Розробка тест-системи для діагностики Ph-лейкемій за допомогою полімеразної ланцюгової реакції

Філадельфійська хромосома – головний маркер розвитку пухлини для більшості пацієнтів з хронічною мієлопроліферативною лейкемією та для значної кількості хворих на гострий лімфобластний лейкоз. Вона обумовлена реципрокною транслокацією між 9 та 22 хромосомами. На молекулярному рівні утворення хромосо...

Повний опис

Збережено в:

Бібліографічні деталі
Дата:	2005
Автори:	Малюта, С.С., Телегеєв, Г.Д., Дибков, М.В., Мірошниченко, Д.О., Єльська, Г.В.
Формат:	Стаття
Мова:	Ukrainian
Опубліковано:	Видавничий дім "Академперіодика" НАН України 2005
Теми:	Науково-технічні інноваційні проекти Національної академії наук України
Онлайн доступ:	http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/2672
Теги:	Додати тег Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
Назва журналу:	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Цитувати:	Розробка тест-системи для діагностики Ph-лейкемій за допомогою полімеразної ланцюгової реакції / С.С. Малюта, Г.Д. Телегеєв, М.В. Дибков, Д.О. Мірошниченко, Г.В. Єльська // Наука та інновації. — 2005. — Т. 1, № 3. — С. 70-75. — Бібліогр.: 17 назв. — укр.

Репозитарії

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine

id	irk-123456789-2672
record_format	dspace
spelling	irk-123456789-26722017-02-12T22:37:57Z Розробка тест-системи для діагностики Ph-лейкемій за допомогою полімеразної ланцюгової реакції Малюта, С.С. Телегеєв, Г.Д. Дибков, М.В. Мірошниченко, Д.О. Єльська, Г.В. Науково-технічні інноваційні проекти Національної академії наук України Філадельфійська хромосома – головний маркер розвитку пухлини для більшості пацієнтів з хронічною мієлопроліферативною лейкемією та для значної кількості хворих на гострий лімфобластний лейкоз. Вона обумовлена реципрокною транслокацією між 9 та 22 хромосомами. На молекулярному рівні утворення хромосоми супроводжується утворенням гібридного bcr/abl-гена. У даній роботі наведені відомості щодо розробки вітчизняної тест-системи для детекції гібридного гена методом полімеразної ланцюгової реакції. Показано, що використання у системі специфічного поєднання праймерів підвищує вірогідність отриманих результатів. Ключові слова: Ph-позитивна лейкемія, BCR/ABL, діагностика, полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР). Филадельфийская хромосома – главный маркер роста опухоли для большинства пациентов с хронической миелоидной лейкемией и острым лимфобластным лейкозом. Она обусловлена реципрокной транслокацией между 9 и 22 хромосомами. На молекулярном уровне образование хромосомы сопровождается образованием гибридного bcr/abl-гена. В данной работе представлены данные о разработке отечественной тест-системы для определения наличия гибридного гена методом полимеразной цепной реакции. Показано, что использование в системе специфического сочетания праймеров позволяет повысить достоверность получаемых результатов. Ключевые слова: Ph-позитивная лейкемия, BCR/ABL, диагностика, полимеразная цепная реакция (ПЦР). The hallmark of tumor growth for the majority of patient with chronic myelogenous leukemia is Philadelphia chromosome (Ph') – a product of reciprocal translocation of 9 and 22 chromosomes. At the molecular level it is connected with bcr/abl-fusion gene. This paper presents data of development of national test-system for detection of hybrid gene with PCR method. It was shown that specific combination of primers used allow to advance a probability to obtain the correct data. Keywords: Ph-positive leukaemia, BCR/ABL, diagnostics, PCR. 2005 Article Розробка тест-системи для діагностики Ph-лейкемій за допомогою полімеразної ланцюгової реакції / С.С. Малюта, Г.Д. Телегеєв, М.В. Дибков, Д.О. Мірошниченко, Г.В. Єльська // Наука та інновації. — 2005. — Т. 1, № 3. — С. 70-75. — Бібліогр.: 17 назв. — укр. 1815-2066 DOI: doi.org/10.15407/scin1.03.070 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/2672 uk Видавничий дім "Академперіодика" НАН України
institution	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection	DSpace DC
language	Ukrainian
topic	Науково-технічні інноваційні проекти Національної академії наук України Науково-технічні інноваційні проекти Національної академії наук України
spellingShingle	Науково-технічні інноваційні проекти Національної академії наук України Науково-технічні інноваційні проекти Національної академії наук України Малюта, С.С. Телегеєв, Г.Д. Дибков, М.В. Мірошниченко, Д.О. Єльська, Г.В. Розробка тест-системи для діагностики Ph-лейкемій за допомогою полімеразної ланцюгової реакції
description	Філадельфійська хромосома – головний маркер розвитку пухлини для більшості пацієнтів з хронічною мієлопроліферативною лейкемією та для значної кількості хворих на гострий лімфобластний лейкоз. Вона обумовлена реципрокною транслокацією між 9 та 22 хромосомами. На молекулярному рівні утворення хромосоми супроводжується утворенням гібридного bcr/abl-гена. У даній роботі наведені відомості щодо розробки вітчизняної тест-системи для детекції гібридного гена методом полімеразної ланцюгової реакції. Показано, що використання у системі специфічного поєднання праймерів підвищує вірогідність отриманих результатів. Ключові слова: Ph-позитивна лейкемія, BCR/ABL, діагностика, полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР).
