Характеризація очищеної рекомбінантної субодиниці В дифтерійного токсину як інструмента його дослідження
Очищення препаратів рекомбінантної субодиниці В (SbB) дифтерійного токсину (DT), синтезованої в цитоплазмі, периплазмі і нерозчинних тільцях включення клітин Escherichia coli, проведене за допомогою металоафінної хроматографії після руйнування бактеріальної ДНК та клітинної стінки ензимами, дало...
Saved in:
| Published in: | Доповіді НАН України |
|---|---|
| Date: | 2017 |
| Main Authors: | , , , , , , |
| Format: | Article |
| Language: | Ukrainian |
| Published: |
Видавничий дім "Академперіодика" НАН України
2017
|
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/126418 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Характеризація очищеної рекомбінантної субодиниці В дифтерійного токсину як інструмента його дослідження / К.Ю. Манойлов, O.Б. Горбатюк, М.О. Усенко, О.Я. Шатурський, T.O. Борисова, Д.В. Колибо, С.В. Комісаренко // Доповіді Національної академії наук України. — 2017. — № 2. — С. 88-99. — Бібліогр.: 15 назв. — укр. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-126418 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Манойлов, К.Ю. Горбатюк, O.Б. Усенко, М.О. Шатурський, О.Я. Борисова, T.O. Колибо, Д.В. Комісаренко, С.В. 2017-11-23T16:03:46Z 2017-11-23T16:03:46Z 2017 Характеризація очищеної рекомбінантної субодиниці В дифтерійного токсину як інструмента його дослідження / К.Ю. Манойлов, O.Б. Горбатюк, М.О. Усенко, О.Я. Шатурський, T.O. Борисова, Д.В. Колибо, С.В. Комісаренко // Доповіді Національної академії наук України. — 2017. — № 2. — С. 88-99. — Бібліогр.: 15 назв. — укр. 1025-6415 DOI: doi.org/10.15407/dopovidi2017.02.088 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/126418 577.352.4:577.2 Очищення препаратів рекомбінантної субодиниці В (SbB) дифтерійного токсину (DT), синтезованої в цитоплазмі, периплазмі і нерозчинних тільцях включення клітин Escherichia coli, проведене за допомогою металоафінної хроматографії після руйнування бактеріальної ДНК та клітинної стінки ензимами, дало можливість позбутися домішок ендогенних пороформуючих протеїнів. Показано, що рекомбінантні похідні DT, SbB та CRM197 мають однакову спорідненість з рецепторами чутливих та резистентних до токсину клітин ліній Vero і L929 відповідно. Прикладання позитивного потенціалу з боку додавання SbВ (0,3 мкг/мл) до фосфатидилетаноламінвмісної бішарової мембрани у розчині 1 M KCl (pH 4,8) призводить до утворення потенціалозалежних іонних каналів з провідністю 20 пСм, як показано у класичних дослідженнях природного DT. За даними порівняльного аналізу, характеристики утворення і функціонування каналів DT найкраще відтворюються SbB, синтезованою в неактивній формі у вигляді тілець включення, та ренатурованою in vitro. Очистка препаратов рекомбинантной субъединицы В (SbB) дифтерийного токсина (DT), синтезированной в цитоплазме, периплазме и твердых тельцах включения клеток Escherichia coli, проведенная с помощью металлоаффинной хроматографии после разрушения бактериальной ДНК и клеточной стенки энзимами, позволила удалить примеси эндогенных пороформирующих белков. Показано, что рекомбинантные производные DT, SbB и CRM197 имеют одинаковое сродство с рецепторами чувствительных и резистентных к токсину клеток линий Vero і L929. Приложение положительного потенциала со стороны добавления SbВ (0,3 мкг/мл) к фосфатидилэтаноламинсодержащей бислойной мембране в растворе 1 M KCl (pH 4,8) приводит к образованию потенциалозависимых ионных каналов с проводимостью 20 пСм, как показано в классических исследованиях DT природного происхождения. Согласно данным сравнительного анализа, характерное для DT образование и функционирование каналов лучше воспроизводятся SbB, синтезированной в неактивной форме в виде телец включения, и ренатурированной in vitro. The purification of recombinant diphtheria toxin (DT) derivative, fragment or subunit B (SbB) synthesized in cytoplasm, periplasm, and solid inclusion bodies of E.coli, by metal-affinity chromatography following the enzymatic digestion of bacterial cell walls and DNA allowed us to avoid the contamination by endogenous poreforming proteins. The recombinant DT derivatives, SbB, and CRM197 are shown to bind the receptors of DTsusceptible cells Vero and non-susceptible cells L929 with equal affinity. The introduction of SbB (0.3 μg/ml) at positive voltages from the side of a phosphatidylethanolamine-containing bilayer membrane, where the derivative was added, results in the creation of potential-dependent ionic channels with the conductance of 20 pS in the bathing solution of 1M KCl buffered at pH 4.8 as had been shown in the classic studies of wild-type DT. The comparative analysis has shown that the channel-forming abilities of wild-type DT are best reproduced by SbB synthesized in the non-active form of inclusion bodies and renaturated in vitro. Автори висловлюють глибоку вдячність Dr. A.N. Chanturiya із фірми Eastern Scientific LLC, Rockville, США за допомогу, надану у встановленні обладнання для вимірювання іонпровідних властивостей БЛМ і обробці результатів з використанням спеціального програмного забезпечення. Всеточкова гістограма розподілу провідностей поодиноких каналів побудована канд. біол. наук Л.