Оценка генетической изменчивости коллекции амаранта (Аmaranthus L.) с использованием RAPD-анализа
При помощи RAPD−анализа изучена генетическая изменчивость коллекции амаранта. Отмечен высокий уровень полиморфности изучаемых образцов, который в среднем составил 85 %. С использованием некоторых праймеров детектированы уникальные фрагменты, характерные только для определенных образцов, а также 18 м...
Збережено в:
| Дата: | 2012 |
|---|---|
| Автор: | |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Russian |
| Опубліковано: |
Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України
2012
|
| Назва видання: | Цитология и генетика |
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/126477 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Оценка генетической изменчивости коллекции амаранта (Аmaranthus L.) с использованием RAPD-анализа / С.В. Лиманская // Цитология и генетика. — 2012. — Т. 46, № 4. — С. 19-26. — Бібліогр.: 22 назв. — рос. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-126477 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-1264772025-02-09T17:34:39Z Оценка генетической изменчивости коллекции амаранта (Аmaranthus L.) с использованием RAPD-анализа Оцінка генетичної мінливості колекції амаранту (Amaranthus L.) з використанням RAPD-аналізу Estimation of the genetic variability of amaranth collection (Amaranthus L.) with RAPD-analysis Лиманская, С.В. Оригинальные работы При помощи RAPD−анализа изучена генетическая изменчивость коллекции амаранта. Отмечен высокий уровень полиморфности изучаемых образцов, который в среднем составил 85 %. С использованием некоторых праймеров детектированы уникальные фрагменты, характерные только для определенных образцов, а также 18 мономорфных локусов, свойственных всем образцам амаранта. Рассчитаны генетические дистанции Неи и Ли. Этот показатель варьировал в пределах от 0,0009 до 0,0141. Проведен кластерный анализ, по результатам которого образцы амаранта были распределены в два кластера в соответствии с видовой принадлежностью. За допомогою RAPD-аналізу вивчено генетичну мінливість колекції амаранту. Зазначено високий рівень поліморфності досліджених зразків, який в середньому становив 85 %. З використанням деяких праймерів детектовано унікальні фрагменти, характерні лише певним зразкам, а також 18 мономорфних локусів, притаманних всім зразкам амаранту. Розраховано генетичні відстані Нея та Лі. Цей показник варіював в межах від 0,0009 до 0,0141. Проведено кластерний аналіз, за результатами якого зразки амаранту було розподілено в два кластери відповідно до видової приналежності. Genetic variability of amaranth collection was studied with RAPD-analysis. A high level of polymorphism of studied accessions was determined and amounted 85 % in mean. The unique bends characteristic only for the definite accessions, and 18 monomorphic loci proper for all amaranth accessions were detected with some primers. The genetic distances of Nei and Li were calculated. This index varied from 0,0009 to 0,0141. Cluster analysis was carried out. The amaranth accessions were classified into 2 clusters conformity with species belonging. 2012 Article Оценка генетической изменчивости коллекции амаранта (Аmaranthus L.) с использованием RAPD-анализа / С.В. Лиманская // Цитология и генетика. — 2012. — Т. 46, № 4. — С. 19-26. — Бібліогр.: 22 назв. — рос. 0564-3783 DOI: 10.3103/S0095452712040093 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/126477 575:582.661.21 ru Цитология и генетика application/pdf Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Russian |
| topic |
Оригинальные работы Оригинальные работы |
| spellingShingle |
Оригинальные работы Оригинальные работы Лиманская, С.В. Оценка генетической изменчивости коллекции амаранта (Аmaranthus L.) с использованием RAPD-анализа Цитология и генетика |
| description |
При помощи RAPD−анализа изучена генетическая изменчивость коллекции амаранта. Отмечен высокий уровень полиморфности изучаемых образцов, который в среднем составил 85 %. С использованием некоторых праймеров детектированы уникальные фрагменты, характерные только для определенных образцов, а также 18 мономорфных локусов, свойственных всем образцам амаранта. Рассчитаны генетические дистанции Неи и Ли. Этот показатель варьировал в пределах от 0,0009 до 0,0141. Проведен кластерный анализ, по результатам которого образцы амаранта были распределены в два кластера в соответствии с видовой принадлежностью. |
| format |
Article |
| author |
Лиманская, С.В. |
| author_facet |
Лиманская, С.В. |
| author_sort |
Лиманская, С.В. |
| title |
Оценка генетической изменчивости коллекции амаранта (Аmaranthus L.) с использованием RAPD-анализа |
| title_short |
Оценка генетической изменчивости коллекции амаранта (Аmaranthus L.) с использованием RAPD-анализа |
| title_full |
Оценка генетической изменчивости коллекции амаранта (Аmaranthus L.) с использованием RAPD-анализа |
| title_fullStr |
Оценка генетической изменчивости коллекции амаранта (Аmaranthus L.) с использованием RAPD-анализа |
| title_full_unstemmed |
Оценка генетической изменчивости коллекции амаранта (Аmaranthus L.) с использованием RAPD-анализа |
| title_sort |
оценка генетической изменчивости коллекции амаранта (аmaranthus l.) с использованием rapd-анализа |
| publisher |
Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України |
| publishDate |
2012 |
| topic_facet |
Оригинальные работы |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/126477 |
| citation_txt |
Оценка генетической изменчивости коллекции амаранта (Аmaranthus L.) с использованием RAPD-анализа / С.В. Лиманская // Цитология и генетика. — 2012. — Т. 46, № 4. — С. 19-26. — Бібліогр.: 22 назв. — рос. |
| series |
Цитология и генетика |
| work_keys_str_mv |
AT limanskaâsv ocenkagenetičeskojizmenčivostikollekciiamarantaamaranthuslsispolʹzovaniemrapdanaliza AT limanskaâsv ocínkagenetičnoímínlivostíkolekcííamarantuamaranthuslzvikoristannâmrapdanalízu AT limanskaâsv estimationofthegeneticvariabilityofamaranthcollectionamaranthuslwithrapdanalysis |
| first_indexed |
2025-11-28T18:39:24Z |
| last_indexed |
2025-11-28T18:39:24Z |
| _version_ |
1850060486198951936 |
| fulltext |
19ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2012. ¹ 4
УДК 575:582.661.21
С.В. ЛИМАНСКАЯ
Харьковский национальный аграрный университет им. В.В. Докучаева
E-mail: svetik_svg@mail.ru
ОЦЕНКА ГЕНЕТИЧЕСКОЙ
ИЗМЕНЧИВОСТИ КОЛЛЕКЦИИ
АМАРАНТА (AMARANTHUS L.)
С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ
RAPD-АНАЛИЗА
Ïðè ïîìîùè RAPD-àíàëèçà èçó÷åíà ãåíåòè÷åñêàÿ
èçìåí÷èâîñòü êîëëåêöèè àìàðàíòà. Îòìå÷åí âûñî-
êèé óðîâåíü ïîëèìîðôíîñòè èçó÷àåìûõ îáðàçöîâ,
êîòîðûé â ñðåäíåì ñîñòàâèë 85 %. Ñ èñïîëüçîâàíèåì
íåêîòîðûõ ïðàéìåðîâ äåòåêòèðîâàíû óíèêàëüíûå
ôðàãìåíòû, õàðàêòåðíûå òîëüêî äëÿ îïðåäåëåííûõ
îáðàçöîâ, à òàêæå 18 ìîíîìîðôíûõ ëîêóñîâ, ñâîé-
ñòâåííûõ âñåì îáðàçöàì àìàðàíòà. Ðàññ÷èòàíû ãå-
íåòè÷åñêèå äèñòàíöèè Íåè è Ëè. Ýòîò ïîêàçàòåëü
âàðüèðîâàë â ïðåäåëàõ îò 0,0009 äî 0,0141. Ïðîâåäåí
êëàñòåðíûé àíàëèç, ïî ðåçóëüòàòàì êîòîðîãî îá-
ðàçöû àìàðàíòà áûëè ðàñïðåäåëåíû â äâà êëàñòåðà
â ñîîòâåòñòâèè ñ âèäîâîé ïðèíàäëåæíîñòüþ.
