Получение культуры "бородатых" корней, каллусных и суспензионных клеточных культур моркови (Daucus carota L.), способных экспрессировать человеческий интерферон альфа-2b
Описано получение суспензионных, каллусных и корневых культур, инициированных из растений моркови сортов Нантская и Перфекция, которые согласно предыдущим исследованиям характеризовались наиболеевысоким уровнем содержания рекомбинантного белка человеческого интерферона альфа-2b и проявляли наиболее...
Saved in:
| Published in: | Цитология и генетика |
|---|---|
| Date: | 2012 |
| Main Authors: | , , , , |
| Format: | Article |
| Language: | Russian |
| Published: |
Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України
2012
|
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/126451 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Получение культуры "бородатых" корней, каллусных и суспензионных клеточных культур моркови (Daucus carota L.), способных экспрессировать человеческий интерферон альфа-2b / Ю.С. Лучакивская, З.М. Олевинская, Е.М. Кищенко, Н.Я. Спивак, Н.В. Кучук // Цитология и генетика. — 2012. — Т. 46, № 1. — С. 18-26. — Бібліогр.: 41 назв. — рос. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-126451 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Лучакивская, Ю.С. Олевинская, З.М. Кищенко, Е.М. Спивак, Н.Я. Кучук, Н.В. 2017-11-23T21:17:21Z 2017-11-23T21:17:21Z 2012 Получение культуры "бородатых" корней, каллусных и суспензионных клеточных культур моркови (Daucus carota L.), способных экспрессировать человеческий интерферон альфа-2b / Ю.С. Лучакивская, З.М. Олевинская, Е.М. Кищенко, Н.Я. Спивак, Н.В. Кучук // Цитология и генетика. — 2012. — Т. 46, № 1. — С. 18-26. — Бібліогр.: 41 назв. — рос. 0564-3783 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/126451 602.2:582.5/.9+57.086.83 Описано получение суспензионных, каллусных и корневых культур, инициированных из растений моркови сортов Нантская и Перфекция, которые согласно предыдущим исследованиям характеризовались наиболеевысоким уровнем содержания рекомбинантного белка человеческого интерферона альфа-2b и проявляли наиболее высокую антивирусную активность белковых экстрактов (до 12,8 • 10³ МЕ/мг СРБ. (Антивирусная активность экстрактов каллусных образований была значительно ниже по сравнению с активностью растительных экстрактов исходных организмов. Однако уровень антивирусной активности экстрактов суспензионных культур (до 11,42 • 10³ МЕ/мг СРБ) и экстрактов Ri-корней (до 8,40 • 10³ МЕ/мг СРБ) был сопоставимым с аналогичными показателями антивирусной активности рекомбинантного белка листьев трансгенных растений моркови, что свидетельствует о возможности использования описанных культур для относительно быстрого получения рекомбинантного терапевтического белка при лечении и профилактике заболеваний вирусной природы. Описано отримання суспензійних, калюсних та кореневих культур, ініційованих з рослин моркви Нантська та Перфекція, які згідно з попередніми дослідженнями демонстрували найбільш високий рівень вмісту рекомбінантного білка людського інтерферону альфа-2b та найбільш високу антивірусну активність білкових екстрактів (до 12.8 • 10³ МО/мг СРБ). Антивірусна активність екстрактів калюсних утворень була значно нижчою порівняно з активністю рослинних екстрактів вихідних організмів. Проте рівень антивірусної активності екстрактів суспензійних культур (до 11,42 • 10³ МО/мг СРБ) та екстрактів Ri-коренів (до 8,4 • 10³ МО/мг СРБ) був подібним до аналогічних показників антивірусної активності сумарного білка листя трансгенних рослин моркви, що вказує на можливість використання описаних культур для відносно швидкого одержання рекомбінантного терапевтичного білка при лікуванні і профілактиці захворювань вірусної природи. Here we report the obtaining of suspension, callus and hairy root culture initiated from carrot plants of Nantskaya and Perfektzya variety with the highest level of recombinant human interferon α-2b accumulation exhibited the highest level of plant protein extract antiviral activity (up to 12.8 • 10³ IU/mg TSP). The antiviral activity of callus extracts was significantly lower comparing to the activity of plant extracts from parent organisms. However, the antiviral activity level of suspension culture extracts (up to 4.42 • 10³ IU/mg TSP) and Ri-root ones (up to 4.42 • 10³ IU/mg TSP) appeared to be comparable to analogical data of antiviral activity of transgenic carrot leaf extracts, this way the described cultures could be possibly used for comparatively speedy obtaining of recombinant therapeutic protein for curing and preventing of virus diseases. ru Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України Цитология и генетика Оригинальные работы Получение культуры "бородатых" корней, каллусных и суспензионных клеточных культур моркови (Daucus carota L.), способных экспрессировать человеческий интерферон альфа-2b Одержання культури «волохатих» коренів, калюсних та суспензійних клітинних культур моркви (Daucus carota l.), здатних експресувати людський інтерферон альфа-2b Obtaining of hairy-root, callus and suspension carrot culture (Daucus carota l.) able to accumulate human interferon alpha-2b Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Получение культуры "бородатых" корней, каллусных и суспензионных клеточных культур моркови (Daucus carota L.), способных экспрессировать человеческий интерферон альфа-2b |
| spellingShingle |
Получение культуры "бородатых" корней, каллусных и суспензионных клеточных культур моркови (Daucus carota L.), способных экспрессировать человеческий интерферон альфа-2b Лучакивская, Ю.С. Олевинская, З.М. Кищенко, Е.М. Спивак, Н.Я. Кучук, Н.В. Оригинальные работы |
| title_short |
Получение культуры "бородатых" корней, каллусных и суспензионных клеточных культур моркови (Daucus carota L.), способных экспрессировать человеческий интерферон альфа-2b |
| title_full |
Получение культуры "бородатых" корней, каллусных и суспензионных клеточных культур моркови (Daucus carota L.), способных экспрессировать человеческий интерферон альфа-2b |
| title_fullStr |
Получение культуры "бородатых" корней, каллусных и суспензионных клеточных культур моркови (Daucus carota L.), способных экспрессировать человеческий интерферон альфа-2b |
| title_full_unstemmed |
Получение культуры "бородатых" корней, каллусных и суспензионных клеточных культур моркови (Daucus carota L.), способных экспрессировать человеческий интерферон альфа-2b |
| title_sort |
получение культуры "бородатых" корней, каллусных и суспензионных клеточных культур моркови (daucus carota l.), способных экспрессировать человеческий интерферон альфа-2b |
| author |
Лучакивская, Ю.С. Олевинская, З.М. Кищенко, Е.М. Спивак, Н.Я. Кучук, Н.В. |
| author_facet |
Лучакивская, Ю.С. Олевинская, З.М. Кищенко, Е.М. Спивак, Н.Я. Кучук, Н.В. |
| topic |
Оригинальные работы |
| topic_facet |
Оригинальные работы |
| publishDate |
2012 |
| language |
Russian |
| container_title |
Цитология и генетика |
| publisher |
Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Одержання культури «волохатих» коренів, калюсних та суспензійних клітинних культур моркви (Daucus carota l.), здатних експресувати людський інтерферон альфа-2b Obtaining of hairy-root, callus and suspension carrot culture (Daucus carota l.) able to accumulate human interferon alpha-2b |
| description |
Описано получение суспензионных, каллусных и корневых культур, инициированных из растений моркови сортов Нантская и Перфекция, которые согласно предыдущим исследованиям характеризовались наиболеевысоким уровнем содержания рекомбинантного белка человеческого интерферона альфа-2b и проявляли наиболее высокую антивирусную активность белковых экстрактов (до 12,8 • 10³ МЕ/мг СРБ. (Антивирусная активность экстрактов каллусных образований была значительно ниже по сравнению с активностью растительных экстрактов исходных организмов. Однако уровень антивирусной активности экстрактов суспензионных культур (до 11,42 • 10³ МЕ/мг СРБ) и экстрактов Ri-корней (до 8,40 • 10³ МЕ/мг СРБ) был сопоставимым с аналогичными показателями антивирусной активности рекомбинантного белка листьев трансгенных растений моркови, что свидетельствует о возможности использования описанных культур для относительно быстрого получения рекомбинантного терапевтического белка при лечении и профилактике заболеваний вирусной природы.
Описано отримання суспензійних, калюсних та кореневих культур, ініційованих з рослин моркви Нантська та Перфекція, які згідно з попередніми дослідженнями демонстрували найбільш високий рівень вмісту рекомбінантного білка людського інтерферону альфа-2b та найбільш високу антивірусну активність білкових екстрактів (до 12.8 • 10³ МО/мг СРБ). Антивірусна активність екстрактів калюсних утворень була значно нижчою порівняно з активністю рослинних екстрактів вихідних організмів. Проте рівень антивірусної активності екстрактів суспензійних культур (до 11,42 • 10³ МО/мг СРБ) та екстрактів Ri-коренів (до 8,4 • 10³ МО/мг СРБ) був подібним до аналогічних показників антивірусної активності сумарного білка листя трансгенних рослин моркви, що вказує на можливість використання описаних культур для відносно швидкого одержання рекомбінантного терапевтичного білка при лікуванні і профілактиці захворювань вірусної природи.
Here we report the obtaining of suspension, callus and hairy root culture initiated from carrot plants of Nantskaya and Perfektzya variety with the highest level of recombinant human interferon α-2b accumulation exhibited the highest level of plant protein extract antiviral activity (up to 12.8 • 10³ IU/mg TSP). The antiviral activity of callus extracts was significantly lower comparing to the activity of plant extracts from parent organisms. However, the antiviral activity level of suspension culture extracts (up to 4.42 • 10³ IU/mg TSP) and Ri-root ones (up to 4.42 • 10³ IU/mg TSP) appeared to be comparable to analogical data of antiviral activity of transgenic carrot leaf extracts, this way the described cultures could be possibly used for comparatively speedy obtaining of recombinant therapeutic protein for curing and preventing of virus diseases.
