Використання наночастинок CoFe₂O₄ для цільової доставки метотрексату в клітини остеосаркоми

Дослiджено вплив наночастинок CoFe₂O₄ на пролiферацiю культури мишачих макрофагiв J774 i оцiнено можливiсть використання гiалуронової кислоти як лiганду для цiльової терапiї. Отримано деякi характеристики наночастинок, такi як значення токсичних концентрацiй, здатнiсть iндукувати оксидативний вибух...

Ausführliche Beschreibung

Gespeichert in:
Bibliographische Detailangaben
Datum:2013
Hauptverfasser: Єфременко, Д.С., Телегеєва, П.Г., Яковенко, А.В., Василенко, І.В., Телегеєв, Г.Д., Малюта, С.С.
Format: Artikel
Sprache:Ukrainian
Veröffentlicht: Видавничий дім "Академперіодика" НАН України 2013
Schriftenreihe:Доповіді НАН України
Schlagworte:
Online Zugang:http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/85786
Tags: Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
Назва журналу:Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Zitieren:Використання наночастинок CoFe₂O₄ для цільової доставки метотрексату в клітини остеосаркоми / Д.С. Єфременко, П.Г. Телегеєва, А.В. Яковенко, І.В. Василенко, Г.Д. Телегеєв, С.С. Малюта // Доповiдi Нацiональної академiї наук України. — 2013. — № 6. — С. 157–161. — Бібліогр.: 9 назв. — укр.

Institution

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
id irk-123456789-85786
record_format dspace
spelling irk-123456789-857862015-08-20T03:02:08Z Використання наночастинок CoFe₂O₄ для цільової доставки метотрексату в клітини остеосаркоми Єфременко, Д.С. Телегеєва, П.Г. Яковенко, А.В. Василенко, І.В. Телегеєв, Г.Д. Малюта, С.С. Біологія Дослiджено вплив наночастинок CoFe₂O₄ на пролiферацiю культури мишачих макрофагiв J774 i оцiнено можливiсть використання гiалуронової кислоти як лiганду для цiльової терапiї. Отримано деякi характеристики наночастинок, такi як значення токсичних концентрацiй, здатнiсть iндукувати оксидативний вибух тощо. Також оцiнено вплив наноконструкцiї CoFe₂O₄–Метотрексат–Гiалуронова кислота на пролiферативну активнiсть культури остеосаркоми людини MG-63. Исследовано влияние наночастиц CoFe₂O₄ на пролиферацию культуры мышиных макрофагов J774 и оценена возможность использования гиалуроновой кислоты в качестве лиганда для целевой терапии. Получены некоторые характеристики наночастиц, такие как значения токсических концентраций, способность индуцировать оксидативный стресс и т. д. Также оценено влияние наноконструкции CoFe₂O₄–Метотрексат–Гиалуроновая кислота на пролиферативную активность культуры остеосаркомы человека MG-63. In order to develop the technology of targeted delivery therapy based on ferromagnetic nanoparticles CoFe₂O₄, we studied its influence on the biogenesis of mouse macrophage J774 cell culture and possibility to use hyaluronic acid as a ligand for target therapy. As a result, we have determined different characteristics of nanoparticles (such as the optimal non-toxic concentration of nanoparticles, ability of nanoparticles to induce oxidative stress) and estimated the influence of the nanoconstruction CoFe₂O₄-Methotrexate-Hyaluronic Acid on the proliferative activity of MG-63 cell culture. 2013 Article Використання наночастинок CoFe₂O₄ для цільової доставки метотрексату в клітини остеосаркоми / Д.С. Єфременко, П.Г. Телегеєва, А.В. Яковенко, І.В. Василенко, Г.Д. Телегеєв, С.С. Малюта // Доповiдi Нацiональної академiї наук України. — 2013. — № 6. — С. 157–161. — Бібліогр.: 9 назв. — укр. 1025-6415 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/85786 575.174.015.616.155.392 uk Доповіді НАН України Видавничий дім "Академперіодика" НАН України
institution Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection DSpace DC
language Ukrainian
topic Біологія
Біологія
spellingShingle Біологія
Біологія
Єфременко, Д.С.
Телегеєва, П.Г.
Яковенко, А.В.
Василенко, І.В.
