Структурно-функциональная организация митохондрий корня гороха в условиях моделированной микрогравитации
Приведены данные исследования ультраструктуры митохондрий и дыхания в корневых апексах, а также метаболической активности органелл, изолированных из зародышевых корней проростков гороха после пяти суточного клиностатирования. Показано, что конденсация митохондрий в дистальной зоне растяжения в услов...
Saved in:
| Published in: | Цитология и генетика |
|---|---|
| Date: | 2012 |
| Main Authors: | , , |
| Format: | Article |
| Language: | Russian |
| Published: |
Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України
2012
|
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/126467 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Структурно-функциональная организация митохондрий корня гороха в условиях моделированной микрогравитации / В.А. Брыков, И.П. Генерозова, А.Г. Шугаев // Цитология и генетика. — 2012. — Т. 46, № 3. — С. 20-26. — Бібліогр.: 30 назв. — рос. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-126467 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Брыков, В.А. Генерозова, И.П. Шугаев, А.Г. 2017-11-24T16:00:55Z 2017-11-24T16:00:55Z 2012 Структурно-функциональная организация митохондрий корня гороха в условиях моделированной микрогравитации / В.А. Брыков, И.П. Генерозова, А.Г. Шугаев // Цитология и генетика. — 2012. — Т. 46, № 3. — С. 20-26. — Бібліогр.: 30 назв. — рос. 0564-3783 DOI: 10.3103/S0095452712030036 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/126467 576.311.347:581.13:52-423 Приведены данные исследования ультраструктуры митохондрий и дыхания в корневых апексах, а также метаболической активности органелл, изолированных из зародышевых корней проростков гороха после пяти суточного клиностатирования. Показано, что конденсация митохондрий в дистальной зоне растяжения в условиях клиностатирования сопровождалась повышением скорости поглощения кислорода на 7 % в сравнении с контролем. Установлено также, что после клиностатирования происходило увеличение скорости окисления митохондриями экзогенного малата в присутствии глутамата, а также возрастание дыхательного контроля одновременно со снижением отношения АДФ/О. Предполагается, что описанные изменения митохондрий носят адаптационный характер. Наведено дані дослідження ультраструктури мітохондрій і дихання в кореневих апексах, а також метаболічної активності органел, ізольованих із зародкових коренів проростків гороху після п’ятидобового кліностатування. Показано, що конденсація мітохондрій в дистальній зоні розтягу кореня в умовах кліностатування супроводжувалася зростанням швидкості поглинання кисню на 7% у порівнянні з контролем. Встановлено також, що після кліностатування швидкість окислення мітохондріями екзогенного малату в присутності глутамату зростала одночасно із зростанням дихального контролю і зниженням ефективності фосфорилювання )АДФ). Припускається, що описані зміни мітохондрій мають адаптивний характер. Experimental data on the mitochondrial ultrastructure and tissue respiration in root apexes, as well as the metabolic activity of organelles isolated from pea seedling roots after five days of clinorotation, are presented. It is shown that the mitochondrial condensation in the distal elongation zone during clinorotation correlates with an increase in the rate of oxygen uptake by 7%. It is also observed increase in rate of malate oxidation and respiratory control ratio increased simultaneously with a decreased in efficiency of oxidative phosphorylation. The described character of mitochondrial changes is assumed to be a consequence of the adaptation to new conditions. ru Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України Цитология и генетика Оригинальные работы Структурно-функциональная организация митохондрий корня гороха в условиях моделированной микрогравитации Структурно-функціональна організація мітохондрій кореня гороху в умовах модельованої мікрогравітації Ultrastructure and metabolic activity of pea mitochondria under clinorotation Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Структурно-функциональная организация митохондрий корня гороха в условиях моделированной микрогравитации |
| spellingShingle |
Структурно-функциональная организация митохондрий корня гороха в условиях моделированной микрогравитации Брыков, В.А. Генерозова, И.П. Шугаев, А.Г. Оригинальные работы |
| title_short |
Структурно-функциональная организация митохондрий корня гороха в условиях моделированной микрогравитации |
| title_full |
Структурно-функциональная организация митохондрий корня гороха в условиях моделированной микрогравитации |
| title_fullStr |
Структурно-функциональная организация митохондрий корня гороха в условиях моделированной микрогравитации |
| title_full_unstemmed |
Структурно-функциональная организация митохондрий корня гороха в условиях моделированной микрогравитации |
| title_sort |
структурно-функциональная организация митохондрий корня гороха в условиях моделированной микрогравитации |
| author |
Брыков, В.А. Генерозова, И.П. Шугаев, А.Г. |
| author_facet |
Брыков, В.А. Генерозова, И.П. Шугаев, А.Г. |
| topic |
Оригинальные работы |
| topic_facet |
Оригинальные работы |
| publishDate |
2012 |
| language |
Russian |
| container_title |
Цитология и генетика |
| publisher |
Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Структурно-функціональна організація мітохондрій кореня гороху в умовах модельованої мікрогравітації Ultrastructure and metabolic activity of pea mitochondria under clinorotation |
| description |
Приведены данные исследования ультраструктуры митохондрий и дыхания в корневых апексах, а также метаболической активности органелл, изолированных из зародышевых корней проростков гороха после пяти суточного клиностатирования. Показано, что конденсация митохондрий в дистальной зоне растяжения в условиях клиностатирования сопровождалась повышением скорости поглощения кислорода на 7 % в сравнении с контролем. Установлено также, что после клиностатирования происходило увеличение скорости окисления митохондриями экзогенного малата в присутствии глутамата, а также возрастание дыхательного контроля одновременно со снижением отношения АДФ/О. Предполагается, что описанные изменения митохондрий носят адаптационный характер.
Наведено дані дослідження ультраструктури мітохондрій і дихання в кореневих апексах, а також метаболічної активності органел, ізольованих із зародкових коренів проростків гороху після п’ятидобового кліностатування. Показано, що конденсація мітохондрій в дистальній зоні розтягу кореня в умовах кліностатування супроводжувалася зростанням швидкості поглинання кисню на 7% у порівнянні з контролем. Встановлено також, що після кліностатування швидкість окислення мітохондріями екзогенного малату в присутності глутамату зростала одночасно із зростанням дихального контролю і зниженням ефективності фосфорилювання )АДФ). Припускається, що описані зміни мітохондрій мають адаптивний характер.
Experimental data on the mitochondrial ultrastructure and tissue respiration in root apexes, as well as the metabolic activity of organelles isolated from pea seedling roots after five days of clinorotation, are presented. It is shown that the mitochondrial condensation in the distal elongation zone during clinorotation correlates with an increase in the rate of oxygen uptake by 7%. It is also observed increase in rate of malate oxidation and respiratory control ratio increased simultaneously with a decreased in efficiency of oxidative phosphorylation. The described character of mitochondrial changes is assumed to be a consequence of the adaptation to new conditions.
|
| issn |
0564-3783 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/126467 |
| citation_txt |
Структурно-функциональная организация митохондрий корня гороха в условиях моделированной микрогравитации / В.А. Брыков, И.П. Генерозова, А.Г. Шугаев // Цитология и генетика. — 2012. — Т. 46, № 3. — С. 20-26. — Бібліогр.: 30 назв. — рос. |
| work_keys_str_mv |
AT brykovva strukturnofunkcionalʹnaâorganizaciâmitohondriikornâgorohavusloviâhmodelirovannoimikrogravitacii AT generozovaip strukturnofunkcionalʹnaâorganizaciâmitohondriikornâgorohavusloviâhmodelirovannoimikrogravitacii AT šugaevag strukturnofunkcionalʹnaâorganizaciâmitohondriikornâgorohavusloviâhmodelirovannoimikrogravitacii AT brykovva strukturnofunkcíonalʹnaorganízacíâmítohondríikorenâgorohuvumovahmodelʹovanoímíkrogravítacíí AT generozovaip strukturnofunkcíonalʹnaorganízacíâmítohondríikorenâgorohuvumovahmodelʹovanoímíkrogravítacíí AT šugaevag strukturnofunkcíonalʹnaorganízacíâmítohondríikorenâgorohuvumovahmodelʹovanoímíkrogravítacíí AT brykovva ultrastructureandmetabolicactivityofpeamitochondriaunderclinorotation AT generozovaip ultrastructureandmetabolicactivityofpeamitochondriaunderclinorotation AT šugaevag ultrastructureandmetabolicactivityofpeamitochondriaunderclinorotation |
| first_indexed |
2025-11-26T15:21:58Z |
| last_indexed |
2025-11-26T15:21:58Z |
| _version_ |
1850626263099637760 |
| fulltext |
20 ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2012. ¹ 3
© . . , . . , . . , 2012
УДК 576.311.347:581.13:52-423
В.А. БРЫКОВ 1, И.П. ГЕНЕРОЗОВА 2, А.Г. ШУГАЕВ 2
1 Институт ботаники им. Н.Г. Холодного НАН Украины, Киев
E-mail: vbrykov@gmail.com
2 Учреждение Российской академии наук «Институт физиологии
растений им. К.А. Тимирязева», Москва
СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ
ОРГАНИЗАЦИЯ МИТОХОНДРИЙ
КОРНЯ ГОРОХА В УСЛОВИЯХ
МОДЕЛИРОВАННОЙ
МИКРОГРАВИТАЦИИ
Ïðèâåäåíû äàííûå èññëåäîâàíèÿ óëüòðàñòðóêòóðû
ìèòîõîíäðèé è äûõàíèÿ â êîðíåâûõ àïåêñàõ, à òàê-
æå ìåòàáîëè÷åñêîé àêòèâíîñòè îðãàíåëë, èçîëè-
ðîâàííûõ èç çàðîäûøåâûõ êîðíåé ïðîðîñòêîâ ãîðîõà
ïîñëå ïÿòèñóòî÷íîãî êëèíîñòàòèðîâàíèÿ. Ïîêàçàíî,
÷òî êîíäåíñàöèÿ ìèòîõîíäðèé â äèñòàëüíîé çîíå
ðàñòÿæåíèÿ ïðè êëèíîñòàòèðîâàíèè ñîïðîâîæäàëàñü
ïîâûøåíèåì ñêîðîñòè ïîãëîùåíèÿ êèñëîðîäà íà 7 %
â ñðàâíåíèè ñ êîíòðîëåì. Óñòàíîâëåíî òàêæå, ÷òî
ïîñëå êëèíîñòàòèðîâàíèÿ ïðîèñõîäèëî óâåëè÷åíèå
ñêîðîñòè îêèñëåíèÿ ìèòîõîíäðèÿìè ýêçîãåííîãî ìà-
ëàòà â ïðèñóòñòâèè ãëóòàìàòà è âîçðàñòàíèå äû-
õàòåëüíîãî êîíòðîëÿ îäíîâðåìåííî ñî ñíèæåíèåì
îòíîøåíèÿ ÀÄÔ/Î. Ïðåäïîëàãàåòñÿ, ÷òî îïèñàííûå
èçìåíåíèÿ ìèòîõîíäðèé íîñÿò àäàïòàöèîííûé õà-
ðàêòåð.
