic |
Молекулярна та клітинна біотехнології Молекулярна та клітинна біотехнології |
| spellingShingle |
Молекулярна та клітинна біотехнології Молекулярна та клітинна біотехнології Горбатюк, О.Б. Ніколаєв, Ю.С. ІродовІродов, Д.М. Дубей, І.Я. Гільчук, П.В. Ренатурація химерного білка ScFv-CBD з тілець включення Escherichia соli Біополімери і клітина |
| description |
Запропоновано ефективний і недорогий метод ренатурації химерного білка ScFv-CBD із тілець включення E. coli. Метод грунтується на ступінчастому розведенні солюбілізованого в розчині 6 М гуанідингідрохлориду ScFv-CBD буфером для ренатурації, який містить L-аргінін та глутатіон. Досліджено вплив вихідної концентрації білка та різного співвідношення реагентів окисно-відновної пари GSSG:GSН, які додавали на певних стадіях ренатурації, на вихід функціонально активного ScFv-CBD і його агрегацію. Показано, що зниження виходу активного ScFv-CBD відбувається за рахунок формування значної кількості його розчинних агрегатів при вихідній концентрації, вищій за 0,53 мг/мл. Визначено умови ренатурації, які забезпечують найбільший вихід розчинного ScFv-CBD у мономерній формі, та найвищу функціональну активність його антигензв’язувального (ScFv) і целюлозозв’язувального (CBD) компонентів (відповідно ~63 і ~96 %). |
| format |
Article |
| author |
Горбатюк, О.Б. Ніколаєв, Ю.С. ІродовІродов, Д.М. Дубей, І.Я. Гільчук, П.В. |
| author_facet |
Горбатюк, О.Б. Ніколаєв, Ю.С. ІродовІродов, Д.М. Дубей, І.Я. Гільчук, П.В. |
| author_sort |
Горбатюк, О.Б. |
| title |
Ренатурація химерного білка ScFv-CBD з тілець включення Escherichia соli |
| title_short |
Ренатурація химерного білка ScFv-CBD з тілець включення Escherichia соli |
| title_full |
Ренатурація химерного білка ScFv-CBD з тілець включення Escherichia соli |
| title_fullStr |
Ренатурація химерного білка ScFv-CBD з тілець включення Escherichia соli |
| title_full_unstemmed |
Ренатурація химерного білка ScFv-CBD з тілець включення Escherichia соli |
| title_sort |
ренатурація химерного білка scfv-cbd з тілець включення escherichia соli |
| publisher |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| publishDate |
2008 |
| topic_facet |
Молекулярна та клітинна біотехнології |
| url |
http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/157663 |
| citation_txt |
Ренатурація химерного білка ScFv-CBD з тілець включення Escherichia соli / О.Б. Горбатюк, Ю.С. Ніколаєв, Д.М. Іродов, І.Я. Дубей, П.В. Гільчук // Біополімери і клітина. — 2008. — Т. 24, № 1. — С. 51-59. — Бібліогр.: назв. — укр. |
| series |
Біополімери і клітина |
| work_keys_str_mv |
AT gorbatûkob renaturacíâhimernogobílkascfvcbdztílecʹvklûčennâescherichiasoli AT níkolaêvûs renaturacíâhimernogobílkascfvcbdztílecʹvklûčennâescherichiasoli AT írodovírodovdm renaturacíâhimernogobílkascfvcbdztílecʹvklûčennâescherichiasoli AT dubejíâ renaturacíâhimernogobílkascfvcbdztílecʹvklûčennâescherichiasoli AT gílʹčukpv renaturacíâhimernogobílkascfvcbdztílecʹvklûčennâescherichiasoli |
| first_indexed |
2023-05-20T17:52:46Z |
| last_indexed |
2023-05-20T17:52:46Z |
| _version_ |
1796154305295679488 |