Конструирование химерного интеин-содержащего белка и оценка условий его расщепления

• Дата: 2007
• Автори: Старокадомский, П.Л., Дубей, И.Я., Окунев, О.В., Иродов, Д.М.
• Формат: Стаття
• Мова: Russian
• Опубліковано: Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України 2007
• Назва видання: Цитология и генетика
• Теми: Оригинальные работы
• Онлайн доступ: http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/66523
• Назва журналу: Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
• Цитувати: Конструирование химерного интеин-содержащего белка и оценка условий его расщепления / П.Л. Старокадомский, И.Я. Дубей, О.В. Окунев, Д.М. Иродов // Цитология и генетика. — 2007. — Т. 41, № 2. — С. 3-11. — Бібліогр.: 16 назв. — рос.

Белковым сплайсингом называют пост-трансляционное автокаталитическое вырезание внутренней белковой последовательности (интеина) с последующим лигированием фланкирующих пептидов (экстеинов). Высокая специфичность расщепления белков-предшественников, которая обеспечивается интеинами, позволяет использовать белковый сплайсинг в биотехнологических целях. Цель работы – получение в клетках E. coli рекомбинантного фактора роста человека с нативным N-концом. Для этого был создан химерный белок, состоявший из короткого N-концевого пептида, интеина Mxe GyrA и гормона роста человека. В процессе трансляции формилметионином модифицируется N-концевой пептид, впоследствии удаляющийся. Показано, что интеин обеспечивал отщепление экстеинов, однако последующего их лигирования не происходило. Это позволило получить гормон роста человека с нативным N-концом. Исследовано влияние различных факторов на эффективность расщепления. Установлено, что наилучший результат расщепления химерного белка (60–80 %) достигается при добавлении индуктора (100 мМ β-меркаптоэтанол) с инкубацией в течение 4–6 сут.