Ââåäåíèå. Àìàðàíò (Amaranthus L.) – ïåð-
ñïåêòèâíàÿ çåðíîâàÿ, êîðìîâàÿ, îâîùíàÿ è
äåêîðàòèâíàÿ êóëüòóðà. Ðàçëè÷íûå âèäû ðîäà
Amaranthus L. (íà ñåãîäíÿ èõ èçâåñòíî áîëåå 60)
ìîãóò áûòü èñïîëüçîâàíû â ñåëåêöèè àìàðàíòà
êàê äîíîðû õîçÿéñòâåííî öåííûõ ãåíîâ. Òàê,
íàïðèìåð, âèä A. caudatus ìîæåò áûòü äîíî-
ðîì õîëîäîóñòîé÷èâîñòè, A. cruentus è A. hy-
bridus – äîíîðàìè ñêîðîñïåëîñòè, ñîëåñòîé-
êîñòè, õîëîäîóñòîé÷èâîñòè è âûñîêîãî ñîäåð-
æàíèÿ áåëêà, à A. hypochondriacus – ñîëå-,
õîëîäîóñòîé÷èâîñòè. Êðîìå òîãî, ãèáðèäû ñ
ïîñëåäíèì âèäîì õàðàêòåðèçóþòñÿ âûñîêîé
êîìáèíàòèâíîé ñïîñîáíîñòüþ [1]. Óêàçàííûå
âèäû àìàðàíòà òàêæå ïðåäñòàâëÿþò íàèáîëü-
øèé èíòåðåñ â ñîçäàíèè ñîðòîâ çåðíîâîãî
íàïðàâëåíèÿ. Âîâëå÷åíèå ðàçëè÷íûõ ãåíîòè-
ïîâ â ñåëåêöèîííî-ãåíåòè÷åñêèå ïðîãðàì-
ìû ñîçäàåò íåîáõîäèìîñòü äåòàëüíîãî èçó÷å-
íèÿ ãåíåòèêè ýòîé êóëüòóðû. Èñïîëüçîâàíèå
òðàäèöèîííûõ ìåòîäîâ ñåëåêöèè (ãèáðèäèçà-
öèÿ, ïîëèïëîèäèÿ è äð.) äëÿ àìàðàíòà óñëîæ-
íåíî ñìåøàííîé ñèñòåìîé îïûëåíèÿ è ÷ðåç-
âû÷àéíî ìåëêèìè ðàçìåðàìè ãåíåðàòèâíîãî
àïïàðàòà. Ïîýòîìó àêòóàëüíûì ÿâëÿåòñÿ ïðèâ-
ëå÷åíèå ìåòîäîâ, êîòîðûå ïîçâîëÿò áûñòðî è
íàäåæíî âûÿâëÿòü ãåíîòèïû ñ õîçÿéñòâåííî
öåííûìè ïðèçíàêàìè, èçó÷àòü ïîïóëÿöèîí-
íûå ïðîöåññû, óñòàíàâëèâàòü ôèëîãåíåòè÷åñ-
êèå âçàèìîîòíîøåíèÿ ìåæäó ðàçëè÷íûìè âè-
äàìè ðîäà Amaranthus L., à òàêæå êîíòðîëèðî-
âàòü âêëþ÷åíèå îïðåäåëåííûõ ãåíîâ â íîâûé
ñåëåêöèîííûé ìàòåðèàë.
Îäíèì èç ïîäõîäîâ, ïîçâîëÿþùèõ ðåøàòü
ïîñòàâëåííûå çàäà÷è, ÿâëÿåòñÿ ïðèìåíåíèå
ðàçëè÷íûõ ÄÍÊ-ìàðêåðîâ, îñíîâàííûõ íà
ÏÖÐ (RAPD, SSR, ISSR, AFLP è äð.) [2,
3]. Ñðåäè íèõ RAPD-àíàëèç ïðè íåêîòîðûõ
íåäîñòàòêàõ (÷óâñòâèòåëüíîñòü ê óñëîâèÿì
ðåàêöèè, íåäîñòàòî÷íàÿ ñïåöèôè÷íîñòü, äîìè-
íàíòíàÿ ïðèðîäà è íèçêîå ÷èñëî àëëåëüíûõ
âàðèàíòîâ) îáëàäàåò ðÿäîì ïðåèìóùåñòâ ïåðåä
äðóãèìè ìàðêåðíûìè ñèñòåìàìè: áûñòðîòà
è ïðîñòîòà ìåòîäà, èñïîëüçîâàíèå ïðîèçâîëü-
íûõ äåñÿòèíóêëåîòèäíûõ ïðàéìåðîâ, ÷òî ñóùå-
ñòâåííî óìåíüøàåò ñåáåñòîèìîñòü àíàëèçîâ;
îäíè è òå æå ïðàéìåðû ìîæíî èñïîëüçîâàòü
äëÿ ðàçíûõ âèäîâ è ðîäîâ æèâûõ îðãà-
íèçìîâ [4]. Êðîìå òîãî, RAPD-ìåòîä ïîçâî-
ëÿåò àíàëèçèðîâàòü ñðàçó íåñêîëüêî ëîêóñîâ,
÷òî äîâîëüíî âûãîäíî è óäîáíî ïðè èçó-
÷åíèè ãåíåòè÷åñêîé ñòðóêòóðû ïîïóëÿöèé, © Ñ.Â. ËÈÌÀÍÑÊÀß, 2012
20 ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2012. ¹ 4
C.Â. Ëèìàíñêàÿ
âûÿâëåíèè ðîäñòâåííûõ âçàèìîñâÿçåé ìåæäó
âèäàìè [5]. Îáíàðóæåííûå óíèêàëüíûå RAPD-
ôðàãìåíòû òàêæå ìîæíî èñïîëüçîâàòü äëÿ
ðàçðàáîòêè áîëåå ñïåöèôè÷íûõ SCAR-ìàðêå-
ðîâ, ÷òî ñ óñïåõîì áûëî ðåàëèçîâàíî äëÿ ðîäà
Amaranthus L. [6].
Èçó÷åíèþ ãåíåòè÷åñêîãî ðàçíîîáðàçèÿ è
ôèëîãåíåòè÷åñêèõ îòíîøåíèé ìåæäó äèêèìè
è êóëüòóðíûìè âèäàìè àìàðàíòà ìåòîäîì
RAPD-àíàëèçà ïîñâÿùåíû ðàáîòû [6–11], â
êîòîðûõ óïîìÿíóòûé ìåòîä èñïîëüçîâàí äëÿ
îïðåäåëåíèÿ âíóòðè- è ìåæâèäîâîé ãåíå-
òè÷åñêîé èçìåí÷èâîñòè, à òàêæå äëÿ èçó÷åíèÿ
ïðîèñõîæäåíèÿ êóëüòóðû. Àâòîðû óêàçàí-
íûõ ðàáîò îòìå÷àþò âûñîêèé óðîâåíü ãåíåòè-
÷åñêîãî ñõîäñòâà çåðíîâûõ âèäîâ àìàðàíòà –
A. caudatus, A. cruentus, A. hybridus, A. hypo-
chondriacus. Stefunova [10] íà îñíîâå ðåçóëü-
òàòîâ RAPD- è ISSR-àíàëèçîâ ïîä÷åðêèâàåò
âûñîêèé óðîâåíü âíóòðèâèäîâîãî ïîëèìîð-
ôèçìà ïåðå÷èñëåííûõ âèäîâ.
Îäíàêî ñëåäóåò îòìåòèòü, ÷òî íà ñåãîäíÿ
äàííûõ ïî ãåíåòèêå àìàðàíòà âñå åùå íå-
äîñòàòî÷íî. Ê íàñòîÿùåìó âðåìåíè ïîñòðîå-
íà åäèíñòâåííàÿ ãåíåòè÷åñêàÿ êàðòà àìàðàíòà
ñ èñïîëüçîâàíèåì SSR-ëîêóñîâ [12]. Â ñèëó
ïðîòèâîðå÷èâîñòè äàííûõ [6, 9, 13] îñòàåòñÿ
îòêðûòûì âîïðîñ ðîäñòâåííûõ âçàèìîîòíî-
øåíèé ìåæäó çåðíîâûìè âèäàìè àìàðàíòà è
èõ ïðåäïîëàãàåìûìè ïðåäøåñòâåííèêàìè. Ñó-
ùåñòâóþò îïðåäåëåííûå ðàñõîæäåíèÿ â ñèñ-
òåìàòèêå êóëüòóðû [1, 9]. Íå èçó÷åííûìè â
ãåíåòè÷åñêîì àñïåêòå îñòàþòñÿ ñîðòà óêðàèí-
ñêîé ñåëåêöèè, ïîñêîëüêó â Óêðàèíå ïîäîáíûå
èññëåäîâàíèÿ äëÿ àìàðàíòà íå ïðîâîäÿòñÿ
âîâñå. Òàêèì îáðàçîì, íàñòîÿùàÿ ðàáîòà ïðåä-
ñòàâëÿåò èíòåðåñ äëÿ äîïîëíåíèÿ çíàíèé ïî
ãåíåòèêå è ôèëîãåíåçó àìàðàíòà, à òàêæå äëÿ
óñêîðåíèÿ è îáëåã÷åíèÿ ñåëåêöèîííîãî ïðî-
öåññà êóëüòóðû.
Öåëü ðàáîòû – èçó÷åíèå ãåíåòè÷åñêîé èç-
ìåí÷èâîñòè êîëëåêöèè àìàðàíòà ïîñðåäñòâîì
RAPD-àíàëèçà, îïðåäåëåíèå ðàññòîÿíèé Íåè
è Ëè, à òàêæå îöåíêà ãåíåòè÷åñêèõ âçàèìî-
îòíîøåíèé ìåæäó îáðàçöàìè àìàðàíòà, ïðè-
íàäëåæàùèìè ê ïÿòè ðàçíûì âèäàì.
