Роль тканевых маркеров в оценке биологических свойств и прогнозе рака молочной железы
Проведен обзор тканевых маркеров, имеющих большое прогностическое значение при раке молочной железы, определяемых с помощью иммуногистохимических методов исследования. Сделан вывод о целесообразности изучения всех указанных маркеров, поскольку они будут способствовать коррекции терапевтических прием...
Gespeichert in:
| Datum: | 2005 |
|---|---|
| Hauptverfasser: | , , |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | Russian |
| Veröffentlicht: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2005
|
| Schriftenreihe: | Международный медицинский журнал |
| Schlagworte: | |
| Online Zugang: | http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/53018 |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Zitieren: | Роль тканевых маркеров в оценке биологических свойств и прогнозе рака молочной железы / И.С. Шпонька, В.А. Бондарева, П.А. Гриценко // Международный медицинский журнал. — 2005. — Т. 11, № 2. — С. 97-104. — Бібліогр.: 46 назв. — рос. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
irk-123456789-53018 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
irk-123456789-530182014-01-16T03:08:50Z Роль тканевых маркеров в оценке биологических свойств и прогнозе рака молочной железы Шпонька, И.С. Бондарева, В.А. Гриценко, П.А. Онкология Проведен обзор тканевых маркеров, имеющих большое прогностическое значение при раке молочной железы, определяемых с помощью иммуногистохимических методов исследования. Сделан вывод о целесообразности изучения всех указанных маркеров, поскольку они будут способствовать коррекции терапевтических приемов при раке молочной железы. Tissue markers which play a prognostic role in breast cancer (BC) determined with the use of immunohistochemical methods are reviewed. The authors conclude about the effect of the above markers as they can promote correction of therapeutic methods in BC. 2005 Article Роль тканевых маркеров в оценке биологических свойств и прогнозе рака молочной железы / И.С. Шпонька, В.А. Бондарева, П.А. Гриценко // Международный медицинский журнал. — 2005. — Т. 11, № 2. — С. 97-104. — Бібліогр.: 46 назв. — рос. 2308-5274 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/53018 ru Международный медицинский журнал Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Russian |
| topic |
Онкология Онкология |
| spellingShingle |
Онкология Онкология Шпонька, И.С. Бондарева, В.А. Гриценко, П.А. Роль тканевых маркеров в оценке биологических свойств и прогнозе рака молочной железы Международный медицинский журнал |
| description |
Проведен обзор тканевых маркеров, имеющих большое прогностическое значение при раке молочной железы, определяемых с помощью иммуногистохимических методов исследования. Сделан вывод о целесообразности изучения всех указанных маркеров, поскольку они будут способствовать коррекции терапевтических приемов при раке молочной железы. |
| format |
Article |
| author |
Шпонька, И.С. Бондарева, В.А. Гриценко, П.А. |
| author_facet |
Шпонька, И.С. Бондарева, В.А. Гриценко, П.А. |
| author_sort |
Шпонька, И.С. |
| title |
Роль тканевых маркеров в оценке биологических свойств и прогнозе рака молочной железы |
| title_short |
Роль тканевых маркеров в оценке биологических свойств и прогнозе рака молочной железы |
| title_full |
Роль тканевых маркеров в оценке биологических свойств и прогнозе рака молочной железы |
| title_fullStr |
Роль тканевых маркеров в оценке биологических свойств и прогнозе рака молочной железы |
| title_full_unstemmed |
Роль тканевых маркеров в оценке биологических свойств и прогнозе рака молочной железы |
| title_sort |
роль тканевых маркеров в оценке биологических свойств и прогнозе рака молочной железы |
| publisher |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| publishDate |
2005 |
| topic_facet |
Онкология |
| url |
http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/53018 |
| citation_txt |
Роль тканевых маркеров в оценке биологических свойств и прогнозе рака молочной железы / И.С. Шпонька, В.А. Бондарева, П.А. Гриценко // Международный медицинский журнал. — 2005. — Т. 11, № 2. — С. 97-104. — Бібліогр.: 46 назв. — рос. |
| series |
Международный медицинский журнал |
| work_keys_str_mv |
AT šponʹkais rolʹtkanevyhmarkerovvocenkebiologičeskihsvojstviprognozerakamoločnojželezy AT bondarevava rolʹtkanevyhmarkerovvocenkebiologičeskihsvojstviprognozerakamoločnojželezy AT gricenkopa rolʹtkanevyhmarkerovvocenkebiologičeskihsvojstviprognozerakamoločnojželezy |
| first_indexed |
2025-07-05T04:28:37Z |
| last_indexed |
2025-07-05T04:28:37Z |
| _version_ |
1836779797807628288 |
| fulltext |
97ÌÅæäóíàðîäíûé ÌÅäèöèíñêèé æóðíàë ¹ 2’2005
онкология
Рак молочной железы (РМЖ) занимает ведущее
место в структуре онкологической заболеваемости
женщин (в среднем 26%), а частота неуклонно растет
и имеет тенденцию к омоложению.
РМЖ — полиэтиологическое заболевание,
в этиологии и патогенезе которого играют большую
роль различные факторы, в том числе наследствен-
ные (случаи семейных РМЖ с мутацией гена Brca
1/2) и репродуктивные факторы (раннее менархе, от-
сутствие в анамнезе родов или поздние роды, инфер-
тильность и др.). главное влияние на развитие РМЖ
оказывает изменение гормонального баланса — вы-
сок риск его развития у женщин, в плазме крови
которых в постменопаузе изменяется соотношение
уровня тестостерона, андростенедиона и глобулина,
связывающего половые гормоны (shBg). Сущест-
вует также эстроген-прогестероновая теория разви-
тия РМЖ (частота РМЖ у женщин с повышенным
содержанием эстрогена в тканях и плазме ниже, чем
у женщин, у которых повышен уровень двух гормо-
нов одномоментно). Согласно этой теории пролифе-
рация клеток активизируется больше в лютеиновой
фазе менструального цикла, чем в фолликулиновой.
У пациенток с РМЖ в пременопаузе не обнаружено
статистически достоверной зависимости от уровня
эндогенных гормонов.