Ââåäåíèå. Ôèçèîëîãè÷åñêîé îñíîâîé ôóíê-
öèîíèðîâàíèÿ ìèòîõîíäðèé â êëåòêå ÿâëÿåòñÿ
ïðîöåññ îêèñëèòåëüíîãî ôîñôîðèëèðîâàíèÿ
è îáðàçîâàíèÿ ìîëåêóë ÀÒÔ, êîòîðûå â ñâîþ
î÷åðåäü èñïîëüçóþòñÿ êàê èñòî÷íèê ýíåðãèè
âî âíóòðèêëåòî÷íûõ ïðîöåññàõ [1]. Ïî ðàçíûì
äàííûì îò 30 äî 70 % óãëåâîäîâ, ñèíòåçèðî-
âàííûõ â ïðîöåññå ôîòîñèíòåçà, òðàíñïîðòè-
ðóþòñÿ â êîðåíü, ãäå óòèëèçèðóþòñÿ â ïðîöåññå
êëåòî÷íîãî äûõàíèÿ [2]. Îáðàçîâàííàÿ ïðè
ýòîì ýíåðãèÿ ðàñõîäóåòñÿ íà îáñëóæèâàíèå
áèîìàññû, íàêîïëåíèå áèîìàññû (ðîñò) è ïî-
ãëîùåíèå èîíîâ èç âíåøíåé ñðåäû [2]. Âûñî-
êèé óðîâåíü äûõàíèÿ â êîðíå ðàñòåíèé
ïðèóðî÷åí ê çîíå ðàñòÿæåíèÿ, ãäå êëåòêè
áûñòðî ðàñòóò çà ñ÷åò öèòîïëàçìàòè÷åñêîé
ýêñïàíñèè [2–4]. Îñîáåííîñòüþ äûõàíèÿ ìè-
òîõîíäðèé âûñøèõ ðàñòåíèé ÿâëÿåòñÿ íàëè÷èå
àëüòåðíàòèâíîãî íåôîñôîðèëèðóþùåãî CN-
ðåçèñòåíòíîãî ïóòè òðàíñïîðòà ýëåêòðîíîâ,
àêòèâàöèÿ êîòîðîãî â ñòðåññîâûõ óñëîâèÿõ
ìîæåò ñóùåñòâåííî ñíèæàòü ýôôåêòèâíîñòü
îáðàçîâàíèÿ ÀÒÔ ïðè äûõàíèè [5], òåì ñàìûì
íàðóøàÿ èíòåíñèâíîñòü ðîñòîâûõ ïðîöåñ-
ñîâ è ïîñòóïëåíèå ìèíåðàëüíûõ âåùåñòâ â
êîðåíü [6].
Èçâåñòíî, ÷òî â óñëîâèÿõ ðåàëüíîé ìèêðî-
ãðàâèòàöèè è ïðè åå ìîäåëèðîâàíèè â ëàáî-
ðàòîðèè (êëèíîñòàòèðîâàíèå) óñêîðÿåòñÿ ïðî-
öåññ äèôôåðåíöèðîâêè ìåðèñòåìàòè÷åñêèõ
êëåòîê êîðíÿ [7]. Ñîêðàùåíèå ïåðèîäà àêòèâ-
íîñòè ìåðèñòåìû ãëàâíîãî êîðíÿ ïðîðîñòêîâ
âåäåò ê áîëåå ðàííåìó ñíÿòèþ àïèêàëüíîãî
äîìèíèðîâàíèÿ è òàêèì îáðàçîì ñòèìóëè-
ðóåò îáðàçîâàíèå áîêîâûõ êîðíåé [8, 9]. Óñêî-
ðåíèå äèôôåðåíöèðîâêè êëåòîê êîðíÿ â óñëî-
âèÿõ ìèêðîãðàâèòàöèè ðàññìàòðèâàåòñÿ â ðÿäå
ðàáîò êàê àäàïòèâíûé ïðîöåññ, òðåáóþùèé
óñèëåííîãî ýíåðãîîáåñïå÷åíèÿ êëåòîê è òåì
ñàìûì ïîâûøåííîé ôóíêöèîíàëüíîé íàãðóç-
êè ìèòîõîíäðèé [7]. Èìåþùèåñÿ äàííûå îò-
íîñèòåëüíî óëüòðàñòðóêòóðû ìèòîõîíäðèé â
êëåòêàõ êîðíÿ â óñëîâèÿõ ðåàëüíîé è ìîäå-
ëèðîâàííîé ìèêðîãðàâèòàöèè ïðîòèâîðå÷è-
âû, ÷òî íå ïîçâîëÿåò äàòü îïðåäåëåííóþ
îöåíêó èõ ôóíêöèîíàëüíîãî ñîñòîÿíèÿ â ýòèõ
óñëîâèÿõ [10–12]. Â òî æå âðåìÿ äàííûå
íåïîñðåäñòâåííîãî îïðåäåëåíèÿ ôóíêöèî-
íàëüíîãî ñîñòîÿíèÿ ìèòîõîíäðèé ïîä âëèÿ-
íèåì ìîäåëèðîâàííîé ìèêðîãðàâèòàöèè îò-
ñóòñòâóþò. Ó÷èòûâàÿ êëþ÷åâóþ ðîëü ìåòàáî-
ëèçìà ìèòîõîíäðèé â ôóíêöèîíèðîâàíèè êëå-
21ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2012. ¹ 3
Ñòðóêòóðíî-ôóíêöèîíàëüíàÿ îðãàíèçàöèÿ ìèòîõîíäðèé êîðíÿ ãîðîõà
òîê ðàñòåíèé, ìû ïðîâåëè èññëåäîâàíèå
âëèÿíèÿ êëèíîñòàòèðîâàíèÿ íà ñòðóêòóðíî-
ôóíêöèîíàëüíîå ñîñòîÿíèå ìèòîõîíäðèé.
Ìàòåðèàëû è ìåòîäû. Ðàñòèòåëüíûé ìàòå-
ðèàë è óñëîâèÿ ýêñïåðèìåíòà. Ñåìåíà ñàõàð-
íîãî ãîðîõà (Pisum sativum L., ñîðò Àëüôà)
ïðåäâàðèòåëüíî çàìà÷èâàëè 8–10 ÷ â äèñòèë-
ëèðîâàííîé âîäå, ïðîäóâàåìîé âîçäóõîì. Îò-
áèðàëè íàáóõøèå ñåìåíà îäèíàêîâîãî ðàçìå-
ðà è çàâîðà÷èâàëè èõ ïî îäíîìó â òðóáî÷êè èç
ôèëüòðîâàëüíîé áóìàãè âûñîòîé 9 ñì. Òðó-
áî÷êè â êîëè÷åñòâå 40 øòóê ïîìåùàëè â
êîíòåéíåðû, êîòîðûå â ñâîþ î÷åðåäü ñòàâèëè
íà êëèíîñòàò. Ìîäåëèðîâàíèå ìèêðîãðàâèòà-
öèè ïðîâîäèëè ñ ïîìîùüþ ìåäëåííîãî ãîðè-
çîíòàëüíîãî êëèíîñòàòèðîâàíèÿ (2 îá./ìèí)
íà ïðîòÿæåíèè 5 ñóò â òåìíîòå ïðè òåìïå-
ðàòóðå 24 ± 1 °Ñ.