Ìàòåðèàëû è ìåòîäû.  ðàáîòó âîâëå÷åíû
9 ñîðòîâ è 9 îáðàçöîâ àìàðàíòà ðàçíîãî ýêî-
ëîãî-ãåîãðàôè÷åñêîãî ïðîèñõîæäåíèÿ, îòíå-
ñåííûå ê ïÿòè âèäàì (A. caudatus L., A. cruen-
tus L., A. hybridus L., A. hypochondriacus L.,
A. mantegazzianus Passer.) (òàáë. 1). Âèäîâàÿ
ïðèíàäëåæíîñòü ñîðòà Êîðìîâîé Ê-22 (Èí-
äèÿ) íå èçâåñòíà. Âûáîð îáðàçöîâ ñâÿçàí ñ
Òàáëèöà 1
Èçó÷àåìûå ñîðòà è ïîïóëÿöèè àìàðàíòà
¹ êàòàëîãà Âèä Ñîðò Ïðîèñõîæäåíèå
K-61
00110
00038
K-146
00039
00050
USD00001
00087
Ê-22
0079
00097
00005
–
–
–
–
–
–
A. hypochondriacus L.
A. hybridus L.
A. hybridus L.
A. caudatus L.
A. hybridus L.
A. hypochondriakus L.
A. cruentus L.
A. caudatus L.
Íåèçâåñòíî
A. hybridus L.
A. hybridus L.
A. cruentus L.
A. hypochondriacus L.
A. mantegazzianus Ð.
A. hybridus L.
A. caudatus L.
A. hypochondriacus L.
A. hypochondriacus L.
–
–
–
–
–
–
Áàãðÿíûé
–
Êîðìîâîé
–
–
Êàðìåí
Ñòóäåí÷åñêèé
Âîãíÿíà êóëüêà
Óëüòðà
Ðîãàíñêèé
Ëåðà
Õàðüêîâñêèé-1
ÑØÀ
»
»
Ãåðìàíèÿ
»
»
Ðîññèÿ
»
Èíäèÿ
»
»
Óêðàèíà
»
»
»
»
»
»
21ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2012. ¹ 4
Îöåíêà ãåíåòè÷åñêîé èçìåí÷èâîñòè êîëëåêöèè àìàðàíòà (Amaranthus L.)
âîâëå÷åíèåì èõ â ðàáîòó ïî ñîçäàíèþ èñ-
õîäíîãî ñåëåêöèîííîãî ìàòåðèàëà àìàðàíòà,
àäàïòèðîâàííîãî ê óñëîâèÿì Ëåâîáåðåæíîé
Ëåñîñòåïè Óêðàèíû.
ÄÍÊ âûäåëÿëè öåòàâëîííûì ìåòîäîì [14]
èç ñìåñè 6–10 çðåëûõ ñåìÿí àìàðàíòà êàæ-
äîãî îáðàçöà. Ïîëó÷åííóþ ÄÍÊ ïðîâåðÿëè â
1%-íîì àãàðîçíîì ãåëå â ïðèñóòñòâèè áðî-
ìèñòîãî ýòèäèÿ. Êîíöåíòðàöèþ ÄÍÊ îïðå-
äåëÿëè ïðè ïîìîùè ñïåêòðîôîòîìåòðà Shi-
madzu UVmini1240.
Àìïëèôèêàöèþ ïðîâîäèëè c èñïîëüçîâà-
íèåì íàáîðîâ äëÿ ÏÖÐ GenePakTM PCR Core
ñ äîáàâëåíèåì 20 íã ãåíîìíîé ÄÍÊ, 0,2 ìêÌ
ñîîòâåòñòâóþùåãî ïðàéìåðà, à çàòåì îáúåì
ðåàêöèîííîé ñìåñè äîâîäèëè ðàñòâîðèòåëåì
äî 20 ìêë. Â ðàáîòå èñïîëüçîâàëè 10 ïðàé-
ìåðîâ, èç êîòîðûõ ÷åòûðå (Ð-28, Ð-37, Ð-39,
Ð-52) ðàçðàáîòàíû àâòîðàìè [14] è øåñòü
(OPF-10, OPA-11, OPP-10, OPW-04, OPW-06,
OPW-10) – ôèðìîé «Operon Technologies»,
ÑØÀ (òàáë. 2).
Àìïëèôèêàöèþ îñóùåñòâëÿëè íà ÷åòûðåõ-
êàíàëüíîì ïðîãðàììèðóåìîì òåðìîñòàòå ÒÏ4-
ÏÖÐ-01-«Òåðöèê» ïðè òàêèõ óñëîâèÿõ: 1 öèêë –
äåíàòóðàöèÿ ïðè 94 °Ñ – 5 ìèí; 45 öèêëîâ:
94 °Ñ – 1 ìèí, îòæèã – 36 °Ñ – 1 ìèí, ýëîí-
ãàöèÿ – 72 °Ñ – 2 ìèí; 1 öèêë – ôèíàëüíàÿ
ýëîíãàöèÿ, 72 °Ñ – 7 ìèí. Ðàçäåëåíèå ïðî-
äóêòîâ àìïëèôèêàöèè ïðîâîäèëè ìåòîäîì ãî-
ðèçîíòàëüíîãî ýëåêòðîôîðåçà â 2%-íîì àãà-
ðîçíîì ãåëå â ïðèñóòñòâèè áðîìèñòîãî ýòè-
Òàáëèöà 2
Ïîëèìîðôèçì, âûÿâëåííûé ïðè RAPD-àíàëèçå
Ïðàéìåð
Íóêëåîòèäíàÿ
ïîñëåäîâàòåëü-
íîñòü 5'–3'
Êîëè÷åñòâî
ëîêóñîâ,
øò.
Ïîëèìîð-
ôèçì,
%
Îáðàçåö, ðàçìåð óíèêàëüíûõ
ôðàãìåíòîâ
Ðàçìåð ôðàã-
ìåíòîâ ÄÍÊ,
min-max
ï.í.
OÐF-10
OPA-11
OPP-10
OPW-04
OPW-06
OPW-10
P-28
P-37
P-39
P-52
GGAAGCTTGG
CAATCGCCGT
TCCCGCCTAC
CAGAAGCGGA
AGGCCCGATG
TCGCATCCCT
CAAACGTCGG
CTGACCAGCC
CCAGTTCGCC
AGGACTGGAC
19
10
6
17
13
17
6
15
10
5
79
80
83
100
77
71
100
100
80
80
–
00039 – 269, Ëåðà – 155
–
Êàðìåí – 1560, 00087 – 913
Ëåðà – 489
Õàðüêîâñêèé-1 – 346
–
Êàðìåí – 325
–
–
420–1859
155–504
234–510
370–2335
277–2216
346–2140
110–450
325–2500
184–535
232–507
Ðèñ. 1. Ýëåêòðîôîðåãðàììà RAPD-ñïåêòðîâ êîë-
ëåêöèè àìàðàíòà, ïîëó÷åííàÿ ïðè èñïîëüçîâàíèè
ïðàéìåðà OPW-10: Ì – 1 kb DNA leader; à – ñëåâà
íàïðàâî îáðàçöû Óëüòðà, Ëåðà, Õàðüêîâñêèé-1,
Ñòóäåí÷åñêèé, Ðîãàíñêèé, Âîãíÿíà êóëüêà, Êàðìåí,
00087, Áàãðÿíûé; á – ñëåâà íàïðàâî îáðàçöû
00038, 00110, Ê-61, Ê-146, 00050, 00039, 00097,
Ê-22, 00079. Ñòðåëêàìè îáîçíà÷åíû ìîíîìîðô-
íûå êîìïîíåíòû, öèôðàìè – èõ äëèíà (ïàð íó-
êëåîòèäîâ)
22 ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2012. ¹ 4
C.Â. Ëèìàíñêàÿ
äèÿ.  êà÷åñòâå ýëåêòðîäíîãî è áóôåðà ãåëÿ
èñïîëüçîâàëè Òðèñ-ÝÄÒÀ-áîðàòíóþ áóôåðíóþ
ñèñòåìó – 0,09 Ì Òðèñ, 0,09 Ì Í3ÂÎ3,
0,0031 Ì ÝÄÒÀ (ðÍ 8,3). Âèçóàëèçàöèþ ñïåê-
òðîâ îñóùåñòâëÿëè ïðè ïîìîùè òðàíñèëëþ-
ìèíàòîðà ÒÑÐ-20 ÌÑ ñ ïîñëåäóþùèì ôîòî-
ãðàôèðîâàíèåì ãåëåé.  êà÷åñòâå ìàðêåðîâ
äëÿ îïðåäåëåíèÿ ðàçìåðîâ àìïëèôèöèðîâàí-
íûõ ôðàãìåíòîâ èñïîëüçîâàëè 1 kb DNA
leader è pUC19/Msp1.
Âû÷èñëåíèå ìîëåêóëÿðíîé ìàññû ïðîäóê-
òîâ àìïëèôèêàöèè ïðîâîäèëè ïðè ïîìîùè
ïðîãðàììíîãî ïàêåòà «TotalLab TL120».
Ïî ðåçóëüòàòàì àíàëèçà áûëè ñîñòàâëåíû
áèíàðíûå ìàòðèöû, â êîòîðûõ îòìå÷àëîñü
«ïðèñóòñòâèå» (1) èëè «îòñóòñòâèå» (0) ôðàã-
ìåíòîâ ñ îäèíàêîâîé ìîëåêóëÿðíîé ìàññîé
íà ýëåêòðîôîðåãðàììå. Êàæäûé RAPD-êîì-
ïîíåíò ðàññìàòðèâàëè êàê îòäåëüíûé ãåíå-
òè÷åñêèé ëîêóñ. Óðîâåíü ïîëèìîðôèçìà ïî
êàæäîìó ïðàéìåðó îïðåäåëÿëè ÷àñòüþ ïîëè-
ìîðôíûõ ëîêóñîâ, âûðàæåííîé â ïðîöåíòàõ,
îò îáùåãî êîëè÷åñòâà ëîêóñîâ íà ïðàéìåð.
