Клонування та експресія білків Mycobacterium bovis MPB63 і MPB83 у клітинах Escherichia coli
Gene fragments mpb83 and mpb63 from Mycobacterium bovis BCG were amplified using PCR. Plasmids containing mpb63 and mpb83 fragments have been constructed using the expressi- on vector pET24a (Novagen). Expression of recombinant proteins was obtained in E. coli Rosetta (DE3) сеlls under control of...
Gespeichert in:
| Datum: | 2007 |
|---|---|
| Hauptverfasser: | , , , , , , |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | Ukrainian |
| Veröffentlicht: |
Видавничий дім "Академперіодика" НАН України
2007
|
| Schlagworte: | |
| Online Zugang: | http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/3152 |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Zitieren: | Клонування та експресія білків Mycobacterium bovis MPB63 і MPB83 у клітинах Escherichia coli / Т.А. Редчук, О.С. Олійник, А.А. Кабернюк, Д.О. Буркальова, С.І. Романюк, Д.В. Колибо, С.В. Комісаренко // Доп. НАН України. — 2007. — № 9. — С. 161-166. — Бібліогр.: 12 назв. — укр. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
irk-123456789-3152 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
irk-123456789-31522018-03-12T15:14:09Z Клонування та експресія білків Mycobacterium bovis MPB63 і MPB83 у клітинах Escherichia coli Редчук, Т.А. Олійник, О.С. Кабернюк, А.А. Буркальова, Д.О. Романюк, С.І. Колибо, Д.В. Комісаренко, С.В. Біохімія Gene fragments mpb83 and mpb63 from Mycobacterium bovis BCG were amplified using PCR. Plasmids containing mpb63 and mpb83 fragments have been constructed using the expressi- on vector pET24a (Novagen). Expression of recombinant proteins was obtained in E. coli Rosetta (DE3) сеlls under control of strong T7 promoter. Lysates were analyzed by immu- noblotting with anti HisTag conjugate. His-Tag fusion proteins were purified with batch metal affіnity chromatography under denaturative conditions. Results are expected to lay groundwork for the further development of improved diagnostic tools or vaccines against human and bovine tuberculosis. 2007 Article Клонування та експресія білків Mycobacterium bovis MPB63 і MPB83 у клітинах Escherichia coli / Т.А. Редчук, О.С. Олійник, А.А. Кабернюк, Д.О. Буркальова, С.І. Романюк, Д.В. Колибо, С.В. Комісаренко // Доп. НАН України. — 2007. — № 9. — С. 161-166. — Бібліогр.: 12 назв. — укр. 1025-6415 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/3152 616-002.5+577.27 uk Видавничий дім "Академперіодика" НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Ukrainian |
| topic |
Біохімія Біохімія |
| spellingShingle |
Біохімія Біохімія Редчук, Т.А. Олійник, О.С. Кабернюк, А.А. Буркальова, Д.О. Романюк, С.І. Колибо, Д.В. Комісаренко, С.В. Клонування та експресія білків Mycobacterium bovis MPB63 і MPB83 у клітинах Escherichia coli |
| description |
Gene fragments mpb83 and mpb63 from Mycobacterium bovis BCG were amplified using PCR.