Ýëåêòðîííàÿ ìèêðîñêîïèÿ. Êîðíåâûå àïåêñû
ôèêñèðîâàëè 2,5%-íûì ãëþòàðîâûì àëüäå-
ãèäîì ñ ïîñëåäóþùåé ïîñòôèêñàöèåé 1%-íûì
OsO4. Îáðàçöû îáåçâîæèâëè â ñåðèè ñïèðòîâ
âîçðàñòàþùåé êîíöåíòðàöèè è àöåòîíîì, ïî-
òîì çàëèâàëè ñìåñüþ ýïîí – àðàëäèò ïî
ñòàíäàðòíîé ìåòîäèêå [13]. Óëüòðàòîíêèå ñðå-
çû (50–70 íì), êîòîðûå êîíòðàñòèðîâàëè óðà-
íèëàöåòàòîì è öèòðàòîì ñâèíöà, áûëè ïîëó-
÷åíû íà óëüòðàìèêðîòîìå RMC MT-XL (ÑØÀ)
[14]. Îáðàçöû èññëåäîâàëè íà ýëåêòðîííûõ
ìèêðîñêîïàõ JEM-1200EX è JEM-1230EX
(ßïîíèÿ).
Òêàíåâîå äûõàíèå. Ïîãëîùåíèå êèñëîðîäà
êîðíåâûìè àïåêñàìè ãîðîõà äëèíîé 4–6 ìì,
âêëþ÷àþùèìè êîðíåâîé ÷åõëèê, ìåðèñòåìó è
çîíó ðàñòÿæåíèÿ, èçìåðÿëè ïîëÿðîãðàôè÷åñ-
êèì ìåòîäîì ñ ïîìîùüþ êèñëîðîäíîãî ýëåê-
òðîäà Hansatech oxygraph (Àíãëèÿ). Äëÿ êàæ-
äîãî èçìåðåíèÿ èñïîëüçîâàëè ñåìü êîðíåâûõ
àïåêñîâ îáùåé ìàññîé 10–15 ìã, êîòîðûå âíî-
ñèëè â ÿ÷åéêó ñ äèñòèëëèðîâàííîé âîäîé
îáúåìîì 1,5 ìë. Èçìåðåíèå ñêîðîñòè ïîãëî-
ùåíèÿ êèñëîðîäà îñóùåñòâëÿëè ïðè òåìïåðà-
òóðå 24 °Ñ íà ïðîòÿæåíèè 12–15 ìèí, íà÷è-
íàÿ ñî âòîðîé ìèíóòû, êîãäà äûõàíèå èìåëî
ëèíåéíûé õàðàêòåð. Îïðåäåëÿëè îáùóþ ñêî-
ðîñòü ïîãëîùåíèÿ êèñëîðîäà òêàíüþ (Vt) â
îòñóòñòâèå èíãèáèòîðîâ; ìàêñèìàëüíóþ ìîù-
íîñòü àëüòåðíàòèâíîãî ïóòè (Valt) â ýëåêòðîí-
íî-òðàíñïîðòíîé öåïè ìèòîõîíäðèé êàê ðàç-
íèöó ìåæäó ïîãëîùåíèåì êèñëîðîäà â ïðè-
ñóòñòâèè 3 ìÌ ÊCN è îñòàòî÷íûì äûõàíè-
åì (Vres) â ïðèñóòñòâèè ÊCN è (ñàëèöèë-
ãèäðîêñàìîâîé êèñëîòû) ÑÃÊ, à òàêæå ìàêñè-
ìàëüíóþ ìîùíîñòü öèòîõðîìíîãî ïóòè (Vcyt)
êàê ðàçíèöó ìåæäó ïîãëîùåíèåì êèñëîðîäà
â ïðèñóòñòâèè 3 ìÌ ÑÃÊ è Vres. Êîíöåíòðà-
öèè èíãèáèòîðîâ ïîäáèðàëè ñ ïîìîùüþ òè-
òðîâàíèÿ. Óðîâåíü Vres ñîñòàâëÿë îêîëî 4 %
êàê â êîíòðîëå, òàê è ïðè êëèíîñòàòèðî-
âàíèè.
Âûäåëåíèå ìèòîõîíäðèé èç êîðíåé ýòèîëè-
ðîâàííûõ ïðîðîñòêîâ ïðîâîäèëè ïî ìåòîäó
[15] â íàøåé ìîäèôèêàöèè. Êîðíè ãîðîõà
(5–20 ã) ïðåäâàðèòåëüíî îõëàæäàëè 10 ìèí,
ïîñëå ÷åãî ãîìîãåíèçèðîâàëè â ñòóïêå 1 ìèí
â ñðåäå âûäåëåíèÿ â ñîîòíîøåíèè 1 : 2 (âåñ :
îáúåì). Ñîñòàâ ñðåäû âûäåëåíèÿ: 0,5 Ì ñàõà-
ðîçà, 50 ìÌ áóôåð Òðèñ-HCl (pH 7,9), 5 ìÌ
ÝÄÒÀ, 1 ìÌ ÝÃÒÀ, 5 ìÌ ãëóòàòèîí, 2 ìÌ
äèòèîýðèòðèòîë è 0,1 % áû÷èé ñûâîðîòî÷íûé
àëüáóìèí (ÁÑÀ). Ãîìîãåíàò ôèëüòðîâàëè ÷åðåç
áÿçü è öåíòðèôóãèðîâàëè 5 ìèí ïðè 22 000 g.
Ïîëó÷åííûé îñàäîê ðåñóñïåíäèðîâàëè â 3–
7 ìë ñðåäû ïðîìûâàíèÿ è öåíòðèôóãèðîâàëè
3 ìèí ïðè 6000 g. Ñðåäà ïðîìûâàíèÿ ñî-
äåðæàëà 0,4 Ì ñàõàðîçó, 20 ìÌ áóôåð Òðèñ-
HCl (pH 7,4), 5 ìÌ ÝÄÒÀ, 0,2 % ÁÑÀ, ñâî-
áîäíûé îò æèðíûõ êèñëîò. Íàäîñàäî÷íóþ
æèäêîñòü öåíòðèôóãèðîâàëè 10 ìèí ïðè
12 000 g. Îñàäîê (ìèòîõîíäðèàëüíóþ ôðàê-
öèþ) ðåñóñïåíäèðîâàëè â ìàëîì îáúåìå ñðå-
äû, ñîäåðæàùåé 0,4 Ì ñàõàðîçó, 20 ìÌ áóôåð
Òðèñ-HCl (pH 7,4), 0,1 % ÁÑÀ, ñâîáîäíûé îò
æèðíûõ êèñëîò.
Èññëåäîâàíèå èçîëèðîâàííûõ ìèòîõîíäðèé.
Ïîãëîùåíèå êèñëîðîäà ìèòîõîíäðèÿìè èçìå-
ðÿëè ïîëÿðîãðàôè÷åñêè, èñïîëüçóÿ ýëåêòðîä
êîíñòðóêöèè Øîëüöà è Îñòðîâñêîãî [16] ïðè
òåìïåðàòóðå 23–24 °Ñ. Ðåàêöèîííàÿ ñðåäà
(1 ìë) ñîäåðæàëà 0,4 Ì ñàõàðîçó, 20 ìÌ
áóôåð Òðèñ-HCl (pH 7,4), 5 ìÌ MgCl, 10 ìÌ
KÍ2PO4, 0,1 % ÁÑÀ, ñâîáîäíûé îò æèðíûõ
êèñëîò. Èññëåäîâàëè îêèñëåíèå ìèòîõîíäðè-
ÿìè ðàçëè÷íûõ äûõàòåëüíûõ ñóáñòðàòîâ (ìà-
ëàòà + ãëóòàìàòà, ñóêöèíàòà, à òàêæå ýêçî-
ãåííîãî ÍÀÄÍ), ïîñëåäîâàòåëüíî âíîñÿ â
ðåàêöèîííóþ ñðåäó ñóñïåíçèþ ìèòîõîíäðèé
(0,3–0,7 ìã áåëêà), îäèí èç ïåðå÷èñëåííûõ
ñóáñòðàòîâ è çàòåì ÀÄÔ, êîòîðûé âíîñèëè
ïîâòîðíî â ÿ÷åéêó ïîñëå åãî èçðàñõîäîâàíèÿ
22 ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2012. ¹ 3
Â.À. Áðûêîâ, È.Ï. Ãåíåðîçîâà, À.Ã. Øóãàåâ
â ïðîöåññå ñèíòåçà ÀÒÔ. Äëÿ àêòèâàöèè ñóê-
öèíàòäåãèäðîãåíàçû ïðè îêèñëåíèè ñóêöè-
íàòà â ÿ÷åéêó äîïîëíèòåëüíî âíîñèëè 0,1 ìÌ
ÀÒÔ. Ñêîðîñòè ïîãëîùåíèÿ êèñëîðîäà â
ñîñòîÿíèè 3 (V3) è ñîñòîÿíèè 4 (V4), êîýô-
ôèöèåíòû äûõàòåëüíîãî êîíòðîëÿ è ÀÄÔ/Î
èçìåðÿëè ïî ×àíñó è Âèëüÿìñó [17]. Êîëè-
÷åñòâî ìèòîõîíäðèàëüíîãî áåëêà îïðåäåëÿëè
ïî ìåòîäó Ëîóðè è äð. [18], èñïîëüçóÿ ÁÑÀ â
êà÷åñòâå ñòàíäàðòà.
Ðåçóëüòàòû èññëåäîâàíèÿ è èõ îáñóæäåíèå.