О. Касаткіною з відділу нейрохімії Інституту біохімії ім. О.В. Палладіна НАН України з використанням спеціального програмного забезпечення. uk Видавничий дім "Академперіодика" НАН України Доповіді НАН України Біохімія Характеризація очищеної рекомбінантної субодиниці В дифтерійного токсину як інструмента його дослідження Характеристика очищенной рекомбинантной субъединицы В дифтерийного токсина как инструмента его исследования The characte rization of purified recombinant fragment B as a tool to study diphtheria toxin Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Характеризація очищеної рекомбінантної субодиниці В дифтерійного токсину як інструмента його дослідження |
| spellingShingle |
Характеризація очищеної рекомбінантної субодиниці В дифтерійного токсину як інструмента його дослідження Манойлов, К.Ю. Горбатюк, O.Б. Усенко, М.О. Шатурський, О.Я. Борисова, T.O. Колибо, Д.В. Комісаренко, С.В. Біохімія |
| title_short |
Характеризація очищеної рекомбінантної субодиниці В дифтерійного токсину як інструмента його дослідження |
| title_full |
Характеризація очищеної рекомбінантної субодиниці В дифтерійного токсину як інструмента його дослідження |
| title_fullStr |
Характеризація очищеної рекомбінантної субодиниці В дифтерійного токсину як інструмента його дослідження |
| title_full_unstemmed |
Характеризація очищеної рекомбінантної субодиниці В дифтерійного токсину як інструмента його дослідження |
| title_sort |
характеризація очищеної рекомбінантної субодиниці в дифтерійного токсину як інструмента його дослідження |
| author |
Манойлов, К.Ю. Горбатюк, O.Б. Усенко, М.О. Шатурський, О.Я. Борисова, T.O. Колибо, Д.В. Комісаренко, С.В. |
| author_facet |
Манойлов, К.Ю. Горбатюк, O.Б. Усенко, М.О. Шатурський, О.Я. Борисова, T.O. Колибо, Д.В. Комісаренко, С.В. |
| topic |
Біохімія |
| topic_facet |
Біохімія |
| publishDate |
2017 |
| language |
Ukrainian |
| container_title |
Доповіді НАН України |
| publisher |
Видавничий дім "Академперіодика" НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Характеристика очищенной рекомбинантной субъединицы В дифтерийного токсина как инструмента его исследования The characte rization of purified recombinant fragment B as a tool to study diphtheria toxin |
| description |
Очищення препаратів рекомбінантної субодиниці В (SbB) дифтерійного токсину (DT), синтезованої в
цитоплазмі, периплазмі і нерозчинних тільцях включення клітин Escherichia coli, проведене за допомогою
металоафінної хроматографії після руйнування бактеріальної ДНК та клітинної стінки ензимами, дало
можливість позбутися домішок ендогенних пороформуючих протеїнів. Показано, що рекомбінантні
похідні DT, SbB та CRM197 мають однакову спорідненість з рецепторами чутливих та резистентних
до токсину клітин ліній Vero і L929 відповідно. Прикладання позитивного потенціалу з боку додавання
SbВ (0,3 мкг/мл) до фосфатидилетаноламінвмісної бішарової мембрани у розчині 1 M KCl (pH 4,8) призводить до утворення потенціалозалежних іонних каналів з провідністю 20 пСм, як показано у класичних
дослідженнях природного DT. За даними порівняльного аналізу, характеристики утворення і функціонування каналів DT найкраще відтворюються SbB, синтезованою в неактивній формі у вигляді тілець включення,
та ренатурованою in vitro.
Очистка препаратов рекомбинантной субъединицы В (SbB) дифтерийного токсина (DT), синтезированной в цитоплазме, периплазме и твердых тельцах включения клеток Escherichia coli, проведенная с помощью металлоаффинной хроматографии после разрушения бактериальной ДНК и клеточной стенки энзимами, позволила удалить примеси эндогенных пороформирующих белков. Показано, что рекомбинантные
производные DT, SbB и CRM197 имеют одинаковое сродство с рецепторами чувствительных и резистентных к токсину клеток линий Vero і L929. Приложение положительного потенциала со стороны добавления
SbВ (0,3 мкг/мл) к фосфатидилэтаноламинсодержащей бислойной мембране в растворе 1 M KCl (pH 4,8)
приводит к образованию потенциалозависимых ионных каналов с проводимостью 20 пСм, как показано в
классических исследованиях DT природного происхождения. Согласно данным сравнительного анализа,
характерное для DT образование и функционирование каналов лучше воспроизводятся SbB, синтезированной в неактивной форме в виде телец включения, и ренатурированной in vitro.