Телегеєв, Г.Д.
Малюта, С.С.
Використання наночастинок CoFe₂O₄ для цільової доставки метотрексату в клітини остеосаркоми
Доповіді НАН України
description Дослiджено вплив наночастинок CoFe₂O₄ на пролiферацiю культури мишачих макрофагiв J774 i оцiнено можливiсть використання гiалуронової кислоти як лiганду для цiльової терапiї. Отримано деякi характеристики наночастинок, такi як значення токсичних концентрацiй, здатнiсть iндукувати оксидативний вибух тощо. Також оцiнено вплив наноконструкцiї CoFe₂O₄–Метотрексат–Гiалуронова кислота на пролiферативну активнiсть культури остеосаркоми людини MG-63.
format Article
author Єфременко, Д.С.
Телегеєва, П.Г.
Яковенко, А.В.
Василенко, І.В.
Телегеєв, Г.Д.
Малюта, С.С.
author_facet Єфременко, Д.С.
Телегеєва, П.Г.
Яковенко, А.В.
Василенко, І.В.
Телегеєв, Г.Д.
Малюта, С.С.
author_sort Єфременко, Д.С.
title Використання наночастинок CoFe₂O₄ для цільової доставки метотрексату в клітини остеосаркоми
title_short Використання наночастинок CoFe₂O₄ для цільової доставки метотрексату в клітини остеосаркоми
title_full Використання наночастинок CoFe₂O₄ для цільової доставки метотрексату в клітини остеосаркоми
title_fullStr Використання наночастинок CoFe₂O₄ для цільової доставки метотрексату в клітини остеосаркоми
title_full_unstemmed Використання наночастинок CoFe₂O₄ для цільової доставки метотрексату в клітини остеосаркоми
title_sort використання наночастинок cofe₂o₄ для цільової доставки метотрексату в клітини остеосаркоми
publisher Видавничий дім "Академперіодика" НАН України
publishDate 2013
topic_facet Біологія
url http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/85786
citation_txt Використання наночастинок CoFe₂O₄ для цільової доставки метотрексату в клітини остеосаркоми / Д.С. Єфременко, П.Г. Телегеєва, А.В. Яковенко, І.В. Василенко, Г.Д. Телегеєв, С.С. Малюта // Доповiдi Нацiональної академiї наук України. — 2013. — № 6. — С. 157–161. — Бібліогр.: 9 назв. — укр.
series Доповіді НАН України
work_keys_str_mv AT êfremenkods vikoristannânanočastinokcofe2o4dlâcílʹovoídostavkimetotreksatuvklítiniosteosarkomi
AT telegeêvapg vikoristannânanočastinokcofe2o4dlâcílʹovoídostavkimetotreksatuvklítiniosteosarkomi
AT âkovenkoav vikoristannânanočastinokcofe2o4dlâcílʹovoídostavkimetotreksatuvklítiniosteosarkomi
AT vasilenkoív vikoristannânanočastinokcofe2o4dlâcílʹovoídostavkimetotreksatuvklítiniosteosarkomi
AT telegeêvgd vikoristannânanočastinokcofe2o4dlâcílʹovoídostavkimetotreksatuvklítiniosteosarkomi
AT malûtass vikoristannânanočastinokcofe2o4dlâcílʹovoídostavkimetotreksatuvklítiniosteosarkomi
first_indexed 2025-07-06T13:08:24Z
last_indexed 2025-07-06T13:08:24Z
_version_ 1836903098287652864
fulltext УДК 575.174.015.616.155.392 Д.С. Єфременко, П. Г. Телегеєва, А.В. Яковенко, I. В. Василенко, Г.Д. Телегеєв, член-кореспондент НАН України С.С. Малюта Використання наночастинок CoFe2O4 для цiльової доставки метотрексату в клiтини остеосаркоми Дослiджено вплив наночастинок CoFe2O4 на пролiферацiю культури мишачих макрофа- гiв J774 i оцiнено можливiсть використання гiалуронової кислоти як лiганду для цiльо- вої терапiї. Отримано деякi характеристики наночастинок, такi як значення токсич- них концентрацiй, здатнiсть iндукувати оксидативний вибух тощо. Також оцiнено вплив наноконструкцiї CoFe2O4–Метотрексат–Гiалуронова кислота на пролiфератив- ну активнiсть культури остеосаркоми людини MG-63. В останнi десятилiття пiдходи з використанням