format	Article
author	Малюта, С.С. Телегеєв, Г.Д. Дибков, М.В. Мірошниченко, Д.О. Єльська, Г.В.
author_facet	Малюта, С.С. Телегеєв, Г.Д. Дибков, М.В. Мірошниченко, Д.О. Єльська, Г.В.
author_sort	Малюта, С.С.
title	Розробка тест-системи для діагностики Ph-лейкемій за допомогою полімеразної ланцюгової реакції
title_short	Розробка тест-системи для діагностики Ph-лейкемій за допомогою полімеразної ланцюгової реакції
title_full	Розробка тест-системи для діагностики Ph-лейкемій за допомогою полімеразної ланцюгової реакції
title_fullStr	Розробка тест-системи для діагностики Ph-лейкемій за допомогою полімеразної ланцюгової реакції
title_full_unstemmed	Розробка тест-системи для діагностики Ph-лейкемій за допомогою полімеразної ланцюгової реакції
title_sort	розробка тест-системи для діагностики ph-лейкемій за допомогою полімеразної ланцюгової реакції
publisher	Видавничий дім "Академперіодика" НАН України
publishDate	2005
topic_facet	Науково-технічні інноваційні проекти Національної академії наук України
url	http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/2672
citation_txt	Розробка тест-системи для діагностики Ph-лейкемій за допомогою полімеразної ланцюгової реакції / С.С. Малюта, Г.Д. Телегеєв, М.В. Дибков, Д.О. Мірошниченко, Г.В. Єльська // Наука та інновації. — 2005. — Т. 1, № 3. — С. 70-75. — Бібліогр.: 17 назв. — укр.
work_keys_str_mv	AT malûtass rozrobkatestsistemidlâdíagnostikiphlejkemíjzadopomogoûpolímeraznoílancûgovoíreakcíí AT telegeêvgd rozrobkatestsistemidlâdíagnostikiphlejkemíjzadopomogoûpolímeraznoílancûgovoíreakcíí AT dibkovmv rozrobkatestsistemidlâdíagnostikiphlejkemíjzadopomogoûpolímeraznoílancûgovoíreakcíí AT mírošničenkodo rozrobkatestsistemidlâdíagnostikiphlejkemíjzadopomogoûpolímeraznoílancûgovoíreakcíí AT êlʹsʹkagv rozrobkatestsistemidlâdíagnostikiphlejkemíjzadopomogoûpolímeraznoílancûgovoíreakcíí
first_indexed	2025-07-02T05:51:39Z
last_indexed	2025-07-02T05:51:39Z
_version_	1836513231018917888
fulltext	70 Інноваційні проекти Національної академії наук України © НАУКА ТА ІННОВАЦІЇ. 2005 1. ВСТУП Різного роду лейкемії складають близько 5 % від загальної кількості онкологічних захво� рювань. Смертність від лімфом та лейкемій становить близько 1,3–1,7 % від загальної, що складає більше 10 % смертності від онколо� гічних захворювань. Методи діагностики лейкозів, що засто� совуються в повсякденній практиці, включа� ють використання простих цитологічних критеріїв, таких, як форма та розмір клітин, РОЗРОБКА ТЕСТ СИСТЕМИ ДЛЯ ДІАГНОСТИКИ PH ЛЕЙКЕМІЙ ЗА ДОПОМОГОЮ ПОЛІМЕРАЗНОЇ ЛАНЦЮГОВОЇ РЕАКЦІЇ С. С. Малюта, Г. Д. Телегеєв, М. В. Дибков, Д. О. Мірошниченко, Г. В. Єльська Інститут молекулярної біології і генетики НАН України, Київ Надійшла до редакції 08.04.05 Резюме: Філадельфійська хромосома – головний маркер розвитку пухлини для більшості пацієнтів з хронічною мієлопроліферативною лейкемією та для значної кількості хворих на гострий лімфо� бластний лейкоз. Вона обумовлена реципрокною транслокацією між 9 та 22 хромосомами. На моле� кулярному рівні утворення хромосоми супроводжується утворенням гібридного bcr/abl�гена. У даній роботі наведені відомості щодо розробки вітчизняної тест�системи для детекції гібридного гена ме� тодом полімеразної ланцюгової реакції. Показано, що використання у системі специфічного поєднан� ня праймерів підвищує вірогідність отриманих результатів. Ключові слова: Ph�позитивна лейкемія, BCR/ABL, діагностика, полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР). С. С. Малюта, Г. Д. Телегеев, М. В. Дыбков, Д. А. Мирошниченко, А. В. Ельськая. РАЗРАБОТКА