Plasmids containing mpb63 and mpb83 fragments have been constructed using the expressi-
on vector pET24a (Novagen). Expression of recombinant proteins was obtained in E. coli
Rosetta (DE3) сеlls under control of strong T7 promoter. Lysates were analyzed by immu-
noblotting with anti HisTag conjugate. His-Tag fusion proteins were purified with batch metal
affіnity chromatography under denaturative conditions. Results are expected to lay groundwork
for the further development of improved diagnostic tools or vaccines against human and bovine
tuberculosis. |
| format |
Article |
| author |
Редчук, Т.А. Олійник, О.С. Кабернюк, А.А. Буркальова, Д.О. Романюк, С.І. Колибо, Д.В. Комісаренко, С.В. |
| author_facet |
Редчук, Т.А. Олійник, О.С. Кабернюк, А.А. Буркальова, Д.О. Романюк, С.І. Колибо, Д.В. Комісаренко, С.В. |
| author_sort |
Редчук, Т.А. |
| title |
Клонування та експресія білків Mycobacterium bovis MPB63 і MPB83 у клітинах Escherichia coli |
| title_short |
Клонування та експресія білків Mycobacterium bovis MPB63 і MPB83 у клітинах Escherichia coli |
| title_full |
Клонування та експресія білків Mycobacterium bovis MPB63 і MPB83 у клітинах Escherichia coli |
| title_fullStr |
Клонування та експресія білків Mycobacterium bovis MPB63 і MPB83 у клітинах Escherichia coli |
| title_full_unstemmed |
Клонування та експресія білків Mycobacterium bovis MPB63 і MPB83 у клітинах Escherichia coli |
| title_sort |
клонування та експресія білків mycobacterium bovis mpb63 і mpb83 у клітинах escherichia coli |
| publisher |
Видавничий дім "Академперіодика" НАН України |
| publishDate |
2007 |
| topic_facet |
Біохімія |
| url |
http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/3152 |
| citation_txt |
Клонування та експресія білків Mycobacterium bovis MPB63 і MPB83 у клітинах Escherichia coli / Т.А. Редчук, О.С. Олійник, А.А. Кабернюк, Д.О. Буркальова, С.І. Романюк, Д.В. Колибо, С.В. Комісаренко // Доп. НАН України. — 2007. — № 9. — С. 161-166. — Бібліогр.: 12 назв. — укр. |
| work_keys_str_mv |
AT redčukta klonuvannâtaekspresíâbílkívmycobacteriumbovismpb63ímpb83uklítinahescherichiacoli AT olíjnikos klonuvannâtaekspresíâbílkívmycobacteriumbovismpb63ímpb83uklítinahescherichiacoli AT kabernûkaa klonuvannâtaekspresíâbílkívmycobacteriumbovismpb63ímpb83uklítinahescherichiacoli AT burkalʹovado klonuvannâtaekspresíâbílkívmycobacteriumbovismpb63ímpb83uklítinahescherichiacoli AT romanûksí klonuvannâtaekspresíâbílkívmycobacteriumbovismpb63ímpb83uklítinahescherichiacoli AT kolibodv klonuvannâtaekspresíâbílkívmycobacteriumbovismpb63ímpb83uklítinahescherichiacoli AT komísarenkosv klonuvannâtaekspresíâbílkívmycobacteriumbovismpb63ímpb83uklítinahescherichiacoli |
| first_indexed |
2025-07-02T06:26:04Z |
| last_indexed |
2025-07-02T06:26:04Z |
| _version_ |
1836515396384980992 |
| fulltext |
УДК :616-002.5+577.27
© 2007
Т.А. Редчук, О. С. Олiйник, А. А. Кабернюк, Д. О. Буркальова,
С. I. Романюк, Д. В. Колибо, академiк НАН України
С.В. Комiсаренко
Клонування та експресiя бiлкiв Mycobacterium bovis
MPB63 i MPB83 у клiтинах Escherichia coli
Gene fragments mpb83 and mpb63 from Mycobacterium bovis BCG were amplified using PCR.
Plasmids containing mpb63 and mpb83 fragments have been constructed using the expressi-
on vector pET24a (Novagen). Expression of recombinant proteins was obtained in E. coli
Rosetta (DE3) сеlls under control of strong T7 promoter. Lysates were analyzed by immu-
noblotting with anti HisTag conjugate. His-Tag fusion proteins were purified with batch metal
affinity chromatography under denaturative conditions. Results are expected to lay groundwork
for the further development of improved diagnostic tools or vaccines against human and bovine
tuberculosis.
Туберкульоз — одне з найпоширенiших у свiтi iнфекцiйних захворювань. Щорiчно вiд нього
помирають понад двох мiльйонiв людей. Останнiми роками зростання захворюваностi на ту-
беркульоз значно ускладнене в зв’язку з появою полiрезистентних штамiв збудникiв тубер-
кульозу [1]. Крiм того, актуальною стала проблема туберкульозу у сiльськогосподарських
тварин, i зокрема, великої рогатої худоби (ВРХ). Так, у рядi робiт доведено можливiсть
передачi iнфекцiї людинi вiд ВРХ внаслiдок вживання непастеризованого молока [наприк-
лад, 2]. Навiть при мiнiмiзацiї ризику передачi iнфекцiї людинi (за рахунок пастеризацiї
молока i своєчасного вибраковування зараженого поголiв’я) туберкульоз ВРХ призводить
до iстотних фiнансових втрат.