Метаболическая теория, в которой придается
значение повышенной массе тела и гиподинамиче-
скому образу жизни, связана с развитием резистент-
ности к инсулину, которая приводит к повышению
его выработки. Высокий выброс инсулина, а также
инсулинподобного фактора роста (Ilgf) способст-
вует повышению синтеза яичниками и/или надпочеч-
никами половых гормонов, в частности андрогенов,
и снижению образования печенью shBg. У женщин
в постменопаузе это обусловливает повышение уров-
ня эстрона и соответственно увеличивает риск раз-
вития РМЖ.
Кроме того, повышению риска развития РМЖ
способствует диета. Высококалорийная диета
с большим количеством животных протеинов
и липидов в сочетании с гиподинамическим обра-
зом жизни в западных странах повышает риск раз-
вития РМЖ (частота РМЖ составляет 70–90 слу-
чаев на 100 000 в год). Это объясняют действием
Ilgf-1, уровень которого сильно повышается при
гликемии. Ilgf-1 запускает синтез гормонов яич-
никами, а также ингибирует глобулин, связыва-
ющий половые гормоны, тогда как диета, включа-
ющая овощи и фрукты, способствует снижению ри-
ска развития РМЖ.
Многообразие механизмов развития РМЖ
осложняет разработку профилактических и терапев-
тических мероприятий, тем не менее прогноз этого
заболевания на ранних стадиях относительно благо-
приятен, в то время как верификация процесса на
поздних стадиях при наличии метастазов обусловли-
вает высокую инвалидность и смертность пациенток
и снижает эффективность всех подходов в тактике
лечения.
Чрезвычайная сложность канцерогенеза и труд-
ности ранней диагностики РМЖ делают выбор опти-
мальной схемы его лечения задачей первостепенной
важности.
Анализ большого количества наблюдений пока-
зал, что гистоструктура РМЖ в определенной степе-
ни влияет на течение заболевания, однако определить
индивидуальный прогноз на этом основании не пред-
ставляется возможным. В связи с этим оценка разно-
образных биологических свойств опухолевой ткани,
которая отражает ключевые звенья возможных пато-
генетических механизмов развития РМЖ, является
весьма обнадеживающей и перспективной.
Коллегия американских патологов в 1999 г. [1]
разработала комплекс прогностических факторов,
имеющих принципиальное значение при РМЖ, кото-
рые структурированы в три категории по степени кли-
нической значимости и востребованности.
В первую категорию входят следующие факторы.
Размер опухоли. Частота регионарных метастазов
у пациенток с размерами опухоли менее 1 см не пре-
вышает 10–20%. Кроме того, 10-летняя выживаемость
больных с опухолью таких размеров при интактных
лимфоузлах составляет около 90%. При оценке раз-
мера опухоли необходимо измерять узел в трех про-
екциях и в тех случаях, когда проводилась трепано-
биопсия, производить поправку на гистологическую
форму (при инфильтрирующем протоковом РМЖ
размер узла реально больше).
Статус лимфоузлов — главный дискриминиру-
ющий признак. 10-летняя выживаемость пациенток
с пораженными лимфоузлами составляет менее 70%.
Необходимо помнить и о возможных микрометаста-
зах (менее 2 мм в диаметре). С помощью иммуноги-
стохимического метода исследования (ИгХ) было
установлено, что в 9–13% случаев имели место микро-
метастазы в лимфоузлах, первично оцененных с помо-
щью традиционных методов как интактные.
роль тканевых Маркеров в оценке биологических
свойств и Прогнозе рака Молочной железы
Профессор и.с. шПоНькА, В.А. БоНДАРеВА, П.А. ГРицеНко
Днепропетровская государственная медицинская академия
Проведен обзор тканевых маркеров, имеющих большое прогностическое значение при раке мо-
лочной железы, определяемых с помощью иммуногистохимических методов исследования. сделан
вывод о целесообразности изучения всех указанных маркеров, поскольку они будут способствовать
коррекции терапевтических приемов при раке молочной железы.
ОНКОлОгИЯ
98
гистологическая форма и степень дифференци-
ровки опухоли. Тубулярные, медуллярные, аденоки-
стозные формы имеют более благоприятный прогноз,
нежели рак с метаплазией, рак Педжета.
Количество митотических фигур (подсчет не ме-
нее чем в 10 полях зрения).
Определение рецепторов к эстрогенам и проге-
стеронам. Наиболее распространенным методом, по-
зволяющим при простоте проведения получить объ-
ективную информацию об уровне этих (и других)
рецепторов, является ИгХ с использованием моно-
и поликлональных антител (МКАТ, ПКАТ).
Ко второй категории отнесены экспрессия эпи-
дермального фактора роста, р53-онкопротеина, марке-
ра пролиферации Ki-67 и наличие инвазии в лимфа-
тические или кровеносные сосуды. Наконец, в третью
категорию входят показатели плоидности опухоли,
активности ангиогенеза, экспрессия ps2-протеина,
bcl-2-онкопротеина, катепсина d, efgf.
главным залогом успеха терапии онкологических
больных являются чувствительность опухоли к вы-
бранным препаратам и отсутствие пула клеток, рези-
стентных к действию цитостатиков.
На сегодняшний день имеются данные о боль-
шом наборе молекулярных и клеточных маркеров,
позволяющих оценить степень чувствительности
опухолевых клеток к терапии, которые могут быть
использованы в качестве прогностических маркеров,
и выделить декретированные группы больных, нуж-
дающихся в более тщательном наблюдении в связи
с неблагоприятным прогнозом [2].
рецепторы стероидных горМонов
Рецепторы стероидных гормонов — протеины,
специфически и избирательно связывающие соот-
ветствующие стероиды после их проникновения
в клетку и опосредующие, таким образом, их биоло-
гические эффекты (влияние на дифференцировку,
рост, адаптацию клетки при смене метаболических
условий, индукцию биосинтеза белка). Интенсив-
ность проникновения гормона зависит от размеров
молекул и растворимости их в липидах мембран.
После проникновения гормона в клетку он связыва-
ется с внутриклеточным рецептором, транспортиру-
ется к ядру клетки, «наводится» к соответствующе-
му гистону хромосомы, активируя факторы транс-
крипции.
Внутриклеточная концентрация рецепторов
к эстрогенам (er) и прогестеронам (pgr) способст-
вует осуществлению регуляции взаимоотношений
между паренхимой и стромой в молочной железе.