Óëüòðàñòðóêòóðó ìèòîõîíäðèé èçó÷àëè â êëåò-
êàõ âòîðîãî è òðåòüåãî ñëîÿ êîðû ñî ñòîðî-
íû ýïèäåðìèñà â òðåõ ðîñòîâûõ çîíàõ êîð-
íåâîãî àïåêñà – ìåðèñòåìå, äèñòàëüíîé çîíå
ðàñòÿæåíèÿ (ÄÇÐ) è öåíòðàëüíîé çîíå ðàñòÿ-
æåíèÿ (ÖÇÐ). Óñòàíîâèëè, ÷òî ïîñëå ïÿòè-
ñóòî÷íîãî êëèíîñòàòèðîâàíèÿ óëüòðàñòðóêòó-
ðà îðãàíåëë â êëåòêàõ ìåðèñòåìû è ÖÇÐ îñòà-
âàëàñü òàêîé æå, êàê â êîíòðîëå. Â êëåòêàõ
ÄÇÐ êîðíÿ êëèíîñòàòèðóåìûõ ðàñòåíèé îòìå-
÷åíî óìåíüøåíèå ïîëèìîðôíîñòè ìèòîõîíä-
ðèàëüíîé ïîïóëÿöèè è îòñóòñòâèå ìèòîõîíä-
ðèé áîëüøîé óäëèíåííîé ôîðìû ñ ïëîùàäüþ
áîëåå 0,9 ìêì2, êîòîðûå õàðàêòåðíû äëÿ êëå-
òîê ÄÇÐ â ñòàöèîíàðíîì êîíòðîëå. Ìèòîõîíä-
ðèè â êëåòêàõ äèñòàëüíîé çîíû ðàñòÿæåíèÿ
óìåíüøàëèñü â ðàçìåðå, ìàòðèêñ ïðèîáðåòàë
ïîâûøåííóþ ýëåêòðîííóþ ïëîòíîñòü, îòíîñè-
òåëüíàÿ ïëîùàäü êðèñò óâåëè÷èâàëàñü (ðèñ. 1).
Õàðàêòåðíûå äëÿ ìèòîõîíäðèé ó÷àñòêè íèçêîé
ýëåêòðîííîé ïëîòíîñòè â öåíòðàëüíîé ÷àñòè
îðãàíåëë îáíàðóæèâàëè çíà÷èòåëüíî ðåæå ïîñ-
ëå êëèíîñòàòèðîâàíèÿ, ÷åì â êîíòðîëå, èëè
æå îíè çàíèìàëè ìåíüøóþ ïëîùàäü. Ðàíåå
íàìè óñòàíîâëåíî, ÷òî ñòåïåíü êîíäåíñàöèè
ìèòîõîíäðèé â êëåòêàõ ÄÇÐ êîðíÿ âîçðàñ-
òàëà ñ óâåëè÷åíèåì äëèòåëüíîñòè êëèíîñòàòè-
ðîâàíèÿ; ñòðóêòóðà îðãàíåëë â ìåðèñòåìàòè-
÷åñêèõ êëåòêàõ â óñëîâèÿõ êëèíîñòàòèðîâà-
íèÿ íå èçìåíÿëàñü [19].
Èññëåäîâàíèå äûõàíèÿ êîðíåâûõ àïåêñîâ
ïÿòèñóòî÷íûõ ïðîðîñòêîâ ãîðîõà â óñëîâèÿõ
êëèíîñòàòèðîâàíèÿ ïîêàçàëî, ÷òî îáùàÿ ñêî-
ðîñòü ïîãëîùåíèÿ êèñëîðîäà ñòàòèñòè÷åñêè
äîñòîâåðíî óâåëè÷èâàëàñü (íà 7 %) ïî ñðàâíå-
íèþ ñ êîíòðîëåì (ðèñ. 2). Èíãèáèòîðíûé àíà-
ëèç äûõàíèÿ âûÿâèë åãî ïîâûøåííóþ ÷óâñòâè-
òåëüíîñòü ê KCN, ÷òî ñâèäåòåëüñòâóåò î çíà-
÷èòåëüíîé äîëå öèòîõðîìíîãî ïóòè â äûõàíèè
êîðíåâûõ àïåêñîâ, õàðàêòåðèçóþùèõñÿ âûñî-
êèì îòíîøåíèåì Vcyt/Valt êàê â êîíòðîëå, òàê
è ïîñëå êëèíîñòàòèðîâàíèÿ.
Î÷åâèäíî, ÷òî ïîâûøåíèå èíòåíñèâíîñòè
äûõàíèÿ êîðíåâûõ àïåêñîâ ïðè êëèíîñòàòè-
ðîâàíèè íå ñîïðîâîæäàëîñü âîçðàñòàíèåì Valt.
Õîðîøî èçâåñòíî, ÷òî óâåëè÷åíèå Valt ÿâëÿåòñÿ
÷àñòüþ îáùåãî ìåõàíèçìà îòâåòà ìèòîõîíä-
ðèé íà äåéñòâèå àáèîòè÷åñêèõ ñòðåññîâ ðàç-
íîé ïðèðîäû [20, 21].
Ðèñ. 1. Ôðàãìåíòû êëåòîê âòîðîãî ñëîÿ êîðû ÄÇÐ
êîðíåé ïÿòèñóòî÷íîãî ïðîðîñòêà ãîðîõà â êîíòðî-
ëå (à) è ïîñëå êëèíîñòàòèðîâàíèÿ (á). Ìàñøòàá –
500 íì
Ðèñ. 2. Äûõàíèå êîðíåâûõ àïåêñîâ ãîðîõà â êîí-
òðîëå è ïîñëå êëèíîñòàòèðîâàíèÿ: ïî âåðòèêàëè –
ïîãëîùåíèå êèñëîðîäà, íìîëè Î2 ìèí–1ã–1 ñûðîãî
âåñà; ïî ãîðèçîíòàëè – Vt – îáùàÿ ñêîðîñòü ïî-
ãëîùåíèÿ êèñëîðîäà, Vcyt è Valt – ìîùíîñòü öèòî-
õðîìíîãî è àëüòåðíàòèâíîãî ïóòè ïåðåíîñà ýëåêòðî-
íîâ ñîîòâåòñòâåííî
23ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2012. ¹ 3
Ñòðóêòóðíî-ôóíêöèîíàëüíàÿ îðãàíèçàöèÿ ìèòîõîíäðèé êîðíÿ ãîðîõà
Ïðåäïîëàãàåòñÿ, ÷òî âîçðàñòàíèå ñêîðîñòè
äûõàíèÿ êîðíåâûõ àïåêñîâ â óñëîâèÿõ êëèíî-
ñòàòèðîâàíèÿ ïðîèñõîäèò èìåííî â ÄÇÐ êîð-
íÿ, ãäå áûëè çàôèêñèðîâàíû èçìåíåíèÿ óëüòðà-
ñòðóêòóðû ìèòîõîíäðèè. Èçâåñòíî, ÷òî çîíû
ðàñòÿæåíèÿ êîðíÿ õàðàêòåðèçóþòñÿ ðåçêîé
àêòèâàöèåé ìåòàáîëèçìà è áîëåå èíòåíñèâ-
íûì ïîãëîùåíèåì êèñëîðîäà ïî ñðàâíåíèþ
ñ ìåðèñòåìîé [2, 3]. Ïîýòîìó èçìåíåíèå ñîîò-
íîøåíèÿ ðîñòîâûõ çîí â êîðíåâîì àïåêñå
â ïîëüçó çîíû ðàñòÿæåíèÿ â óñëîâèÿõ ìèêðî-
ãðàâèòàöèè [7] ìîæåò ïðèâîäèòü ê óâåëè-
÷åíèþ îáùåé ñêîðîñòè äûõàíèÿ äàæå â
òîì ñëó÷àå, åñëè ïîãëîùåíèå êèñëîðîäà â
ìåðèñòåìå è çîíàõ ðàñòÿæåíèÿ êîðíÿ îñòàåòñÿ
íåèçìåííûì.
Ñîäåðæàíèå áåëêà ìèòîõîíäðèàëüíîé ôðàê-
öèè â êîðíÿõ ïÿòèñóòî÷íûõ ïðîðîñòêîâ ãîðîõà
ñîñòàâëÿëî 0,30 ± 0,056 è 0,28 ± 0,058 ìã·ã–1
ñûðîãî âåñà ïðè n = 6 ñîîòâåòñòâåííî â êîí-
òðîëå è ïîñëå êëèíîñòàòèðîâàíèÿ. Îêèñëåíèÿ
ãëóòàìàòà êàê äûõàòåëüíîãî ñóáñòðàòà â íà-
øèõ ýêñïåðèìåíòàõ óäàâàëîñü äîñòè÷ü òîëüêî
â ïðèñóòñòâèè òèàìèíïèðîôîñôàòà ïðè äëè-
òåëüíûõ èíêóáàöèÿõ êàê â êîíòðîëå, òàê è ïðè
êëèíîñòàòèðîâàíèè. Ïîýòîìó ìû ñêëîííû ñ÷è-
òàòü, ÷òî ïðè íàëè÷èè â èíêóáàöèîííîé ñðåäå
ìàëàòà è ãëóòàìàòà îäíîâðåìåííî ïðîèñõîäèò
îêèñëåíèå ìèòîõîíäðèÿìè îäíîãî ìàëàòà. Èñ-
ñëåäîâàíèå îêèñëåíèÿ ìàëàòà â ïðèñóòñòâèè
ãëóòàìàòà (ðèñ. 3) ìèòîõîíäðèÿìè êîðíåé
ïÿòèñóòî÷íûõ ïðîðîñòêîâ ïîêàçàëî, ÷òî êëèíî-
ñòàòèðîâàíèå âûçûâàëî çàìåòíîå óâåëè÷åíèå
èíòåíñèâíîñòè îêèñëåíèÿ ìàëàòà (íà 37 %) â
àêòèâíîì ôîñôîðèëèðóþùåì ñîñòîÿíèè V3.