Невiд’ємною частиною боротьби з розвитком туберкульозу є розробка пiдходiв в дiаг-
ностицi, якi б сприяли швидкому i ефективному виявленню його збудника. Методи, що
iснують на сьогоднi в клiнiчнiй практицi, заснованi на виявленнi в мокротi пацiєнтiв кис-
лотостiйких бактерiй та на їх iдентифiкацiї. Такi тести характеризуються недостатньою
ефективнiстю [3].
Одним з найпоширенiших альтернативних варiантiв дiагностики є тести на основi по-
лiмеразної ланцюгової реакцiї (ПЛР) [4]. Проте слiд зазначити, що методи дiагностики,
якi базуються на ПЛР, не позбавленi недолiкiв. Зокрема, iснує ряд проблем, пов’язаних
з можливiстю контамiнацiї та крос-контамiнацiї клiнiчних зразкiв, а також детектування
мiкобактерiй у випадку, коли вони не здатнi викликати захворювання, тому лiкування не
потрiбне [5]. Iнша негативна риса цiєї дiагностики — наявнiсть iнгiбiторiв полiмеразної ре-
акцiї в клiнiчних зразках [6].
Тому, на сьогоднi актуальним напрямом стала серодiагностика туберкульозу. Такий пiд-
хiд (з урахуванням його специфiчностi) вигiдно вiдрiзняється швидкiстю вiд iснуючих у клi-
нiчнiй практицi методiв. До переваг серодiагностики також вiдносять простоту i низьку
вартiсть [7]. Крiм того, деякi роботи вiдзначають протективнi властивостi антитiл до анти-
генiв мiкобактерiй [8 тощо], що також пiдвищує цiннiсть iнформацiї про рiвень гуморальної
iмунної вiдповiдi, отриманої в серодiагностичних тестах.
ISSN 1025-6415 Доповiдi Нацiональної академiї наук України, 2007, №9 161
Одним iз критично важливих елементiв розробки серологiчних тест-систем є вибiр ком-
понента, що використовується як антиген. MPB63 є секреторним бiлком, який значно збiль-
шує його дiагностичну значущiсть. Згiдно з лiтературними даними, антитiла до нього не
мають перехресну активнiсть стосовно антигенiв Mycobacterium avium та близького дуже
поширеного в навколишньому середовищi виду [9]. MPB83 в бактерiальних клiтинах екс-
понований на поверхнi, що визначає високу вiрогiднiсть появи антитiл до цього антигену.
Крiм того, рiвень його експресiї в клiтинах штаму, що використовується для вакцинацiї
(Mycobacterium bovis BCG), нижче, нiж в клiтинах патогенних штамiв. Це дозволяє вико-
ристовувати його для диференцiацiї вiдповiдi на вакцинацiю та прогресуючу iнфекцiю [10].
Таким чином, клонування названих вище антигенiв є високоперспективним, зважаю-
чи на гостру потребу системи охорони здоров’я у вакцинах i дiагностичних тестах нового
поколiння.
Матерiали i методи. Видiлення геномної ДНК Mycobacterium bovis. 0,1 г лiо-
фiлiзованих клiтин Mycobacterium bovis BCG ресуспендували в 300 мкл буфера STET (8%
сахароза, 5% TRITON X-100, 50 мМ TrisHCl, pH 8,0, 50 мМ ЕДТА, pH 8,0) i додавали 30 мкл
сумiшi RNAseA з лiцозомом (10 мг/мл лiзоцим, 10 мг/мл РНКаза) кип’ятили на водянiй
банi i охолоджували по 2 хв 3 рази. Центрифугували 15 хв при g = 8000. З супернатанта
екстрагували бiлок фенолом, насиченим буфером STET, пiсля чого осаджували ДНК iзо-
пропанолом (1 об’єм iзопропанолу на 1 об’єм отриманого розчину), промивали етанолом,
розчиняли в 20 мкл води.