Àíàëèç ãåíåòè÷åñêîãî ðàçíîîáðàçèÿ ïðîâîäè-
ëè ïîñðåäñòâîì âû÷èñëåíèÿ ãåíåòè÷åñêèõ
ðàññòîÿíèé ïî Íåè è Ëè [15]. Êëàñòåðèçàöèþ
è ïîñòðîåíèå äåíäðîãðàììû, äåìîíñòðèðóþ-
ùåé ôèëîãåíåòè÷åñêèå îòíîøåíèÿ ìåæäó èçó-
÷åííûìè îáðàçöàìè àìàðàíòà, îñóùåñòâëÿëè
ìåòîäîì áëèæàéøèõ ñîñåäåé (Neighbor-joi-
Ðèñ. 2. Äåíäðîãðàììà ôèëîãåíåòè÷åñêèõ âçàèìîîò-
íîøåíèé ìåæäó èçó÷àåìûìè ñîðòàìè è ïîïóëÿöè-
ÿìè àìàðàíòà ïî ðåçóëüòàòàì RAPD-àíàëèçà. Âîçëå
âåòâåé äåðåâà óêàçàíû çíà÷åíèÿ áóòñòðåï-îöåíêè, %
Îáðàçåö
àìàðàíòà
Óëüòðà Ëåðà Õàðüêîâ-
ñêèé-1
Ñòóäåí÷åñ-
êèé
Ðîãàíñêèé Âîãíÿíà
êóëüêà
Êàðìåí
Óëüòðà
Ëåðà
Õàðüêîâñêèé-1
Ñóäåí÷åñêèé
Ðîãàíñêèé
Âîãíÿíà êóëüêà
Êàðìåí
00087
Áàãðÿíûé
00038
00110
K-61
K-146
00050
00039
00097
K-22
00079
0,0000
0,0051
0,0071
0,0049
0,0064
0,0064
0,0086
0,0056
0,0027
0,0017
0,0022
0,0059
0,0067
0,0048
0,0031
0,0068
0,0070
0,0035
0,0000
0,0077
0,0029
0,0053
0,0067
0,0054
0,0075
0,0056
0,0047
0,0047
0,0027
0,0055
0,0068
0,0052
0,0090
0,0061
0,0064
0,0000
0,0080
0,0127
0,0117
0,0103
0,0100
0,0080
0,0081
0,0086
0,0084
0,0103
0,0104
0,0076
0,0141
0,0132
0,0077
0,0000
0,0058
0,0083
0,0055
0,0078
0,0068
0,0051
0,0054
0,0029
0,0064
0,0080
0,0061
0,0090
0,0067
0,0074
0,0000
0,0025
0,0090
0,0097
0,0074
0,0058
0,0058
0,0070
0,0037
0,0089
0,0057
0,0089
0,0059
0,0071
0,0000
0,0119
0,0097
0,0079
0,0058
0,0058
0,0088
0,0040
0,0084
0,0057
0,0083
0,0063
0,0062
0,0000
0,0055
0,0087
0,0080
0,0084
0,0066
0,0097
0,0088
0,0092
0,0138
0,0098
0,0103
Ìàòðèöà ãåíåòè÷åñêèõ ðàññòîÿíèé ìåæäó
23ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2012. ¹ 4
Îöåíêà ãåíåòè÷åñêîé èçìåí÷èâîñòè êîëëåêöèè àìàðàíòà (Amaranthus L.)
ning, NJ) ïðè ïîìîùè ïàêåòà ïðîãðàìì Phy-
lip-3.69. Äîñòîâåðíîñòü ïîëó÷åííîãî äåðåâà
ôèëîãåíåòè÷åñêèõ âçàèìîîòíîøåíèé ïðîâå-
ðÿëè ñ ïîìîùüþ áóòñòðåï-àíàëèçà ñ èñïîëü-
çîâàíèåì ïðîãðàììû Phylip-3.69.
Ðåçóëüòàòû èññëåäîâàíèé è èõ îáñóæäåíèå.
Èçó÷àëè ãåíåòè÷åñêîå ðàçíîîáðàçèå 18 îáðàç-
öîâ àìàðàíòà, îòíåñåííûõ ê ïÿòè âèäàì è
èìåþùèõ ðàçíîå ýêîëîãî-ãåîãðàôè÷åñêîå ïðî-
èñõîæäåíèå (Óêðàèíà, Ðîññèÿ, ÑØÀ, Èíäèÿ,
Ãåðìàíèÿ). Ïðè ïîìîùè RAPD-àíàëèçà
óñòàíîâèëè ïîëèìîðôèçì èçó÷àåìûõ ñîðòîâ
è ïîïóëÿöèé, êîòîðûé â ñðåäíåì ñîñòàâèë
85 %. Ìàêñèìàëüíûé óðîâåíü ïîëèìîðôèçìà –
100 % (ïîëèìîðôèçì ïî âñåì ëîêóñàì) – îò-
ìå÷åí ïðè èñïîëüçîâàíèè ïðàéìåðîâ OPW-04,
P-28 è Ð-37. Ìèíèìàëüíûé óðîâåíü ïîëó÷åí
ïðè èñïîëüçîâàíèè ïðàéìåðà OPW-10 è ñî-
ñòàâèë 71 %. Â öåëîì èäåíòèôèöèðîâàëè 118
ëîêóñîâ, èç êîòîðûõ 100 îêàçàëèñü ïîëè-
ìîðôíûìè. Ïðè ýòîì àìïëèôèöèðîâàëîñü îò
5 äî 19 ôðàãìåíòîâ íà ïðàéìåð. Ìîëåêóëÿðíàÿ
ìàññà âûÿâëåííûõ ôðàãìåíòîâ äëÿ ðàçíûõ
ïðàéìåðîâ âàðüèðîâàëà â ïðåäåëàõ ~110–
2500 ï.í. Äëÿ íåêîòîðûõ îáðàçöîâ èäåíòè-
ôèöèðîâàíû óíèêàëüíûå, ïðèñóùèå òîëüêî èì
ôðàãìåíòû (òàáë. 2). Ýòè ó÷àñòêè ÄÍÊ ìîãóò
ñëóæèòü ìàðêåðàìè êîíêðåòíîãî îáðàçöà. Ïðè
èñïîëüçîâàíèè íåêîòîðûõ ïðàéìåðîâ òàêæå
äåòåêòèðîâàíî íàëè÷èå îò 1 äî 5 ìîíî-
ìîðôíûõ ëîêóñîâ, ïðèñóùèõ âñåì îáðàçöàì
(ðèñ. 1).  ÷àñòíîñòè äëÿ ïðàéìåðà OÐF-10
îáíàðóæåíû ìîíîìîðôíûå ôðàãìåíòû ðàç-
ìåðîì ~ 970, 750, 725 è 637 ï.í.; äëÿ OPA-
11 – 350 è 214 ï.í.; äëÿ OPP-10 – 332 ï.í.;
OPW-06 – 995, 825 è 277 ï.í.; äëÿ OPW-10 –
1520, 950, 880, 527 è 453 ï.í.; äëÿ Ð-39 – 450
è 345 ï.í. è äëÿ Ð-52 – ôðàãìåíò ðàçìåðîì
~ 326 ï.í. Ïðè ìîíîìîðôíîñòè ïåðå÷èñëåííûõ
ôðàãìåíòîâ è ó äðóãèõ, íå âîâëå÷åííûõ â
íàñòîÿùåå èññëåäîâàíèå âèäîâ àìàðàíòà, ýòè
ëîêóñû ìîæíî áóäåò èñïîëüçîâàòü êàê ìàð-
êåðû ðîäà Amaranthus L. â öåëîì.
Ïî ðåçóëüòàòàì îáðàáîòêè äàííûõ ðàññ÷è-
òàëè ãåíåòè÷åñêèå ðàññòîÿíèÿ Íåè è Ëè.
Äëÿ âîâëå÷åííûõ â èññëåäîâàíèå îáðàçöîâ
àìàðàíòà ýòîò ïîêàçàòåëü âàðüèðîâàë â ïðåäå-
ëàõ îò 0,0009 äî 0,0141 (òàáë. 3). Íà îñíîâàíèè
ìàòðèöû ãåíåòè÷åñêèõ äèñòàíöèé ïîñòðîèëè
äåðåâî ôèëîãåíåòè÷åñêèõ âçàèìîîòíîøåíèé
ìåæäó èçó÷àåìûìè îáðàçöàìè (ðèñ. 2).