ТЕСТ СИСТЕМЫ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ PH ЛЕЙКЕМИЙ С ПОМОЩЬЮ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ. Резюме: Филадельфийская хромосома – главный маркер роста опухоли для большинства пациентов с хронической миелоидной лейкемией и острым лимфобластным лейкозом. Она обусловлена реци� прокной транслокацией между 9 и 22 хромосомами. На молекулярном уровне образование хромосо� мы сопровождается образованием гибридного bcr/abl�гена. В работе представлены данные о разра� ботке отечественной тест�системы для определения наличия гибридного гена методом полимеразной цепной реакции. Показано, что использование в системе специфического сочетания праймеров поз� воляет повысить достоверность получаемых результатов. Ключевые слова: Ph�позитивная лейкемия, BCR/ABL, диагностика, полимеразная цепная реакция (ПЦР). S. S. Maliuta, G. D. Telegeev, M. V. Dybkov, D. O. Miroshnychenko, A. V. El'skaya. TEST SYSTEM DEVELOPMENT FOR PH LEUKAEMIA DIAGNOSTICS BY POLYMERASE CHAIN REACTION. Abstract: The hallmark of tumor growth for the majority of patient with chronic myelogenous leukemia is Philadelphia chromosome (Ph') – a product of reciprocal translocation of 9 and 22 chromosomes. At the molecular level it is connected with bcr/abl�fusion gene. This paper presents data of development of nation� al test�system for detection of hybrid gene with PCR method. It was shown that specific combination of primers used allow to advance a probability to obtain the correct data. Keywords: Ph�positive leukaemia, BCR/ABL, diagnostics, PCR. Наука та інновації.2005.Т 1.№ 3.С. 70–75. 71НАУКА ТА ІННОВАЦІЇ. № 3, 2005 Інноваційні проекти Національної академії наук України характер зернистості цитоплазми, ядерно� цитоплазматичне співвідношення, структура ядра тощо. Ці методи доповнюються також цитохімічними методами (визначення актив� ності кислої фосфатази, мієлопероксидази, PAS�реакція) [1]. На підставі результатів, що дають ці методи, можна встановити віро� гідний діагноз для більшості пацієнтів. Уточ� нення ж природи конкретного лейкемічного клона вимагає проведення імунофенотипу� вання та цитогенетичного аналізу. Викорис� тання моноклональних антитіл, а також іму� нофлуоресцентних та імуноферментних ме� тодів дозволяє більш точно встановлювати рідкіcні форми та варіанти лейкозів і, таким чином, застосовувати відповідні методи ліку� вання [2, 3]. Хромосомні транслокації виявляються при більшості неоплазій у людини і голов� ним чином саме вони зумовлюють один чи декілька етапів розвитку пухлини. У зв'язку з цим результати цитогенетич� ного аналізу, під час якого виявляють харак� терні аномалії (транслокаціі, інверсіі, делеції тощо) шляхом диференційного забарвлення хромосом, мають самостійне діагностичне і прогностичне значення [4–6]. Першим по� дібним маркером росту пухлини була ма� ленька G�забарвлена хромосома, описана в 1960 р. і названа філадельфійською (Ph') [7]. Утворення даної хромосоми обумовлене ре� ципрокною транслокацією між 9 і 22 хромо� сомами t(9;22)(q34;q11) [8]. Вона вияв� ляється приблизно у 95 % хворих на хроніч� ну гранулоцитарну лейкемію, а також у 25–30 % дорослих та 2–10 % дітей, хворих на гостру лімфобластну лейкемію (ГЛЛ) [9]. На молекулярному рівні утворення Ph'�хромо� соми супроводжується утворенням нового злитого bcr/abl�гена (представленого на 5'� кінці ділянкою гена bcr, а на 3'�кінці – ділян� кою гена abl (рис.1) [10]. Як показали чис� Рис. 1, в. Схематичне зображення основних типів химерних мРНК bcr/abl, що утворюються в наслідок