наночастинок стали перспективним напрям- ком у боротьбi з онкологiчними захворюваннями. Наночастинка — iзольований твердофаз- ний об’єкт, що має чiтко вираженi кордони з навколишнiм середовищем та розмiри якого в усiх трьох вимiрах становлять вiд 1 до 100 нм. Серед значної кiлькостi наночастинок най- бiльший iнтерес викливають феромагнiтнi наночастинки завдяки своїм фiзичним власти- востям. Зважаючи на їх здатнiсть до генерацiї теплової енергiї при опромiненнi змiнним магнiтним полем, вони є перспективними для терапiї рiзноманiтних пухлин. Крiм того, за допомогою постiйного магнiтного поля вони можуть бути сконцентрованi в певних дiлян- ках. Одним iз актуальних напрямкiв використання феромагнiтних наночастинок може бути їх таргетна доставка в онкотрансформованi клiтини. Вiдомо, що пухлини здатнi до гiперекспресiї рiзних типiв поверхневих рецепторiв. Це можуть бути як ембрiональнi рецептори, так i звичайнi соматичнi. Наприклад, остеосаркома людини гiперекспресує маркер CD44. Даний маркер є рецептором для гiалуронової кислоти. Сам по собi вiн не є високоспецифiчним, але в поєднаннi з локалiзацiєю магнiтним полем можна сконцентрувати наночастинки з хiмiотерапевтичним препаратом в зонi пухлини. Нами для цiльової доставки в онкотрансформованi клiтини наночастинки складу CoFe2O4 були модифiкованi лiкарським препаратом метотрексат (MT) та гiалуроновою кислотою (HA). Було оцiнено вплив цих наночастинок на клiтини остеосаркоми MG-63 та показано значне зниження рiвня пролiферативної активностi культури MG-63 при iн- кубацiї з CoFe2O4–MT–HA, що передбачає можливе використання даної наноконструкцiї в терапевтичних цiлях. Матерiали i методи. Наночастинки CoFe2O4 синтезували вiдповiдно до описаного в [1] протоколу. Культуру мишачих макрофагiв J774 iнкубували в поживному середовищi DMEM (Dulbecco’s Modified Eagle Medium) з 10% FBS (Fetal Bovine Serum) та ростили в 100 мм культуральних чашках Петрi при 37 ◦C з подачею 5% CO2. Тест на цитотоксичнiсть. Для дослiдження цитотоксичностi наночастинок клiтини попередньо обробляли розчином наночастинок, iнкубували 24 год та фарбували 0,4% роз- чином трипанового синього. Фарбованi клiтини аналiзували пiд свiтловим мiкроскопом [2]. Оцiнка фагоцитарного iндексу. Фагоцитарний iндекс (ФI) оцiнювали згiдно з протоко- лом [3]. Для цього клiтини попередньо фарбували розчином акридину оранжевого, iнкубу- © Д.С. Єфременко, П. Г. Телегеєва, А.В. Яковенко, I. В. Василенко, Г.Д. Телегеєв, С. С. Малюта, 2013 ISSN 1025-6415 Доповiдi Нацiональної академiї наук України, 2013, №6 157 Рис. 1. Зiставлення даних рiвня цитотоксичностi, фагоцитарного iндексу, рiвня АФК та пролiферативної активностi. C — концентрацiя наночастинок; E — оптична густина (для НСТ тесту) вали при 37 ◦С протягом 30 хв. Потiм додавали певну кiлькiсть наночастинок та iнкубували протягом 30 хв, пiсля чого дослiджували на флуоресцентному мiкроскопi. Визначення рiвня активних форм кисню (АФК) в клiтинах [4]. Для визначення рiв- ня АФК в клiтинах застосовували НСТ (нiтросинiй тетразолiй) тест. Клiтини iнкубували з наночастинками протягом 1 год. Потiм додавали 0,1% водного розчину НСТ i iнкубували 4 год при 37 ◦C. Клiтини осаджували центрифугуванням, вiдбирали супернатант i суши- ли. Потiм додавали DMSO та повторно iнкубували при 37 ◦С протягом 10 хв. Далi зразок дослiджували методом оптичної спектрофотометрiї при довжинi хвилi 530(±20) нм. Визначення пролiферативної активностi. Для