Îäíîâðåìåííî ñ ýòèì îòìå÷åíî äîñòîâåðíîå
óâåëè÷åíèå êîýôôèöèåíòà äûõàòåëüíîãî êîí-
Ðèñ. 3. Ïîëÿðîãðàôè÷åñêèå êðèâûå ïîãëîùåíèÿ
êèñëîðîäà ïðè îêèñëåíèè ìàëàòà + ãëóòàìàòà
ìèòîõîíäðèÿìè êîðíåé ïÿòèñóòî÷íûõ ïðîðîñòêîâ
ãîðîõà â êîíòðîëå (1) è ïîñëå êëèíîñòàòèðîâàíèÿ
(2).  ÿ÷åéêó äîïîëíèòåëüíî ê êîìïîíåíòàì ðå-
àêöèîííîé ñðåäû, îïèñàííîé â ìåòîäèêå, âíî-
ñèëè (óêàçàíî ëèíèÿìè) ñóñïåíçèþ ìèòîõîíäðèé
(Ì), 10 ìÌ ìàëàòà, 18 ìÌ ãëóòàìàòà, 110 ìêÌ
ÀÄÔ. Öèôðû ó êðèâûõ – ñêîðîñòü ïîãëîùåíèÿ
êèñëîðîäà (íìîëü Î2 ìèí–1ìã–1 áåëêà)
Îêèñëåíèå ñóáñòðàòîâ ìèòîõîíäðèÿìè êîðíåé ïÿòèñóòî÷íûõ ïðîðîñòêîâ ãîðîõà
* Ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíàÿ ðàçíèöà Ð 0,05.
Ñóáñòðàò
Ñîñòîÿíèå 3 Ñîñòîÿíèå 4 Êîýôôèöèåíò
íìîëü Î2 ìèí–1 ìã–1 ÄÊ ÀÄÔ/Î
Êîíòðîëü Êëèíîñòà-
òèðîâàíèå
Êîíòðîëü Êëèíîñòà-
òèðîâàíèå
Êîíòðîëü Êëèíîñòà-
òèðîâàíèå
Êîíòðîëü Êëèíîñòà-
òèðîâàíèå
Ìàëàò +
+ ãëóòàìàò
ÍÀÄÍ
Ñóêöèíàò
49,2 ±
± 7,14 *
178,2 ±
± 59,71
129,2 ±
± 35,57
78,8 ±
± 30,49 *
207,3 ±
± 44,15
153,6 ±
± 26,64
28,9 ±
± 10,56
98,4 ±
± 13,22
85,1 ±
± 12,04
36,4 ±
± 15,34
91,4 ±
± 29,13
92,1 ±
± 12,54
1,69 ±
± 0,344 *
1,88 ±
± 0,464
1,43 ±
± 0,222
2,28 ±
± 0,626 *
2,44 ±
± 1,023
1,67 ±
± 0,26
3,55 ±
± 0,579 *
1,66 ±
± 0,630 *
1,80 ±
± 0,327 *
2,54 ±
± 0,885*
1,07 ±
± 0,308*
1,19 ±
± 0,380*
24 ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2012. ¹ 3
Â.À. Áðûêîâ, È.Ï. Ãåíåðîçîâà, À.Ã. Øóãàåâ
òðîëÿ (íà 35 %) è ñíèæåíèå îòíîøåíèÿ ÀÄÔ/Î
(íà 30 %) â ñðàâíåíèè ñ êîíòðîëåì (òàáëè-
öà). Õàðàêòåð ïîãëîùåíèÿ êèñëîðîäà ïðè
óòèëèçàöèè ýêçîãåííîãî ÍÀÄÍ è ñóêöèíàòà
òàêæå íåñêîëüêî èçìåíÿëñÿ â óñëîâèÿõ êëèíî-
ñòàòèðîâàíèÿ (ðèñ. 4). Ïðè èñïîëüçîâàíèè
ýòèõ ñóáñòðàòîâ ñêîðîñòü ïîãëîùåíèÿ êèñëî-
ðîäà â ñîñòîÿíèè 3 íåçíà÷èòåëüíî âîçðàñ-
òàëà è íàáëþäàëàñü òåíäåíöèÿ ê óâåëè÷å-
íèþ êîýôôèöèåíòà äûõàòåëüíîãî êîíòðîëÿ,
êàê è â ñëó÷àå îêèñëåíèÿ ìàëàòà, íî îíà
áûëà âûðàæåíà çíà÷èòåëüíî ñëàáåå è íå
èìåëà ñòàòèñòè÷åñêîé äîñòîâåðíîñòè (òàáëè-
öà).Îêèñëåíèå ÍÀÄÍ è ñóêöèíàòà ñîïðî-
âîæäàëîñü çàìåòíûì ñíèæåíèåì îòíîøåíèÿ
ÀÄÔ/Î â ýêñïåðèìåíòàëüíûõ óñëîâèÿõ. Òà-
êèì îáðàçîì, â ïðîöåññå óòèëèçàöèè âñåõ
èñïîëüçîâàííûõ íàìè äûõàòåëüíûõ ñóáñòðà-
òîâ îêèñëèòåëüíàÿ àêòèâíîñòü ìèòîõîíäðèé
â ñîñòîÿíèè 3 èìåëà òåíäåíöèþ ê ïîâûøå-
íèþ â óñëîâèÿõ ìîäåëèðîâàííîé ìèêðîãðà-
âèòàöèè. Îäíàêî àêòèâàöèÿ îêèñëèòåëüíîãî
ìåòàáîëèçìà, ïî-âèäèìîìó, íå ïðèâîäèëà
ê çàïàñàíèþ áîëüøåãî êîëè÷åñòâà ìîëåêóë
ÀÒÔ ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëåì, ïîñêîëüêó
ñîïðîâîæäàëàñü ñíèæåíèåì ýôôåêòèâíîñòè
ôîñôîðèëèðîâàíèÿ, ò.å. îòíîøåíèÿ ÀÄÔ/Î.
Ñóùåñòâóåò íå òàê ìíîãî äàííûõ, êîòî-
ðûå êàñàëèñü áû ýíåðãåòè÷åñêèõ àñïåêòîâ
ôóíêöèîíèðîâàíèÿ ðàñòèòåëüíûõ ìèòîõîíä-
ðèé â óñëîâèÿõ ìèêðîãðàâèòàöèè è êëèíîñòà-
òèðîâàíèÿ. Ïðè èçó÷åíèè äûõàòåëüíîé àê-
òèâíîñòè ìèòîõîíäðèé êîðíåé êóêóðóçû â
óñëîâèÿõ êëèíîñòàòèðîâàíèÿ, êîòîðûå îòëè-
÷àëèñü îò èñïîëüçîâàííûõ íàìè, íå íàáëþäà-
ëîñü êàêèõ-íèáóäü çíà÷èìûõ îòëè÷èé â ñêî-
ðîñòè îêèñëåíèÿ ðàçëè÷íûõ ñóáñòðàòîâ ìåæäó
êîíòðîëüíûìè è îïûòíûìè îáðàçöàìè [22].
Îäíàêî â êîíòðîëå íèçêèå ñêîðîñòè îêèñ-
ëåíèÿ ñóáñòðàòîâ ìèòîõîíäðèÿìè, à òàêæå
î÷åíü íèçêèå ïîêàçàòåëè êîýôôèöèåíòà äûõà-
òåëüíîãî êîíòðîëÿ ìîãóò ñâèäåòåëüñòâîâàòü î
ñóùåñòâåííîì ïîäàâëåíèè ìåòàáîëè÷åñêîé àê-
òèâíîñòè ìèòîõîíäðèé â ïðîöåññå èõ âû-
Ðèñ. 4. Ïîëÿðîãðàôè÷åñêèå êðèâûå ïîãëîùåíèÿ êèñëîðîäà ìèòîõîíäðèÿìè êîðíåé ãîðîõà ïðè îêèñëåíèè
ýêçîãåííîãî ÍÀÄÍ è ñóêöèíàòà â êîíòðîëå (1) è ïîñëå êëèíîñòàòèðîâàíèÿ (2).  ÿ÷åéêó ñ ðåàêöèîííîé
ñðåäîé, îïèñàííîé â ìåòîäàõ èññëåäîâàíèÿ, âíîñèëè ñóñïåíçèþ ìèòîõîíäðèé (Ì), ñóáñòðàò îêèñëåíèÿ –
1 ìÌ ÍÀÄÍ, 10 ìÌ ñóêöèíàò, 110 ìêÌ ÀÄÔ. Öèôðû ó êðèâûõ – ñêîðîñòü ïîãëîùåíèÿ êèñëîðîäà
(íìîëü Î2 ìèí–1 ìã–1 áåëêà)
25ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2012. ¹ 3
Ñòðóêòóðíî-ôóíêöèîíàëüíàÿ îðãàíèçàöèÿ ìèòîõîíäðèé êîðíÿ ãîðîõà
äåëåíèÿ. Èìåþòñÿ è äðóãèå äàííûå, êîòîðûå
ìîæíî áûëî áû ñîïîñòàâèòü ñ äàííûìè,
ïîëó÷åííûìè íàìè. Òàê, ïðè èññëåäîâàíèè
óðîâíÿ äûõàíèÿ êëåòîê âîäîðîñëè Chlorella
áûëî óñòàíîâëåíî, ÷òî êëèíîñòàòèðîâàíèå âû-
çûâàëî ïîâûøåíèå óðîâíÿ ïîãëîùåíèÿ êèñëî-
ðîäà íà âñåõ ôàçàõ ðîñòà êóëüòóðû êëåòîê. Ýòî
òàêæå êîððåëèðîâàëî ñ óëüòðàñòðóêòóðíûìè
èçìåíåíèÿìè ìèòîõîíäðèé [23].