розривів в різних ділянках гена bcr Рис. 1, a. Схематичне зображення гена bcr та основні ділянки розривів при утворенні химерного гена bcr/abl Рис. 1, б. Схематичне зображення гена abl та ділянки розривів при утворенні химерного гена bcr/abl 72 Інноваційні проекти Національної академії наук України НАУКА ТА ІННОВАЦІЇ. № 3, 2005 ленні експерименти, саме продукт транс� крипції гена bcr/abl є головним етіологічним моментом у розвитку Ph+�лейкемії. На� явність цього гена в клітинах крові та кістко� вого мозку дозволяє виявляти Ph' хромосому методами молекулярної біології. Сучасні молекулярно�біологічні методи включають використання геномних зондів [11, 12], полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) [13, 14], флюоресценції in situ гібри� дизації (FISH) [15], PCR in cell [16] тощо. Найбільш простим і чутливим є метод полімеразної ланцюгової реакції. Тест�системи для діагностики лейкемії, що наразі використовуються в Україні, заку� повуються за кордоном. В Україні такі тест� системи не розроблялися. Дана робота при� свячена розробці вітчизняної тест�системи для детекції гібридного bcr\abl�гена, що є маркером хронічної мієлоїдної лейкемії (ХМЛ) та значної кількості гострих лімфоб� ластних лейкозів. Створення такої системи є доцільним як з економічних міркувань (знач� на вартість закордонних аналогів), так і вихо� дячи з отриманих в нашій лабораторії даних щодо високої нестабільності bcr� та abl�генів, внаслідок чого потрібне використання додат� кових праймерів. В основу пропонованої тест�системи по� ставлена задача створення такого методу, який би підвищив достовірність діагностики для людей з мієлопрофілеративними захво� рюваннями за рахунок створення умов змен� шення негативних моментів полімеразноі ланцюгової реакції шляхом врахування не� стабільності пухлинного геному. 2. КЛІНІЧНІ МАТЕРІАЛИ ТА МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ У роботі використовували зразки крові хво� рих, які проходили лікування у гемато� логічних клініках м. Києва. На рис. 2 схема� тично зображені основні етапи виявлення Ph'�хромосоми у клітинах крові хворих. РНК отримували методом, описаним в [17]. Реакційна суміш для синтезу кДНК містила 1–5 мкг РНК, 10 pМ праймера А1 (5'�TGATTATAGCCTAAGACCCGGA�3') (рис. 2 та 3) або розсіяного праймера d(NTP)6, 20 одиниць зворотної транскипта� зи M�MLV (GibcoBRL), 10–20 одиниць РНазіну, 1мМ dNTP та буфер для зворотної транскиптази. Загальний об'єм суміші – 40 мкл. Синтез проводили при 37 °С протя� гом 1 год. Аліквоти реакційної суміші (5– 10 мкл) використовували для проведення ампліфікації. На першому етапі проводили 30 циклів полімеразної ланцюгової реакції з використанням праймерів Ph1�f та Ph1�r в об'ємі 30 мкл (рис. 3) за умов, рекомендова� них фірмою�виготовлювачем Taq�полімера� зи. Температурний режим синтезу був: 94 °С – 18 сек, 55 °С – 18 сек, 72 °С – 1 хв. Далі про� водили другий етап ПЛР з використанням Рис. 2. Схема виявлення гена bcr/abl методом ПЛР 73НАУКА ТА ІННОВАЦІЇ. № 3, 2005 Інноваційні проекти Національної академії наук України праймерів Ph�f та Ph�r (рис. 3) 94 °С – 24 сек, 58 °С – 18 сек, 72 °С – 1 хв. Продукти ампліфікації аналізували в 1,5 %�ому агароз� ному гелі. 3. РЕЗУЛЬТАТИ ТА ОБГОВОРЕННЯ Полімеразна ланцюгова реакція використо� вується для отримання значної кількості пев� них ділянок молекули ДНК. Це досягається проведенням кількох (до 40) циклів, кожен з яких включає стадії денатурації, відпалу та синтезу. На стадії синтезу відбувається копіювання ДНК�ланцюга (на ділянці, обме� женій спеціально підібраними