Влияние различных концентраций криопротектора ДМСО на уровень экспрессии stemness-генов в стволовых клетках фетальной печени мышей до и после криоконсервирования
Збережено в:
| Дата: | 2014 |
|---|---|
| Автори: | , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Russian |
| Опубліковано: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2014
|
| Назва видання: | Проблемы криобиологии и криомедицины |
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/68829 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Влияние различных концентраций криопротектора ДМСО на уровень экспрессии stemness-генов в стволовых клетках фетальной печени мышей до и после криоконсервирования / П.А. Борисов, А.Ю. Димитров, М.В. Останков, А.Н. Гольцев // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2014. — Т. 24, № 2. — С. 185. — рос., англ. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
irk-123456789-68829 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
irk-123456789-688292014-10-11T22:43:43Z Влияние различных концентраций криопротектора ДМСО на уровень экспрессии stemness-генов в стволовых клетках фетальной печени мышей до и после криоконсервирования Борисов, П.А. Димитров, А.Ю. Останков, М.В. Гольцев, А.Н. Тезисы 2014 Article Влияние различных концентраций криопротектора ДМСО на уровень экспрессии stemness-генов в стволовых клетках фетальной печени мышей до и после криоконсервирования / П.А. Борисов, А.Ю. Димитров, М.В. Останков, А.Н. Гольцев // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2014. — Т. 24, № 2. — С. 185. — рос., англ. 2307-6143 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/68829 ru Проблемы криобиологии и криомедицины Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Russian |
| topic |
Тезисы Тезисы |
| spellingShingle |
Тезисы Тезисы Борисов, П.А. Димитров, А.Ю. Останков, М.В. Гольцев, А.Н. Влияние различных концентраций криопротектора ДМСО на уровень экспрессии stemness-генов в стволовых клетках фетальной печени мышей до и после криоконсервирования Проблемы криобиологии и криомедицины |
| format |
Article |
| author |
Борисов, П.А. Димитров, А.Ю. Останков, М.В. Гольцев, А.Н. |
| author_facet |
Борисов, П.А. Димитров, А.Ю. Останков, М.В. Гольцев, А.Н. |
| author_sort |
Борисов, П.А. |
| title |
Влияние различных концентраций криопротектора ДМСО на уровень экспрессии stemness-генов в стволовых клетках фетальной печени мышей до и после криоконсервирования |
| title_short |
Влияние различных концентраций криопротектора ДМСО на уровень экспрессии stemness-генов в стволовых клетках фетальной печени мышей до и после криоконсервирования |
| title_full |
Влияние различных концентраций криопротектора ДМСО на уровень экспрессии stemness-генов в стволовых клетках фетальной печени мышей до и после криоконсервирования |
| title_fullStr |
Влияние различных концентраций криопротектора ДМСО на уровень экспрессии stemness-генов в стволовых клетках фетальной печени мышей до и после криоконсервирования |
| title_full_unstemmed |
Влияние различных концентраций криопротектора ДМСО на уровень экспрессии stemness-генов в стволовых клетках фетальной печени мышей до и после криоконсервирования |
| title_sort |
влияние различных концентраций криопротектора дмсо на уровень экспрессии stemness-генов в стволовых клетках фетальной печени мышей до и после криоконсервирования |
| publisher |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| publishDate |
2014 |
| topic_facet |
Тезисы |
| url |
http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/68829 |
| citation_txt |
Влияние различных концентраций криопротектора ДМСО на уровень экспрессии stemness-генов в стволовых клетках фетальной печени мышей до и после криоконсервирования / П.А. Борисов, А.Ю. Димитров, М.В. Останков, А.Н. Гольцев // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2014. — Т. 24, № 2. — С. 185. — рос., англ. |
| series |
Проблемы криобиологии и криомедицины |
| work_keys_str_mv |
AT borisovpa vliânierazličnyhkoncentracijkrioprotektoradmsonaurovenʹékspressiistemnessgenovvstvolovyhkletkahfetalʹnojpečenimyšejdoiposlekriokonservirovaniâ AT dimitrovaû vliânierazličnyhkoncentracijkrioprotektoradmsonaurovenʹékspressiistemnessgenovvstvolovyhkletkahfetalʹnojpečenimyšejdoiposlekriokonservirovaniâ AT ostankovmv vliânierazličnyhkoncentracijkrioprotektoradmsonaurovenʹékspressiistemnessgenovvstvolovyhkletkahfetalʹnojpečenimyšejdoiposlekriokonservirovaniâ AT golʹcevan vliânierazličnyhkoncentracijkrioprotektoradmsonaurovenʹékspressiistemnessgenovvstvolovyhkletkahfetalʹnojpečenimyšejdoiposlekriokonservirovaniâ |
| first_indexed |
2025-07-05T18:36:05Z |
| last_indexed |
2025-07-05T18:36:05Z |
| _version_ |
1836833116420833280 |
| fulltext |
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 24, №/issue 2, 2014
185
Влияние различных концентраций криопротектора ДМСО на уровень
экспрессии stemness-генов в стволовых клетках фетальной
печени мышей до и после криоконсервирования
П.А. Борисов, А.Ю. Димитров, М.В. Останков, А.Н. Гольцев
Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины, г. Харьков
Effect of Different DMSO Concentrations on Expression Level of Stemness
Genes in Mice Fetal Liver Stem Cells Prior to and after Cryopreservation
P.A. Borisov, A.Yu. Dimitrov, M.V. Ostankov, A.N. Goltsev
Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine
of the National Academy of Sciences of Ukraine, Kharkov, Ukraine
Криоконсервирование является обязательным эта-
пом использования клеточного материала в клинической
практике. Варьирование условий криоконсервирования,
включая начальные этапы предобработки криопротек-
тором, может оказывать разное влияние на характеристи-
ки биообъекта. Мезенхимальные (МСК) и гемопоэтичес-
кие (ГСК) стволовые клетки фетальной печени (КФП)
широко применяются в клеточной терапии. Плюрипо-
тентность стволовых клеток контролируется рядом
транскрипционных факторов, наиболее значимыми из
которых являются Nanog, Oct4 и Sox2. Анализ состояния
stemness-генов может дать понимание принципов функ-
ционирования геномного аппарата клеток после крикон-
сервирования и оптимизировать его существующие про-
токолы.