Ðåàëüíàÿ ìèêðîãðàâèòàöèÿ â êîñìè÷åñêîì
ïîëåòå èëè åå ìîäåëèðîâàíèå â ëàáîðàòîð-
íûõ óñëîâèÿõ ñóùåñòâåííî âëèÿþò íà ñòðóê-
òóðíî-ôóíêöèîíàëüíóþ îðãàíèçàöèþ ìèòî-
õîíäðèé êëåòîê æèâîòíûõ è ÷åëîâåêà, ÷òî
âåäåò ê ñåðüåçíûì íàðóøåíèÿì êëåòî÷íî-
ãî ìåòàáîëèçìà [24–26]. Óñëîâèÿ ìèêðî-
ãðàâèòàöèè èíãèáèðóþò ìåòàáîëè÷åñêóþ àê-
òèâíîñòü ìèòîõîíäðèé æèâîòíûõ. Ïðîèñõî-
äèò ñíèæåíèå àêòèâíîñòè ìåòàáîëè÷åñêîãî
ïóòè îêèñëåíèÿ æèðíûõ êèñëîò, êîòîðûé
îáåñïå÷èâàåò ñóáñòðàòàìè ìèòîõîíäðèàëüíîå
äûõàíèå [27]. Èíãèáèðóåòñÿ àêòèâíîñòü ôåð-
ìåíòîâ öèêëà òðèêàðáîíîâûõ êèñëîò è ýëåê-
òðîí-òðàíñïîðòíîé öåïè [28, 29], ÷òî íåãà-
òèâíî îòðàæàåòñÿ íà âíóòðèêëåòî÷íîì óðîâíå
ÀÒÔ [30]. Òàêèì îáðàçîì, ïîëó÷åííûå íàìè
è èçâåñòíûå èç ëèòåðàòóðû äàííûå óêàçû-
âàþò íà áîëåå âûñîêóþ óñòîé÷èâîñòü ìèòî-
õîíäðèé ðàñòåíèé ê óñëîâèÿì ìèêðîãðàâè-
òàöèè ïî ñðàâíåíèþ ñ ìèòîõîíäðèÿìè æè-
âîòíûõ.
 çàêëþ÷åíèå ñëåäóåò îòìåòèòü, ÷òî ïðî-
âåäåííîå íàìè èññëåäîâàíèå ìèòîõîíäðèé â
óñëîâèÿõ ìîäåëèðîâàííîé ìèêðîãðàâèòàöèè
ïîêàçàëî, ÷òî ñòðóêòóðíî-ôóíêöèîíàëüíàÿ
îðãàíèçàöèÿ ýòèõ îðãàíåëë â êëåòêàõ êîðíÿ
ãîðîõà â öåëîì îñòàåòñÿ áëèçêîé ê ñòàöèî-
íàðíîìó êîíòðîëþ. Â òî æå âðåìÿ óñòàíîâëåíî,
÷òî óëüòðàñòðóêòóðà ìèòîõîíäðèé â ðàñòóùèõ
êëåòêàõ êîðíåâîãî àïåêñà èçìåíÿåòñÿ òîëüêî
â àêòèâíî ìåòàáîëèçèðóþùèõ êëåòêàõ ÄÇÐ,
÷òî ñîïðîâîæäàåòñÿ áîëåå èíòåíñèâíûì äû-
õàíèåì êîðíåâûõ àïåêñîâ. Ïîëó÷åííûå íàìè
ðåçóëüòàòû òàêæå ÷åòêî ïîêàçûâàþò, ÷òî
êëèíîñòàòèðîâàíèå íå îêàçûâàëî ñêîëüêî-
íèáóäü çàìåòíîãî íåãàòèâíîãî âëèÿíèÿ íà
ïðîöåññ îêèñëèòåëüíîãî ôîñôîðèëèðîâàíèÿ
â ìèòîõîíäðèÿõ êîðíåé ãîðîõà, èíûìè ñëî-
âàìè, íå ïðåïÿòñòâîâàëî âûïîëíåíèþ èìè
ñâîåé îñíîâíîé ôèçèîëîãè÷åñêîé ôóíêöèè.
Âìåñòå ñ òåì íàáëþäàåìûå èçìåíåíèÿ, íà
íàø âçãëÿä, çàêëþ÷àþòñÿ íå â îáùåé ñòèìó-
ëÿöèè îêèñëèòåëüíîé àêòèâíîñòè ìèòîõîí-
äðèé è óâåëè÷åíèè ïðîäóêöèè ÀÒÔ, à â ðå-
ãóëÿöèè ýëåêòðîí-òðàíñïîðòíîé öåïè ìèòî-
õîíäðèé, ÷òî ïîçâîëÿåò ïîääåðæèâàòü ïîñòîÿí-
íûé óðîâåíü ÀÒÔ, íåîáõîäèìûé äëÿ ïîëíî-
öåííîãî ôóíêöèîíèðîâàíèÿ êëåòîê â óñëîâè-
ÿõ êëèíîñòàòèðîâàíèÿ.
V.Î. Brykov, I.P. Generozova, A.G. Shugaev
ULTRASTRUCTURE AND METABOLIC
ACTIVITY OF PEA MITOCHONDRIA
UNDER CLINOROTATION
Experimental data on the mitochondrial ultrastruc-
ture and tissue respiration in root apex as well as meta-
bolic activity of the organelles isolated from pea seed-
ling roots after 5-day of clinorotation are presented.
It was shown that mitochondrial condensation in the
distal elongation zone correlated with an increased rate
of oxygen uptake on 7 %. We also observed increase in
rate of malate oxidation and respiratory control ratio
increased simultaneously with a decreased in efficiency
of oxidative phosphorylation. Such character of mito-
chondrial rearrangements in simulated microgravity is
assumed to be a consequence of adaptation to these
conditions.
Â.Î. Áðèêîâ, ².Ï. Ãåíåðîçîâà, Î.Ã. Øóãàåâ
ÑÒÐÓÊÒÓÐÍÎ-ÔÓÍÊÖ²ÎÍÀËÜÍÀ
ÎÐÃÀͲÇÀÖ²ß Ì²ÒÎÕÎÍÄÐ²É ÊÎÐÅÍß ÃÎÐÎÕÓ
 ÓÌÎÂÀÕ ÌÎÄÅËÜÎÂÀÍί ̲ÊÐÎÃÐÀ²ÒÀÖ²¯
Íàâåäåíî äàí³ äîñë³äæåííÿ óëüòðàñòðóêòóðè
ì³òîõîíäð³é ³ äèõàííÿ â êîðåíåâèõ àïåêñàõ, à òàêîæ
ìåòàáîë³÷íî¿ àêòèâíîñò³ îðãàíåë, ³çîëüîâàíèõ ³ç
çàðîäêîâèõ êîðåí³â ïðîðîñòê³â ãîðîõó ï³ñëÿ ï’ÿòè-
äîáîâîãî êë³íîñòàòóâàííÿ. Ïîêàçàíî, ùî êîíäåí-
ñàö³ÿ ì³òîõîíäð³é â äèñòàëüí³é çîí³ ðîçòÿãó êîðåíÿ
â óìîâàõ êë³íîñòàòóâàííÿ ñóïðîâîäæóâàëàñÿ çðîñ-
òàííÿì øâèäêîñò³ ïîãëèíàííÿ êèñíþ íà 7 % ó
ïîð³âíÿíí³ ç êîíòðîëåì. Âñòàíîâëåíî òàêîæ, ùî
ï³ñëÿ êë³íîñòàòóâàííÿ øâèäê³ñòü îêèñëåííÿ ì³òî-
õîíäð³ÿìè åêçîãåííîãî ìàëàòó â ïðèñóòíîñò³ ãëóòà-
ìàòó çðîñòàëà îäíî÷àñíî ³ç çðîñòàííÿì äèõàëüíîãî
êîíòðîëþ ³ çíèæåííÿì åôåêòèâíîñò³ ôîñôîðèëþ-
âàííÿ (ÀÄÔ/Î). Ïðèïóñêàºòüñÿ, ùî îïèñàí³ çì³íè
ì³òîõîíäð³é ìàþòü àäàïòèâíèé õàðàêòåð.
ÑÏÈÑÎÊ ËÈÒÅÐÀÒÓÐÛ
1. Plaxton W.C., Podestá E.F. The functional organi-
zation and control of plant respiration // Crit. Rev.
Plant. Sci. – 2006. – 25, ¹ 2. – P. 159–198.