Êëàñòåðèçàöèþ ïðîâîäèëè ìåòîäîì áëè-
æàéøèõ ñîñåäåé. Íàìè âûäåëåíû äâà îñíîâ-
íûõ êëàñòåðà: â ïåðâûé âîøëè ïî÷òè âñå
00087 Áàãðÿíûé 00038 00011 Ê-61 Ê-146 00050 00039 00097 Ê-22 00079
0,0000
0,0061
0,0067
0,0071
0,0097
0,0104
0,0068
0,0070
0,0106
0,0089
0,0067
0,0000
0,0030
0,0032
0,0057
0,0073
0,0054
0,0039
0,0065
0,0067
0,0018
0,0000
0,0009
0,0048
0,0046
0,0036
0,0015
0,0053
0,0051
0,0031
0,0000
0,0044
0,0042
0,0039
0,0014
0,0048
0,0047
0,0031
0,0000
0,0057
0,0063
0,0053
0,0090
0,0063
0,0062
0,0000
0,0067
0,0041
0,0086
0,0041
0,0058
0,0000
0,0042
0,0085
0,0075
0,0055
0,0000
0,0047
0,0042
0,0024
0,0000
0,0062
0,0053
0,0000
0,0055 0,0000
Òàáëèöà 3
âîâëå÷åííûìè â èññëåäîâàíèå îáðàçöàìè àìàðàíòà
24 ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2012. ¹ 4
C.Â. Ëèìàíñêàÿ
îáðàçöû, îòíåñåííûå ê A. hybridus, âî âòîðîé –
ïðèíàäëåæàùèå ê âèäó A. hypochondriacus. Îá-
ðàçöû âèäîâ A. caudatus è A. cruentus ïðåä-
ñòàâëåíû â îáîèõ êëàñòåðàõ (ðèñ. 2).
Òàêèì îáðàçîì, â ïåðâîì êëàñòåðå îêàçà-
ëèñü ñîðòà Ðîãàíñêèé è Âîãíÿíà êóëüêà
(Óêðàèíà), Áàãðÿíûé (Ðîññèÿ), ïîïóëÿöèè
00079, Ê-22, 00097 (Èíäèÿ), 00039, Ê-146
(Ãåðìàíèÿ). Ñîðòà Ðîãàíñêèé è Âîãíÿíà êóëü-
êà â ïðåäåëàõ ïåðâîãî êëàñòåðà ðàñïîëîæåíû
íà îäíîé âåòâè ôèëîãåíåòè÷åñêîãî äåðåâà
(ðèñ. 2). Ïðèâåäåííûå îáðàçöû ÿâëÿþòñÿ
ñïîíòàííûìè ãèáðèäàìè ìåæäó A. caudatus è
A. mantegazzianus (Ò.È. Ãîïöèé, óñòíîå ñîîá-
ùåíèå). Ïðè ýòîì ñîðò Ðîãàíñêèé îòíåñåí ê
A. caudatus L., à ñîðò Âîãíÿíà êóëüêà – ê âèäó
A. mantegazzianus Passer. Ñëåäóåò îòìåòèòü
íåêîòîðîå ôåíîòèïè÷åñêîå ñõîäñòâî óïîìÿ-
íóòûõ ñîðòîâ (ñâåòëàÿ ìåòåëêà, æåëòî-çåëåíûé
ñòåáåëü, áåëûå ñòåêëîâèäíûå ñåìåíà). Òàêèì
îáðàçîì, íà îñíîâàíèè ïîëó÷åííûõ ðåçóëü-
òàòîâ ìîæíî äîïóñòèòü ó÷àñòèå îäíèõ è òåõ
æå èñõîäíûõ ôîðì â ñîçäàíèè ýòèõ ñîðòîâ.
Êðîìå òîãî, âèäû A. mantegazzianus è A. cau-
datus íåêîòîðûå àâòîðû îòîæäåñòâëÿþò [1].
Äàëåå íàèìåíüøèì ãåíåòè÷åñêèì ðàññòîÿ-
íèåì ïî îòíîøåíèþ ê óêàçàííûì îáðàçöàì
õàðàêòåðèçîâàëàñü ïîïóëÿöèÿ Ê-146 (A. cau-
datus). Çàòåì ïî ìåðå óâåëè÷åíèÿ ãåíåòè÷åñ-
êèõ äèñòàíöèé ðàñïîëîæèëèñü ïîïóëÿöèè
Ê-22 (âèäîâàÿ ïðèíàäëåæíîñòü íå èçâåñòíà),
00097, 00039 (A. hybridus) (ðèñ. 2). Áóòñòðåï-
ïîääåðæêà óêàçàííûõ óçëîâ ñîñòàâèëà 94,6;
89,6; 59,1; 24,3 % ñîîòâåòñòâåííî. Íà îñíî-
âàíèè ïîëó÷åííîãî ôèëîãåíåòè÷åñêîãî äåðåâà
ìîæíî ïðåäïîëîæèòü, ÷òî îáðàçåö Ê-22 îò-
íîñèòñÿ ê îäíîìó èç âèäîâ – A. caudatus
èëè A. hybridus. Äëÿ äîêàçàòåëüñòâà ýòîãî
óòâåðæäåíèÿ íåîáõîäèìî ïðîâåäåíèå äîïîë-
íèòåëüíûõ àíàëèçîâ ñ ïðèâëå÷åíèåì äðóãèõ
ÄÍÊ-ìàðêåðîâ.
Âî âòîðîì êëàñòåðå ðàñïîëîæåíû ñîðòà óê-
ðàèíñêîé ñåëåêöèè Ëåðà, Ñòóäåí÷åñêèé, Õàðü-
êîâñêèé-1, à òàêæå ïîïóëÿöèè Ê-61 (ÑØÀ) è
00050 (Ãåðìàíèÿ), êîòîðûå îòíîñÿòñÿ ê âèäó A.
hypochondriacus (ðèñ. 2), ïðè÷åì íàèáîëåå ãå-
íåòè÷åñêè áëèçêèìè îêàçàëèñü îáðàçöû Ñòó-
äåí÷åñêèé, Õàðüêîâñêèé-1, Ê-61 è Ëåðà, ÷òî
ïîäòâåðæäàåò èõ ïðîèñõîæäåíèå èç ïîïóëÿ-
öèé, èíòðîäóöèðîâàííûõ èç ÑØÀ (òàáë. 1)
[16]. Áóòñòðåï-àíàëèç óçëîâ â ýòîì áëîêå ïî-
êàçàë óðîâåíü äîñòîâåðíîñòè 93,7- è 53,8 %
ñîîòâåòñòâåííî. Íàèáîëåå ãåíåòè÷åñêè îòäà-
ëåííûì â ïðåäåëàõ ýòîãî êëàñòåðà áûë îáðà-
çåö 00050 (áóòñòðåï-îöåíêà – 62,0 %), ÷òî,
âåðîÿòíî, âûçâàíî åãî ïðèíàäëåæíîñòüþ ê
äðóãîé ýêîëîãî-ãåîãðàôè÷åñêîé ãðóïïå.
 îáîèõ êëàñòåðàõ îòìå÷åíû ïî äâà îáðàçöà
(â ïåðâîì êëàñòåðå – 00079 è Áàãðÿíûé, âî
âòîðîì – Êàðìåí è 00087), êîòîðûå, íåñìîòðÿ
íà ðàçíóþ âèäîâóþ è ýêîëîãî-ãåîãðàôè÷åñêóþ
ïðèíàäëåæíîñòü, õàðàêòåðèçîâàëèñü âûñîêèì
óðîâíåì ãåíåòè÷åñêîãî ñõîäñòâà è íà ôèëîãå-
íåòè÷åñêîì äåðåâå â ïðåäåëàõ «ñâîåãî» êëàñ-
òåðà ðàñïîëîæåíû íà îäíîé âåòâè (ðèñ. 2).
Ïî ðåçóëüòàòàì áóòñòðåï-àíàëèçà äîñòîâåð-
íîñòü äàííûõ óçëîâ ñîñòàâèëà 75,1 è 84,2 %
ñîîòâåòñòâåííî. Ðîäîñëîâíûå óïîìÿíóòûõ îá-
ðàçöîâ íå èçâåñòíû, ïîýòîìó îáúÿñíèòü èõ
ãåíåòè÷åñêîå ïîäîáèå íà îñíîâàíèè ðåçóëü-
òàòîâ ïðîâåäåííîãî èññëåäîâàíèÿ äîñòàòî÷-
íî ñëîæíî.
Íè â îäèí êëàñòåð íå âîøëè ïîïóëÿöèè
00110 è 00038 (ÑØÀ), à òàêæå ñîðò Óëüòðà
(Óêðàèíà) (áóòñòðåï-ïîääåðæêà ñîñòàâèëà
28,9; 100; 28,7 % ñîîòâåòñòâåííî). Îíè ïðè-
íàäëåæàò ê âèäó A. hybridus. Ñîðò Óëüòðà ïî-
ëó÷åí èç ñîðòà Áåëîñåìÿííûé (A. hybridus)
ìåòîäîì õèìè÷åñêîãî ìóòàãåíåçà [16], ÷òî,
âåðîÿòíî, è ÿâëÿåòñÿ ïðè÷èíîé åãî îáîñîá-
ëåííîñòè ïî îòíîøåíèþ ê äðóãèì îáðàçöàì
âèäà A. hybridus. Ðîäîñëîâíàÿ îáðàçöîâ 00110
è 00038 îòñóòñòâóåò. Ïîýòîìó ìû ìîæåì
ëèøü äîïóñòèòü, ÷òî óäàëåííîñòü 00038 è
00110 îò äðóãèõ îáðàçöîâ ýòîãî âèäà ìî-
æåò ñâèäåòåëüñòâîâàòü îá îñîáåííîñòÿõ èíòðî-
äóêöèè A. hybridus â ðàçíûå ýêîëîãî-ãåîãðà-
ôè÷åñêèå çîíû (ÑØÀ Ãåðìàíèÿ Èíäèÿ).