The purification of recombinant diphtheria toxin (DT) derivative, fragment or subunit B (SbB) synthesized in
cytoplasm, periplasm, and solid inclusion bodies of E.coli, by metal-affinity chromatography following the enzymatic
digestion of bacterial cell walls and DNA allowed us to avoid the contamination by endogenous poreforming
proteins. The recombinant DT derivatives, SbB, and CRM197 are shown to bind the receptors of DTsusceptible
cells Vero and non-susceptible cells L929 with equal affinity. The introduction of SbB (0.3 μg/ml) at
positive voltages from the side of a phosphatidylethanolamine-containing bilayer membrane, where the derivative
was added, results in the creation of potential-dependent ionic channels with the conductance of 20 pS in the
bathing solution of 1M KCl buffered at pH 4.8 as had been shown in the classic studies of wild-type DT. The
comparative analysis has shown that the channel-forming abilities of wild-type DT are best reproduced by SbB
synthesized in the non-active form of inclusion bodies and renaturated in vitro.
|
| issn |
1025-6415 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/126418 |
| citation_txt |
Характеризація очищеної рекомбінантної субодиниці В дифтерійного токсину як інструмента його дослідження / К.Ю. Манойлов, O.Б. Горбатюк, М.О. Усенко, О.Я. Шатурський, T.O. Борисова, Д.В. Колибо, С.В. Комісаренко // Доповіді Національної академії наук України. — 2017. — № 2. — С. 88-99. — Бібліогр.: 15 назв. — укр. |
| work_keys_str_mv |
AT manoilovkû harakterizacíâočiŝenoírekombínantnoísubodinicívdifteríinogotoksinuâkínstrumentaiogodoslídžennâ AT gorbatûkob harakterizacíâočiŝenoírekombínantnoísubodinicívdifteríinogotoksinuâkínstrumentaiogodoslídžennâ AT usenkomo harakterizacíâočiŝenoírekombínantnoísubodinicívdifteríinogotoksinuâkínstrumentaiogodoslídžennâ AT šatursʹkiioâ harakterizacíâočiŝenoírekombínantnoísubodinicívdifteríinogotoksinuâkínstrumentaiogodoslídžennâ AT borisovato harakterizacíâočiŝenoírekombínantnoísubodinicívdifteríinogotoksinuâkínstrumentaiogodoslídžennâ AT kolibodv harakterizacíâočiŝenoírekombínantnoísubodinicívdifteríinogotoksinuâkínstrumentaiogodoslídžennâ AT komísarenkosv harakterizacíâočiŝenoírekombínantnoísubodinicívdifteríinogotoksinuâkínstrumentaiogodoslídžennâ AT manoilovkû harakteristikaočiŝennoirekombinantnoisubʺedinicyvdifteriinogotoksinakakinstrumentaegoissledovaniâ AT gorbatûkob harakteristikaočiŝennoirekombinantnoisubʺedinicyvdifteriinogotoksinakakinstrumentaegoissledovaniâ AT usenkomo harakteristikaočiŝennoirekombinantnoisubʺedinicyvdifteriinogotoksinakakinstrumentaegoissledovaniâ AT šatursʹkiioâ harakteristikaočiŝennoirekombinantnoisubʺedinicyvdifteriinogotoksinakakinstrumentaegoissledovaniâ AT borisovato harakteristikaočiŝennoirekombinantnoisubʺedinicyvdifteriinogotoksinakakinstrumentaegoissledovaniâ AT kolibodv harakteristikaočiŝennoirekombinantnoisubʺedinicyvdifteriinogotoksinakakinstrumentaegoissledovaniâ AT komísarenkosv harakteristikaočiŝennoirekombinantnoisubʺedinicyvdifteriinogotoksinakakinstrumentaegoissledovaniâ AT manoilovkû thecharacterizationofpurifiedrecombinantfragmentbasatooltostudydiphtheriatoxin AT gorbatûkob thecharacterizationofpurifiedrecombinantfragmentbasatooltostudydiphtheriatoxin AT usenkomo thecharacterizationofpurifiedrecombinantfragmentbasatooltostudydiphtheriatoxin AT šatursʹkiioâ thecharacterizationofpurifiedrecombinantfragmentbasatooltostudydiphtheriatoxin AT borisovato thecharacterizationofpurifiedrecombinantfragmentbasatooltostudydiphtheriatoxin AT kolibodv thecharacterizationofpurifiedrecombinantfragmentbasatooltostudydiphtheriatoxin AT komísarenkosv thecharacterizationofpurifiedrecombinantfragmentbasatooltostudydiphtheriatoxin |
| first_indexed |
2025-12-07T13:31:39Z |
| last_indexed |
2025-12-07T13:31:39Z |
| _version_ |
1850856491677908992 |