|
| issn |
0564-3783 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/126451 |
| citation_txt |
Получение культуры "бородатых" корней, каллусных и суспензионных клеточных культур моркови (Daucus carota L.), способных экспрессировать человеческий интерферон альфа-2b / Ю.С. Лучакивская, З.М. Олевинская, Е.М. Кищенко, Н.Я. Спивак, Н.В. Кучук // Цитология и генетика. — 2012. — Т. 46, № 1. — С. 18-26. — Бібліогр.: 41 назв. — рос. |
| work_keys_str_mv |
AT lučakivskaâûs polučeniekulʹturyborodatyhkorneikallusnyhisuspenzionnyhkletočnyhkulʹturmorkovidaucuscarotalsposobnyhékspressirovatʹčelovečeskiiinterferonalʹfa2b AT olevinskaâzm polučeniekulʹturyborodatyhkorneikallusnyhisuspenzionnyhkletočnyhkulʹturmorkovidaucuscarotalsposobnyhékspressirovatʹčelovečeskiiinterferonalʹfa2b AT kiŝenkoem polučeniekulʹturyborodatyhkorneikallusnyhisuspenzionnyhkletočnyhkulʹturmorkovidaucuscarotalsposobnyhékspressirovatʹčelovečeskiiinterferonalʹfa2b AT spivaknâ polučeniekulʹturyborodatyhkorneikallusnyhisuspenzionnyhkletočnyhkulʹturmorkovidaucuscarotalsposobnyhékspressirovatʹčelovečeskiiinterferonalʹfa2b AT kučuknv polučeniekulʹturyborodatyhkorneikallusnyhisuspenzionnyhkletočnyhkulʹturmorkovidaucuscarotalsposobnyhékspressirovatʹčelovečeskiiinterferonalʹfa2b AT lučakivskaâûs oderžannâkulʹturivolohatihkorenívkalûsnihtasuspenzíinihklítinnihkulʹturmorkvidaucuscarotalzdatnihekspresuvatilûdsʹkiiínterferonalʹfa2b AT olevinskaâzm oderžannâkulʹturivolohatihkorenívkalûsnihtasuspenzíinihklítinnihkulʹturmorkvidaucuscarotalzdatnihekspresuvatilûdsʹkiiínterferonalʹfa2b AT kiŝenkoem oderžannâkulʹturivolohatihkorenívkalûsnihtasuspenzíinihklítinnihkulʹturmorkvidaucuscarotalzdatnihekspresuvatilûdsʹkiiínterferonalʹfa2b AT spivaknâ oderžannâkulʹturivolohatihkorenívkalûsnihtasuspenzíinihklítinnihkulʹturmorkvidaucuscarotalzdatnihekspresuvatilûdsʹkiiínterferonalʹfa2b AT kučuknv oderžannâkulʹturivolohatihkorenívkalûsnihtasuspenzíinihklítinnihkulʹturmorkvidaucuscarotalzdatnihekspresuvatilûdsʹkiiínterferonalʹfa2b AT lučakivskaâûs obtainingofhairyrootcallusandsuspensioncarrotculturedaucuscarotalabletoaccumulatehumaninterferonalpha2b AT olevinskaâzm obtainingofhairyrootcallusandsuspensioncarrotculturedaucuscarotalabletoaccumulatehumaninterferonalpha2b AT kiŝenkoem obtainingofhairyrootcallusandsuspensioncarrotculturedaucuscarotalabletoaccumulatehumaninterferonalpha2b AT spivaknâ obtainingofhairyrootcallusandsuspensioncarrotculturedaucuscarotalabletoaccumulatehumaninterferonalpha2b AT kučuknv obtainingofhairyrootcallusandsuspensioncarrotculturedaucuscarotalabletoaccumulatehumaninterferonalpha2b |
| first_indexed |
2025-11-26T09:57:54Z |
| last_indexed |
2025-11-26T09:57:54Z |
| _version_ |
1850618303895044096 |
| fulltext |
18 ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2012. ¹ 1
© Þ.Ñ. ËÓ×ÀÊÈÂÑÊÀß, Ç.Ì. ÎËÅÂÈÍÑÊÀß,
Å.Ì. ÊÈÙÅÍÊÎ, Í.ß. ÑÏÈÂÀÊ, Í.Â. ÊÓ×ÓÊ, 2012
УДК 602.2:582.5/.9+57.086.83
Ю.С. ЛУЧАКИВСКАЯ 1, З.М. ОЛЕВИНСКАЯ 2,
Е.М. КИЩЕНКО 1, Н.Я. СПИВАК 2, Н.В. КУЧУК 1
1 Институт клеточной биологии и генетической инженерии
НАН Украины, Киев
2 Институт микробиологии и вирусологии им. Д.К. Заболотного
НАН Украины, Киев
E-mail: yu.luchakivskaya@gmail.com
ПОЛУЧЕНИЕ КУЛЬТУРЫ
«БОРОДАТЫХ» КОРНЕЙ,
КАЛЛУСНЫХ И СУСПЕНЗИОННЫХ
КЛЕТОЧНЫХ КУЛЬТУР МОРКОВИ
(DAUCUS CAROTA L.), СПОСОБНЫХ
ЭКСПРЕССИРОВАТЬ ЧЕЛОВЕЧЕСКИЙ
ИНТЕРФЕРОН АЛЬФА-2b
Îïèñàíî ïîëó÷åíèå ñóñïåíçèîííûõ, êàëëóñíûõ è êîð-
íåâûõ êóëüòóð, èíèöèèðîâàííûõ èç ðàñòåíèé ìîðêîâè
ñîðòîâ Íàíòñêàÿ è Ïåðôåêöèÿ, êîòîðûå ñîãëàñíî ïðå-
äûäóùèì èññëåäîâàíèÿì õàðàêòåðèçîâàëèñü íàèáîëåå
âûñîêèì óðîâíåì ñîäåðæàíèÿ ðåêîìáèíàíòíîãî áåëêà
÷åëîâå÷åñêîãî èíòåðôåðîíà àëüôà-2b è ïðîÿâëÿëè íàè-
áîëåå âûñîêóþ àíòèâèðóñíóþ àêòèâíîñòü áåëêîâûõ
ýêñòðàêòîâ (äî 12,8 · 103 ÌÅ/ìã ÑÐÁ). Àíòèâèðóñíàÿ
àêòèâíîñòü ýêñòðàêòîâ êàëëóñíûõ îáðàçîâàíèé áûëà
çíà÷èòåëüíî íèæå ïî ñðàâíåíèþ ñ àêòèâíîñòüþ ðàñ-
òèòåëüíûõ ýêñòðàêòîâ èñõîäíûõ îðãàíèçìîâ. Îäíàêî
óðîâåíü àíòèâèðóñíîé àêòèâíîñòè ýêñòðàêòîâ ñóñïåí-
çèîííûõ êóëüòóð (äî 11,42 · 103 ÌÅ/ìã ÑÐÁ) è ýêñ-
òðàêòîâ Ri-êîðíåé (äî 8,40 · 103 ÌÅ/ìã ÑÐÁ) áûë
ñîïîñòàâèìûì ñ àíàëîãè÷íûìè ïîêàçàòåëÿìè àíòè-
âèðóñíîé àêòèâíîñòè ðåêîìáèíàíòíîãî áåëêà ëèñ-
òüåâ òðàíñãåííûõ ðàñòåíèé ìîðêîâè, ÷òî ñâèäåòåëü-
ñòâóåò î âîçìîæíîñòè èñïîëüçîâàíèÿ îïèñàííûõ êóëü-
òóð äëÿ îòíîñèòåëüíî áûñòðîãî ïîëó÷åíèÿ ðåêîìáèíàí-
òíîãî òåðàïåâòè÷åñêîãî áåëêà ïðè ëå÷åíèè è ïðî-
ôèëàêòèêå çàáîëåâàíèé âèðóñíîé ïðèðîäû.
Ââåäåíèå. Íåâûñîêàÿ ñåáåñòîèìîñòü êóëü-
òèâèðîâàíèÿ, îòñóòñòâèå íåîáõîäèìîñòè îñó-
ùåñòâëåíèÿ äîïîëíèòåëüíûõ ïîñòòðàíñëÿ-
öèîííûõ ìîäèôèêàöèé, áåçîïàñíîñòü ïðè-
ìåíåíèÿ ïîçâîëÿþò óñïåøíî èñïîëüçîâàòü
ðàñòèòåëüíûå ñèñòåìû â êà÷åñòâå áèîðåàê-
òîðîâ äëÿ ïîëó÷åíèÿ ôàðìàöåâòè÷åñêèõ áåë-
êîâ. Ïî ñðàâíåíèþ ñ èíòàêòíûìè ðàñòå-
íèÿìè, ê ìèíóñàì êîòîðûõ ìîæíî îòíåñòè
íèçêóþ óðîæàéíîñòü, äëèòåëüíûé ïåðèîä íà-
ðàùèâàíèÿ áèîìàññû, ãåíåòè÷åñêóþ è áèî-
ñèíòåòè÷åñêóþ íåñòàáèëüíîñòü ïðîäóöèðóåìî-
ãî ìàòåðèàëà, ñíèæåíèå ýêñïðåññèè çà ñ÷åò
ñèñòåìíîãî ìîë÷àíèÿ ãåíîâ, ýêîëîãè÷åñêóþ
óãðîçy ðàñïðîñòðàíåíèÿ ÃÌÎ è îñîáåííîñ-
òè ïåðåðàáîòêè è õðàíåíèÿ ñûðüÿ [1],
îñíîâíûì ïðåèìóùåñòâîì èñïîëüçîâàíèÿ
ðàñòèòåëüíîé êëåòî÷íîé êóëüòóðû in vitro
ÿâëÿþòñÿ: 1) âîçìîæíîñòü ïîñòîÿííîãî è
ñòàáèëüíîãî íàêîïëåíèÿ áèîìàññû ïóòåì
êîíòðîëÿ óñëîâèé îêðóæàþùåé ñðåäû [2];
2) áûñòðîå íàêàïëèâàíèå ðåêîìáèíàíòíûõ
áåëêîâ, ïîñêîëüêó êëåòî÷íàÿ êóëüòóðà ñïî-
ñîáíà ê çíà÷èòåëüíî áîëåå áûñòðûì òåìïàì
ðàçìíîæåíèÿ [3, 4]; 3) áîëåå ïðîñòûå è
äåøåâûå ñõåìû î÷èñòêè æåëàåìîãî ïðîäóêòà
[5]. Â ðÿäå ðàáîò ïîêàçàíà âîçìîæíîñòü èñ-
ïîëüçîâàíèÿ ñóñïåíçèîííûõ è êàëëóñíûõ
ðàñòèòåëüíûõ êóëüòóð äëÿ ïîëó÷åíèÿ ðåêîì-
áèíàíòíûõ ôàðìàöåâòè÷åñêèõ áåëêîâ: áðèî-
äèíà-1 è áðèîäèí-ïðîèçâîäíîãî îäíîöåïî÷-
íîãî èììóíîòîêñèíà [6], ÷åëîâå÷åñêîãî àëü-
ôà-1-àíòèòðèïñèíà [7] â ñóñïåíçèîííûõ
êóëüòóðàõ òàáàêà, ÷åëîâå÷åñêîãî àëüáóìèíà
â ñóñïåíçèîííîé êóëüòóðå ðèñà [8], êàðöèíî-
ýìáðèãåííîãî àíòèãåíà scFvT84.66 â êàë-
ëóñíîé êóëüòóðå ðèñà [8] è äð. Äëÿ ïðî-
äóêöèè ãëþêîöåðåáðîçèäàçû, àëüôàãàëàêòî-
çèäàçû, àöåòèëõîëèñòåðàçû, ïðîòèâîîïóõî-
ëåâîãî íåêðîçîãåííîãî ôàêòîðà ïðåäëàãàþò
èñïîëüçîâàòü ñóñïåíçèîííûå êóëüòóðû ìîð-
êîâè (www.protalix.com).
Âìåñòå c òåì êóëüòóðó íåäèôôåðåíöè-
ðîâàííûõ ðàñòèòåëüíûõ êëåòîê îòëè÷àåò
âûñîêèé óðîâåíü ãåíåòè÷åñêîé íåñòàáèëü-
íîñòè è, êàê ñëåäñòâèå, ñíèæåíèå ýêñ-
ïðåññèè òðàíñãåíîâ â äëèòåëüíî êóëüòè-
âèðóåìûõ òðàíñãåííûõ êëåòî÷íûõ ëèíèÿõ
[10–13].
ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2012. ¹ 1 19
Ïîëó÷åíèå êóëüòóðû «áîðîäàòûõ» êîðíåé, êàëëóñíûõ è ñóñïåíçèîííûõ êëåòî÷íûõ êóëüòóð
Îäíîé èç íàèáîëåå óäà÷íûõ ñ òî÷êè çðåíèÿ
áèîòåõíîëîãèè àëüòåðíàòèâíîé ðàñòèòåëüíîé
ñèñòåìîé ÿâëÿåòñÿ êóëüòóðà «áîðîäàòûõ» êîð-
íåé, ïðåèìóùåñòâàìè èñïîëüçîâàíèÿ êîòî-
ðîé ÿâëÿåòñÿ áûñòðûé ðîñò, äëèòåëüíàÿ ãå-
íåòè÷åñêàÿ è ñèíòåòè÷åñêàÿ ñòàáèëüíîñòü
[14], âîçìîæíîñòü ñèíòåçèðîâàíèÿ òåõ æå
âåùåñòâ, ÷òî è â êîðíÿõ òðàíñãåííûõ ðàñòåíèé
[15]. Òåõíîëîãèÿ èñïîëüçîâàíèÿ «áîðîäàòûõ»
êîðíåé äëÿ ïðîäóöèðîâàíèÿ ôàðìàöåâòè÷åñ-
êèõ ïðåïàðàòîâ ïîëó÷àåò âñå áîëüøåå ðàñ-
ïðîñòðàíåíèå: íåìåöêàÿ êîìïàíèÿ «ROOTec»
ñïåöèàëèçèðóåòñÿ íà ïîëó÷åíèè öåííûõ ìåòà-
áîëèòîâ êàìïòîòåöèíà è ïîäîôèëîòîêñèíà íà
îñíîâå êîðíåâîé êóëüòóðû; êðîìå òîãî, êóëü-
òóðó «áîðîäàòûõ» êîðíåé ïðåäëàãàþò èñïîëü-
çîâàòü äëÿ ôèòîðåìåäèàöèè, à òàêæå äëÿ
ïðîäóöèðîâàíèÿ ðåêîìáèíàíòíûõ áåëêîâ [16,
17]. Íà ñåãîäíÿøíèé äåíü ïîêàçàíà âîçìîæ-
íîñòü ïîëó÷åíèÿ ìîíîêëîíàëüíûõ àíòèòåë
lgG1 (äî 1,8 % ÑÐÁ) [18], àíòè-ÂÈ× öèà-
íîâèðèíà-N (äî 0,64 ìêã/ìë ñðåäû) [19],
SEAP (secreated alkaline phosphatase) [21, 20]
ñ ïîìîùüþ êóëüòóðû «áîðîäàòûõ» êîðíåé
òàáàêà Nicotiana tabacum L.
Ïðåäñòàâëåííàÿ ðàáîòà îïèñûâàåò ïîëó-
÷åíèå ñóñïåíçèîííûõ, êàëëóñíûõ è êîðíåâûõ
êóëüòóð, èíèöèèðîâàííûõ èç ðàñòåíèé ìîðêî-
âè è ñïîñîáíûõ àêêóìóëèðîâàòü ÷åëîâå÷åñêèé
èíòåðôåðîí àëüôà-2b [22]
Ìàòåðèàëû è ìåòîäû. Ðàñòèòåëüíûé ìàòå-
ðèàë. Â ðàáîòå èñïîëüçîâàëè òðàíñãåííûå
ðàñòåíèÿ ìîðêîâè (Daucus carota L.) ñîðòîâ
Íàíòñêàÿ è Ïåðôåêöèÿ, êîòîðûå ñîãëàñíî
ïðåäûäóùèì èññëåäîâàíèÿì [22] õàðàêòå-
ðèçîâàëèñü íàèáîëåå âûñîêèì óðîâíåì ñîäåð-
æàíèÿ ðåêîìáèíàíòíîãî áåëêà ÷åëîâå÷åñêîãî
èíòåðôåðîíà àëüôà-2b è ïðîÿâëÿëè íàèáî-
ëåå âûñîêóþ àíòèâèðóñíóþ àêòèâíîñòü áåë-
êîâûõ ýêñòðàêòîâ (6,4–50,7 · 103 ÌÅ/ã ñûðîãî
âåñà ìîëîäûõ ëèñòüåâ). Òðàíñãåííûå ðàñòå-
íèÿ ìîðêîâè áûëè ïîëó÷åíû â ðåçóëüòàòå
àãðîáàêòåðèàëüíîé òðàíñôîðìàöèè (Agrobac-
terium tumefaciens, GV3101) ñ èñïîëüçîâàíèåì
âåêòîðíûõ êîíñòðóêöèé, Ò-ÄÍÊ ðàéîí êî-
òîðûõ ñîäåðæàë ãåí ÷åëîâå÷åñêîãî ëåéêî-
öèòàðíîãî èíòåðôåðîíà àëüôà-2b, ñëèòîãî ñ
ðàñòèòåëüíûì êàëüðåòèêóëèíîâûì àïîïëà-
ñòíûì ñèãíàëîì ïîä êîíòðîëåì êîíñòèòóòèâ-
íîãî 35S ïðîìîòîðà ÂÌÖÊ (pCB124) èëè
êîðíåñïåöèôè÷åñêîãî Mll ïðîìîòîðà ñàõàð-
íîé ñâåêëû (pCB161).
Èíèöèàöèÿ êàëëóñîîáðàçîâàíèÿ è êóëüòè-
âèðîâàíèå ñóñïåíçèîííûõ êóëüòóð ìîðêîâè.
Ëèñòüÿ ìîðêîâè ñòåðèëèçîâàëè ñîãëàñíî
îáùåïðèíÿòîé ìåòîäèêå ñ èñïîëüçîâàíèåì
40%-íîãî ðàñòâîðà áåëèçíû (2 % ãèïîõëî-
ðèòà íàòðèÿ). Äàëåå ëèñòâåííûå è ÷åðåø-
êîâûå ýêñïëàíòû ïîìåùàëè íà ñðåäó MS
[23] ñ äîáàâëåíèåì 2 ìã/ë ðåãóëÿòîðà ðîñòà
Äèêàìáà äëÿ èíèöèàöèè êàëëóñîîáðàçîâà-
íèÿ, à òàêæå ñåëåêòèâíîãî àíòèáèîòèêà êàíà-
ìèöèíñóëüôàòà â êîíöåíòðàöèè 100 ìã/ë.
×åðåç 3 4 íåä ïîñëå ïîÿâëåíèÿ êàëëóñíûõ
îáðàçîâàíèé èõ ïåðåíîñèëè â æèäêèå ñðåäû
MS ñ äîáàâëåíèåì ðåãóëÿòîðà ðîñòà Äè-
êàìáà è àíòèáèîòèêà êàíàìèöèíñóëüôàòà
â óêàçàííûõ êîíöåíòðàöèÿõ ëèáî ïðîäîë-
æàëè êóëüòèâèðîâàòü íà àãàðèçèðîâàííûõ
ñðåäàõ, ïåðåñàæèâàÿ êàæäûå 2 íåä. Ïîëó÷åí-
íûå ñóñïåíçèè ðàñòèòåëüíûõ êëåòîê êóëü-
òèâèðîâàëè íà îðáèòàëüíîì øåéêåðå (125
îá/ìèí, 24 Ñ), ïåðåñàæèâàÿ êàæäûå 2 íåä.
Áàêòåðèàëüíûå øòàììû è ãåíåòè÷åñêàÿ
òðàíñôîðìàöèÿ. Äëÿ ïîëó÷åíèÿ êóëüòóðû
òðàíñãåííûõ êîðíåé ìîðêîâè èñïîëüçîâàëè
àãðîïèíîâûé A4 øòàìì A. rhizogenes. Áàê-
òåðèàëüíóþ ñóñïåíçèîííóþ êóëüòóðó ïîëó-
÷àëè â æèäêîé ñðåäå Ëóðèÿ-Áåðòàíè (ïåïòîí
10 ã/ë, äðîææåâîé ýêñòðàêò 5 ã/ë, NaCl
10 ã/ë, ðÍ 7,2) íà øåéêåðå (200 îá/ìèí)
ïðè òåìïåðàòóðå 28 Ñ â òå÷åíèå 24 ÷.
Ñóñïåíçèîííóþ áàêòåðèàëüíóþ êóëüòóðó
îñàæäàëè öåíòðèôóãèðîâàíèåì (5000 îá/ìèí,
4 Ñ), ðåñóñïåíäèðîâàëè ïîëó÷åííûé îñà-
äîê â æèäêîé ñðåäå MS ñ ïîëîâèííûì
ñîäåðæàíèåì ìàêðîñîëåé è äîáàâëåíèåì
200 ìêÌ àöåòîñèðèíãîíà è äàëåå êóëüòè-
âèðîâàëè íà ðîòàöèîííîì øåéêåðå ïðè
òåìïåðàòóðå 28 Ñ è 200 îá/ìèí â òå÷å-
íèå 1 ÷. Ðàñòèòåëüíûå ýêñïëàíòû (àñåï-
òè÷åñêè êóëüòèâèðóåìûå íà ñðåäå MS ñ
äîáàâëåíèåì 2 ìã/ë ðåãóëÿòîðà ðîñòà Äè-
êàìáà ëèñòâåííûå è ÷åðåøêîâûå ýêñïëàí-
20 ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2012. ¹ 1
Þ.Ñ. Ëó÷àêèâñêàÿ, Ç.Ì. Îëåâèíñêàÿ, Å.Ì. Êèùåíêî è äð.
òû ìîðêîâè) èíêóáèðîâàëè áàêòåðèàëüíîé
ñóñïåíçèåé 10 15 ìèí, ïðîìûâàëè ñòå-
ðèëüíîé äèñòèëëèðîâàííîé âîäîé. Òðàíñ-
ôîðìàöèÿ ïðîõîäèëà íà ñòåðèëüíîé ôèëü-
òðîâàëüíîé áóìàãå â òå÷åíèå 48 ÷ íà ðàñ-
ñåÿííîì ñâåòó.
 äàëüíåéøåì ýêñïëàíòû ïåðåíîñèëè íà
àãàðèçèðîâàííóþ ïèòàòåëüíóþ ñðåäó MS ñ
äîáàâëåíèåì 100 ìã/ë êàíàìèöèíà â êà÷å-
ñòâå ñåëåêòèâíîãî àãåíòà, 500 ìã/ë öåôî-
òàêñèìà äëÿ ýëèìèíàöèè áàêòåðèé. ×åðåç
4 6 íåä îáðàçîâàâøèåñÿ êîðíåâûå î÷àãè
ïåðåíîñèëè íà áåçãîðìîíàëüíóþ ñðåäó MS
ñ äîáàâëåíèåì àíòèáèîòèêîâ â óêàçàííûõ
êîíöåíòðàöèÿõ è êóëüòèâèðîâàëè ïðè 24 Ñ
â òåìíîòå ñ èíòåðâàëîì ñóáêóëüòèâèðîâàíèÿ
2 3 íåä.