В норме в эпителии молочной железы наблюдается
невысокая экспрессия er и pgr (7–30% клеток в за-
висимости от фазы цикла или гормонального фона),
тогда как при опухолевой трансформации значительно
повышается экспрессия обоих маркеров [3]. В строме
не отмечается их экспрессии, несмотря на то что в фи-
бробластах обнаружены рецепторы к er и pgr.
Стероидные гормоны, в частности рецепторы
к er и pgr, имеют большое значение в онкогенезе
и опухолевой прогрессии (причем их экспрессия за-
висит от возраста пациентки — чем она старше, тем
больше уровень презентируемых клеток). При раз-
витии РМЖ повреждение в сигнальных механизмах
одного или двух рецепторов обнаруживается доста-
точно часто (речь идет об экспрессии конформативно
измененных изоформ рецепторов к er (α, αer)/pgr,
являющихся лигандзависимыми факторами транс-
крипции) [4]. M. Macaluso et al. [5] в своей работе
показали критическую роль αer и его лиганда 17α-
эстрадиола в онкогенезе РМЖ. Кроме того, по их
мнению, комплекс prb2/p130 связывается с промоу-
тером αer и, таким образом, участвует в повреждении
структуры хроматина и метилирования ДНК [6].
Озлокачествление клеток и опухолевая прогрес-
сия зависят не только от генетических трансформа-
ций, но также от нарушения соотношения ферментов
в ткани молочной железы. В опухолевой ткани содер-
жится большой набор энзимов — эстрон-сульфатаза,
17α-гидроксистероидная дегидрогеназа, ароматаза,
участвующая в последних этапах биотрансформации
er, сульфотрансфераза, конвертирующая er в био-
логически не активный er-сульфат. J.r. pasqualini et
al. [7] показали, что «сульфатазный путь» опухолевой
прогрессии, при которой сульфатированный неактив-
ный er превращается в биологически активный не-
конъюгированный, является в 100–500 раз более ин-
тенсивным, чем описанный на сегодня «ароматазный
путь», при котором происходит конвертация андро-
генов в er.
Кроме того, было показано, что у пациентов с вы-
соким уровнем стероидной сульфатазы прогноз го-
раздо хуже по сравнению с лицами с низким уровнем
сульфатазы, даже при er+ иммуногистохимическом
статусе РМЖ. Синтез pgr опосредуется er и осу-
ществляет реакцию клеток на прогестины (также че-
рез лигандзависимый путь) и, таким образом, отра-
жает аналогичное er действие на опухолевую ткань.
Уровень экспрессии pgr у женщин в пременопаузе
выше, чем er, тогда как в постменопаузе отмечается
обратная тенденция. Этот феномен объяснили в своей
работе s. saji et al. [8]. По их мнению, у женщин в ме-
нопаузе повышается уровень рецепторов erαcx, кото-
рые конкурентно ингибируют экспрессию pgr. Ана-
логично димерам er (erα, α) pgr также существует
в двух формах — pgr-a и pgr-B, которые принимают
участие в экспрессии er-зависимых генов.
er/pgr-рецепторный статус первичной опу-
холи молочной железы признан одним из наиболее
мощных прогностических маркеров клинического
исхода и связан с обоснованием адекватной гормо-
нальной терапии — в случаях er- или pgr-позитив-
ной опухоли последняя может управляться и кон-
тролироваться антиэстрогеновыми препаратами,
а в дальнейшем предполагается хирургическая или
медикаментозная кастрация [9]. Индивидуально по-
добранная тактика ведения больной существенно
влияет на течение заболевания и качество жизни;
при этом следует помнить, что чем больше уровень
экспрессии презентируемых er- или pgr-рецепто-
ров, тем большим будет эффект проводимой гормо-
нальной терапии, тем более оптимистичным будет
прогноз. Так, если опухоль только er-позитивна, то
ее чувствительность к проводимой терапии соста-
И.С. шПОНьКА… РОль ТКАНЕВыХ МАРКЕРОВ…
99
вит 55–60%; если же опухоль er/pgr-позитивна,
чувствительность ее к гормональной терапии будет
составлять уже 80%.
Поскольку качество ответа на терапию все-таки
зависит от уровня экспрессии рецепторов, следует
учитывать определенную диссоциацию в количестве
окрашенных клеток и интенсивность окрашивания по
каждому маркеру отдельно: если специфически окра-
шено от 10 до 30% опухолевой ткани, то чувствитель-
ность опухоли к терапии будет составлять 20%; если
от 30 до 70%, эффективность терапии составит 50%;
если окрашено от 70 до 100% клеток, эффективность
будет равна 75–80%, в связи с чем оценка «+» или «–»
(есть рецепторы в ткани или нет) не несет полной ин-
формации.
Оценка рецепторного статуса может определять-
ся различными методами: радиолигандным, иммуно-
ферментным (количественные методы), ИгХ. В прин-
ципе значения, полученные этими способами, корре-
лируют между собой, но методу ИгХ сейчас отдается
предпочтение, поскольку принадлежность рецепторов
определяется именно в опухолевой ткани, есть воз-
можность работы с архивным материалом. большим
достоинством ИгХ является также простота и эконо-
мическая эффективность [10].
Факторы роста
Кроме выявления рецепторов к er и pgr с по-
мощью ИгХ возможно определение факторов опу-
холевого роста и прогрессии (путем аутокринной
и/или паракринной регуляции), отражающих спо-
собность опухоли к саморегулируемому росту.
К факторам опухолевого роста относятся основной
фактор роста фибробластов (bfgf); трансформиру-
ющий фактор роста (tgf); инсулиноподобный фак-
тор роста (Ilgf); эпидермальный фактор роста, име-
ющий определяющее значение при РМЖ (семейство
efgf); фактор роста эндотелия сосудов (Vegf).
Возрастающий интерес исследователей к факторам
роста связан с поиском и созданием препаратов на
основе гуманизированных моноклональных анти-
тел, позволяющих заблокировать рецепторы к этим
факторам и таким образом стабилизировать опухо-
левый рост.
HER-2/neu — эпидермальный фактор роста.