2. Lambers H., Scheurwater I., Atkin O.K. Respira-
tory patterns in roots in relation to their func-
tioning // Plant Roots : The Hidden Half / Eds
26 ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2012. ¹ 3
Â.À. Áðûêîâ, È.Ï. Ãåíåðîçîâà, À.Ã. Øóãàåâ
Y. Waisel, A. Eshel, V. Kafakki. – New York :
Marcel Dekker, 1996. – P. 323–362.
3. Õàâêèí Ý.Å. Ôîðìèðîâàíèå ìåòàáîëè÷åñêèõ
ñèñòåì â ðàñòóùèõ êëåòêàõ ðàñòåíèé. – Íîâî-
ñèáèðñê : Íàóêà, 1977. – 221 ñ.
4. Êîðäþì Å.Ë., Ìàðòûí Ã.È., Îâ÷àðåíêî Þ.Â. Ðîñò
è äèôôåðåíöèðîâêà êëåòîê êîëëóìåëûêîðíåâîãî
÷åõëèêà è ñîáñòâåííî êîðíÿ âñòàöèîíàðíûõ
óñëîâèÿõ è ïðè êëèíîñòàòèðîâàíèè // Öèòîëîãèÿ
è ãåíåòèêà. – 2008. – 42, ¹ 1. – C. 3–12.
5. Lambers H. Respiration in intact plant tissues: its
regulation and dependence on environmental fac-
tors, metabolism and invading organisms // High-
er Plant Cell Respiration / Eds R. Douce, D.A.
Day. – Berlin : Springer, 1985. – 18. – P. 202–247.
6. Jeong J., Guerinota M.L. Homing in on iron ho-
meostasis in plants // Trends Plant Sci. – 2009. –
14, ¹ 5. – P. 280–285.
7. Kordyum E.L. Biology of plant cell microgravity
and under clinostating // Int. Rev. Cytol. – 1997. –
171. – P. 1–72.
8. Mercys A.I., Lavrinavichius R.S., Rupainenen O.I.
et al. The state of gravity sensors and peculiari-
ties of plant growth during different gravitational
loads // Adv. Space Res. – 1983. – 3, ¹ 9. –
P. 211–219.
9. Halstead T.W., Dutcher F.R. Plants in Space // Annu.
Rev. Plant Physiol. – 1987. – 38. – Ð. 317–345.
10. Êëèì÷óê Ä.Î. Ñòðóêòóðíî-ôóíêö³îíàëüí³ îñîá-
ëèâîñò³ ì³òîõîíäð³é â ñòàòîöèòàõ êîðåí³â ñî¿ çà
óìîâ ì³êðîãðàâ³òàö³¿ // Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. –
2007. – 41, ¹ 1. – C. 30–35.
11. Popova A.F. Comparative characteristic of mito-
chondria ultrastructural organization in Chlorella
cells under altered gravity conditions // Adv.
Space Res. – 2003. – 31, ¹ 10. – P. 2253–2259.
12. Slocum R.D., Gaynor J.J., Galston A.W. Cytological
and ultrastructural studies on root tissues // Ann.
Bot. – 1984. – 54. – P. 65–76.
13. Weigel D., Glazebrook J. Arabidopsis : A laboratory
manual. – New York : Gold Spring Harbor
Laboratory Press, 2002. – P. 354.
14. Reynolds E.S. The use of lead citrate at high pH as
an electron-opaque stain in electron microscopy //
J. Cell Biol. – 1963. – 17, ¹ 1. – P. 208–212.
15. Ãåíåðîçîâà È.Ï., Ìàåâñêàÿ Ñ.Í., Øóãàåâ À.Ã.
Èíãèáèðîâàíèå ìåòàáîëè÷åñêîé àêòèâíîñòè
ìèòîõîíäðèé ýòèîëèðîâàííûõ ïðîðîñòêîâ ãî-
ðîõà, ïîäâåðãíóòûõ âîäíîìó ñòðåññó // Ôèçèî-
ëîãèÿ ðàñòåíèé. – 2009. – 56, ¹ 1. – Ñ. 1–8.
16. Øîëüö Ê.Ô., Îñòðîâñêèé Ä.Í. ß÷åéêà äëÿ àì-
ïåðîìåòðè÷åñêîãî îïðåäåëåíèÿ êèñëîðîäà //
Ìåòîäû ñîâðåìåííîé áèîõèìèè / Ïîä ðåä.
Â.Ë. Êðåòîâè÷à – Ì.: Íàóêà, 1975. – Ñ. 52–58.
17. Chance B., Williams G.R. The respiratory chain
and oxidative phosphorylation // Adv. Enzymol. –
1956. – 17, ¹ 1. – P. 65–134.
18. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L., Randall R.J.
Protein measurement with the folin phenol reagent //
J. Biol. Chem. – 1951. – 193. – P. 265–275.
19. Brykov V. Clinorotation àffects the ultrastructure
of pea root mitochondria // Micrograv. Sci.
Technol. – 2011. – 23. – P. 215–219.
20. Vanlerberghe G.C., McIntosh L. Coordinate regu-
lation of cytochrome and alternative pathway res-
piration in Tobacco // Plant Physiol. – 1992. –
100. – P. 1846–1851.
21. Van Aken O., Giraud E., Clifton R., Whelan J. Alter-
native oxidase: a target and regulator of stress respons-
es // Physiol. Plant. – 2009. – 137. – P. 354–361.
22. Òàèðáåêîâ Ì.Ã., Ìàèëÿí Ý.Ñ., Ðîçîâ À.Í. Äûõà-
òåëüíàÿ àêòèâíîñòü ìèòîõîíäðèé â êëåòêàõ
êîðíåé êóêóðóçû, âûðàùåííûõ â óñëîâèÿõ èç-
ìåíåííîé ñèëû òÿæåñòè // Äîêë. ÀÍ ÑÑÑÐ. –
1978. – 241, ¹ 5. – Ñ. 238–241.
23. Ïîïîâà À.Ô. Óðîâåíü äûõàíèÿ è óëüòðàñòðóê-
òóðà êëåòîê Chlorella ïðè äëèòåëüíîì êëèíî-
ñòàòèðîâàíèè // Äîï. ÍÀÍ Óêðà¿íè, Ñåð. Á. –
1999. – ¹ 5. – C. 183–187.
24. Philpott D.E., Popova I.A., Kato K. et al. Mor-
phological and biochemical examination of Cos-
mos 1887 rat heart tissue. Part I. Ultrastructure //
FASEB J. – 1990. – 4. – P. 73–78.
25. Yang H., Bhat G.K., Sridaran R. Clinostat rotation
induces apoptosis in luteal cells of the pregnant rat //
Biol. Reprod. – 2002. – 66, ¹ 1. – P. 770–777.
26. Maccarrone M., Battista N., Meloni M. et al. Creating
conditions similar to those that occur during exposure
of cells to microgravity induces apoptosis in human
lymphocytes by 5-lipoxygenase-mediated mitochon-
drial uncoupling and cytochrome c release // J. Leuk.
Biol. – 2003. – 73, ¹ 4. – P. 472–481.
27. Stein T.P., Schlutera M.D., Galante A.T. et al.
Energy metabolism pathways in rat muscle under
conditions of simulated microgravity // J. Nutr.
Biochem. – 2002. – 13, ¹ 8. – P. 471–478.
28. Buravkova L.B., Mailian E.S. Dehydrogenase ac-
tivity in skeletal muscles of rats after long-term
exposure to weightlessness // Biull. Eksp. Biol.
Med. – 1988. – 105, ¹ 5. – P. 538–540.
29. Connor M.K., Hood D.A. Effect of microgravity
on the expression of mitochondrial enzymes in rat
cardiac and skeletal muscles // J. Appl. Physiol. –
1998. – 84. – P. 593–598.
30. Degan P., Sancandi M., Zunino A. et al. Exposure
of human lymphocytes and lymphoblastoid cells to
simulated microgravity strongly affects energy me-
tabolism and DNA repair // J. Cell. Biochem. –
2004. – 94, ¹ 3. – P. 460–469.