Ìîëåêóëÿðíî-áèîëîãè÷åñêèé àíàëèç. Ñóììàð-
íóþ ðàñòèòåëüíóþ ÄÍÊ ýêñòðàãèðîâàëè ñî-
ãëàñíî ðåêîìåíäàöèÿì Doyle et al. [24]. Äëÿ
ïîäòâåðæäåíèÿ òðàíñãåííîé ïðèðîäû êîðíå-
âîé êóëüòóðû ïðîâîäèëè ÏÖÐ-àíàëèç c
èñïîëüçîâàíèåì ïðàéìåðîâ 5’-atggatcccaa-
attgctattccttccttccacga-3’, 5’-ttaggcttctttcttcag-
gtttactgcagc-3’ äëÿ èäåíòèôèêàöèè àãðîáàêòå-
ðèàëüíîãî ãåíà rolB (ïðîäóêò àìïëèôèêàöèè
780 ï.î.). ÏÖÐ äëÿ àìïëèôèêàöèè ôðàã-
ìåíòà ãåíà ïðîõîäèëà ïðè ñëåäóþùèõ óñëî-
âèÿõ: äåíàòóðàöèÿ 94 Ñ/5 ìèí; 34 öèêëà
(äåíàòóðàöèÿ 94 Ñ/30 ñ, îòæèã 65 Ñ/30 ñ,
ñèíòåç 72 Ñ/45 ñ); çàêëþ÷èòåëüíûé ñèíòåç
72 Ñ/5 ìèí. Ïðîäóêòû ðåàêöèè ôðàêöèî-
íèðîâàëè â 1%-íîì àãàðîçíîì ãåëå â òðèñ-
áîðàòíîé áóôåðíîé ñèñòåìå.
Èçìåðåíèå àíòèâèðóñíîé àêòèâíîñòè èí-
òåðôåðîíà. Ýêñòðàêòû êàëëóñíûõ, ñóñïåí-
çèîííûõ è êîðíåâûõ êóëüòóð ìîðêîâè ãîòî-
âèëè ïóòåì ðàñòèðàíèÿ ðàñòèòåëüíûõ òêà-
íåé â äâîéíîì îáúåìå áóôåðà, ñîäåð-
æàùåãî 100 ìM Tris HCl, pH 8.0, 5 ìM
Na2ÝÄTA, 100 ìM NaCl, 10 ìM ìåðêàïòî-
ýòàíîëà ñ äîáàâëåíèåì 2,5 % ïîëèâèíèë-
ïèððîëèäîíà è ïîñëåäóþùåãî öåíòðèôóãè-
ðîâàíèÿ (10 000 îá/ìèí â òå÷åíèå 5 7 ìèí,
4 Ñ; 15 000 îá/ìèí â òå÷åíèå 25 ìèí, 4 Ñ).
Äëÿ èçìåðåíèÿ ñîäåðæàíèÿ îáùåãî ðàñòâîðè-
ìîãî áåëêà â ïîëó÷åííûõ ýêñòðàêòàõ èñïîëü-
çîâàëè ìåòîä Áðýäôîðäà [25]. Àêòèâíîñòü
èíòåðôåðîíà èçìåðÿëè ìåòîäîì ìèêðîòèò-
ðîâàíèÿ [26], îñíîâàííîãî íà ñïîñîáíîñòè
èçó÷àåìûõ ýêñòðàêòîâ çàùèùàòü êëåòêè êëå-
òî÷íîé êóëüòóðû ïåðåâèâàåìûõ òåñòèêóë ïî-
ðîñÿò (èç êîëëåêöèè Èíñòèòóòà ìèêðîáèî-
ëîãèè è âèðóñîëîãèè èì. Ä.Ê. Çàáîëîòíîãî
ÍÀÍ Óêðàèíû) îò öèòîïàòè÷åñêîãî ýôôåê-
òà âèðóñà âåçèêóëÿðíîãî ñòîìàòèòà (øòàìì
«Èíäèàíà» èç êîëëåêöèè òîãî æå èíñòèòóòà).
 êàæäóþ èç 96 ëóíîê ïëàòû («Falcon»,
ÑØÀ) âíîñèëè ïî 0,2 ìë âçâåñè êëåòîê èç
ðàñ÷åòà 2·105 êëåòîê/ìë. Ïîñëå ôîðìèðî-
âàíèÿ ÷åðåç 24 48 ÷ ñïëîøíîãî ìîíîñëîÿ
èññëåäóåìûé ýêñòðàêò (0,2 ìë) ñ ïîñëåäî-
âàòåëüíûì äâóêðàòíûì ðàçâåäåíèåì äîáàâëÿ-
ëè â ëóíêè ê êëåòî÷íîé êóëüòóðå. Ðàçâåäåíèå
êàæäîãî îáðàçöà àíàëèçèðîâàëè â òðåõ ïàðàë-
ëåëÿõ. Ïëàòû ñ âíåñåííûìè ïðåïàðàòàìè
èíêóáèðîâàëè â òåðìîñòàòå ïðè 37 Ñ. ×åðåç
18 20 ÷ èññëåäóåìûå îáðàçöû óäàëÿëè, à â
ëóíêè âíîñèëè ïî 0,1 ìë ñâåæåé ñðåäû äëÿ
ïîääåðæàíèÿ ðîñòà êëåòîê è ïî 0,1 ìë òåñò-
âèðóñà âåçèêóëÿðíîãî ñòîìàòèòà (ÂÂÑ) â
äîçå 100 ÒÖÄ50. Êîíòðîëåì êëåòîê ñëóæèë
ñôîðìèðîâàííûé êëåòî÷íûé ìîíîñëîé, ê
êîòîðîìó äîáàâëÿëè òîëüêî ñðåäó äëÿ êóëü-
òèâèðîâàíèÿ, êîíòðîëåì âèðóñà – ñôîðìèðî-
âàííûé êëåòî÷íûé ìîíîñëîé, â êîòîðûé
âíîñèëè òîëüêî äîçó âèðóñà, èñïîëüçóåìóþ
â íàñòîÿùåì èññëåäîâàíèè.
Ïîäñ÷åò êîëè÷åñòâà âûæèâøèõ êëåòîê
ïðîâîäèëè ïîñëå îêðàøèâàíèÿ èõ 0,2%-íûì
ðàñòâîðîì êðàñèòåëÿ Crystal Violet («Sigma»,
ÑØÀ) â 2%-íîì ýòàíîëå [27]. Îïòè÷åñêóþ
ïëîòíîñòü îêðàøåííûõ êëåòîê èçìåðÿëè íà
ñïåêòðîôîòîìåòðå ñ âåðòèêàëüíûì ëó÷îì
(«LabsystemMultiscan», ÎÊ) ïðè äëèíå âîëíû
540 íì. Ïðîöåíò çàäåðæêè ðàçâèòèÿ öèòî-
ïàòè÷åñêîãî äåéñòâèÿ ÂÂÑ ó÷èòûâàëè ïî
îòíîøåíèþ êîëè÷åñòâà æèâûõ êëåòîê â
ëóíêàõ, ñîäåðæàùèõ ðàñòèòåëüíûå ýêñòðàê-
òû, ê êîíòðîëüíûì, íåèíôèöèðîâàííûì, ñ
ó÷åòîì óðîâíÿ ðàçâèòèÿ öèòîïàòè÷åñêîãî
äåéñòâèÿ ÂÂÑ â êîíòðîëå. Íà îñíîâàíèè
ïîëó÷åííûõ äàííûõ îòìå÷àëè ðàçâåäåíèå
îáðàçöîâ, âûçûâàâøèõ 50%-íóþ çàäåðæêó
ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2012. ¹ 1 21
Ïîëó÷åíèå êóëüòóðû «áîðîäàòûõ» êîðíåé, êàëëóñíûõ è ñóñïåíçèîííûõ êëåòî÷íûõ êóëüòóð
ðàçâèòèÿ öèòîïàòè÷åñêîãî äåéñòâèÿ ÂÂÑ â
êóëüòóðå êëåòîê [28]. Ïîëó÷åííûå ðåçóëü-
òàòû ïðèíèìàëè âî âíèìàíèå òîëüêî â òîì
ñëó÷àå, åñëè â êîíòðîëüíûõ êóëüòóðàõ, íå
ñîäåðæàùèõ âèðóñ, öèòîäåñòðóêòèâíûå èçìå-
íåíèÿ îòñóòñòâîâàëè, à â êîíòðîëå âèðóñà
íàáëþäàëè ïîëíóþ äåãåíåðàöèþ êëåòîê. Çà
òèòð èíòåðôåðîíà ïðèíèìàëè ìàêñèìàëüíîå
ðàçâåäåíèå ïðåïàðàòà, êîòîðîå âûçûâàëî çà-
ùèòó îò öèòîïàòè÷åñêîãî äåéñòâèÿ âèðóñà. Â
êà÷åñòâå ïîëîæèòåëüíîãî êîíòðîëÿ èñïîëüçî-
âàëè ñòàíäàðò ÷åëîâå÷åñêîãî èíòåðôåðîíà
àëüôà ÈÔÍ (ïðåäîñòàâëåííûé Èíñòèòóòîì
ìîëåêóëÿðíîé áèîëîãèè è ãåíåòèêè ÍÀÍ
Óêðàèíû). Àêòèâíîñòü èíòåðôåðîíà âûðà-
æàëè â ìåæäóíàðîäíûõ åäèíèöàõ íà 1 ã ñû-
ðîãî âåñà êàëëóñíîé, êîðíåâîé èëè ñóñïåí-
çèîííîé êóëüòóðû (ÌÅ/ã ÑÂ) èëè íà 1 ìã
ñóììàðíîãî ðàñòâîðèìîãî áåëêà (ÌÅ/ìã
ÑÐÁ).
Ñòàòèñòè÷åñêîé îáðàáîòêå ïîäâåðãàëè
äàííûå èçìåðåíèé àíòèâèðóñíîé àêòèâíîñ-
òè èíòåðôåðîíà. Àíàëèòè÷åñêèå ìîäåëè,
êîòîðûå äåìîíñòðèðîâàëè ñðåäíåå çíà÷åíèå
ñ äîâåðèòåëüíûìè èíòåðâàëàìè ïðè P < 0,05,
ñ÷èòàëè ñòàòèñòè÷åñêè çíà÷èìûìè.  äàëü-
íåéøåì èõ èñïîëüçîâàëè äëÿ ñðàâíèòåëüíîãî
àíàëèçà. Ïðè îöåíêå äîñòîâåðíîñòè ñðàâíå-
íèÿ ïîëó÷åííûõ ðåçóëüòàòîâ èñïîëüçîâàëè
t-êðèòåðèé Ñòúþäåíòà.