за последние 20 лет наиболее изучен представи-
тель в этой области протоонкоген her-2/neu (c-erb
B-2), который локализуется в 17q-хромосоме и ко-
дирует тирозинкиназный рецептор факторов роста.
her-2/neu является геном семейства рецепторов
эпидермального фактора роста, включающих egfr
или her-1 (erb-B1); her-2 (erb-B2); her-3 (erb-
B3); her-4 (erb-B4). Амплификация гена или экс-
прессия белка her-2/neu встречается при РМЖ
(10–34%, по данным разных исследователей), опухо-
лях легких, ЖКТ, женской половой системы и многих
других новообразованиях.
her-2/neu локализуется на мембранах клеток
и после связывания с лигандами активирует кина-
зы, а инициированная внутренняя тирозинкиназа
конформативно измененного рецептора запускает
реакции фосфорилирования белков, участвующих
в передаче митогенных сигналов [11]. Его коварство
заключается не только в стимуляции опухолью своего
роста, но также в вовлечении стромы в экспрессию ре-
цепторов к самому фактору с последующей «косвен-
ной» индукцией опухолевого роста (так называемый
двойной механизм опухолевой прогрессии) [12]. Кро-
ме того, экспрессия her-2/neu играет более важную
роль, чем большинство других факторов, в прогнозе
и сроках возникновения рецидива у больных с мета-
стазами в лимфоузлы [13].
При позитивном her-2/neu статусе 5-летняя вы-
живаемость составляет 56%, при негативном — 73%;
при наличии метастазов эти показатели составля-
ют 33 и 62% соответственно [14]. Сверхэкспрессия
her-2/neu свидетельствует также о резистентности
опухоли к химиотерапии, в том числе к тамоксифену.
У больных РМЖ с метастазами при адъювантной те-
рапии тамоксифеном 5-летняя выживаемость при от-
сутствии экспрессии her-2/neu равнялась 75%, а при
его сверхэкспрессии снижалась до 13% [15].
В отношении корреляции er/pgr-рецепторного
статуса и her-2/neu получены различные данные.
Например, в er+ РМЖ может наблюдаться инвер-
сия соотношения позитивного статуса по her-2/neu
и pgr. Это объясняет низкую чувствительность к ан-
тигормональной терапии РМЖ с er+/pgr-her-2/
neu+ статусом. Однако h.J. huang et al. [16] в рандо-
мизированном исследовании установили, что в пре-
менопаузе РМЖ с er+ статусом, как правило, хорошо
чувствителен к антигормональной терапии, несмотря
на her-2/neu+ статус. Авторы определили возраст-
ную зависимость между экспрессией этих маркеров —
инверсия соотношения pgr/her-2/neu имела место
только после 45 лет [17].
РМЖ с негативным статусом по er и pgr-ре-
цепторам чаще сочетался с экспрессией her-2/neu
(her-2/neu был позитивен в 28,7% негативных по
er РМЖ, тогда как в er+ случаях экспрессия эпи-
дермального фактора роста составляла 6,8%). По ре-
цепторам к pgr были получены аналогичные данные
(19,9 и 5,9% соответственно). была продемонстриро-
вана достоверная зависимость между рецепторами
к er, pgr и эпидермальным фактором роста.
Наличие сверхэкспрессии her-2/neu является
показанием (при соматическом благополучии, не счи-
тая основного заболевания) к применению препарата
герцептин (гуманизированное моноклональное анти-
тело, избирательно блокирующее экстрацеллюлярный
домен рецептора к эпидермальному фактору роста).
Оценка уровня экспрессии her-2/neu учитывает раз-
личную степень окрашивания и классифицируется от
0 до 3+. Экспрессия her-2/neu подтверждается про-
ведением fIsh-метода (оценка амплификации гена).
При этом большее предсказательное значение имеет
онкогенная продукция самого белка в отношении про-
гнозирования поведения опухоли по сравнению с ко-
личеством копий самого гена.
Таким образом, маркер her-2/neu можно счи-
тать фактором неблагоприятного прогноза, а его
высокую экспрессию — показателем высокой мета-
статической способности опухоли и возможной ре-
зистентности к антигормональной терапии.
ОНКОлОгИЯ
100
VEGF — фактор роста эндотелия сосудов. Нео-
васкулогенез в опухолевой ткани является необхо-
димым условием ее роста и инвазивности и, кроме
того, играет большую роль в развитии метастазов.
Vegf, будучи лигандом 2-го типа Vegf-рецепто-
ра, оказывает значительное влияние на ангиогенез
в опухоли. Секреция злокачественными клетками
Vegf приводит к стимуляции роста эндотелиаль-
ных клеток и увеличению проницаемости капил-
ляров. В свою очередь, увеличение проницаемости
сосудов влечет за собой инфильтрацию плазмати-
ческими белками, далее — к изменению межклеточ-
ного матрикса и наконец — к образованию новых
сосудов.
Vegf экспрессируется большинством типов
опухолей, включая РМЖ, причем уже на ранних ста-
диях последнего экспрессия Vegf свидетельствует
об ухудшении показателей выживаемости, укоро-
чении безметастазного и безрецидивного периодов
у пациенток вне зависимости от статуса лимфоуз-
лов. Высокая экспрессия этого фактора коррелирует
с негативным er/pgr-рецепторным статусом, от-
сутствием эффекта антиэстрогеновой терапии, экс-
прессией mt р53 и низкой степенью гистологической
дифференцировки опухоли. В последнее время было
показано, что неоваскулогенез в опухолевой ткани
инциируется очень рано — когда сформировался кла-
стер из 100–300 опухолевых клеток, в связи с чем
разработка препаратов антиангиогенного действия
представляется весьма актуальной, поскольку позво-
лит предупредить метастатический каскад.
На сегодняшний день получено гуманизирован-
ное моноклональное антитело к Vegf — бевацизу-
маб, которое (по аналогии с трастузумабом при her-
2/neu-позитивном статусе) в качестве монотерапии
или в комбинации с химиотерапией приводит к сни-
жению ангиогенеза и подавлению роста солидных
опухолей [18].
регуляторы клеточного цикла
Одним из механизмов опухолевой трансформа-
ции и прогрессии является нарушение регуляции
клеточного цикла с ингибированием апоптоза и акти-
вацией пролиферации. В связи с этим особое значение
имеет изучение протеинов, регулирующих клеточный
цикл и инициирующих пролиферацию (маркер про-
лиферации Ki-67, циклин Е, циклинзависимые кина-
зы), а также протеинов — блокаторов апоптоза р53,
bcl-2 и др.