Полiмеразна ланцюгова реакцiя. Фрагмент гену mpb63 амплiфiкували за до-
помогою 2 пар праймерiв. Перша пара (forward 5′ AGGGACCAATGAAGCTCA 3′
i reverse 5′ TCTACGGCTCCCAAATCA 3′) характеризувалася максимальною специ-
фiчнiстю, тодi як друга (forward 5′ CTGAGGATCCATGAAGCTCACCACAATGAT3′
i reverse 5′ TCAGCTCGAGCGGCTCCCAAATCAGCAGAT3′) обмежувала необ-
хiдний фрагмент, не мiстила в послiдовностi стоп-кодону гена (для отриман-
ня злитого з полгiстидиновим тагом бiлка) i несла сайти рестрикцiї BamHI
i XhoI (пiдкресленi). Фрагмент mpb83 був амплiфiкований за допомогою однiєї
пари праймерiв (forward 5′ GGATCCGACACCCTCAACGGCGGCGAG 3′ i reverse
5′ CTCGAGCTGTGCCGGTGGCATCAGTACC3′). Праймери мали тi самi сайти ре-
стрикцiї. ПЛР сумiш в обох випадках мiстила кожний з dNTP в концентрацiї 200 мкМ,
MgCl2 в концентрацiї 1,5 мM, Taq полiмеразу (2,5 units, Sigma, США), по 15 pmole кожного
праймера, геномну ДНК (∼ 1–10 нг). Кiнцевий об’єм сумiшi становив 30 мкл. Реакцiю
проводили на термоциклерi 2720 Thermal Cycler (Applied biosystems, США) за схемою:
30 циклiв (де цикл — денатурацiя — 93◦ 30 с, вiдпалювання — 57◦ 30 с, синтез 72◦ 75 с).
Клонування. Отриманi продукти ПЛР i векторнi ДНК обробляли рестриктазами
BamHI i XhoI (Fermentas, Литва), змiшували у спiввiдношеннi ∼ 1 : 1 (в мольних кон-
центрацiях). У складi лiгазної сумiшi була Т4 ДНК лiгаза (2,5 юнiта, Fermentas, Литва)
i буфер до Т4 ДНК лiгази того самого виробника. Лiгування проводили протягом ночi
при 22 ◦С. Отриманою ДНК трансформували компетентнi клiтини штаму Escherichia (E ).
coli Rosetta (DE3) за допомогою електропоратора Eppendorf Electroporator 2510 (Нiмеч-
чина). Вольтаж 1800 V, час iмпульсу ∼ 5 мс. Вiдiбранi клони пiддавали рестрикцiйному
аналiзу за допомогою BamHI i XhoI, а при клонуваннi mpb63 також ApaI. Вставки були
секвенованi за допомогою ABI Prism 3130 (Applied biosystems, США) у вiддiленнi молеку-
лярної дiагностики Української лабораторiї якостi i безпеки продукцiї агропромислового
комплексу Нацiонального аграрного унiверситету.
162 ISSN 1025-6415 Reports of the National Academy of Sciences of Ukraine, 2007, №9
Експресiя i очищення бiлка. Данi конструкцiї дозволяли отримати фрагменти бiлкiв,
злитi з полiгiстидиновим тагом (на С-кiнцi). Це дало змогу очистити rMPB63 i rMPB83
методом хроматографiї в об’ємi в денатуруючих умовах на NiNTA агарозi (Sigma) з лiзату
клiтин.
Експресiю проводили пiд контролем лактозного оперона в штамi E. coli Rosetta (DE3)
(Novagen). Пiдрощенi протягом ночi клiтини iнокулювали в свiже 2YT середовище, що мi-
стить глюкозу (2%), i дорощували при 37 ◦С до оптичної густини 0,4–0,6 при довжинi хвилi
600 нм. Пiсля цього середовище мiняли на рiвний об’єм середовища 2YT, що мiстить iндук-
тор експресiї IPTG в концентрацiї 1 мM. Iнкубували 3 год при струшуваннi (200 об./хв)
i при 30 ◦С. Проiнкубовану культуру центрифугували при g = 6000 5 хв при 4 ◦С. Осад
100 мл культури лiзували в 1 мл лiзуючого розчину (50 мM Na2HPO4 pH 8,0, 0,3 M NaCl,
8 M сечовина) i обробляли ультразвуковим дезiнтегратором LABSONIC M (Sartorius, ФРН)
тричi по 20 с, до просвiтлення розчину, пiсля чого знову центрифугували (g = 12000, 15 хв).
Супернатант (1 мл) змiшували з сорбентом (50 мкл, заздалегiдь урiвноваженим у розчинi,
що мiстив 8 M сечовину, 50 мM Na2HPO4 pH 8,0, 0,5 M NaCl). Iнкубували протягом години,
перiодично струшуючи, при 4 ◦С. Центрифугували при g = 4000 3 хв, супернатант вилива-
ли. Тричi промивали осад розчином, що мiстив 8 M сечовину, 50 мM Na2HPO4 pH 8,0, 0,5 M
NaCl, 10 мМ iмiдазол. Елюювали тричi по 100 мкл розчином, що мiстив 8 M сечовину, 20
мM Tris pH 7,5, 100 мM NaCl, iмiдазол 250 мM.