Цель исследования – изучить влияние температуры
экспозиции и разных концентраций криопротектора
диметилсульфоксида (ДМСО) на уровень экспрессии
генов nanog, oct4 и sox2 в стволовых клетках фетальной
печени мышей до и после криоконсервирования.
Материалы и методы. Суспензию клеток получали
методом гомогенизации фетальной печени 14 и 18 суток
гестации мышей линии С57BL. Фракции CD105+ (МСК)
и CD117+ (ГСК) КФП получали методом иммуномагнит-
ного сортирования. К выделенным фракциям при темпе-
ратуре 20 или 4°С добавляли ДМСО, конечная концентра-
ция которого составляла 5 или 10%. Экспозицию клеток
в растворе проводили в течение 10 мин при вышеуказан-
ной температуре. Суспензию клеток криоконсервиро-
вали на программном замораживателе УОП-6 (СКТБ с
ОП ИПКиК НАН Украины) со скоростью 1 град/мин до
–25°С с последующим погружением в жидкий азот, ото-
гревали на водяной бане при 37°С. Анализ экспрессии
генов nanog, oct4, sox2 в субпопуляциях нативных, экспо-
нированных с криопротектором и криоконсервиро-
ванных клеток проводили методом ОТ-ПЦР анализа
(методом ∆∆Ct). Результаты обрабатывали статистичес-
ки по методу Стьюдента с использованием компьютер-
ной программы «Origin».
Результаты исследования показали, что повышение
концентрации криопротектора приводило к снижению
уровня экспрессии stemness-генов до и после криокон-
сервирования. Экспозиция с охлажденным криопротек-
тором оказывала меньшее влияние на данный параметр.
В клетках, которые замораживали с 10%-м ДМСО, добав-
ленным в среду при температуре 4°С, уровень экспрес-
сии до и после криоконсервирования изменялся в
наименьшей степени по сравнению с нативом.
Cryopreservation is a mandatory stage for using cell
samples in clinical practice. Varying conditions of cryo-
preservation, including the initial stages of treatment with
cryoprotectant may have different effects on the charac-
teristics of bioobject. Mesenchymal (MSCs) and hemato-
poietic (HSCs) stem cells of fetal liver (FLC) are widely
applied in cell therapy. Pluripotency of stem cells is controlled
by a number of transcription factors, the most significant of
which are nanog, oct4 and sox2. Analysis of the stemness-
genes status can give understanding of the functioning of
cell genomic apparatus after cryopreservation and optimize
the existing protocols.
The research aim was to study the effect of exposure
temperature and different concentrations of cryoprotectant
dimethyl sulfoxide (DMSO) on the expression level of
nanog, oct4 and sox2 genes in mice fetal liver stem cells
prior to and after cryopreservation.
Materials and methods. The cell suspension was
procured by homogenization of C57BL mice fetal liver of 14
and 18 gestation days. CD105+ (MSCs) and CD117+ (HSCs)
fractions of FLCs were obtained by immunomagnetic sor-
ting. The extracted fractions were supplemented with DMSO
at 20 or 4°C, final concentration of cryoprotectant in the
solution was 5 or 10%. Cell exposure in the solution was
carried out for 10 min at the stated temperatures. Cell
suspension was cryopreserved using the programmable
freezer UOP-6 (Special Designing and Technical Bureau with
Experimental Unit of IPCC of NAS of Ukraine) with the
cooling rate of 1 deg/min down to –25°C and following
plunging into liquid nitrogen, then thawed in water bath at
37°C. The expression of nanog, oct4, sox2 genes in
subpopulations of native cells, those exposed to cryopro-
tectant and cryopreserved ones was analyzed by RT-PCR
(using ∆∆Ct). The results were statistically processed by
Student’s t-test using Origin software.
The results showed that elevated cryoprotectant con-
centration resulted in a lower expression level of stemness-
genes before and after cryopreservation. Exposure with the
cooled cryoprotectant had less effect on this parameter. In
the cells frozen with 10% DMSO added at 4°C the expres-
sion level prior to and after cryopreservation changed in
the least degree if compared to the native.
|