Р53-онкопротеин. В последнее время доказано,
что в эукариотических клетках противоопухолевые
препараты индуцируют апоптоз также посредством
повреждения ДНК и/или гибели клеток, способных
к выработке факторов роста. Программируемая кле-
точная гибель является зависимым процессом, как
это следует из названия, т.е. для ее активации необхо-
димы специфические гены, а именно активация гена
wt p53 (маркера апоптоза), после чего индуцируется
процесс апоптоза.
В обычных условиях ген р53 служит «защитни-
ком» генома, «реаниматором» ДНК, а также индукто-
ром апоптоза. При сублетальных повреждениях ДНК
данный ген блокирует клеточный цикл в g1-фазе, за-
пускает процессы восстановления ДНК и, в зависи-
мости от результата, определяет дальнейшую судьбу
клетки. Следовательно, р53 является ограничителем
пролиферативной активности клеток и ингибитором
злокачественных трансформаций.
Ряд исследований дает основание полагать, что
мутация р53, пожалуй, наиболее часто встречается
в онкогенезе. Впервые связь р53 с развитием РМЖ
была установлена в 1982 г. [19], когда было показано
наличие циркулирующих антител к р53 у больных
с опухолями молочной железы, причем именно у тех
пациенток, которые имели висцеральные метастазы.
Тогда же автор предположил, что, возможно, изменя-
ется содержание р53, нарушается его тип или презен-
тация в клетке и, следовательно, он становится имму-
ногенным.
В настоящее время описаны два типа р53-про-
теина: wt (wild type) p53 — «дикий» тип р53, при-
сутствующий во всех пролиферирующих и регене-
рирующих тканях и определяющий апоптотический
путь элиминации клеток. Одним из «стратегических»
решений опухолевой ткани представляется мутация
гена с синтезом «мутантного» типа (mt р53) белка,
имитирующего свойства «дикого» и, таким образом,
ускользающего из-под влияния системы иммунного
надзора.
К утрате супрессорных свойств могут приводить
различные изменения в геноме — делеции, реверсии,
точечные мутации. При этом, с одной стороны, дей-
ствие wtр53 нивелируется mt53 в связи с тем, что
wtр53 обладает коротким периодом полураспада, по-
этому определить его в тканях с высокой пролифера-
цией и апоптозом в типичных условиях достаточно
трудно (пороговая концентрация в виде нестабиль-
ных олигомерных комплексов); с другой стороны,
mtр53 оказывает супрессорное действие на резиду-
альный wtр53; кроме того, накапливается mtр53, «ма-
скирующий» опухолевую клетку под апоптотически
погибающую (обладающий теми же внешними при-
знаками).
Накопление mtр53 свидетельствует об агрессив-
ном поведении этой формы РМЖ, более коротком
безметастазном и безрецидивном периоде, худшем
прогнозе и необходимости более «жесткой» терапии.
Р53 также может использоваться в комплексном ис-
следовании РМЖ в качестве независимого прогно-
стического маркера, особенно у пациенток с интакт-
ными лимфоузлами, что будет способствовать отбору
больных, потенциально чувствительных к химио- или
лучевой терапии [20].
h. sobol в своем исследовании [21] продемонстри-
ровал взаимосвязь экспрессии mtp53 у лиц с синдро-
мом ли—фроумена и показал, что в гередитарных
формах РМЖ экспрессия р53 связана с Brca1, так
как р53 является опухолевым кофактором у таких
больных.
Стандарт ИгХ оценки экспрессии р53 более
сложен по сравнению со стероидными рецепторами
и требует осторожной интерпретации, поскольку по-
зитивный статус существенно влияет на терапевтиче-
ские подходы.
И.С. шПОНьКА… РОль ТКАНЕВыХ МАРКЕРОВ…
101
Ki-67 — маркер пролиферативного потенциала
опухоли. Степень злокачественности и дифференци-
ровки РМЖ во многом определяется пролифератив-
ной активностью опухолевых клеток, однако традици-
онный подсчет митотической активности не отражает
пролиферативный потенциал опухоли, поскольку
собственно митоз занимает несколько часов (что мо-
жет визуализироваться при традиционном исследова-
нии), а подготовка к нему — около 24 ч. В связи с этим
изучение негистонового протеина Ki-67 (маркера про-
лиферации), экспрессирующегося во всех клетках,
вышедших из g0-фазы, представляется актуальным
и позволяет определить именно «скрытый» пролифе-
ративный потенциал данной опухоли и судить о сте-
пени злокачественности, а также разделить больных
на группы с относительно благоприятным и неблаго-
приятным прогнозом [22].
Пролиферативная активность в опухолях мо-
лочной железы в соответствии с рекомендациями
M.d. fitzgibbons et al. [1] оценивается по градациям
(≥1%, ≥10%, ≥20% опухолевых клеток), в связи с чем
экспрессия Ki-67 более чем в 20% опухолевых кле-
ток рассматривается как крайне неблагоприятный
фактор.
Циклин Е представляет собой протеин, регули-
рующий клеточный цикл, который экспрессируется
в конце g1-фазы и поддерживается в клетке на про-
тяжении s-фазы. Его экспрессия, в свою очередь, ре-
гулируется геном из семейства e2f факторов транс-
крипции. Циклин Е связывает и активирует циклин-
зависимую киназу 2 путем фосфорилирования ее суб-
страта. Комплекс циклин/cdK2 инициирует целый
каскад событий, приводящих к разблокировке генов,
специфичных для s-фазы [23]. Кроме запуска s-фазы
циклин Е оказывает значительное влияние на акти-
вацию репликации ДНК, контроль генетической ста-
бильности и цикл центросом. более чем в половине
случаев со сверхэкспрессией циклина Е наблюдается
мутация р53-онкопротеина и анэуплоидия — опухо-
левых клеток. Высокая экспрессия циклина Е отра-
жает крайне неблагоприятное течение опухолевого
процесса, особенно у пациенток, не получавших хи-
миотерапию, и, как правило, сопровождается мутаци-
ей Brca-1 [24].