визначення пролiферативної активностi клiтини iнкубували з наночастинками протягом 24 i 48 год. У кожну лунку додавали 12 мM 3-(4,5-диметилтiазол-2-iл)-2,5-дифенiлтетразолiю (MTT) i iнкубували 4 год при темпе- ратурi 37 ◦С. Для лiзису клiтин та розчинення формазану додавали DMSO. Визначення акумуляцiї наночастинок в клiтинах [5]. Клiтини iнкубували з наночас- тинками протягом 1 год. Пiсля iнкубацiї проводили вiдмивку частинок, що не iнтерналi- зували. Клiтини фiксували 8% розчином формальдегiду фарбували розчином фероцiанiду калiю з еквiмолярною кiлькiстю 1Н HCl. Результати та обговорення. Важливим моментом у використаннi наночастинок є їх вiдносна нетоксичнiсть для клiтин органiзму. Саме тому нами було проаналiзовано цитоток- сичнiсть феромагнiтних наночастинок при рiзних значеннях концентрацiї. Встановлено, що концентрацiї до 100 мкг/мл не викликають значного цитотоксичного ефекту. При концен- трацiї 1600 мкг/мл спостерiгається максимальна цитотоксичнiсть — кiлькiсть життездат- них клiтин становить 51±3,2%. При подальшому пiдвищеннi концентрацiї наночастинок до 2000 мкг/мл рiвень цитотоксичностi знижується на 12% (рис. 1). Цi значення узгоджують- ся з лiтературними даними [6]. ФI показує вiдсоток клiтин, що поглинули певну частинку, в порiвняннi iз загальною кiлькiстю клiтин. Оцiнка ФI дає можливiсть визначити оптимальнi концентрацiї наночасти- нок для застосування при онкологiчних захворюваннях, при яких спостерiгається фагоци- тарна активнiсть неопластичних клiтин (наприклад, при деяких формах гострої лейкемiї). Даний тест показав (див. рис. 1), що зi збiльшенням концентрацiї наночастинок поступо- во збiльшуються значення ФI. Зростання ФI вiдбувається до значення 1600 мкг/мл. При подальшому пiдвищеннi концентрацiї наночастинок ФI знижується. З цього факту можна 158 ISSN 1025-6415 Reports of the National Academy of Sciences of Ukraine, 2013, №6 зробити висновок, що для фагоцитозу iснують певнi оптимальнi концентрацiї наночасти- нок. Рiзними дослiдниками було також показано, що для рiзноманiтних наночастинок ФI залежить вiд їх концентрацiї i при високих значеннях може знижуватися [7, 8]. З метою дослiдження залежностi рiвня АФК вiд концентрацiї наночастинок нами було проведено НСТ тест. Для феромагнiтних наночастинок властива стимуляцiя генерацiї АФК через реакцiю Фентона. Ця особливiсть може бути використана для цiльового знищення ракових клiтин, оскiльки вони мають дефектну антиоксидантну систему. З пiдвищенням концентрацiї наночастинок рiвень АФК зростає. Максимальний рiвень АФК спостерiгаєть- ся при концентрацiї 1600 мкг/мл, а потiм поступово знижується (див. рис. 1). Як було зазначено вище, при концентрацiї 1600 мкг/мл максимальним є i показник ФI. Також було проведено визначення рiвня пролiферативної активностi (див. рис. 1). Ана- лiз проводили в дiапазонi концентрацiй наночастинок 0–2000 мкг/мл. При концентрацiях вiд 0 до 1000 мкг/мл пролiферативна активнiсть спочатку рiзко знижується (0–200 мкг/мл), але потiм поступово вирiвнюється i в дiапазонi 600–1000 мкг/мл пiдвищується. Зi збiльшен- ням концентрацiї наночастинок до 1600 мкг/мл рiвень пролiферацiї наближається до свого мiнiмуму. В дiапазонi 1600–2000 мкг/мл пролiферативна активнiсть знову зростає, що ко- релює зi зменшенням рiвня АФК, ФI та цитотоксичнiстю наночастинок. Якщо чотири графiки (див. рис. 1) накласти вiдносно концентрацiї на одну координатну вiсь, то прослiдкувується залежнiсть мiж