Получение трансгенных линий ячменя, продуцирующих лактоферрин человека, с использованием мутантного альфа-тубулина в качестве селективного маркерного гена

• Дата: 2011
• Автори: Танасиенко, И.В., Емец, А.И., Пирко, Я.В., Корховой, В.И., Абумхади, Н., Блюм, Я.Б.
• Формат: Стаття
• Мова: Russian
• Опубліковано: Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України 2011
• Назва видання: Цитология и генетика
• Теми: Оригинальные работы
• Онлайн доступ: http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/66817
• Назва журналу: Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
• Цитувати: Получение трансгенных линий ячменя, продуцирующих лактоферрин человека, с использованием мутантного альфа-тубулина в качестве селективного маркерного гена / И.В. Танасиенко, А.И. Емец, Я.В. Пирко, В.И. Корховой, Н. Абумхади, Я.Б. Блюм // Цитология и генетика. — 2011. — Т. 45, № 1. — С. 3-10. — Бібліогр.: 30 назв. — рос.

Метод биолистической трансформации был использован для генетического усовершенствования трех коммерческих сортов ячменя отечественной селекции (Оксамытовый, Водограй и Гетьман). Для трансформации использовали конструкцию pHLFTuBA, содержащую ген интереса, ген человеческого лактоферрина (hLF) под контролем глютелинового В-1 (GluB-1) промотора риса. В качестве селективного маркерного гена использовали ген мутантного a-тубулина, обеспечивающего устойчивость к трифлюралину (гербицид динитроанилинового ряда). Для установления селективной концентрации трифлюралина был проведен скрининг его разных концентраций в диапазоне от 0,1 до 30 мкМ. После 2–3 месяцев селекции на 10 мкМ трифлюралина были получены две трансгенные линии растений ячменя сорта Оксамытовый и каллусная линия сорта Гетьман. Для подтверждения стабильной интеграции гена hLF был проведен ПЦР-анализ листьев растений-регенерантов после их адаптации в грунте. В обеих линиях ячменя был амплифицирован фрагмент гена hLF размером 734 п.н.