Bcl-2-онкопротеин — маркер, свидетельству-
ющий о блоке апоптоза в опухолевой ткани (экспрес-
сия bcl-2 способствует защите клеток от инициации
гибели и отсутствия ответа при проведении химио-
терапии). Однако в отношении РМЖ получены со-
вершенно противоположные результаты: для РМЖ
повышенная экспрессия bcl-2 связана с хорошим
прогнозом и чувствительностью опухоли к тамо-
ксифену. было установлено [25, 26], что экспрессия
bcl-2 коррелирует с позитивным er-статусом и бо-
лее длительным безметастазным и безрецидивным
периодом по сравнению с bcl-2-негативными РМЖ.
p. hellemans et al. [27] не определил прогности-
ческого значения bcl-2 у пациенток с интактными
лимфоузлами, но показал, что негативный статус по
bcl-2-онкопротеину у больных с пораженными лим-
фоузлами сопровождается редукцией периода кли-
нического благополучия.
интегрины
pS2 (пресенилин) — протеин, синтез которого ак-
тивируется er (причем в большей степени фракция-
ми er [28], а также факторами роста и онкопротеина-
ми путем индукции ps2-гена [29]. ps2 экспрессируется
приблизительно в половине всех случаев РМЖ [30].
Установлено, что ps2 накапливается в слизистой обо-
лочке интактного желудка, в регенерирующем эпите-
лии при язвенной болезни, но его значение и физио-
логическая роль пока не известны. Существует пред-
положение, что ps2 принимает участие в интегратив-
ных взаимодействиях в ЖКТ [30].
Внутриопухолевое содержание ps2 отчетливо
коррелирует со степенью дифференцировки опухо-
ли, с продолжительностью жизни и частотой реци-
дивирования, низкой пролиферативной активно-
стью [31]. a. Ioakim-liossi et al. [32] пришли к выво-
ду, что прогноз у больных с er/pgr-ps2-негативным
профилем РМЖ значительно хуже по сравнению
с прогнозом у больных с er/pgr-ps2-позитивным
профилем. Так, например, ряд исследователей уста-
новил, что повышенная экспрессия ps2 свидетель-
ствует о меньшем риске метастазирования опухоли
в аксиллярные лимфоузлы и о лучшей 5-летней вы-
живаемости [33].
В большинстве случаев в er-позитивных опухо-
лях экспрессируется и ps2 (по данным разных авто-
ров, от 85 до 96% [34]), причем уровень экспрессии
ps2 коррелирует с экспрессией er и не взаимосвязан
с выработкой pgr. Присутствие ps2 (в отличие от
pgr) свидетельствует о функциональном гетерогени-
тете эстрогеновой системы.
Получены обнадеживающие данные о значитель-
ном регрессе опухоли после терапии тамоксифеном
при er-ps2-позитивном статусе [35]. В то же время
на сегодняшний день известно, что не все er-пози-
тивные опухоли молочной железы чувствительны
к антиэстрогеновой терапии. Приблизительно 30%
ps2-позитивных опухолей были гормононезависи-
мыми, а 25% ps2-негативных — гормонозависимы-
ми. Скорее всего, этот удивительный феномен свя-
зан либо с изменением конформации рецепторов,
либо с наличием дефектов в системе регуляции [36].
По данным M.f. pichon et al. [37], по меньшей мере
2/3 er-позитивных опухолей молочной железы име-
ют разную чувствительность к гормональной тера-
пии, причем не уточнялось, имела ли место разная
выраженность рецепторного статуса либо это связано
с другими факторами, роль и значение которых еще
не известны.
Маркеры клеточной кластерной
диФФеренцировки
Синдекан-1 (CD138) представляет собой по-
верхностный протеогликан (гепаран-сульфат, ко-
рецептор фактора роста), который осуществляет
регуляцию клеточной пролиферации, миграции,
взаимодействие компонентов экстрацеллюлярного
матрикса и основного фактора роста фибробластов,
адгезию неопластических клеток в строме и, таким
образом, отражает инвазивные свойства опухоле-
вой ткани [38]. Как ни парадоксально, в некоторых
ОНКОлОгИЯ
102
случаях онкологических заболеваний утрата экс-
прессии синдекана-1 свидетельствует о худшем про-
гнозе, тогда как для РМЖ получены противополож-
ные результаты. При высоком уровне экспрессии
синдекана-1 существенно повышается смертность
при РМЖ.
Но и при РМЖ (обнаруживается в 42% случаев)
в отношении синдекана получены разные данные,
в зависимости от локализации экспрессии. Синде-
кан-1 экспрессируется как в эпителии, так и в строме
опухолевой ткани (61 и 67% соответственно). Экс-
прессия синдекана в эпителиальном компоненте опу-
холи коррелирует с негативным er-статусом, тог-
да как в строме — с er-позитивным статусом. При
наличии экспрессии синдекана-1 в эпителиальном
компартменте опухоли 10-летняя выживаемость со-
ставляет 65%, а при его отсутствии — 82% [39]. Вы-
сокая экспрессия синдекана-1 ассоциирована с вы-
сокой степенью дифференцировки, большим разме-
ром опухоли, высокой митотической активностью,
сверхэкспрессией her-2/neu и негативным er/pgr
статусом.
M. Barbareschi et al. [40] в своих исследованиях
установили, что летальность пациентов с РМЖ со
сверхэкспрессией синдекана-1 и получавших терапию
по cMf-схеме очень высока.
Молекулы клеточной адгезии
Е-кадгерин из семейства Са2+-зависимых мо-
лекул клеточной адгезии, в обычных условиях экс-
прессирующийся в ткани молочной железы, может
также использоваться как маркер прогноза течения
РМЖ (имеется в виду дольковый рак в связи с ак-
тивизацией опухолевого роста из-за утраты клеточ-
ных взаимодействий) и клинического исхода в связи
с ухудшением течения заболевания при утрате этого
маркера [41]. При анализе экспрессии Е-кадгерина
в дольковом РМЖ учитывается только мембран-
ное распределение метки. По данным e.a. rakha et
al. [42] экспрессия Е-кадгерина классифицируется
как типичная при среднем значении более 100 (10%
окрашенных клеток), атипичная — при значении
экспрессии ≤100 (менее 10%). В 7,2% случаев при
дольковом РМЖ отмечается отсутствие экспрессии
Е-кадгерина.
Таким образом, утрата экспрессии Е-кадгерина
свидетельствует о худшем прогнозе течения долько-
вого РМЖ. В отношении протокового РМЖ получена
информация о корреляции повышенной экспрессии
Е-кадгерина с her-2/neu [43] и достоверно худшем
прогнозе таких гистологических форм. Следователь-
но, необходимо указывать клиницистам гистологи-
ческую форму РМЖ для правильного представления
о свойствах опухоли.