даними. Умовно подiливши графiк на три зони за концентрацiєю наночастинок, можна зробити такi висновки. В дiапазонi 0–1000 мкг/мл поступово зростає кiлькiсть наночастинок, збiльшується ФI та рiвень АФК, знижується число живих клiтин та пролiферативна активнiсть. Зi збiльшенням кiлькостi поглинених наночастинок пiдвищується рiвень АФК (порiвняно з контролем), а це призводить до заги- белi клiтин. Також фактором, що стимулює зростання рiвня АФК, може бути пiдсилення фагоцитозу. При концентрацiї 1000–1600 мкг/мл кiлькiсть мертвих клiтин, рiвень АФК та ФI досягають максимуму. Судячи з рiзкого зростання рiвня АФК, ефективнiсть роботи антиоксидантної системи рiзко знижується. На концентрацiї 1600 мкг/мл пересiкаються ма- ксимуми та мiнiмуми усiх показникiв. У дiапазонi 1600–2000 мкг/мкл поступово знижується ФI, рiвень АФК, збiльшується кiлькiсть живих клiтин. Модифiкацiя наночастинок гiалуроновою кислотою. Iснує декiлька шляхiв потраплян- ня лiкарських препаратiв в клiтини. Одним iз них є рецепторопосередкований ендоцитоз. В клiтинах остеосаркоми виявлено пiдвищену експресiю рецептора CD44 [9]. Лiгандом для нього є HA. Саме її було використано для модифiкацiї наночастинок та цiльової достав- ки. Крiм того, НА, на вiдмiну вiд iнших цiльових лiгандiв, є економiчно доступною. Для перевiрки здатностi клiтин MG-63 поглинати наночастинки культуру iнкубували з модифi- кованими наночастинками (CoFe2O4–HA) (рис. 2). Модифiкацiя наночастинок CoFe2O4–HA препаратом метотрексат. Наночастинки CoFe2O4–HA були модифiкованi цитостатичним препаратом МТ. За механiзмом дiї даний препарат є антагонiстом фолiєвої кислоти. Наноконструкцiя мала таку будову: CoFe2O4– МТ–НА. Структура типу “троянський кiнь” має важливе значення. Ракова клiтина зв’язується з НА та поглинає наночастинку з препаратом. Це дозволяє уникнути механiзму стiйкостi до хiмiотерапiї. При потрапляннi в лiзосоми конструкцiя деградує i компоненти поступово ди- фундують в цитозоль. Для визначення цитотоксичностi даної конструкцiї проводився МТТ тест. Найбiльше зниження пролiферативної активностi спостерiгається при концентрацiї 1000 мкг/мл (рис. 3). З подальшим збiльшенням концентрацiї графiк виходить на плато. ISSN 1025-6415 Доповiдi Нацiональної академiї наук України, 2013, №6 159 Рис. 2. Здатнiсть клiтин MG-63 поглинати наночастинки: а — контроль (без частинок); б — iнкубацiя з наночастинками Рис. 3. Рiвень пролiферативної активностi клiтин MG-63 пiсля iнкубацiї з наночастинками CoFe2O4–МТ– НА. Iнкубацiя протягом 24 год Таким чином, дослiджено вплив наночастинок на культуру клiтин J774, а саме: визна- чено цитотоксичнiсть та здатнiсть iндукувати окисний вибух. Найвищу цитотоксичнiсть та зростання рiвня АФК вiдмiчено при концентрацiї 1600 мкг/мм. Встановлено взаємо- зв’язок мiж рiвнем цитотоксичностi, рiвнем АФК та ФI. Показано здатнiсть клiтин MG-63 ефективно поглинати наночастинки CoFe2O4–HA. Це свiдчить про те, що гiалуронова кис- лота може виконувати роль лiганду для доставки наночастинок в клiтини остеосаркоми. Виявлено ефективну цитотоксичну дiю наночастинок складу CoFe2O4–МТ–НА на клiтини остеосаркоми. 1. Василенко И.В., Гавриленко К.С., Котенко И.Е. и др. Влияние условий формирования на строе- ние, морфологию и магнитные свойства наноразмерных ферритов MIIFeIII2O4 (M = Mn, Co, Ni) и Fe2O3 // Теорет. и эксперим. химия. – 2007. – 43, № 5. – С. 323–329. 