Наличие двух различных активных центров на тиаминсвязывающем протеине плазматических мембран синаптосом

• Main Authors: Пархоменко, Ю.М., Строкина, А.А., Пилипчук, С.Ю., Степаненко, С.П., Чеховская, Л.И., Донченко, Г.В.
• Format: Article
• Language: Russian
• Published: Інститут біохімії ім. О.В. Палладіна НАН України 2010
• Series: Український біохімічний журнал
• Subjects: Експериментальні роботи
• Online Access: http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/19021

Исследовано влияние тиаминтрифосфата на тиаминсвязывающую активность (ТСА) в препаратах плазматических мембран синаптосом (ПМС), изолированных из головного мозга крыс. Показано ингибирование тиаминтрифосфатом тиаминсвязывающей активности ПМС, которое носит конкурентный характер (Кi =1,0 ± 0,3 мкМ). В то же время тиамин в диапазоне концентраций 0,5–20 мкМ не оказывает ингибирующего действия на тиаминтрифосфатазную (ThTP-азную) активность, а, напротив, наблюдается ее активация с максимумом при концентрации 2,5 мкМ. Изучено влияние классических антагонистов тиамина (ампролиума, окситиамина и пиритиамина) на биологическую активность плазматических мембран, присущую тиаминсвязывающему протеину (ТСП). Величина IC50 для ингибирования ампролиумом тиаминсвязывающей активности ПМС определена равной 50 ± 4,0 мкМ, в то время как на ThTP-азную активность этот антагонист не оказывает влияния. Показано ингибирование окситиамином обоих видов активности ТСП. Величина IC50 составляет 125 ± 28 и 1000 ± 95 мкМ соответственно для ТСА и ThTP-азной активности. А величины IC50 для ингибирования ТСА и ThTP-азной активности пиритиамином отличаются на порядок, составляя соответственно 2,2 ± 0,2 и 43 ± 9 мкМ. Полученные данные свидетельствуют о том, что активные центры на ПМС, отвечающие за ТСА и ThTP-азную активность, обладают различной чувствительностью к антагонистам тиамина. Полученные результаты дают основание предположить, что за специфическое связывание и гидролиз тиаминфосфатов в ТСП синаптических мембран отвечают различные активные центры.