Матриксные Металлопротеиназы
Изучение экспрессии опухолевыми клетками ма-
триксных металлопротеиназ целесообразно также при
оценке ИгХ статуса РМЖ, поскольку отражает спо-
собность к деградации экстрацеллюлярного матрикса,
разрушению базальных мембран, к метастазированию
и инвазии.
Матриксные металлопротеиназы (ММР) 2/9.
Наиболее изученными при РМЖ являются ММР
2-го и 9-го типов. На сегодняшний день 5-летняя
выживаемость больных с er- MMp9+ статусом со-
ставляет 37%, тогда как при er- MMp9- — 63% [44].
При оценке экспрессии ММР9 необходимо учи-
тывать реакцию и в опухолевой ткани, и в строме.
Авторы [45] считают, что повышенная экспрессия
ММР9 в строме опухоли свидетельствует о худшем
прогнозе, при экспрессии в паренхиме опухоли не
получено сведений о прогнозе. t.n. Mitropoulou et
al. [46] установили, что летрозол ингибирует экс-
прессию ММР и, таким образом, снижает риск ре-
гионарного и отдаленного метастазирования и ре-
цидивирования.
Таким образом, несмотря на то что er/pgr/
her-2/neu статус в настоящее время является «золо-
тым стандартом», позволяющим проводить адекват-
ную адъювантную и неоадъювантную терапию, пред-
ставляется целесообразным изучать все указанные
маркеры, поскольку они будут способствовать кор-
рекции терапевтических приемов и выделению декре-
тированных групп больных. задача как морфологов,
так и онкологов, работающих в этой области,— опре-
деление того набора наиболее значимых, дополня-
ющих друг друга показателей, который позволил бы
при минимально возможной стоимости обследования
обеспечить максимальную эффективность лечения
каждой пациентки. Спектр исследования, интере-
сующий клиницистов, в каждом конкретном случае
зависит от гистологической формы, стадии заболева-
ния, клинической группы, возраста больной, планиру-
емой схемы терапии и материально-технической базы
учреждения.
л и т е р а т у р а
1. prognostic factors in Breast cancer / M.d. fitzgibbons
et al. // arch. pathol. lab. Med.— 2000.— Vol. 124.—
p. 966–978.
2. Goradini D., Diadone M.G. Biomolecular prognostic factors
in breast cancer // curr. opin. obstet. gynecol.— 2004.—
Vol. 16., № 1.— p. 49–55.
3. Increased estrogen receptor betacx expression during mam-
mary carcinogenesis /M. esslimani-sahla et al. // clin.
cancer. res.— 2005.— Vol. 11, № 9.— p. 3170–3174.
4. cell cycle regulation of breast cancer cells through estro-
gen-induced activities of erK and akt protein kinases /
n. geffroy et al. // Mol. cell endocrinol.— 2005.— Vol. 237,
№ 1.— p. 11–23.
5. Macaluso M., Montanari M., Giordano A. the regulation of
er-{alpha} transcription by prb2/p130 in breast cancer //
ann. oncol.— 2005.— № 4.— p. 20–22.
6. Felty Q., Singh K.P., Roy D. estrogen-induced g(1)/s tran-
sition of g(0)-arrested estrogen-dependent breast cancer
cells is regulated by mitochondrial oxidant signalling //
oncogene.— 2005.— May 16.
И.С. шПОНьКА… РОль ТКАНЕВыХ МАРКЕРОВ…
103
7. Pasqualini J.R., Chetrite G.S. recent insight on the control
of enzymes involved in estrogen formation and transforma-
tion in human breast cancer // J. steroid. Biochem. Mol.
Biol.— 2005.— Vol. 93, № 2.— p. 221–236.
8. expression of estrogen receptor (er) (beta)cx protein in
er(alpha)-positive breast cancer: specific correlation with
progesterone receptor // s. saji et al. // cancer res.—
2002.— Vol. 62, № 17.— p. 4849–4853.
9. Elwood V. E., Craig V.J. the estrogen receptor: a Model for
Molecular Medicine // clin. cancer res.— 2003.— Vol. 9.—
p. 1980–1989.
10. dabbs d.J. diagnostic immunohistochemistry.— churchill
livingstone, 2002.— 676 p.
11. endogenous anti-her2 antibodies block her2 phospho-
rylation and signaling through extracellular signal-regulated
kinase / r.B. Montgomery et al. // cancer res.— 2005.—
Vol. 65, № 2.— p. 650–656.
12. Moghal N., Sternberg P.W. Multiple positive and negative
regulators of signaling by the egf-receptor // cur. opi-
nion on cell Biol.— 1999.— Vol. 11.— p.190–196.
13. the predictive power of semiquantitative immunohisto-
chemical assessment of p53 and c-erb β-2 in limph node-
negative breast canser / f.p. o’Malley et al. // hum. pa-
tol.— 1996.— Vol. 27, № 9.— p. 955–963.
14. Петров С.В., Райхлин Н.Т. Руководство по иммуногисто-
химической диагностике опухолей человека.— Казань,
2004.— 452 с.
15. prognostic value of c-erbB2 expression in breast cancer /
s. tsutsui et al. // J. surg. oncol.— 2002.— Vol. 79, № 4.—
p. 216–223.
16. association between her-2/neu and the progesterone re-
ceptor in oestrogen-dependent breast cancer is age-related
/ h.J. huang et al. // Breast cancer res. treat.— 2005.—
№ 1.— p. 81–87.
17. Huang H.J. association between tumour characteristics and
her-2/neu by immunohistochemistry in 1362 women with
primary operable breast cancer // clin. pathol.— 2005.—
Vol. 58, № 6.— p. 611–616.
18. Rugo H.S. Bevacizumab in the treatment of breast cancer:
rationale and current data // oncologist.— 2004.— Vol. 9,
№ 1.— p. 43–49.
19. Crawford L.V., Pim D.C., Bulbrook R.D. detection of anti-
bodies against the cellular protein p53 in sera from patients
with breast cancer // Int. J. cancer.— 1982.— Vol. 30,
№ 4.— p. 403–408.