Iмуноблоттiнг. Iмуноблоттiнг проводили методом напiвсухого перенесення. Буфер для
перенесення мiстив Tris 25 мM, глiцин 192 мM, 0,1 SDS, MetOH 20%. Нiтроцелюлоза пiсля
перенесення протягом години при 37 ◦С блокувалася знежиреним молоком (5%) в PBS.
Проявляли кон’югатом Monoclonal Anti-Polyhistidine clone His-1 (Sigma) в розведеннi 1/2000.
Перед проявкою кон’югат блокували 0,2% BSA (1 год при 37 ◦С). Як фарбник використову-
вали дiамiнобензидин (DAB): змiшували розчини 1 мл 0,3% NiCl2 (у буферi Tris HCl 50 мM,
pH 7,6) i DAB — 6 мг в 9 мл того самого буфера. До сумiшi додавали H2O2 30% 10 мкл.
Смужки виявляються протягом кiлькох секунд, пiсля чого нiтроцелюлозу промивали в дис-
тильованiй водi.
Результати i обговорення. Нами було отримано рекомбiнантнi конструкцiї на основi
вектора для експресiї pET24a, що мiстять фрагменти генiв mpb63 i mpb83, амплiфiкованi
з геномної ДНК Mycobacterium bovis (рис. 1).
Рестрикцiйний аналiз пiдтвердив наявнiсть у конструкцiї фрагментiв очiкуваного роз-
мiру (рис. 2).
Секвенуванння конструкцiй продемонструвало iдентичнiсть отриманих послiдовностей
вiдповiдним послiдовностям у базi даних, а також пiдтвердило наявнiсть вiдкритої рамки
зчитування, що включає фрагменти генiв i необхiднi таги. Було вiдзначено замiну L (109)
на P у MPB63, яка може бути обумовленою як полiморфiзмом гена, так i помилками полi-
мерази Taq при перебiгу ПЛР. Розв’язання цього питання вимагає подальших дослiджень.
Також було вiдзначено дуплiкацiю нуклеотидної послiдовностi sense праймера в конструкцiї
з фрагментом mpb83, яка, iмовiрно, є наслiдком утворення на праймерi вторинної структури
типу шпильки (hairpin loop). Вказанi замiни в нуклеотидних послiдовностях не призвели до
зсуву рамки зчитування. Отриманi конструкцiї використовували для експресiї i отримання
рекомбiнантних бiлкiв. Бiлки з лiзата були обчищенi шляхом металоафiнної хроматографiї
в об’ємi (рис. 3).
Як показано у рядi робiт, MPB63 i MPB83 є високоiмуногенними бiлками мiкобакте-
рiй [9, 11, 12]. Тому, за нашими припущеннями, використання отриманих нами їх рекомбi-
ISSN 1025-6415 Доповiдi Нацiональної академiї наук України, 2007, №9 163
Рис. 1. Продукти ПЛР з гену mpb63 (а) та mpb83 (б ):
1 — маркери молекулярної маси; 2 — електрофореграма продукту ПЛР
Рис. 2. Результат рестрикцiйного аналiзу отриманих генетичних конструкцiй на базi pET24a+ , що мiстили
фрагменти генiв mpb63 (а) та mpb83 (б ):
1 — маркери молекулярної маси; 2 — електрофореграма рестрикцiйного аналiзу
нантних аналогiв може дозволити не тiльки полiпшити якiсть дiагностики, а й обiйти ряд
вузьких мiсць при розробцi технологiї промислового отримання компонентiв протитубер-
кульозних дiагностикумiв i вакцин.
164 ISSN 1025-6415 Reports of the National Academy of Sciences of Ukraine, 2007, №9
Рис. 3. Результат електрофоретичного аналiзу очищених рекомбiнантнiх аналогiв бiлкiв MPB83 (а) та
MPB63 (б ):
1 — маркери молекулярної маси; 2 — електрофореграма продукту очистки
Зокрема, зважаючи на рекомендацiї Належної виробничої практики, для виробництва
вакцини БЦЖ i роботи з живими мiкроорганiзмами, що використовуються у виробництвi
препаратiв туберкулiну, необхiдно застосовувати лише спецiальнi примiщення i обладнання.