Ðåçóëüòàòû èññëåäîâàíèé è èõ îáñóæäå-
íèå. Èçó÷åíèþ îñîáåííîñòåé èíèöèàöèè è
êóëüòèâèðîâàíèÿ ñóñïåíçèîííûõ êëåòî÷-
íûõ êóëüòóð ìîðêîâè ïîñâÿùåíî áîëüøîå
êîëè÷åñòâî èññëåäîâàíèé ïîñëåäíèõ äåñÿ-
òèëåòèé ïðîøëîãî âåêà, ñðåäè êîòîðûõ
ïðèñóòñòâóþò ðàáîòû, ïîñâÿùåííûå êàê
ñîáñòâåííî óñëîâèÿì êóëüòèâèðîâàíèÿ [29
32], òàê è èçó÷åíèþ ôèçèîëîãè÷åñêèõ è
ãåíåòè÷åñêèõ îñîáåííîñòåé ðàçâèòèÿ êëå-
òî÷íîé êóëüòóðû [33 38].  íàøåé ðàáîòå
ôîðìèðîâàíèå êàëëóñà íàáëþäàëè ÷åðåç
3 4 íåä íà ñðåäå MS ñ äîáàâëåíèåì 2 ìã/ë
ðåãóëÿòîðà ðîñòà Äèêàìáà è ñåëåêòèâíî-
ãî àíòèáèîòèêà êàíàìèöèíñóëüôàòà â êîí-
öåíòðàöèè 100 ìã/ë ïîñëå ïîâåðõíîñòíîé
ñòåðèëèçàöèè ÷åðåøêîâûõ è ëèñòîâûõ ýêñ-
ïëàíòîâ. Èñïîëüçîâàíèå 2,4-Ä â êà÷åñòâå
ðåãóëÿòîðà ðîñòà [39] â 80 % ñëó÷àåâ ïðè
ïðîâåäåíèè íàøèõ èññëåäîâàíèé ïðèâîäè-
ëî ê îáðàçîâàíèþ áåñöâåòíîãî âèòðèôèöè-
ðîâàííîãî íåêîìïàêòíîãî êàëëóñà, äëÿ ýêñ-
òðàêòîâ êîòîðîãî íå îòìå÷àëè áèîëîãè÷åñ-
êîé àêòèâíîñòè ïðè äàëüíåéøåì àíàëèçå
íà ïðîòèâîâèðóñíóþ àêòèâíîñòü. Áîëåå òîãî,
çíà÷èòåëüíî ñíèæåííóþ àíòèâèðóñíóþ àê-
òèâíîñòü ïðîÿâëÿëè è ñóñïåíçèîííûå êóëü-
òóðû, êîòîðûå áûëè èíèöèèðîâàíû èç êàë-
ëóñíûõ êóëüòóð, ïîëó÷åííûõ ñ èñïîëüçîâà-
íèåì 2,4-Ä. Ýêñòðàêòû êàëëóñíûõ îáðàçîâà-
íèé, èíèöèèðîâàííûõ èç íåòðàíñãåííîãî
ðàñòåíèÿ, íå ïðîÿâëÿëè áèîëîãè÷åñêîé àê-
òèâíîñòè.
Ïîêàçàòåëè àíòèâèðóñíîé àêòèâíîñòè ýê-
ñòðàêòîâ êàëëóñíûõ îáðàçîâàíèé, èíèöèèðî-
âàííûõ èç òðàíñôîðìèðîâàííûõ ñ èñïîëü-
çîâàíèåì âåêòîðíûõ êîíñòðóêöèé ðàñòå-
íèé, ãäå ãåí èíòåðôåðîíà íàõîäèëñÿ ïîä
êîíòðîëåì êîíñòèòóòèâíîãî èëè êîðíåñïå-
öèôè÷åñêîãî ïðîìîòîðîâ, äîñòîâåðíî íå
îòëè÷àëèñü (òàáë. 1). Êðîìå òîãî, áèîëî-
ãè÷åñêàÿ àêòèâíîñòü óïîìÿíóòûõ ýêñòðàêòîâ
áûëà çíà÷èòåëüíî íèæå ïî ñðàâíåíèþ ñ
àíòèâèðóñíîé àêòèâíîñòüþ ðàñòèòåëüíûõ
ýêñòðàêòîâ, âîçìîæíî, â ðåçóëüòàòå ãåíåòè-
÷åñêîé íåñòàáèëüíîñòè íåäèôôåðåíöèðî-
âàííîãî ðàñòèòåëüíîãî ìàòåðèàëà [10, 13].
Ïîñëå ïîÿâëåíèÿ êàëëóñíûõ îáðàçîâàíèé
èõ ïåðåíîñèëè â æèäêèå ñóñïåíçèîííûå
ñðåäû MS ñ äîáàâëåíèåì ðåãóëÿòîðà ðîñòà
Äèêàìáà è àíòèáèîòèêà êàíàìèöèíñóëüôàòà
â óêàçàííûõ êîíöåíòðàöèÿõ, êóëüòèâèðî-
âàëè íà êà÷àëêå (125 îá/ìèí, 24 Ñ) â äâóõ
âàðèàíòàõ – íà ñâåòó è â òåìíîòå, è ïåðå-
ñàæèâàëè êàæäûå 2 íåä, çàìåíÿÿ ïèòàòåëü-
íóþ ñðåäó. Äîñòîâåðíîé ðàçíèöû ïðè îöå-
íèâàíèè àíòèâèðóñíîé àêòèâíîñòè cóñïåí-
çèé ðàñòèòåëüíûõ êëåòîê, ïîëó÷åííûõ â äâóõ
âàðèàíòàõ êóëüòèâèðîâàíèÿ, íå îòìå÷åíî.
Ýêñòðàêòû ñóñïåíçèîííûõ êóëüòóð, èíèöè-
èðîâàííûõ èç íåòðàíñãåííîãî ðàñòåíèÿ,
áèîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè íå ïðîÿâëÿëè. Íå
íàáëþäàëè áèîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè ïðè
îöåíèâàíèè àíòèâèðóñíûõ ñâîéñòâ êóëüòó-
22 ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2012. ¹ 1
Þ.Ñ. Ëó÷àêèâñêàÿ, Ç.Ì. Îëåâèíñêàÿ, Å.Ì. Êèùåíêî è äð.
ðàëüíîãî ôèëüòðàòà, ÷òî ñâèäåòåëüñòâóåò î
íåâûâåäåíèè â ñðåäó ðåêîìáèíàíòíîãî áåëêà
èç êëåòî÷íûõ êëàñòåðîâ. Ñëåäóåò îòìåòèòü,
÷òî óðîâåíü áèîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè íà
åäèíèöó ìàññû ñóììàðíîãî ðàñòâîðèìîãî
áåëêà ýêñòðàêòîâ ñóñïåíçèîííûõ êóëüòóð,
èíèöèèðîâàííûõ èç ðàñòåíèé, òðàíñôîðìè-
ðîâàííûõ ñ èñïîëüçîâàíèåì îáåèõ âåêòîð-
íûõ êîíñòðóêöèé (òàáë. 2), áûë ñîïîñòà-
âèìûì ñ àíàëîãè÷íûìè ïîêàçàòåëÿìè áèî-
ëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè ðåêîìáèíàíòíîãî
áåëêà ëèñòüåâ òðàíñãåííûõ ðàñòåíèé ìîð-
êîâè (ñðåäíèå çíà÷åíèÿ 3,96 5,42 · 103 ÌÅ/ìã
ÑÐÁ) è äîñòîâåðíî áîëåå âûñîêèì ïî îò-
íîøåíèþ ê áèîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè ýêñ-
òðàêòîâ êîðíåïëîäîâ (0,89 1,46·103 ÌÅ/ìã
ÑÐÁ) îïèñàííûõ ðàíåå ðàñòåíèé [22]. Òàêèå
äàííûå äàþò âîçìîæíîñòü ñóäèòü î ñóñïåí-
çèîííîé êëåòî÷íîé êóëüòóðå ìîðêîâè êàê î
âîçìîæíîì èñòî÷íèêå áûñòðîãî íàêîïëå-
íèÿ ðåêîìáèíàíòíîãî áåëêà, êîòîðûé ìîã áû
áûòü èñïîëüçîâàí äëÿ ëå÷åíèÿ è ïðîôèëàê-
òèêè çàáîëåâàíèé âèðóñíîé ïðèðîäû, îäíà-
êî ñòîèò çàìåòèòü, ÷òî íàøè èññëåäîâàíèÿ,
Òàáëèöà 1
Áèîëîãè÷åñêàÿ àêòèâíîñòü èíòåðôåðîíà àëüôà-2b â êàëëóñíûõ êóëüòóðàõ ìîðêîâè
Ïîêàçàòåëè ÌÅ/ìã ÑÐÁ ÌÅ/ã ÑÂ
pCB124 (35S::HuINF -2b)
Ñðåäíåå çíà÷åíèå
Âàðèàáåëüíîñòü ïîêàçàòåëÿ
2,81·103
0,5·103 3,1·103
1,1·103
0,93·103 1,8·103
pCB161 (Mll::HuINF -2b)
Ñðåäíåå çíà÷åíèå
Âàðèàáåëüíîñòü ïîêàçàòåëÿ
2,67·103
0,4·103 3,9·103
1,2·103
0,84·103 1,72·103
Òàáëèöà 2
Áèîëîãè÷åñêàÿ àêòèâíîñòü èíòåðôåðîíà àëüôà-2b â ñóñïåíçèîííûõ êóëüòóðàõ ìîðêîâè
Ïîêàçàòåëè ÌÅ/ìã ÑÐÁ ÌÅ/ã ÑÂ
pCB124 (35S::HuINF -2b)
Ñðåäíåå çíà÷åíèå
Âàðèàáåëüíîñòü ïîêàçàòåëÿ
5,8·103
1,14·103 11,42·103
2,7·103
0,8·103 3,5·103
pCB161 (Mll::HuINF -2b)
Ñðåäíåå çíà÷åíèå
Âàðèàáåëüíîñòü ïîêàçàòåëÿ
5,02·103
2,2·103 9,8·103
2,34·103
0,84·103 3,01·103
Òàáëèöà 3
Áèîëîãè÷åñêàÿ àêòèâíîñòü èíòåðôåðîíà àëüôà-2 â êóëüòóðàõ «áîðîäàòûõ» êîðíåé ìîðêîâè
Ïîêàçàòåëè ÌÅ/ìã ÑÐÁ ÌÅ/ã ÑÂ
pCB124 (35S::HuINF -2b)
Ñðåäíåå çíà÷åíèå
Âàðèàáåëüíîñòü ïîêàçàòåëÿ
4,9·103
3,2·103 8,4·103
6,34·103
3,2·102 12,08·103
pCB161 (Mll::HuINF -2b)
Ñðåäíåå çíà÷åíèå
Âàðèàáåëüíîñòü ïîêàçàòåëÿ
5,02·103
3,8·103 8,4·103
10,2·103
3,2·103 12,8·103
ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2012. ¹ 1 23
Ïîëó÷åíèå êóëüòóðû «áîðîäàòûõ» êîðíåé, êàëëóñíûõ è ñóñïåíçèîííûõ êëåòî÷íûõ êóëüòóð
êîòîðûå íå ïðèâåäåíû â íàñòîÿ-
ùåé ñòàòüå, ñâèäåòåëüñòâóþò î ñíèæåíèè
àêòèâíîñòè íàêàïëèâàåìîãî áåëêà ïîñëå
2,5 3 ìåñ êóëüòèâèðîâàíèÿ ðàñòèòåëüíîé ñóñ-
ïåíçèè, âîçìîæíî, èç-çà ñêëîííîñòè áåëêà ê
äåãðàäàöèè ïðè äëèòåëüíîì íàêîïëåíèè èí-
òåðôåðîíà â ðàñòèòåëüíûõ òêàíÿõ [40], ëèáî
ãåíåòè÷åñêîé íåñòàáèëüíîñòè íåäèôôåðåí-
öèðîâàííîãî ðàñòèòåëüíîãî ìàòåðèàëà [10, 13].
Îáðàçîâàíèå êóëüòóðû òðàíñãåííûõ êîð-
íåé ìîðêîâè ïðè îáðàáîòêå ýêñïëàíòîâ áàê-
òåðèàëüíîé êóëüòóðîé A. rhizogenes íàáëþäà-
ëè ÷åðåç 4 6 íåä íà áåçãîðìîíàëüíîé ñðåäå
MS ñ äîáàâëåíèåì àíòèáèîòèêîâ â óêàçàí-
íûõ êîíöåíòðàöèÿõ ïðè 24 Ñ â òåìíîòå ñ
èíòåðâàëîì ñóáêóëüòèâèðîâàíèÿ 2 3 íåä.