Ïîëó÷åííîå íàìè ôèëîãåíåòè÷åñêîå äåðåâî
ìîæåò ñëóæèòü ïîäòâåðæäåíèåì ãåíåòè÷åñêîé
áëèçîñòè ÷åòûðåõ âèäîâ àìàðàíòà (A. cauda-
tus, A. cruentus, A. hybridus, A. hypochondriacus),
÷òî áûëî îòìå÷åíî ðàíåå â ðàáîòàõ [6–12].
Sauer [17, 18] åùå â 1967–1976 ãã. ïðåä-
ëîæèë äâà àëüòåðíàòèâíûõ ïóòè îáðàçîâàíèÿ
çåðíîâûõ âèäîâ àìàðàíòà. Ñòàíîâëåíèå âèäîâ
A. cruentus, A. caudatus è A. hypochondriacus
ñîãëàñíî ïîëèôèëåòè÷åñêîé ãèïîòåçå ïðî-
èñõîäèëî íåçàâèñèìî äðóã îò äðóãà â ðàçíûõ
ãåîãðàôè÷åñêèõ ðåãèîíàõ (Öåíòðàëüíàÿ Àìå-
25ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2012. ¹ 4
Îöåíêà ãåíåòè÷åñêîé èçìåí÷èâîñòè êîëëåêöèè àìàðàíòà (Amaranthus L.)
ðèêà, Þæíàÿ Àìåðèêà è Ìåêñèêà ñîîòâåò-
ñòâåííî) ñ ó÷àñòèåì ðàçíûõ ïðåäêîâûõ ôîðì
(A. hybridus, A. quitensis è A. powellii ñîîò-
âåòñòâåííî). Ìîíîôèëåòè÷åñêàÿ ãèïîòåçà ïî-
ñòóëèðóåò ïðîöåññ ïåðâè÷íîé äîìåñòèêàöèè
A. cruentus îò A. hybridus â Öåíòðàëüíîé
Àìåðèêå. Ïîÿâëåíèå äâóõ äðóãèõ âèäîâ (A.
ñaudatus è A. hypochondriacus) àâòîð ñâÿçûâàåò
ñ ìíîãîêðàòíûì ïåðåîïûëåíèåì: A. cruentus è
A. quitensis – íà þãå, A. cruentus è A. powellii –
íà ñåâåðå. Òàêèì îáðàçîì, A. hybridus,
î÷åâèäíî, ÿâëÿåòñÿ ïðåäøåñòâåííèêîì âñåõ
òðåõ çåðíîâûõ âèäîâ àìàðàíòà. Â äàëüíåé-
øåì ðàçíûå ãðóïïû ó÷åíûõ ïîëó÷àëè ïðîòè-
âîðå÷èâûå ðåçóëüòàòû [7, 19–22], ïîäòâåðæ-
äàþùèå îäíó èç äâóõ ãèïîòåç. Áîëüøèíñòâî
àâòîðîâ, èçó÷àâøèõ ðîäñòâåííûå âçàèìîñâÿ-
çè çåðíîâûõ è äèêèõ âèäîâ àìàðàíòà ïðè ïî-
ìîùè ÄÍÊ-ìàðêåðîâ [6–13], ñêëîíÿþòñÿ ê
ñïðàâåäëèâîñòè ìîíîôèëåòè÷åñêîé òåîðèè ñ
íåêîòîðûìè óòî÷íåíèÿìè. Íàïðèìåð, Ranade
et al. [9] óòâåðæäàþò, ÷òî A. caudatus è A. hy-
pochondriacus ãåíåòè÷åñêè áîëåå áëèçêè äðóã
ê äðóãó, ÷åì êàæäûé èç íèõ ïî îòíîøåíèþ ê
A. cruentus. Ýòî ñòàâèò ïîä ñîìíåíèå ó÷àñòèå
ïîñëåäíåãî (ñîãëàñíî ìîíîôèëåòè÷åñêîé ãè-
ïîòåçå) â îáðàçîâàíèè óïîìÿíóòûõ âèäîâ.
Ðåçóëüòàòû íàøåé ðàáîòû òàêæå ãîâîðÿò
â ïîëüçó ìîíîôèëåòè÷åñêîé ãèïîòåçû ïðî-
èñõîæäåíèÿ çåðíîâûõ àìàðàíòîâ. Îäíàêî âû-
äåëåíèå îáðàçöîâ âèäà A. hypochondriacus â
îáîñîáëåííóþ ãðóïïó, î÷åâèäíî, ñâèäåòåëü-
ñòâóåò î òîì, ÷òî A. hybridus è A. hypo-
chondriacus ãåíåòè÷åñêè áîëåå äàëåêè äðóã îò
äðóãà, ÷åì ýòè æå âèäû ïî îòíîøåíèþ ê
A. caudatus è A. cruentus. Íàøè âûâîäû ñî-
ãëàñóþòñÿ ñ äàííûìè ðàáîòû Xu et al. [13],
ïî ðåçóëüòàòàì êîòîðîé îäèí èç ïðåäøåñò-
âåííèêîâ (A. powellii), ó÷àñòâîâàâøèõ â îáðà-
çîâàíèè A. hypochondriacus, ÿâëÿåòñÿ íàèáî-
ëåå ãåíåòè÷åñêè îáîñîáëåííûì â êîìïëåêñå
ãðóïïû A. hybridus (A. quitensis, A. hybridus,
A. powellii, A. caudatus, A. cruentus, A. hypochon-
driacus). Ýòèì, âåðîÿòíî, è îáúÿñíÿåòñÿ âû-
äåëåíèå îáðàçöîâ âèäà A. hypochondriacus â îò-
äåëüíûé êëàñòåð íà ïîëó÷åííîì íàìè ôèëî-
ãåíåòè÷åñêîì äåðåâå.
Ðàñïðåäåëåíèå â ðàçíûå êëàñòåðû îáðàç-
öîâ, îòíîñÿùèõñÿ ê A. caudatus è A. cruentus,
ìîæåò ñâèäåòåëüñòâîâàòü î ñõîäñòâå ïðîöåñ-
ñîâ ñòàíîâëåíèÿ ýòèõ âèäîâ. Òàêîå ïðåäïî-
ëîæåíèå ïîäòâåðæäàåò ìíåíèå Ray et al. [6]
îòíîñèòåëüíî îñîáîé ãåíåòè÷åñêîé áëèçîñòè
óïîìÿíóòûõ òàêñîíîìè÷åñêèõ åäèíèö â ãðóï-
ïå çåðíîâûõ àìàðàíòîâ.
Òàêèì îáðàçîì, ïðè ïîìîùè RAPD-àíà-
ëèçà íàìè âûÿâëåí âûñîêèé óðîâåíü ïîëè-
ìîðôèçìà èçó÷àåìûõ îáðàçöîâ àìàðàíòà, óñ-
òàíîâëåíû âçàèìîñâÿçè ìåæäó íèìè. Îáíà-
ðóæåíû ñïåöèôè÷åñêèå ãåíîìíûå ïîñëåäî-
âàòåëüíîñòè, êîòîðûå ìîæíî èñïîëüçîâàòü
êàê ãåíåòè÷åñêèå ìàðêåðû îïðåäåëåííûõ
îáðàçöîâ è ðîäà Amaranthus L. â öåëîì, ÷òî
ÿâëÿåòñÿ êðàéíå âàæíûì ïðè èäåíòèôèêà-
öèè ðàñòèòåëüíîãî ìàòåðèàëà ñ öåëüþ äàëü-
íåéøåãî åãî èñïîëüçîâàíèÿ â ðàçëè÷íûõ
ñåëåêöèîííî-ãåíåòè÷åñêèõ ïðîãðàììàõ. Óíè-
êàëüíûå ôðàãìåíòû, âûÿâëåííûå íàìè ïðè
ïîìîùè RAPD-òåõíîëîãèè, ìîãóò áûòü ñåêâå-
íèðîâàíû è èñïîëüçîâàíû äëÿ ðàçðàáîòêè
SCAR-ìàðêåðîâ. Ïîëó÷åííûå äàííûå òàêæå
ïîçâîëÿþò äîïîëíèòü èíôîðìàöèþ ïî ãåíå-
òèêå àìàðàíòà.
S.V. Lymanska
ESTIMATION OF THE GENETIC
VARIABILITY OF AMARANTH COLLECTION
(AMARANTHUS L.) WITH RAPD-ANALYSIS
Genetic variability of amaranth collection was stud-
ied with RAPD-analysis. A high level of polymorphism
of studied accessions was determined and amounted
85 % in mean. The unique bends characteristic only
for the definite accessions, and 18 monomorphic loci
proper for all amaranth accessions were detected with
some primers. The genetic distances of Nei and Li
were calculated. This index varied from 0,0009 to
0,0141. Cluster analysis was carried out. The amaranth
accessions were classified into 2 clusters conformity
with species belonging.
Ñ.Â. Ëèìàíñüêà
ÎÖ²ÍÊÀ ÃÅÍÅÒÈ×Íί ̲ÍËÈÂÎÑÒ²
ÊÎËÅÊÖ²¯ ÀÌÀÐÀÍÒÓ (AMARANTHUS L.)