Ïîñòóïèëà 08.08.11
<<
/ASCII85EncodePages false
/AllowTransparency false
/AutoPositionEPSFiles true
/AutoRotatePages /None
/Binding /Left
/CalGrayProfile (Dot Gain 20%)
/CalRGBProfile (sRGB IEC61966-2.1)
/CalCMYKProfile (U.S. Web Coated \050SWOP\051 v2)
/sRGBProfile (sRGB IEC61966-2.1)
/CannotEmbedFontPolicy /Error
/CompatibilityLevel 1.4
/CompressObjects /Tags
/CompressPages true
/ConvertImagesToIndexed true
/PassThroughJPEGImages true
/CreateJobTicket false
/DefaultRenderingIntent /Default
/DetectBlends true
/DetectCurves 0.0000
/ColorConversionStrategy /CMYK
/DoThumbnails false
/EmbedAllFonts true
/EmbedOpenType false
/ParseICCProfilesInComments true
/EmbedJobOptions true
/DSCReportingLevel 0
/EmitDSCWarnings false
/EndPage -1
/ImageMemory 1048576
/LockDistillerParams false
/MaxSubsetPct 100
/Optimize true
/OPM 1
/ParseDSCComments true
/ParseDSCCommentsForDocInfo true
/PreserveCopyPage true
/PreserveDICMYKValues true
/PreserveEPSInfo true
/PreserveFlatness true
/PreserveHalftoneInfo false
/PreserveOPIComments false
/PreserveOverprintSettings true
/StartPage 1
/SubsetFonts true
/TransferFunctionInfo /Apply
/UCRandBGInfo /Preserve
/UsePrologue false
/ColorSettingsFile ()
/AlwaysEmbed [ true
]
/NeverEmbed [ true
]
/AntiAliasColorImages false
/CropColorImages true
/ColorImageMinResolution 300
/ColorImageMinResolutionPolicy /OK
/DownsampleColorImages true
/ColorImageDownsampleType /Bicubic
/ColorImageResolution 1200
/ColorImageDepth -1
/ColorImageMinDownsampleDepth 1
/ColorImageDownsampleThreshold 1.50000
/EncodeColorImages false
/ColorImageFilter /DCTEncode
/AutoFilterColorImages true
/ColorImageAutoFilterStrategy /JPEG
/ColorACSImageDict <<
/QFactor 0.15
/HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1]
>>
/ColorImageDict <<
/QFactor 0.15
/HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1]
>>
/JPEG2000ColorACSImageDict <<
/TileWidth 256
/TileHeight 256
/Quality 30
>>
/JPEG2000ColorImageDict <<
/TileWidth 256
/TileHeight 256
/Quality 30
>>
/AntiAliasGrayImages false
/CropGrayImages true
/GrayImageMinResolution 300
/GrayImageMinResolutionPolicy /OK
/DownsampleGrayImages true
/GrayImageDownsampleType /Bicubic
/GrayImageResolution 1200
/GrayImageDepth -1
/GrayImageMinDownsampleDepth 2
/GrayImageDownsampleThreshold 1.50000
/EncodeGrayImages false
/GrayImageFilter /DCTEncode
/AutoFilterGrayImages true
/GrayImageAutoFilterStrategy /JPEG
/GrayACSImageDict <<
/QFactor 0.15
/HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1]
>>
/GrayImageDict <<
/QFactor 0.15
/HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1]
>>
/JPEG2000GrayACSImageDict <<
/TileWidth 256
/TileHeight 256
/Quality 30
>>
/JPEG2000GrayImageDict <<
/TileWidth 256
/TileHeight 256
/Quality 30
>>
/AntiAliasMonoImages false
/CropMonoImages true
/MonoImageMinResolution 1200
/MonoImageMinResolutionPolicy /OK
/DownsampleMonoImages true
/MonoImageDownsampleType /Bicubic
/MonoImageResolution 1200
/MonoImageDepth -1
/MonoImageDownsampleThreshold 1.50000
/EncodeMonoImages false
/MonoImageFilter /CCITTFaxEncode
/MonoImageDict <<
/K -1
>>
/AllowPSXObjects false
/CheckCompliance [
/None
]
/PDFX1aCheck false
/PDFX3Check false
/PDFXCompliantPDFOnly false
/PDFXNoTrimBoxError true
/PDFXTrimBoxToMediaBoxOffset [
0.00000
0.00000
0.00000
0.00000
]
/PDFXSetBleedBoxToMediaBox true
/PDFXBleedBoxToTrimBoxOffset [
0.00000
0.00000
0.00000
0.00000
]
/PDFXOutputIntentProfile (None)
/PDFXOutputConditionIdentifier ()
/PDFXOutputCondition ()
/PDFXRegistryName ()
/PDFXTrapped /False
/CreateJDFFile false
/Description <<
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
/BGR <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>
/CHS <FEFF4f7f75288fd94e9b8bbe5b9a521b5efa7684002000410064006f006200650020005000440046002065876863900275284e8e9ad88d2891cf76845370524d53705237300260a853ef4ee54f7f75280020004100630072006f0062006100740020548c002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e003000204ee553ca66f49ad87248672c676562535f00521b5efa768400200050004400460020658768633002>
/CHT <FEFF4f7f752890194e9b8a2d7f6e5efa7acb7684002000410064006f006200650020005000440046002065874ef69069752865bc9ad854c18cea76845370524d5370523786557406300260a853ef4ee54f7f75280020004100630072006f0062006100740020548c002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e003000204ee553ca66f49ad87248672c4f86958b555f5df25efa7acb76840020005000440046002065874ef63002>
/CZE <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>
/DAN <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>
/DEU <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>
/ESP <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>
/ETI <FEFF004b00610073007500740061006700650020006e0065006900640020007300e4007400740065006900640020006b00760061006c006900740065006500740073006500200074007200fc006b006900650065006c007300650020007000720069006e00740069006d0069007300650020006a0061006f006b007300200073006f00620069006c0069006b0065002000410064006f006200650020005000440046002d0064006f006b0075006d0065006e00740069006400650020006c006f006f006d006900730065006b0073002e00200020004c006f006f0064007500640020005000440046002d0064006f006b0075006d0065006e00740065002000730061006100740065002000610076006100640061002000700072006f006700720061006d006d006900640065006700610020004100630072006f0062006100740020006e0069006e0067002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e00300020006a00610020007500750065006d006100740065002000760065007200730069006f006f006e00690064006500670061002e000d000a>
/FRA <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>
/GRE <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>
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
/HRV (Za stvaranje Adobe PDF dokumenata najpogodnijih za visokokvalitetni ispis prije tiskanja koristite ove postavke. Stvoreni PDF dokumenti mogu se otvoriti Acrobat i Adobe Reader 5.0 i kasnijim verzijama.)
/HUN <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>
/ITA <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>
/JPN <FEFF9ad854c18cea306a30d730ea30d730ec30b951fa529b7528002000410064006f0062006500200050004400460020658766f8306e4f5c6210306b4f7f75283057307e305930023053306e8a2d5b9a30674f5c62103055308c305f0020005000440046002030d530a130a430eb306f3001004100630072006f0062006100740020304a30883073002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e003000204ee5964d3067958b304f30533068304c3067304d307e305930023053306e8a2d5b9a306b306f30d530a930f330c8306e57cb30818fbc307f304c5fc59808306730593002>
/KOR <FEFFc7740020c124c815c7440020c0acc6a9d558c5ec0020ace0d488c9c80020c2dcd5d80020c778c1c4c5d00020ac00c7a50020c801d569d55c002000410064006f0062006500200050004400460020bb38c11cb97c0020c791c131d569b2c8b2e4002e0020c774b807ac8c0020c791c131b41c00200050004400460020bb38c11cb2940020004100630072006f0062006100740020bc0f002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e00300020c774c0c1c5d0c11c0020c5f40020c2180020c788c2b5b2c8b2e4002e>
/LTH <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>
/LVI <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>
/NLD (Gebruik deze instellingen om Adobe PDF-documenten te maken die zijn geoptimaliseerd voor prepress-afdrukken van hoge kwaliteit. De gemaakte PDF-documenten kunnen worden geopend met Acrobat en Adobe Reader 5.0 en hoger.)
/NOR <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>
/POL <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>
/PTB <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>
/RUM <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>
/RUS <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>
/SKY <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>
/SLV <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>
/SUO <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>
/SVE <FEFF0041006e007600e4006e00640020006400650020006800e4007200200069006e0073007400e4006c006c006e0069006e006700610072006e00610020006f006d002000640075002000760069006c006c00200073006b006100700061002000410064006f006200650020005000440046002d0064006f006b0075006d0065006e007400200073006f006d002000e400720020006c00e4006d0070006c0069006700610020006600f60072002000700072006500700072006500730073002d007500740073006b00720069006600740020006d006500640020006800f600670020006b00760061006c0069007400650074002e002000200053006b006100700061006400650020005000440046002d0064006f006b0075006d0065006e00740020006b0061006e002000f600700070006e00610073002000690020004100630072006f0062006100740020006f00630068002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e00300020006f00630068002000730065006e006100720065002e>
/TUR <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>
/UKR <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>
/ENU (Use these settings to create Adobe PDF documents best suited for high-quality prepress printing. Created PDF documents can be opened with Acrobat and Adobe Reader 5.0 and later.)
>>
/Namespace [
(Adobe)
(Common)
(1.0)
]
/OtherNamespaces [
<<
/AsReaderSpreads false
/CropImagesToFrames true
/ErrorControl /WarnAndContinue
/FlattenerIgnoreSpreadOverrides false
/IncludeGuidesGrids false
/IncludeNonPrinting false
/IncludeSlug false
/Namespace [
(Adobe)
(InDesign)
(4.0)
]
/OmitPlacedBitmaps false
/OmitPlacedEPS false
/OmitPlacedPDF false
/SimulateOverprint /Legacy
>>
<<
/AddBleedMarks false
/AddColorBars false
/AddCropMarks false
/AddPageInfo false
/AddRegMarks false
/ConvertColors /ConvertToCMYK
/DestinationProfileName ()
/DestinationProfileSelector /DocumentCMYK
/Downsample16BitImages true
/FlattenerPreset <<
/PresetSelector /MediumResolution
>>
/FormElements false
/GenerateStructure false
/IncludeBookmarks false
/IncludeHyperlinks false
/IncludeInteractive false
/IncludeLayers false
/IncludeProfiles false
/MultimediaHandling /UseObjectSettings
/Namespace [
(Adobe)
(CreativeSuite)
(2.0)
]
/PDFXOutputIntentProfileSelector /DocumentCMYK
/PreserveEditing true
/UntaggedCMYKHandling /LeaveUntagged
/UntaggedRGBHandling /UseDocumentProfile
/UseDocumentBleed false
>>
]
>> setdistillerparams
<<
/HWResolution [2400 2400]
/PageSize [612.000 792.000]
>> setpagedevice
|