праймерами) термостабільним ферментом. У нашому випадку напрацьовувалась ділянка гібридного гена bcr/abl. У зв'язку з тим, що розрив у генах bcr та abl відбувається на значних за розміром ділянках, це робить проблематичним застосування ДНК у полі� меразній ланцюговій реакції. Тому для діаг� ностики використовують дослідження РНК, яка має значно менший розмір. Нами було перевірено декілька наборів фірм�вироб� ників MoBio, Sigma, Quagene для виділення РНК (табл. 1). Всі ці набори базуються на використанні принципу сорбції�десорбції РНК на колонках. При використанні цих наборів були помічені такі особливості. Набори вимагають більш точного (аніж за методом Chomczynski та Sacchi) обрахунку кількості клітин крові пацієнтів, оскільки всі вони мають малу ємність, яка, до того ж, різниться для різних наборів. При її перевищенні відбувається значне забруднення препарату РНК доміш� ками ДНК та білку, а в ряді випадків і повна деградація РНК. На це слід звертати особли� ву увагу, оскільки кількість клітин крові у пацієнтів, що перевіряються на позитивні Ph�лейкемії, в залежності від стадії захворю� вання та індивідуальних особливостей може різнитися на кілька порядків. Тому кількість крові необхідно розраховувати для кожного пацієнта індивідуально, виходячи з даних за� гального аналізу крові. Наступним етапом було отримання копійної ДНК (кДНК), яку синтезували за допомогою зворотної транскриптази, вико� ристовуючи РНК як матрицю, а праймер A1 � як затравку (або розсіяного праймера d(NTP)6) (рис. 2, 3; табл. 1). Перший етап ПЛР, котрий проводили з використанням праймерів Ph1�f та Ph1�r, не дає такої кількості продукту, котра необхідна Рис. 3. Схема розміщення праймерів, що використовувались для ампліфікації гібридної ділянки bcr/abl Таблиця 1. Перелік праймерів для виявлення Рh хро мосоми 74 Інноваційні проекти Національної академії наук України НАУКА ТА ІННОВАЦІЇ. № 3, 2005 для візуального виявлення в агарозному гелі. Тому проводили другий етап ПЛР, викорис� товуючи аліквоту ПЛР продукту з першого етапу та інші (внутрішні) праймери Ph�f та Ph�r (рис. 3). Праймери Ph1�f, Ph1�r, Ph�f та Ph�r були підібрані за допомогою програми GeneRunner. При цьому враховували такі па� раметри, як довжина праймера, температура плавлення та компліментарність праймерів між собою. Приведені дані свідчать про високу ефек� тивність ПЛР в діагностиці хворих з невиз� наченим діагнозом. Використання ПЛР дає змогу виявляти мінімальну кількість пато� логічних клітин (10–4 – 10–5), що дуже важ� ливо для ранньої діагностики. На рис. 4 наведені результати аналізу крові хворого Н. з використанням стандарт� ного набору праймерів та праймерів, що про� понуються. Як бачимо, використання стан� дартних праймерів [13, 14] не виявляє гібридного bcr/abl�гена (рис. 4, доріжка 3), в той час, як використання Ph�праймерів де� тектувало наявність такої перебудови. По� дальше секвенування гібридної ділянки по� казало, що стандартний праймер не мав зони комплементації в гібридному гені. Таким чином, запропонований метод дає змогу прогнозувати подальший перебіг за� хворювання, оцінювати цитогенетичну ремі� сію та ефективність лікування. Використан� ня пропонованого способу з праймерами Ph1�f, Ph1�r, Ph�f, Ph�r дає можливість підви� щити достовірність отриманих результатів діагностики у хворих на мієлопрофілера� тивні захворювання шляхом створення умов для зменшення негативних моментів поліме� разної ланцюгової реакції, а також врахуван� ня факту високої нестабільності пухлинного генома й отримання позитивної ланцюгової реакції при наявності характерної геномної перебудови (bcr/abl). Висока ефективність тест�системи була апробована на більш ніж 150 зразках крові пацієнтів з різних регіонів України з підо� зрою на ХМЛ. ЛІТЕРАТУРА 1. Бутенко З.