20. Hawkins D.S., Demers G.W., Galloway D.A. Inactivation
of p53 enhances sensitivity to multiple chemotherapeutic
agents // cancer res.— 1996.— Vol. 56.— p. 892–898.
21. Sobol H. Brca1-p53 relationship in hereditary breast can-
cer / Int. J. oncol.— 1997.— Vol. 10.— p. 349–353.
22. Ki-67 immunostaining in 322 primary breast cancers:
association with clinical and pathological variables and
prognosis / a. Molino, r. Micciolo, M. turazza et al. // Int.
J. cancer.— 1997.— Vol. 74.— p. 433–437.
23. Moroy T., Geisen C. Cylcin E. // Int. J. Biochem. cell Biol.—
2004.— Vol.36, №8.— p. 1424–1439.
24. cyclin e expression in breast cancer: predicting germline
Brca1 mutations, prognosis and response to treatment
/ p.c. chappius et al. // ann. oncol.— 2005.— Vol. 16,
№ 5.— p. 735–742.
25. clinicopathologic analysis of bcl-2 immunostaining in breast
carcinoma / d.W. Visscher et al. // Mod. pathol.— 1996.—
Vol. 9.— p. 642–646.
26. bcl-2, p53, and response to tamoxifen in estrogen receptor-
positive metastatic breast cancer: a southwest onco logy
group study / r.M. elledge et al. // J. clin. oncol.—
1997.— Vol. 15.— p. 1916–1922.
27. prognostic value of bcl-2 expression in invasive breast
cancer / p. hellemans et al. // Br. J. cancer.— 1995.—
Vol. 72.— p. 354–360.
28. transcriptional regulation of the estrogen-inducible
ps2 breast cancer marker gene by the err family of orphan
nuclear receptors / d. lu et al. // cancer res.— 2001.—
Vol. 61, № 18.— p. 6755–6761.
29. Immunohistochemical detection of ps2 protein in paraffin
sections of breast carcinoma tissue. comparison with results
of an immunoradiometry assay / a. ahr et al. // patholo-
gy.— 1995.— Vol. 16, № 4.— p. 278–284.
30. ps2 is an independent prognostic factor for post-relapse
survival in primary breast cancer / r.l. Jansen et al. // an-
ticancer res.— 1998.— Vol. 18, № 1B.— p. 577–582.
31. clinico-biological impact of ps2 positivity in estrogen recep-
tor negative-infiltrating ductal carcinomas of the breast /
a. ruibal et al. // rev. esp. Med. nucl.— 2000.— Vol. 19,
№ 6.— p. 428–433.
32. expression of ps2 protein and estrogen and progesterone
receptor status in breast cancer / a. Ioakim-liossi et al. //
acta cytol.— 1997.— Vol. 41, № 3.— p. 713–716.
33. Wysocki S.J., Iacopetta B.J., Ingram D.M. prognostic sig-
nificance of ps2 mrna in breast cancer // eur. J. cancer.—
1994.— Vol. 30a, № 12.— p.1882–1884.
34. expression of ps2 protein in breast cancer / g. crombach
et al. // arch. gynecol. obstet.— 1993.— Vol. 253, № 4.—
p. 183–192.
35. ps2 protein: a marker improving prediction of response to
neoadjuvant tamoxifen in post-menopausal breast cancer
patients / I. soubeyran et al. // Br. J. cancer.— 1996.—
Vol. 74, № 7.— p. 1120–1125.
36. analysis of five-year course of the disease / p. surowiak et
al. // folia histochem. cytobiol.— 2001.— Vol. 39, № 2.—
p. 143–144.
37. Pichon M.F., Milgrom E. clinical significance of the estrogen
regulated ps2 protein in mammary tumors // crit. rev. on-
col. hematol.— 1993.— Vol. 15, № 1.— p. 13–21.
38. clinicopathological study of the expression of syndecan-
1 in invasive breast carcinoma correlation with extracellular
matrix components / e. tsanou et al. // J. exp. clin. cancer
res.— 2004.— Vol. 23, № 4.— p. 641–650.
39. prognostic value of syndecan-1 expression in breast cancer
/ M. leivonen et al. // oncology.— 2004.— Vol. 67, № 1.—
p. 11–18.
40. high syndecan-1 expression in breast carcinoma is re-
lated to an aggressive phenotype and to poorer prognosis /
M. Barbareschi et al. // cancer.— 2003.— Vol. 98, № 3.—
p. 474–483.
41. correlation of e-cadherin expression with clinicopathologi-
cal parameters in breast carcinoma / u. cobanoglu et al. //
saudi Med. J.— 2004.— Vol. 25, № 8.— p. 1024–1027.
42. e-cadherin expression in invasive non-lobular carcinoma
of the breast and its prognostic significance / e.a. ra-
kha et al. // histopathology.— 2005.— Vol. 46, № 6.—
p. 685–693.
ОНКОлОгИЯ
104
the role of tIssue MarKers In assessMent of BIologIcal propertIes
and prognosIs of Breast cancer
I.s. shponka, V.a. Bondareva, p.a. gritsenko
s u m m a r y
tissue markers which play a prognostic role in breast cancer (Bc) determined with the use of immunohisto-
chemical methods are reviewed. the authors conclude about the effect of the above markers as they can promote
correction of therapeutic methods in Bc.
43. expression of e-cadherin in high-risk breast cancer /
e.M. howard et al. // J. canc. res. clin. oncol.— 2005.—
Vol. 131, № 1.— p. 14–18.
44. Matrix metalloproteinase-9 (MMp-9) immunoreactive pro-
tein has modest prognostic value in locally advanced breast
carcinoma patients treated with an adjuvant antiestrogen
therapy / e. rahko et al. // anticancer res.— 2004.—
Vol. 24, № 6.— p. 4247–4253.
45. prognostic value of matrix metalloproteinases (MMp-2 and
MMp-9) in patients with lymph node-negative breast carci-
noma / h.c. li et al. // Breast cancer res. treat.— 2004.—
Vol. 88, № 1.— p. 75–85.
46. letrozole as a potent inhibitor of cell proliferation and ex-
pression of metalloproteinases (MMp-2 and MMp-9) by
human epithelial breast cancer cells / t.n. Mitropoulou et
al. // Int. J. cancer.— 2003.— Vol. 104, № 2.— p. 155–160.
Поступила 21.04.2005
|