Персонал, який працює на такому виробництвi пiдлягає систематичному рентгенологiчному
обстеженню.
Для бiльш безпечних продуктiв, що виробляються iз застосуванням технологiї рекомбi-
нантних ДНК, пропонуються менш жорсткi вимоги до обладнання виробничих примiщень.
Також допускається їх одночасне (конкурентне) виробництво в однiй зонi з використан-
ням закритих систем бiоферментаторiв (Good Manufacturing Practices (GMP) for Schedule
D Drugs — Part 1 — Biological Drugs).
З покращенням дiагностування туберкульозу отриманi нами рекомбiнантнi аналоги бiл-
кiв мiкобактерiй надають новi можливостi для дослiджень механiзмiв протитуберкульозно-
го iмунiтету.
1. Zhang Y., Young D. Molecular genetics drug resistance in Mycobacterium tuberculosis // J. Antimicrob.
Chem. – 1994. – 34. – P. 313–319.
2. Cosivi O, Grange J.M., Daborn C. J. et al. Zoonotic Tuberculosis due to Mycobacterium bovis in Developi-
ng Countries // Emerging Infectious Diseases. – 1998. – 4 (1). – P. 59–70.
3. Jackett P. S., Bothamley G.H., Batra H.V. et al. Specificity Antibodies to Immunodominant Mycobacterial
Antigens in Pulmonary Tuberculosis // J. Clinical Microbiol. – 1988. – 26. – P. 2313–2318.
4. Maher M., Glennon M., Martinazzo G. et al. Evaluation а novel PCR-based diagnostic assay for detection
Mycobacterium tuberculosis in sputum samples // Ibid. – 1996. – 34. – P. 2307–2308.
5. Beige J., Lokies J., Schaberg T., et al. Clinical Evaluation а Mycobacterium tuberculosis PCR Assay //
Ibid. – 1995. – 32. – P. 90–95.
6. Clarridge J. E., Shawar R.M., Shinnick T.M. et al. Use роlymerase chain reaction for detection Mycobac-
terium tuberculosis in а routine mycobacteriology laboratory // Ibid. – 1993. – 31. – P. 2049–2056.
ISSN 1025-6415 Доповiдi Нацiональної академiї наук України, 2007, №9 165
7. Okuda Y., Maekura R., Hirotani A. et al. Rapid Serodiagnosis Active Pulmonary Mycobacterium tuber-
culosis Analysis Results from Multiple Antigen-Specific Tests // Ibid. – 2004. – 42. – P. 1136–1141.
8. Glatman-Freedman A., Casadevall A. Serum Therapy for Tuberculosis Revisited: Reappraisal Role of
Antibody-Mediated Immunity against Mycobacterium tuberculosis // Casadev. Clinical Microbiol. Rev. –
1998. – 11. – P. 514–532.
9. Manca C., Lyashchenko K, Gotten Wiker H., et al. Molecular Cloning, Purification, and Serological
Characterization MPT63, а Novel Antigen Secreted Mycobacterium tuberculosis // Infection and Immuni-
ty. – 1997. – 65. – P. 16–23.
10. Vordermeier H.M., Cockle P. C., Whelan А., et al. Development Diagnostic Reagents To Differentiate
between Mycobacterium bovis BCG Vaccination and M. bovis Infection in Cattle // Clinical and Diagnostic
Lab. Immunol. – 1999. – 6. – P. 675–682.
11. Cohen M.L., Mayer L.W., Rumschlag H. S. et al. Expression Proteins Mycobacterium tuberculosis in
Escherichia coli and Potential Recombinant Genes and Proteins for Development Diagnostic Reagents //
J. Clinical Microbiol. – 1987. – No 7. – P. 1176–1180.
12. Hewinson R.G., Michell S. L., Russell W.P. et al. Molecular characterization MPT83: а seroreactive anti-
gen Mycobacterium tuberculosis with homology to MPT70 // Scand. J. Immunol. – 1996. – 43(5). –
P. 490–499.
Надiйшло до редакцiї 19.03.2007Iнститут бiохiмiї iм. О.В. Палладiна
НАН України, Київ
166 ISSN 1025-6415 Reports of the National Academy of Sciences of Ukraine, 2007, №9
|