2. Strober W. APPENDIX 3B Trypan Blue Exclusion Test of Cell Viability // Current Protocols in Immuno- logy. – 2001. – DOI:10.1002/0471142735.ima03bs21. 160 ISSN 1025-6415 Reports of the National Academy of Sciences of Ukraine, 2013, №6 3. Pruzanski W., Saito S. Comparative study of phagocytosis and intracellular bactericidal activity of human monocytes and polymorphonuclear cells // Inflammation. – 1988. – 12, No 1. – P. 87–97. 4. Esfandiari N. Utility of the nitroblue tetrazolium reduction test for assessment of reactive oxygen species production by seminal leukocytes and spermatozoa // J. Androl. – 2003. – 24. – P. 862–870. 5. Song M., Moon W.K. Kim Y. et al. Labeling efficacy of Superparamagnetic Iron Oxide Nanoparticles to human neural stem cells: comparison of ferrumoxides, monocrystalline iron oxide, cross-linked iron oxide (CLIO) – NH2 and tat-CLIO // Korean J. Radiol. – 2007. – 8, No 5. – P. 365–371. 6. Kim D.-H., Kim K.-M., Kim K.-N. et al. In vitro & in vivo toxicity of CoFe2O4 for application to magnetic hyperthermia // Nanotech. – 2007. – 2. – P. 748–751. 7. Bhattacharjee S., de Haan L.H. J., Evers N.M. et al. Role of surface charge and oxidative stress in cytotoxi- city of organic monolayer-coated silicon nanoparticles towards macrophage NR8383 cells // Particle and Fibre Toxicol. – 2010. – 7: 25. – DOI:10.1186/1743-8977-7-25. 8. Moghimi S.M. Modulation of lymphatic distribution of subcutaneously injected poloxamer 407-coated nanospheres: the effect of the ethylene oxide chain configuration // FEBS Lett. – 2003. – 540. – P. 241–244. 9. Ma Q., Zhou Y., Ma B. et al. The clinical value of CXCR4, HER2 and CD44 in human osteosarcoma: A pilot study // Oncol. Lett. – 2012. – 3, No 4. – P. 797–801. Надiйшло до редакцiї 16.11.2012Iнститут молекулярної бiологiї i генетики НАН України, Київ Iнститут фiзичної хiмiї iм. Л. В. Писаржевського НАН України, Київ Д.С. Ефременко, П. Г. Телегеева, А. В. Яковенко, И. В. Василенко, Г. Д. Телегеев, член-корреспондент НАН Украины С.С. Малюта Использование наночастиц CoFe2O4 для целевой доставки метотрексата в клетки остеосаркомы Исследовано влияние наночастиц CoFe2O4 на пролиферацию культуры мышиных макрофа- гов J774 и оценена возможность использования гиалуроновой кислоты в качестве лиганда для целевой терапии. Получены некоторые характеристики наночастиц, такие как зна- чения токсических концентраций, способность индуцировать оксидативный стресс и т. д. Также оценено влияние наноконструкции CoFe2O4–Метотрексат–Гиалуроновая кислота на пролиферативную активность культуры остеосаркомы человека MG-63. D. S. Iefremenko, P.G. Telegeeva, A.V. Yakovenko, I. V. Vasilenko, G.D. Telegeev, Corresponding Member of the NAS of Ukraine S. S. Maluta Using CoFe2O4 nanoparticles for targeted delivery of methotrexate in osteosarcoma cells In order to develop the technology of targeted delivery therapy based on ferromagnetic nanoparticles CoFe2O4, we studied its influence on the biogenesis of mouse macrophage J774 cell culture and possibility to use hyaluronic acid as a ligand for target therapy. As a result, we have determined different characteristics of nanoparticles (such as the optimal non-toxic concentration of nanopar- ticles, ability of nanoparticles to induce oxidative stress) and estimated the influence of the nano- construction CoFe2O4-Methotrexate-Hyaluronic Acid on the proliferative activity of MG-63 cell culture. ISSN 1025-6415 Доповiдi Нацiональної академiї наук України, 2013, №6 161