Ïîëó÷åííûå êîðíè õàðàêòåðèçîâàëèñü Ri-
ôåíîòèïîì: ãîðìîíîíåçàâèñèìûì ðîñòîì,
îòñóòñòâèåì ãåîòðîïèçìà. Äîñòîâåðíîé ðàç-
íèöû ïðè îöåíèâàíèè ýôôåêòèâíîñòè Ri-
êîðíåîáðàçîâàíèÿ äëÿ ðàçëè÷íûõ ñîðòîâ è
ëèíèé, òðàíñôîðìèðîâàííûõ ñ èñïîëüçîâà-
íèåì âåêòîðíûõ êîíñòðóêöèé, ãäå ãåí èíòåð-
ôåðîíà íàõîäèëñÿ ïîä êîíòðîëåì êîíñòèòó-
òèâíîãî è êîðíåñïåöèôè÷åñêîãî ïðîìîòîðîâ,
íå íàáëþäàëè. Êîíòðîëüíûå íåòðàíñôîðìè-
ðîâàííûå ýêñïëàíòû áûëè íå ñïîñîáíû ê
ôîðìèðîâàíèþ Ri-êîðíåé íà îïèñàííîé ñðå-
äå. ÏÖÐ-àíàëèç ïîçâîëèë âûÿâèòü ïðèñóò-
ñòâèå àãðîáàêòåðèàëüíîãî ãåíà rolB äëÿ 95
98 % àíàëèçèðîâàííûõ êîðíåâûõ êëîíîâ
(ðèñóíîê), ÷òî ïîäòâåðæäàåò òðàíñãåííóþ
ïðèðîäó ïîëó÷åííîé êîðíåâîé êóëüòóðû.
Áèîëîãè÷åñêóþ àêòèâíîñòü íå íàáëþäàëè
äëÿ ýêñòðàêòîâ «áîðîäàòûõ» êîðíåé, èíèöè-
èðîâàííûõ èç íåòðàíñãåííîãî ðàñòåíèÿ. Ïî-
êàçàòåëè àíòèâèðóñíîé àêòèâíîñòè ýêñòðàê-
òîâ Ri-êîðíåé, èíèöèèðîâàííûõ èç ðàñòå-
íèé, òðàíñôîðìèðîâàííûõ ñ èñïîëüçîâàíèåì
âåêòîðíîé êîíñòðóêöèè, ãäå ãåí èíòåðôå-
ðîíà íàõîäèëñÿ ïîä êîíòðîëåì êîðíåñïå-
öèôè÷åñêîãî Mll ïðîìîòîðà ñàõàðíîé ñâåê-
ëû, áûëà äîñòîâåðíî âûøå, ÷åì â âàðèàí-
òå, ãäå ãåí èíòåðôåðîíà íàõîäèëñÿ ïîä
êîíòðîëåì êîíñòèòóòèâíîãî 35S ïðîìîòîðà
ÂÌÖÊ (òàáë. 3). Ýòî, âîçìîæíî, ÿâëÿåòñÿ ðå-
çóëüòàòîì âûñîêîé êîðíåñïåöèôè÷åñêîé àê-
òèâíîñòè Mll ïðîìîòîðà â êóëüòóðå «áîðî-
äàòûõ» êîðíåé. Êðîìå òîãî, óðîâåíü áèî-
ëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè ýêñòðàêòîâ Ri-êîð-
íåé, èíèöèèðîâàííûõ èç ðàñòåíèé, òðàíñ-
ôîðìèðîâàííûõ ñ èñïîëüçîâàíèåì âåêòîð-
íîé êîíñòðóêöèè, ãäå ãåí èíòåðôåðîíà íàõî-
äèëñÿ ïîä êîíòðîëåì êîðíåñïåöèôè÷åñêîãî
ïðîìîòîðà, áûë îñòàòî÷íî âûñîêèì, ñðàâíè-
ìûì ñ ïîêàçàòåëÿìè áèîëîãè÷åñêîé àêòèâ-
íîñòè ðåêîìáèíàíòíîãî áåëêà ðàñòèòåëüíûõ
ñóñïåíçèîííûõ êóëüòóð è ñîïîñòàâèìûì ñ
àíàëîãè÷íûìè ïîêàçàòåëÿìè áèîëîãè÷åñêîé
àêòèâíîñòè ðåêîìáèíàíòíîãî áåëêà ëèñòüåâ
è êîðíåïëîäîâ ìîðêîâè îïèñàííûõ ðàñòå-
íèé [22]. Ïðåäïîëàãàåì, ÷òî òàêîé óðîâåíü
àíòèâèðóñíîé àêòèâíîñòè ýêñòðàêòîâ êóëü-
òóðû «áîðîäàòûõ» êîðíåé ÿâëÿåòñÿ ðåçóëü-
òàòîì âûñîêîé ñïåöèôè÷åñêîé àêòèâíîñòè
èíòåðôåðîíà (108 ÌÅ/ìã) è íå ñâèäåòåëüñò-
âóåò îá óðîâíå åãî íàêîïëåíèÿ â êóëüòóðå
«áîðîäàòûõ» êîðíåé ìîðêîâè ñ ó÷åòîì äàí-
Èíèöèàöèÿ êàëëóñîîáðàçîâàíèÿ íà ÷åðåøêîâûõ
ýêñïëàíòàõ ìîðêîâè (à) è Ri-êîðíåîáðàçîâàíèÿ íà
÷åðåøêîâûõ ýêñïëàíòàõ (á); â – ÏÖÐ-àíàëèç íà
ïðèñóòñòâèå ãåíà rolB: Ì – Ìàðêåð (1 kb Plus DNA
Ladder, «Fermentas»), 1 – îòðèöàòåëüíûé êîíòðîëü
(ïðîáà áåç ÄÍÊ), 2 – îòðèöàòåëüíûé êîíòðîëü
(ÄÍÊ íåòðàíñôîðìèðîâàííîãî ðàñòåíèÿ), 3 – ïî-
ëîæèòåëüíûé êîíòðîëü (ïëàçìèäíàÿ ÄÍÊ (À4)),
4–7 – ÄÍÊ àíàëèçèðóåìûõ ðàñòåíèé ìîðêîâè
â
24 ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2012. ¹ 1
Þ.Ñ. Ëó÷àêèâñêàÿ, Ç.Ì. Îëåâèíñêàÿ, Å.Ì. Êèùåíêî è äð.
íûõ î íàêîïëåíèè ðåêîìáèíàíòíûõ áåëêîâ
â êóëüòóðå «áîðîäàòûõ» êîðíåé íà îòíî-
ñèòåëüíî íåâûñîêîì óðîâíå [41, 20].
Òàêèì îáðàçîì, íàñòîÿùàÿ ðàáîòà ïîêà-
çûâàåò âîçìîæíîñòü ïîëó÷åíèÿ êëåòî÷íûõ
êóëüòóð è êóëüòóðû «áîðîäàòûõ» êîðíåé ìîð-
êîâè, ñïîñîáíûõ ýêñïðåññèðîâàòü ÷åëîâå÷å-
ñêèé èíòåðôåðîí àëüôà-2b è îáëàäàþùèõ
âûñîêèì óðîâíåì àíòèâèðóñíîé àêòèâíîñòè.
Îïèñàííûå êóëüòóðû ìîãëè áû áûòü èñïîëü-
çîâàíû â êà÷åñòâå èñòî÷íèêà îòíîñèòåëüíî
áûñòðîãî ïîëó÷åíèÿ ðåêîìáèíàíòíîãî òåðà-
ïåâòè÷åñêîãî áåëêà äëÿ ëå÷åíèÿ è ïðîôèëàê-
òèêè çàáîëåâàíèé âèðóñíîé ïðèðîäû.
Y.S. Luchakivskaya, Z.M. Olevinskaya,
Y.M. Kishchenko, N.Y. Spivak, N.V. Kuchuk
OBTAINING OF HAIRY-ROOT, CALLUS AND
SUSPENSION CARROT CULTURE (DAUCUS
CAROTA L.) ABLE TO ACCUMULATE HUMAN
INTERFERON ALPHA-2b
Here we report the obtaining of suspension, cal-
lus and hairy root culture initiated from carrot plants
of Nantskaya and Perfektzya variety with the highest
level of recombinant human interferon -2b accumu-
lation exhibited the highest level of plant protein ex-
tract antiviral activity (up to 12.8 · 103 IU/mg TSP).
The antiviral activity of callus extracts was significantly
lower comparing to the activity of plant extracts from
parent organisms. However, the antiviral activity level
of suspension culture extracts (up to 4.42 · 103 IU/mg
TSP) and Ri-root ones (up to 4.42 · 103 IU/mg TSP)
appeared to be comparable to analogical data of anti-
viral activity of transgenic carrot leaf extracts, this way
the described cultures could be possibly used for com-
paratively speedy obtaining of recombinant therapeutic
protein for curing and preventing of virus diseases.
Þ.Ñ. Ëó÷àê³âñüêà, Ç.Ì. Îëåâèíñüêà,
Î.Ì. ʳùåíêî, Ì.ß. Ñï³âàê, Ì.Â. Êó÷óê
ÎÄÅÐÆÀÍÍß ÊÓËÜÒÓÐÈ «ÂÎËÎÕÀÒÈÕ»
ÊÎÐÅͲÂ, ÊÀËÞÑÍÈÕ ÒÀ ÑÓÑÏÅÍDzÉÍÈÕ
Ê˲ÒÈÍÍÈÕ ÊÓËÜÒÓÐ ÌÎÐÊÂÈ (DAUCUS
CAROTA L.), ÇÄÀÒÍÈÕ ÅÊÑÏÐÅÑÓÂÀÒÈ
ËÞÄÑÜÊÈÉ ²ÍÒÅÐÔÅÐÎÍ ÀËÜÔÀ-2b
Îïèñàíî îòðèìàííÿ ñóñïåíç³éíèõ, êàëþñíèõ òà
êîðåíåâèõ êóëüòóð, ³í³ö³éîâàíèõ ç ðîñëèí ìîðêâè
Íàíòñüêà òà Ïåðôåêö³ÿ, ÿê³ çã³äíî ç ïîïåðåäí³ìè
äîñë³äæåííÿìè äåìîíñòðóâàëè íàéá³ëüø âèñîêèé
ð³âåíü âì³ñòó ðåêîìá³íàíòíîãî á³ëêà ëþäñüêîãî
³íòåðôåðîíó àëüôà-2b òà íàéá³ëüø âèñîêó àíòè-
â³ðóñíó àêòèâí³ñòü á³ëêîâèõ åêñòðàêò³â (äî 12.8 · 103
ÌÎ/ìã ÑÐÁ). Àíòèâ³ðóñíà àêòèâí³ñòü åêñòðàêò³â êà-
ëþñíèõ óòâîðåíü áóëà çíà÷íî íèæ÷îþ ïîð³âíÿíî ç àê-
òèâí³ñòþ ðîñëèííèõ åêñòðàêò³â âèõ³äíèõ îðãàí³çì³â.
Ïðîòå ð³âåíü àíòèâ³ðóñíî¿ àêòèâíîñò³ åêñòðàêò³â ñóñ-
ïåíç³éíèõ êóëüòóð (äî 11,42 · 103 ÌÎ/ìã ÑÐÁ) òà åêñ-
òðàêò³â Ri-êîðåí³â (äî 8,4 · 103 ÌÎ/ìã ÑÐÁ) áóâ ïî-
ä³áíèì äî àíàëîã³÷íèõ ïîêàçíèê³â àíòèâ³ðóñíî¿ àê-
òèâíîñò³ ñóìàðíîãî á³ëêà ëèñòÿ òðàíñãåííèõ ðîñëèí
ìîðêâè, ùî âêàçóº íà ìîæëèâ³ñòü âèêîðèñòàííÿ îïè-
ñàíèõ êóëüòóð äëÿ â³äíîñíî øâèäêîãî îäåðæàííÿ
ðåêîìá³íàíòíîãî òåðàïåâòè÷íîãî á³ëêà ïðè ë³êóâàíí³
³ ïðîô³ëàêòèö³ çàõâîðþâàíü â³ðóñíî¿ ïðèðîäè.