А., Глузман Д.Ф., Зак К.П. и др. Цито� химия и электронная микроскопия клеток крови и кроветворных органов // Киев, Наукова Думка, 1974, 244 с. 2. Глузман Д.Ф., Бебешко В.Г., Надгорная В.А. и др. Эмбриональное кроветворение и гемобластозы у детей // Киев, Наукова Думка, 1988, 200 с. 3. Пинчук В.Г., Глузман Д.Ф., Надгорная В.А. и др. Иммуноцитохимические методы и моноклональ� ные антитела в онкогематологии // Киев, Наукова Думка, 1990, 233 с. 4. Boehm, T.H. Rabbits A chromosomal basis of lym� phoid malignancy in man // E.J.Biochem, 1989. –V.185, P. 1–17. 5. M.J. Cline The molecular basis of leukemia // The Рис. 4. Електрофореграма продуктів ПЛР, що були отримані при дослідженні крові хворого Н: 1 – маркер молекулярної ваги; 2 – негативний контроль; 3 – про дукт ПЛР з використанням стандартного набору (В2 А3); 4, 5 – позитивний контроль 176 п.н., 118 п.н.; 6 – продукт ПЛР з використанням праймерів Ph f та Ph r 590 п.н. 75НАУКА ТА ІННОВАЦІЇ. № 3, 2005 Інноваційні проекти Національної академії наук України New England Journal of Medicine, 1994.–V.330, N5. –P. 328–336. 6. T.H. Rabbits Chromosomal translocations in human cancer // Nature, 1994.–V.372, N.6502.–P. 143–149. 7. Nowell PC, Hunderford DA. A minute chromosome in human chronic granulocytic leukemia // Science 1960.–V.132, P. 1497–1499. 8. Rowley JD. A new consistent chromosomal abnor� mality in chronic myelogenous leukaemia identified by quinacrine fluorescence and Giemsa staining // Nature.–1973.–V.243, N5405.–P. 290–293. 9. Телегеев Г.Д., Дыбков М.В., Карпенко О.И., Чере� пенко Е.И. Молекулярные основы Ph�лейкемий и пути их лечения Биополимеры и клетка 1994; 10(5):78–92. 10. Gishizky ML. Molecular mechanisms of Bcr�Abl� induced oncogenesis // Cytokines Molular Therapy 1996.–V2, N4.–P. 251–261. 11. E.M. Southern. Detection of specific sequences among DNA fragments separated by gel electroforesis // J. Mol.Biol.–1975.–V.98, N.3.–P. 503–517. 12. G.Grosveld, T.Verwoerd, T van Agthoven et al. The chronic myelocytic cell line K 562 contains a break� point in bcr and produces a chimeric bcr/c�abl tran� script // Molecular and Cellular Biology, 1986.–V.6, N2.–P. 607–616. 13. E.S.Kawasaki, S.S.Clark, M.Y.Coyne et al. Diagnosis of chronic myeloid and acute lymphocytic leukemias by deletion of leukemia�specific mRNA sequences amplified in vitro // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1988.–V.85, N15.–P. 5698–5702. 14. Maurer J., Janssen J., Thiel E., et al. Detection of chimeric BCR�ABL genes in acute lymphoblastic leukemia by the polymerase chain reaction // The Lancet.–1991.–V.337, N 8749.–P. 1055–1058. 15. Tkachuk D.C., Westbrook C.A., Andreeff M., et al. Detection of bcr�abl fusion in chronic myelogenous leukemia by in situ hybridization // Science.–1990. –V.250, N.4980.–P. 559–562. 16. N.Testori, G.Martinelli, P.Farabedoli et al. A new method of "in�cell reverse transciptase�polymerase chain reaction" for detection of BCR/Abl transcripts in chronic myeloid leukemia patients // Blood.–1996.–V.87, N.9.–P. 3884–3892. 17. Chomczynski P., Sacchi N. Single�step method of RNA isolation by acid guanidinum thiocyanate�phe� nol�chloroform extraction // Analyt. Biochem.–1987.–V.162.–P. 156–159.

Розробка тест-системи для діагностики Ph-лейкемій за допомогою полімеразної ланцюгової реакції

Репозитарії

Схожі ресурси