Ç ÂÈÊÎÐÈÑÒÀÍÍßÌ RAPD-ÀÍÀ˲ÇÓ
Çà äîïîìîãîþ RAPD-àíàë³çó âèâ÷åíî ãåíåòè÷íó
ì³íëèâ³ñòü êîëåêö³¿ àìàðàíòó. Çàçíà÷åíî âèñîêèé
ð³âåíü ïîë³ìîðôíîñò³ äîñë³äæåíèõ çðàçê³â, ÿêèé
â ñåðåäíüîìó ñòàíîâèâ 85 %. Ç âèêîðèñòàííÿì
äåÿêèõ ïðàéìåð³â äåòåêòîâàíî óí³êàëüí³ ôðàãìåí-
òè, õàðàêòåðí³ ëèøå ïåâíèì çðàçêàì, à òàêîæ 18
ìîíîìîðôíèõ ëîêóñ³â, ïðèòàìàííèõ âñ³ì çðàçêàì
àìàðàíòó. Ðîçðàõîâàíî ãåíåòè÷í³ â³äñòàí³ Íåÿ òà ˳.
26 ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2012. ¹ 4
C.Â. Ëèìàíñêàÿ
Öåé ïîêàçíèê âàð³þâàâ â ìåæàõ â³ä 0,0009 äî 0,0141.
Ïðîâåäåíî êëàñòåðíèé àíàë³ç, çà ðåçóëüòàòàìè
ÿêîãî çðàçêè àìàðàíòó áóëî ðîçïîä³ëåíî â äâà
êëàñòåðè â³äïîâ³äíî äî âèäîâî¿ ïðèíàëåæíîñò³.
ÑÏÈÑÎÊ ËÈÒÅÐÀÒÓÐÛ
1. Ãîïö³é Ò.². Àìàðàíò: á³îëîã³ÿ, âèðîùóâàííÿ,
ïåðñïåêòèâè âèêîðèñòàííÿ, ñåëåêö³ÿ. – Õàðê³â,
1999. – 273 ñ.
2. Àëòóõîâ Þ.Ï., Ñàëìåíêîâà Å.À. Ïîëèìîðôèçì
ÄÍÊ â ïîïóëÿöèîííîé ãåíåòèêå // Ãåíåòèêà. –
2002. – 38, ¹ 9. – Ñ. 1173–1195.
3. Êàëåíäàðü Ð.Í., Ãëàçêî Â.È. Òèïû ìîëåêóëÿðíî-
ãåíåòè÷åñêèõ ìàðêåðîâ è èõ ïðèìåíåíèå //
Ôèçèîëîãèÿ è áèîõèìèÿ êóëüòóð. ðàñòåíèé. –
2002. – 34, ¹ 4. – Ñ. 279–295.
4. Ìàëûøåâ Ñ.Â., Êàðòåëü Í.À. Ìîëåêóëÿðíûå ìàð-
êåðû â ãåíåòè÷åñêîì êàðòèðîâàíèè ðàñòåíèé //
Ìîëåêóëÿð. áèîëîãèÿ. – 1997. – 31, ¹ 2. –
Ñ. 197–208.
5. Êî÷èåâà Å.Ç. Èñïîëüçîâàíèå ìåòîäîâ íà îñíî-
âàíèè ïîëèìåðàçíîé öåïíîé ðåàêöèè äëÿ àíà-
ëèçà è ìàðêèðîâàíèÿ ðàñòèòåëüíîãî ãåíîìà //
Ñ.-õ. áèîëîãèÿ. – 1999. – ¹ 3. – Ñ. 3–14.
6. Ray T., Roy S.C. Genetic diversity of Amaranthus
species from the Indo-Gangetik plains revealed by
RAPD analysis leading to the development of eco-
type-specific SCAR marker // J. Hered. – 2009. –
100, ¹ 3. – P. 338–347.
7. Chan K.F., Sun M. Genetic diversity and relation-
ships detected by isozyme and RAPD analysis of
crop and wild species of Amaranthus // Theor.
Appl. Genet. – 1997. – 95, ¹ 5/6. – P. 865–873.
8. Mandal N., Das P.K. Intra- and interspecific ge-
netic diversity in grain amaranthus using random
amplified polymorphic DNA markers // Plant Tis-
sue Culture. – 2002. – 12, ¹ 1. – P. 49–56.
9. Ranade S.A., Kumar A., Goswamt M., Farooqui N.,
Sane P.V. Genome analysis of amaranth : Deter-
mination of inter- and intra-species variation // J.
Biosci. – 1997. – 22, ¹ 4. – P. 457–464.
10. Stefunova I.V. Geneticka analyza laskavca (Ama-
ranthus L.) DNA markermi : Autoref. diz. 15-03-9
genetika. – Nitra, 2008. – 20 p.
11. Faseela K.V., Salikutty J. Molecular characteriza-
tion of amaranthus landraces and assessment of in-
terspecific relationships among Amaranthus spp. L.
using RAPD markers // Indian J. Genet. – 2007. –
67, ¹ 1. – P. 12–17.
12. Mallory M.A., Hall R.V., McNabb A.R., Pratt D.B.,
Jellen E.N., Maughan P.J. Development and cha-
racterization of microsatellite markers for the grain
amaranths // Crop Sci. – 2008. – 48, ¹ 3. –
P. 1098–1106.
13. Xu F., Sun M. Comparative analysis of phyloge-
netic relationships of grain amaranths and their
wild relatives (Amaranthus; Amaranthaceae) using
Internal Transcribed Spacer, Amplified Fragment
Length Polymorphism, and Double-Primer Fluo-
rescent Intersimple Sequence Repeat Markers //
Mol. Phylogenet. Evol. – 2001. – 21, ¹ 3. –
P. 372–387.
14. Èñïîëüçîâàíèå ÏÖÐ-àíàëèçà â ãåíåòèêî-
ñåëåêöèîííûõ èññëåäîâàíèÿõ : Íàó÷.-ìåòîä.
ðóêîâîäñòâî / Ïîä ðåä. Þ.Ì. Ñèâîëàïà. – Ê.:
Àãðàð. íàóêà, 1998. – 156 ñ.
15. Ne³ M., Li W.-H. Mathematical model for studying
genetic variation in terms of restriction endonucle-
ases // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. – 1979. – 76,
¹ 10. – P. 5269–5273.
16. Goptsiy T., Voroncov N., Popov V., Zhyravel D.,
Gromenko S. Grain varieties of amaranth developed
by selection at Kharkiv national agrarian university
and the perspectives of their use // Amaranth –
Plant of the Future : 5th Int. Symp. of the Duporean
Amaranth Association. – Nitra, 2008. – P. 97–
100.
17. Sauer J.D. The grain Amaranths and its relatives: a
revised taxonomic and geographic survey // Ann.
Missour. Bot. Gard. – 1967. – 54. – P. 102–
137.
18. Sauer J.D. Grain amaranth // Evolution of crop
plants / Ed. N.W. Simmonds. – London : Long-
man Group Ltd., 1976. – Ð. 4–7.
19. Greizerstein E.I., Poggio L. Karyological studies in
grain amaranthus // Cytologia. – 1994. – 59, ¹ 1. –
P. 25–30.
20. Kulakow Ð.À., Hauptli H., Jain S.K. Genetics of
grain amaranths. I. Mendelian analysis of six color
characteristics // J. Hered. – 1985. – 76, ¹ 1. –
P. 27–30.
21. Hauptli H., Jain S.B. Genetic structure of landrace
populations of the New World grain amaranths //
Euphytica. – 1984. – 33, ¹ 3. – P. 875–884.