ÑÏÈÑÎÊ ËÈÒÅÐÀÒÓÐÛ
1. Streatfield S.J., Howard J.A. Plant-based vaccines //
Int. J. Parasitol. — 2003. — 33. — P. 479–493.
2. Su W.W., Lee K.T. Plant cell and hairy-root
cultures – process characteristics, products, and
applications // Bioprocessing for Value-Added
Products from Renewable Resources : New Tech-
nologies and Applications / Ed. S.T. Yang. —
New York : Elsevier, 2006. — P. 263—292.
3. Fischer R., Emans N., Schuster F. et al. Towards
molecular farming in the future: using plant-cell-
suspension cultures as bioreactors. // Biotechnol.
Appl. Biochem. — 2003. — 30, ¹ 2. — Ð. 109—
112.
4. Kim T.-G., Kim H.-M., Lee H.-J. et al. Reduced
protease activity in transformed rice cell suspension
cultures expressing a proteinase inhibitor // Prot.
Exp. Purif. — 2007. — 53, ¹ 2. — P. 270—277.
5. Shiha Sh.M.-H., Doran P.M. Foreign protein
production using plant cell and organ cultures :
Advantages and limitations // Biotechnol. Adv. —
2009. — 27, ¹ 6. — Ð. 1036—1042.
6. Francisco J.A., Gawlak S.L., Miller M. et al. Ex-
pression and characterization of bryodin 1 and a
bryodin 1-based single-chain immunotoxin from
tobacco cell culture // Bioconjug. Chem. — 1997. —
8, ¹ 5. – Ð. 708—713.
7. Terashima M., Murai Y., Kawamura M. et al.
Production of functional human alpha 1-anti-
trypsin by plant cell culture // Appl. Microbiol. Bio-
technol. — 1999. — 52, ¹ 4. — Ð. 516—523 .
8. Huang L.-F., Liu Y.-K., Lu C.-A. et al. Produc-
tion of human serum albumin by sugar starvation
induced promoter and rice cell culture // Transgenic.
Res. — 2000. — 14, ¹ 5. — Ð. 569—581.
9. Torres E., Vaquero C., Nicholson L. et al. Rice cell
culture as an alternative production system for
functional diagnostic and therapeutic antibodies //
Transgenic Res. — 1999. — 8, ¹ 6. — Ð. 441—
449.
ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2012. ¹ 1 25
Ïîëó÷åíèå êóëüòóðû «áîðîäàòûõ» êîðíåé, êàëëóñíûõ è ñóñïåíçèîííûõ êëåòî÷íûõ êóëüòóð
10. Miao Y., Ding Y., Sun Q.Y. et al. Plant bioreactors
for pharmaceuticals biotechnology and genetic engi-
neering // Reviews. — 2008. — 25. – Ð. 363—380.
11. Carpita N., Sabularse D., Monterzinos D. et al. De-
termination of the pore size of cell walls of living
plant cells // Science. — 1979. — 205, ¹ 4411. —
Ð. 1144—1147.
12. Su W.W. Bioreactor engineering for recombinant
protein production using plant cell suspension
culture. // Plant Tissue Culture Engineering. —
2006. — 6, Part 2. — Ð. 135—159.
13. Doran P.M. Foreign protein degradation and insta-
bility in plants and plant tissue cultures // Trends
Biotechnol. — 2006. — 24. — Ð. 426—432.
14. Sivakumar G. Bioreactor technology: a novel indus-
trial tool for high-tech production of bioactive mol-
ecules and biopharmaceutical from plant roots //
J. Biotechnol. – 2006. – 1. – P. 1419—1427.
15. Choi Y.E., Kim Y.S., Paek K.Y. Types and designs
of bioreactors for hairy root culture // Plant Tis-
sue Culture Engineering. – 2006. – 6. – P. 161—
172.
16. Guillon S., Tremouillaux-Guiller J., Pati P.K. et al.
Hairy root research: recent scenario and exciting
prospects // Curr. Opin. Plant. Biol. – 2006. – 9. –
P. 341—346.
17. Drake P.M.W., Chargelegue D.M., Vine N.D. et al.
Rhizosecretion of a monoclonal antibody protein
complex from transgenic tobacco roots // Plant Mol.
Biol. – 2005. – 52, ¹ 1. – Ð. 233—241.
18. Wongsamuth R., Doran P.M. Production of mono-
clonal antibodies by tobacco hairy roots // Bio-
technol. Bioeng. – 2000. – 54. – Ð. 401—415.
19. Ma J.K., Drake P.M., Chargelegue D. et al. An-
tibody processing and engineering in plants, and
new strategies for vaccine production // Vaccine. –
2005. – 23, ¹ 15. – Ð. 1814—1818.
20. Borisjuk N.V., Borisjuk L.G., Logendra S. et al. Pro-
duction of recombinant proteins in plant root exu-
dates // Nat. Biotechnol. – 1999. – 17. – Ð. 466–
469.
21. Gaume A., Komarnytsky S., Borisjuk N.V. et al. Rhi-
zosecretion of recombinant proteins from plant
hairy roots // Plant. Cell. Rep. – 2009. – 21,
¹ 12. – Ð. 1188—1193.
22. Luchakivskaya Yu., Kishchenko O., Gerasimenko I. et
al. High-level expression of human interferon alpha-
2b in transgenic carrot (Daucus carota L.) plants //
Plant Cell Rep. – 2011. – 30, ¹ 3. – Ð. 407—415.
23. Murashige T., Skoog F. A revised medium for rap-
id growth and bioassays tissue cultures // Physiol.
Plant. – 1962. – 15. – P. 473—497.
24. Doyle J.J., Doyle J.L Isolation of plant DNA from
fresh tissue // Focus. – 1990. – 12. – Ð. 13—15.
25. Bradford M.M. A rapid and sensitive method for
the quantification of microgram quantities of pro-
tein utilizing the principle of protein-dye binding //
Anal. Biochem. – 1976. – 72. – Ð. 248—254.
26. Rubinstein S., Familletti Ph., Petska S. Convenient
assay for interferons // J. Virol. – 1981. – 37,
¹ 5. – Ð. 755—758.
27. Medvedev A.E., Fuchs B.B., Rakhmilevich A.L. A stu-
dy of the action of immunosuppressive factors from
tumor cells on lymphocytes and macrophages in vi-
tro and on the graft-versus-host reaction in mice //
Biomed. Sci. – 1990. – 3, ¹ 1. – Ð. 261—266.
28. Äîêë³í³÷í³ äîñë³äæåííÿ ë³êàðñüêèõ çàñîá³â /
ϳä ðåä. Î.Â. Ñòåôàíîâà. – Êè¿â, 2001. – 392 ñ.
29. Dougall D.K., Weyrauch K.W. Abilities of organic
acids to support growth and anthocyanin accumula-
tion by suspension cultures of wild carrot cells am-
monium as the sole nitrogen source // In Vitro. –
1980. – 16, ¹ 11. – Ð. 969—975.
30. Michler Ch.H., Lineberger R.D. Effects of light on
somatic embryo development and abscisic levels in
carrot suspension cultures // Plant Cell Tissue Or-
gan. Culture. – 1987. — 11. – Ð. 189—207.
31. Jay V., Genestier S., Courduroux J.-C. Bioreactor
studies on the effect of dissolved oxygen concentra-
tions on growth and differentiation of carrot (Daucus
carota L.) cell cultures // Plant Cell Rep. – 1992. –
11. – Ð. 605—608.
32. Widholm J.M. Carrot cell mutants // Plant Mol.
Biol. Rep. – 1984. – 2, ¹ 3. – P. 45—53.
33. Osuga K., Komamine A. Synchronization of somatic
embryogenesis from carrot cells at high frequency
as a basis for the mass production of embryos //
Plant Cell Tissue Organ. Culture. – 1994. –
39. – Ð. 125—135.
34. Komamine A., Murata N., Nomura K. 2004 SIVB
Congress symposium proceeding: mechanisms of
somatic embryogenesis in carrot suspension cul-
tures – morphology, physiology, biochemistry
and molecular biology // In Vitro Cell. Dev. Biol.
(Plant). – 2005. – 41. – Ð. 6—10.
35. Ronchi V.N., Giorgetti L., Tonelli M. et al. Ploidy
reduction and genome segregation in cultured car-
rot cell lines. 1. Prophase chromosome reduction //
Plant Cell Tissue Organ. Culture. – 1992. – 30. –
P. 107—114.
36. Kikuchi A., Satoh Sh., Nakamura N. et al. Dif-
ferences in pectic polysaccharides between carrot
embryogenic and non-embryogenic calli // Plant
Cell Rep. – 1995. – 14. – P. 279–284.
37. Ducos J.-P., Bollon H., Pettard V. Production of
carrot somatic embryos in a bioreactor // Appl.
Microbiol. Biotechnol. – 1993. – 39. – P. 465—
470.
38. Thorpe T.A. In vitro Embryogenesis in Plants. –
Dordrecht : Kluwer Acad. Publ., 1995. – 486 ð.
26 ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2012. ¹ 1
Þ.Ñ. Ëó÷àêèâñêàÿ, Ç.Ì. Îëåâèíñêàÿ, Å.Ì. Êèùåíêî è äð.
39. Fujumura T., Komamine A. The serial observation
of embryogenesis in a carrot cell suspension cul-
ture // New Phytol. – 1980. – 86. – P. 213—218.
40. Leelavathi S., Reddy V.S. Chloroplast expression
of His-tagged GUS-fusions: a general strategy
to overproduce and purify foreign proteins us-
ing transplastomic plants as bioreactors // Mol.
Breed. – 2003. – 11. – P. 49—58.
41. Gleba D., Borisyuk N., Borisyuk L. et al. Use of
plant roots for phytoremediation and molecular
farming. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. – 1999. –
96. – P. 5973—5977.