22. Lanoue K.Z., Wolf P.G., Browning S., Hood E.E.
Phylogenetic analysis of restriction-site variation in
wild and cultivated Amaranthus species (Amaran-
thaceae) // Theor. Appl. Genet. – 1996. – 93. –
P. 722–732.
Ïîñòóïèëà 20.02.11
<<
/ASCII85EncodePages false
/AllowTransparency false
/AutoPositionEPSFiles true
/AutoRotatePages /None
/Binding /Left
/CalGrayProfile (Dot Gain 20%)
/CalRGBProfile (sRGB IEC61966-2.1)
/CalCMYKProfile (U.S. Web Coated \050SWOP\051 v2)
/sRGBProfile (sRGB IEC61966-2.1)
/CannotEmbedFontPolicy /Error
/CompatibilityLevel 1.4
/CompressObjects /Tags
/CompressPages true
/ConvertImagesToIndexed true
/PassThroughJPEGImages true
/CreateJobTicket false
/DefaultRenderingIntent /Default
/DetectBlends true
/DetectCurves 0.0000
/ColorConversionStrategy /CMYK
/DoThumbnails false
/EmbedAllFonts true
/EmbedOpenType false
/ParseICCProfilesInComments true
/EmbedJobOptions true
/DSCReportingLevel 0
/EmitDSCWarnings false
/EndPage -1
/ImageMemory 1048576
/LockDistillerParams false
/MaxSubsetPct 100
/Optimize true
/OPM 1
/ParseDSCComments true
/ParseDSCCommentsForDocInfo true
/PreserveCopyPage true
/PreserveDICMYKValues true
/PreserveEPSInfo true
/PreserveFlatness true
/PreserveHalftoneInfo false
/PreserveOPIComments false
/PreserveOverprintSettings true
/StartPage 1
/SubsetFonts true
/TransferFunctionInfo /Apply
/UCRandBGInfo /Preserve
/UsePrologue false
/ColorSettingsFile ()
/AlwaysEmbed [ true
]
/NeverEmbed [ true
]
/AntiAliasColorImages false
/CropColorImages true
/ColorImageMinResolution 300
/ColorImageMinResolutionPolicy /OK
/DownsampleColorImages true
/ColorImageDownsampleType /Bicubic
/ColorImageResolution 1200
/ColorImageDepth -1
/ColorImageMinDownsampleDepth 1
/ColorImageDownsampleThreshold 1.50000
/EncodeColorImages false
/ColorImageFilter /DCTEncode
/AutoFilterColorImages true
/ColorImageAutoFilterStrategy /JPEG
/ColorACSImageDict <<
/QFactor 0.15
/HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1]
>>
/ColorImageDict <<
/QFactor 0.15
/HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1]
>>
/JPEG2000ColorACSImageDict <<
/TileWidth 256
/TileHeight 256
/Quality 30
>>
/JPEG2000ColorImageDict <<
/TileWidth 256
/TileHeight 256
/Quality 30
>>
/AntiAliasGrayImages false
/CropGrayImages true
/GrayImageMinResolution 300
/GrayImageMinResolutionPolicy /OK
/DownsampleGrayImages true
/GrayImageDownsampleType /Bicubic
/GrayImageResolution 1200
/GrayImageDepth -1
/GrayImageMinDownsampleDepth 2
/GrayImageDownsampleThreshold 1.50000
/EncodeGrayImages false
/GrayImageFilter /DCTEncode
/AutoFilterGrayImages true
/GrayImageAutoFilterStrategy /JPEG
/GrayACSImageDict <<
/QFactor 0.15
/HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1]
>>
/GrayImageDict <<
/QFactor 0.15
/HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1]
>>
/JPEG2000GrayACSImageDict <<
/TileWidth 256
/TileHeight 256
/Quality 30
>>
/JPEG2000GrayImageDict <<
/TileWidth 256
/TileHeight 256
/Quality 30
>>
/AntiAliasMonoImages false
/CropMonoImages true
/MonoImageMinResolution 1200
/MonoImageMinResolutionPolicy /OK
/DownsampleMonoImages true
/MonoImageDownsampleType /Bicubic
/MonoImageResolution 1200
/MonoImageDepth -1
/MonoImageDownsampleThreshold 1.50000
/EncodeMonoImages false
/MonoImageFilter /CCITTFaxEncode
/MonoImageDict <<
/K -1
>>
/AllowPSXObjects false
/CheckCompliance [
/None
]
/PDFX1aCheck false
/PDFX3Check false
/PDFXCompliantPDFOnly false
/PDFXNoTrimBoxError true
/PDFXTrimBoxToMediaBoxOffset [
0.00000
0.00000
0.00000
0.00000
]
/PDFXSetBleedBoxToMediaBox true
/PDFXBleedBoxToTrimBoxOffset [
0.00000
0.00000
0.00000
0.00000
]
/PDFXOutputIntentProfile (None)
/PDFXOutputConditionIdentifier ()
/PDFXOutputCondition ()
/PDFXRegistryName ()
/PDFXTrapped /False
/CreateJDFFile false
/Description <<
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
/BGR <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>
/CHS <FEFF4f7f75288fd94e9b8bbe5b9a521b5efa7684002000410064006f006200650020005000440046002065876863900275284e8e9ad88d2891cf76845370524d53705237300260a853ef4ee54f7f75280020004100630072006f0062006100740020548c002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e003000204ee553ca66f49ad87248672c676562535f00521b5efa768400200050004400460020658768633002>
/CHT <FEFF4f7f752890194e9b8a2d7f6e5efa7acb7684002000410064006f006200650020005000440046002065874ef69069752865bc9ad854c18cea76845370524d5370523786557406300260a853ef4ee54f7f75280020004100630072006f0062006100740020548c002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e003000204ee553ca66f49ad87248672c4f86958b555f5df25efa7acb76840020005000440046002065874ef63002>
/CZE <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>
/DAN <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>
/DEU <FEFF00560065007200770065006e00640065006e0020005300690065002000640069006500730065002000450069006e007300740065006c006c0075006e00670065006e0020007a0075006d002000450072007300740065006c006c0065006e00200076006f006e002000410064006f006200650020005000440046002d0044006f006b0075006d0065006e00740065006e002c00200076006f006e002000640065006e0065006e002000530069006500200068006f006300680077006500720074006900670065002000500072006500700072006500730073002d0044007200750063006b0065002000650072007a0065007500670065006e0020006d00f60063006800740065006e002e002000450072007300740065006c006c007400650020005000440046002d0044006f006b0075006d0065006e007400650020006b00f6006e006e0065006e0020006d006900740020004100630072006f00620061007400200075006e0064002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e00300020006f0064006500720020006800f600680065007200200067006500f600660066006e00650074002000770065007200640065006e002e>
/ESP <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>
/ETI <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>
/FRA <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>
/GRE <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>
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
/HRV (Za stvaranje Adobe PDF dokumenata najpogodnijih za visokokvalitetni ispis prije tiskanja koristite ove postavke. Stvoreni PDF dokumenti mogu se otvoriti Acrobat i Adobe Reader 5.0 i kasnijim verzijama.)
/HUN <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>
/ITA <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>
/JPN <FEFF9ad854c18cea306a30d730ea30d730ec30b951fa529b7528002000410064006f0062006500200050004400460020658766f8306e4f5c6210306b4f7f75283057307e305930023053306e8a2d5b9a30674f5c62103055308c305f0020005000440046002030d530a130a430eb306f3001004100630072006f0062006100740020304a30883073002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e003000204ee5964d3067958b304f30533068304c3067304d307e305930023053306e8a2d5b9a306b306f30d530a930f330c8306e57cb30818fbc307f304c5fc59808306730593002>
/KOR <FEFFc7740020c124c815c7440020c0acc6a9d558c5ec0020ace0d488c9c80020c2dcd5d80020c778c1c4c5d00020ac00c7a50020c801d569d55c002000410064006f0062006500200050004400460020bb38c11cb97c0020c791c131d569b2c8b2e4002e0020c774b807ac8c0020c791c131b41c00200050004400460020bb38c11cb2940020004100630072006f0062006100740020bc0f002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e00300020c774c0c1c5d0c11c0020c5f40020c2180020c788c2b5b2c8b2e4002e>
/LTH <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>
/LVI <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>
/NLD (Gebruik deze instellingen om Adobe PDF-documenten te maken die zijn geoptimaliseerd voor prepress-afdrukken van hoge kwaliteit. De gemaakte PDF-documenten kunnen worden geopend met Acrobat en Adobe Reader 5.0 en hoger.)
/NOR <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>
/POL <FEFF0055007300740061007700690065006e0069006100200064006f002000740077006f0072007a0065006e0069006100200064006f006b0075006d0065006e007400f300770020005000440046002000700072007a0065007a006e00610063007a006f006e00790063006800200064006f002000770079006400720075006b00f30077002000770020007700790073006f006b00690065006a0020006a0061006b006f015b00630069002e002000200044006f006b0075006d0065006e0074007900200050004400460020006d006f017c006e00610020006f007400770069006500720061010700200077002000700072006f006700720061006d006900650020004100630072006f00620061007400200069002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e0030002000690020006e006f00770073007a0079006d002e>
/PTB <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>
/RUM <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>
/RUS <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>
/SKY <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>
/SLV <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>
/SUO <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>
/SVE <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>
/TUR <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>
/UKR <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>
/ENU (Use these settings to create Adobe PDF documents best suited for high-quality prepress printing. Created PDF documents can be opened with Acrobat and Adobe Reader 5.0 and later.)
>>
/Namespace [
(Adobe)
(Common)
(1.0)
]
/OtherNamespaces [
<<
/AsReaderSpreads false
/CropImagesToFrames true
/ErrorControl /WarnAndContinue
/FlattenerIgnoreSpreadOverrides false
/IncludeGuidesGrids false
/IncludeNonPrinting false
/IncludeSlug false
/Namespace [
(Adobe)
(InDesign)
(4.0)
]
/OmitPlacedBitmaps false
/OmitPlacedEPS false
/OmitPlacedPDF false
/SimulateOverprint /Legacy
>>
<<
/AddBleedMarks false
/AddColorBars false
/AddCropMarks false
/AddPageInfo false
/AddRegMarks false
/ConvertColors /ConvertToCMYK
/DestinationProfileName ()
/DestinationProfileSelector /DocumentCMYK
/Downsample16BitImages true
/FlattenerPreset <<
/PresetSelector /MediumResolution
>>
/FormElements false
/GenerateStructure false
/IncludeBookmarks false
/IncludeHyperlinks false
/IncludeInteractive false
/IncludeLayers false
/IncludeProfiles false
/MultimediaHandling /UseObjectSettings
/Namespace [
(Adobe)
(CreativeSuite)
(2.0)
]
/PDFXOutputIntentProfileSelector /DocumentCMYK
/PreserveEditing true
/UntaggedCMYKHandling /LeaveUntagged
/UntaggedRGBHandling /UseDocumentProfile
/UseDocumentBleed false
>>
]
>> setdistillerparams
<<
/HWResolution [2400 2400]
/PageSize [612.000 792.000]
>> setpagedevice
|