ÑÏÈÑÎÊ ÑÎÊÐÀÙÅÍÈÉ
ÌÅ – ìåæäóíàðîäíûå åäèíèöû
ÑÐÁ – ñóììàðíûé ðàñòâîðèìûé áåëîê
ÂÌÖÊ – âèðóñ ìîçàèêè öâåòíîé êàïóñòû
ÏÖÐ – ïîëèìåðàçíàÿ öåïíàÿ ðåàêöèÿ
ÒÖÄ – òêàíåâàÿ öèòîïàòè÷åñêàÿ äîçà
ÂÂÑ – âèðóñ âåçèêóëÿðíîãî ñòîìàòèòà
2,4-D – 2,4-äèõëîðîôåíîêñèàöåòàòíàÿ êèñëîòà
ÑÂ – ñûðîé âåñ
Ïîñòóïèëà 09.06.10
<<
/ASCII85EncodePages false
/AllowTransparency false
/AutoPositionEPSFiles true
/AutoRotatePages /None
/Binding /Left
/CalGrayProfile (Dot Gain 20%)
/CalRGBProfile (sRGB IEC61966-2.1)
/CalCMYKProfile (U.S. Web Coated \050SWOP\051 v2)
/sRGBProfile (sRGB IEC61966-2.1)
/CannotEmbedFontPolicy /Error
/CompatibilityLevel 1.4
/CompressObjects /Tags
/CompressPages true
/ConvertImagesToIndexed true
/PassThroughJPEGImages true
/CreateJobTicket false
/DefaultRenderingIntent /Default
/DetectBlends true
/DetectCurves 0.0000
/ColorConversionStrategy /CMYK
/DoThumbnails false
/EmbedAllFonts true
/EmbedOpenType false
/ParseICCProfilesInComments true
/EmbedJobOptions true
/DSCReportingLevel 0
/EmitDSCWarnings false
/EndPage -1
/ImageMemory 1048576
/LockDistillerParams false
/MaxSubsetPct 100
/Optimize true
/OPM 1
/ParseDSCComments true
/ParseDSCCommentsForDocInfo true
/PreserveCopyPage true
/PreserveDICMYKValues true
/PreserveEPSInfo true
/PreserveFlatness true
/PreserveHalftoneInfo false
/PreserveOPIComments false
/PreserveOverprintSettings true
/StartPage 1
/SubsetFonts true
/TransferFunctionInfo /Apply
/UCRandBGInfo /Preserve
/UsePrologue false
/ColorSettingsFile ()
/AlwaysEmbed [ true
]
/NeverEmbed [ true
]
/AntiAliasColorImages false
/CropColorImages true
/ColorImageMinResolution 300
/ColorImageMinResolutionPolicy /OK
/DownsampleColorImages true
/ColorImageDownsampleType /Bicubic
/ColorImageResolution 1200
/ColorImageDepth -1
/ColorImageMinDownsampleDepth 1
/ColorImageDownsampleThreshold 1.50000
/EncodeColorImages false
/ColorImageFilter /DCTEncode
/AutoFilterColorImages true
/ColorImageAutoFilterStrategy /JPEG
/ColorACSImageDict <<
/QFactor 0.15
/HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1]
>>
/ColorImageDict <<
/QFactor 0.15
/HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1]
>>
/JPEG2000ColorACSImageDict <<
/TileWidth 256
/TileHeight 256
/Quality 30
>>
/JPEG2000ColorImageDict <<
/TileWidth 256
/TileHeight 256
/Quality 30
>>
/AntiAliasGrayImages false
/CropGrayImages true
/GrayImageMinResolution 300
/GrayImageMinResolutionPolicy /OK
/DownsampleGrayImages true
/GrayImageDownsampleType /Bicubic
/GrayImageResolution 1200
/GrayImageDepth -1
/GrayImageMinDownsampleDepth 2
/GrayImageDownsampleThreshold 1.50000
/EncodeGrayImages false
/GrayImageFilter /DCTEncode
/AutoFilterGrayImages true
/GrayImageAutoFilterStrategy /JPEG
/GrayACSImageDict <<
/QFactor 0.15
/HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1]
>>
/GrayImageDict <<
/QFactor 0.15
/HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1]
>>
/JPEG2000GrayACSImageDict <<
/TileWidth 256
/TileHeight 256
/Quality 30
>>
/JPEG2000GrayImageDict <<
/TileWidth 256
/TileHeight 256
/Quality 30
>>
/AntiAliasMonoImages false
/CropMonoImages true
/MonoImageMinResolution 1200
/MonoImageMinResolutionPolicy /OK
/DownsampleMonoImages true
/MonoImageDownsampleType /Bicubic
/MonoImageResolution 1200
/MonoImageDepth -1
/MonoImageDownsampleThreshold 1.50000
/EncodeMonoImages false
/MonoImageFilter /CCITTFaxEncode
/MonoImageDict <<
/K -1
>>
/AllowPSXObjects false
/CheckCompliance [
/None
]
/PDFX1aCheck false
/PDFX3Check false
/PDFXCompliantPDFOnly false
/PDFXNoTrimBoxError true
/PDFXTrimBoxToMediaBoxOffset [
0.00000
0.00000
0.00000
0.00000
]
/PDFXSetBleedBoxToMediaBox true
/PDFXBleedBoxToTrimBoxOffset [
0.00000
0.00000
0.00000
0.00000
]
/PDFXOutputIntentProfile (None)
/PDFXOutputConditionIdentifier ()
/PDFXOutputCondition ()
/PDFXRegistryName ()
/PDFXTrapped /False
/CreateJDFFile false
/Description <<
/ARA <FEFF06270633062A062E062F0645002006470630064700200627064406250639062F0627062F0627062A002006440625064606340627062100200648062B062706260642002000410064006F00620065002000500044004600200645062A064806270641064206290020064406440637062806270639062900200641064A00200627064406450637062706280639002006300627062A0020062F0631062C0627062A002006270644062C0648062F0629002006270644063906270644064A0629061B0020064A06450643064600200641062A062D00200648062B0627062606420020005000440046002006270644064506460634062306290020062806270633062A062E062F062706450020004100630072006F0062006100740020064800410064006F006200650020005200650061006400650072002006250635062F0627063100200035002E0030002006480627064406250635062F062706310627062A0020062706440623062D062F062B002E0635062F0627063100200035002E0030002006480627064406250635062F062706310627062A0020062706440623062D062F062B002E>
/BGR <FEFF04180437043f043e043b043704320430043904420435002004420435043704380020043d0430044104420440043e0439043a0438002c00200437043000200434043000200441044a0437043404300432043004420435002000410064006f00620065002000500044004600200434043e043a0443043c0435043d04420438002c0020043c0430043a04410438043c0430043b043d043e0020043f044004380433043e04340435043d04380020043704300020043204380441043e043a043e043a0430044704350441044204320435043d0020043f04350447043004420020043704300020043f044004350434043f0435044704300442043d04300020043f043e04340433043e0442043e0432043a0430002e002000200421044a04370434043004340435043d043804420435002000500044004600200434043e043a0443043c0435043d044204380020043c043e0433043004420020043404300020044104350020043e0442043204300440044f0442002004410020004100630072006f00620061007400200438002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e00300020043800200441043b0435043404320430044904380020043204350440044104380438002e>
/CHS <FEFF4f7f75288fd94e9b8bbe5b9a521b5efa7684002000410064006f006200650020005000440046002065876863900275284e8e9ad88d2891cf76845370524d53705237300260a853ef4ee54f7f75280020004100630072006f0062006100740020548c002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e003000204ee553ca66f49ad87248672c676562535f00521b5efa768400200050004400460020658768633002>
/CHT <FEFF4f7f752890194e9b8a2d7f6e5efa7acb7684002000410064006f006200650020005000440046002065874ef69069752865bc9ad854c18cea76845370524d5370523786557406300260a853ef4ee54f7f75280020004100630072006f0062006100740020548c002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e003000204ee553ca66f49ad87248672c4f86958b555f5df25efa7acb76840020005000440046002065874ef63002>
/CZE <FEFF005400610074006f0020006e006100730074006100760065006e00ed00200070006f0075017e0069006a007400650020006b0020007600790074007600e101590065006e00ed00200064006f006b0075006d0065006e0074016f002000410064006f006200650020005000440046002c0020006b00740065007200e90020007300650020006e0065006a006c00e90070006500200068006f006400ed002000700072006f0020006b00760061006c00690074006e00ed0020007400690073006b00200061002000700072006500700072006500730073002e002000200056007900740076006f01590065006e00e900200064006f006b0075006d0065006e007400790020005000440046002000620075006400650020006d006f017e006e00e90020006f007400650076015900ed007400200076002000700072006f006700720061006d0065006300680020004100630072006f00620061007400200061002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e0030002000610020006e006f0076011b006a016100ed00630068002e>
/DAN <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>
/DEU <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>
/ESP <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>
/ETI <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>
/FRA <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>
/GRE <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>
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
/HRV (Za stvaranje Adobe PDF dokumenata najpogodnijih za visokokvalitetni ispis prije tiskanja koristite ove postavke. Stvoreni PDF dokumenti mogu se otvoriti Acrobat i Adobe Reader 5.0 i kasnijim verzijama.)
/HUN <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>
/ITA <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>
/JPN <FEFF9ad854c18cea306a30d730ea30d730ec30b951fa529b7528002000410064006f0062006500200050004400460020658766f8306e4f5c6210306b4f7f75283057307e305930023053306e8a2d5b9a30674f5c62103055308c305f0020005000440046002030d530a130a430eb306f3001004100630072006f0062006100740020304a30883073002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e003000204ee5964d3067958b304f30533068304c3067304d307e305930023053306e8a2d5b9a306b306f30d530a930f330c8306e57cb30818fbc307f304c5fc59808306730593002>
/KOR <FEFFc7740020c124c815c7440020c0acc6a9d558c5ec0020ace0d488c9c80020c2dcd5d80020c778c1c4c5d00020ac00c7a50020c801d569d55c002000410064006f0062006500200050004400460020bb38c11cb97c0020c791c131d569b2c8b2e4002e0020c774b807ac8c0020c791c131b41c00200050004400460020bb38c11cb2940020004100630072006f0062006100740020bc0f002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e00300020c774c0c1c5d0c11c0020c5f40020c2180020c788c2b5b2c8b2e4002e>
/LTH <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>
/LVI <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>
/NLD (Gebruik deze instellingen om Adobe PDF-documenten te maken die zijn geoptimaliseerd voor prepress-afdrukken van hoge kwaliteit. De gemaakte PDF-documenten kunnen worden geopend met Acrobat en Adobe Reader 5.0 en hoger.)
/NOR <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>
/POL <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>
/PTB <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>
/RUM <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>
/RUS <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>
/SKY <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>
/SLV <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>
/SUO <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>
/SVE <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>
/TUR <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>
/UKR <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>
/ENU (Use these settings to create Adobe PDF documents best suited for high-quality prepress printing. Created PDF documents can be opened with Acrobat and Adobe Reader 5.0 and later.)
>>
/Namespace [
(Adobe)
(Common)
(1.0)
]
/OtherNamespaces [
<<
/AsReaderSpreads false
/CropImagesToFrames true
/ErrorControl /WarnAndContinue
/FlattenerIgnoreSpreadOverrides false
/IncludeGuidesGrids false
/IncludeNonPrinting false
/IncludeSlug false
/Namespace [
(Adobe)
(InDesign)
(4.0)
]
/OmitPlacedBitmaps false
/OmitPlacedEPS false
/OmitPlacedPDF false
/SimulateOverprint /Legacy
>>
<<
/AddBleedMarks false
/AddColorBars false
/AddCropMarks false
/AddPageInfo false
/AddRegMarks false
/ConvertColors /ConvertToCMYK
/DestinationProfileName ()
/DestinationProfileSelector /DocumentCMYK
/Downsample16BitImages true
/FlattenerPreset <<
/PresetSelector /MediumResolution
>>
/FormElements false
/GenerateStructure false
/IncludeBookmarks false
/IncludeHyperlinks false
/IncludeInteractive false
/IncludeLayers false
/IncludeProfiles false
/MultimediaHandling /UseObjectSettings
/Namespace [
(Adobe)
(CreativeSuite)
(2.0)
]
/PDFXOutputIntentProfileSelector /DocumentCMYK
/PreserveEditing true
/UntaggedCMYKHandling /LeaveUntagged
/UntaggedRGBHandling /UseDocumentProfile
/UseDocumentBleed false
>>
]
>> setdistillerparams
<<
/HWResolution [2400 2400]
/PageSize [612.000 792.000]
>> setpagedevice
|