Противовирусная активность экстрактов трансгенных растений цикория и салата с геном интерферона α2b человека
Изучена биологическая активность белковых экстрактов трансгенных растений Cichorium intybus L. и Lactuca sativa L. с геном интерферона-α2b человека по отношению к вирусу везикулярного стоматита. Экстракты из трансгенных корней цикория и салата, полученных после трансформации A. rhizogenes, обладали...
Saved in:
| Date: | 2012 |
|---|---|
| Main Authors: | , , , , , |
| Format: | Article |
| Language: | Russian |
| Published: |
Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України
2012
|
| Series: | Цитология и генетика |
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/126490 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Противовирусная активность экстрактов трансгенных растений цикория и салата с геном интерферона α2b человека / Н.А. Матвеева, Ю.И. Кудрявец, А.А. Лихова, А.М. Шаховский, Н.А. Безденежных, Е.Ю. Кваско // Цитология и генетика. — 2012. — Т. 46, № 5. — С. 28-35. — Бібліогр.: 38 назв. — рос. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-126490 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-1264902025-02-09T23:32:01Z Противовирусная активность экстрактов трансгенных растений цикория и салата с геном интерферона α2b человека Противірусна активність екстрактів трансгенних рослин цикорію та салату з геном інтерферону α-2b людини Antiviral activity of extracts of transgenic cichory and lettuce plants with the human interferon alpha-2b gene Матвеева, Н.А. Кудрявец, Ю.И. Лихова, А.А. Шаховский, А.М. Безденежных, Н.А. Кваско, Е.Ю. Оригинальные работы Изучена биологическая активность белковых экстрактов трансгенных растений Cichorium intybus L. и Lactuca sativa L. с геном интерферона-α2b человека по отношению к вирусу везикулярного стоматита. Экстракты из трансгенных корней цикория и салата, полученных после трансформации A. rhizogenes, обладали противовирусной активностью в пределах 1620–5400 МЕ/г массы, а экстракты из листьев растений цикория, трансформированных A. tumefaciens – до 9375 МЕ/г. Показана зависимость противовирусной активности растительных экстрактов из корней или листьев от вектора, использованного для трансформации растений. Противовирусной активностью обладали экстракты из корней растений, полученных при трансформации с помощью A. rhizogenes, в то же время такая активность у экстрактов из листьев отсутствовала. Досліджено противірусну активність екстрактів трансгенних рослин цикорію Cichorium intybus L. та салату Lactuca sativa L. з геном інтерферону-α2b людини відносно вірусу везикулярного стоматиту. Показано, що екстракти з трансгенних коренів цикорію та салату, отриманих за допомогою A. rhizogenes, мають противірусну активність в 1620–5400 МЕ/г маси, а екстрактів з листків рослин цикорію, трансформованих A. tumefaciens – до 9375 МЕ/г. Встановлено залежність рівня біологічної активності рослинних екстрактів з коренів або листків від вектора, використаного для трансформації. Biological activity of protein extracts from transgenic plants of chicory Cichorium intybus L. and let tuce Lactuca sativa L. with human interferon α2b gene was investigated against vesicular stomatitis virus. It was shown that the extracts from the hairy roots of chicory and lettuce transformed by A. rhizogenes possess the antiviral activity 1620…5400 IU/g weight, and the extracts from leaves of the plants transformed by A. tumefaciens – till 9375 IU/g weight. Dependence of plant extract biological activity on the transformation vector was shown. 2012 Article Противовирусная активность экстрактов трансгенных растений цикория и салата с геном интерферона α2b человека / Н.А. Матвеева, Ю.И. Кудрявец, А.А. Лихова, А.М. Шаховский, Н.А. Безденежных, Е.Ю. Кваско // Цитология и генетика. — 2012. — Т. 46, № 5. — С. 28-35. — Бібліогр.: 38 назв. — рос. 0564-3783 DOI: 10.3103/S0095452712050076 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/126490 57.085:57.088 ru Цитология и генетика application/pdf Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Russian |
| topic |
Оригинальные работы Оригинальные работы |
| spellingShingle |
Оригинальные работы Оригинальные работы Матвеева, Н.А. Кудрявец, Ю.И. Лихова, А.А. Шаховский, А.М. Безденежных, Н.А. Кваско, Е.Ю. Противовирусная активность экстрактов трансгенных растений цикория и салата с геном интерферона α2b человека Цитология и генетика |
| description |
Изучена биологическая активность белковых экстрактов трансгенных растений Cichorium intybus L. и Lactuca sativa L. с геном интерферона-α2b человека по отношению к вирусу везикулярного стоматита. Экстракты из трансгенных корней цикория и салата, полученных после трансформации A. rhizogenes, обладали противовирусной активностью в пределах 1620–5400 МЕ/г массы, а экстракты из листьев растений цикория, трансформированных A. tumefaciens – до 9375 МЕ/г. Показана зависимость противовирусной активности растительных экстрактов из корней или листьев от вектора, использованного для трансформации растений. Противовирусной активностью обладали экстракты из корней растений, полученных при трансформации с помощью A. rhizogenes, в то же время такая активность у экстрактов из листьев отсутствовала. |
| format |
Article |
| author |
Матвеева, Н.А. Кудрявец, Ю.И. Лихова, А.А. Шаховский, А.М. Безденежных, Н.А. Кваско, Е.Ю. |
| author_facet |
Матвеева, Н.А. Кудрявец, Ю.И. Лихова, А.А. Шаховский, А.М. Безденежных, Н.А. Кваско, Е.Ю. |
| author_sort |
Матвеева, Н.А. |
| title |
Противовирусная активность экстрактов трансгенных растений цикория и салата с геном интерферона α2b человека |
| title_short |
Противовирусная активность экстрактов трансгенных растений цикория и салата с геном интерферона α2b человека |
| title_full |
Противовирусная активность экстрактов трансгенных растений цикория и салата с геном интерферона α2b человека |
| title_fullStr |
Противовирусная активность экстрактов трансгенных растений цикория и салата с геном интерферона α2b человека |
| title_full_unstemmed |
Противовирусная активность экстрактов трансгенных растений цикория и салата с геном интерферона α2b человека |
| title_sort |
противовирусная активность экстрактов трансгенных растений цикория и салата с геном интерферона α2b человека |
| publisher |
Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України |
| publishDate |
2012 |
| topic_facet |
Оригинальные работы |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/126490 |
| citation_txt |
Противовирусная активность экстрактов трансгенных растений цикория и салата с геном интерферона α2b человека / Н.А. Матвеева, Ю.И. Кудрявец, А.А. Лихова, А.М. Шаховский, Н.А. Безденежных, Е.Ю. Кваско // Цитология и генетика. — 2012. — Т. 46, № 5. — С. 28-35. — Бібліогр.: 38 назв. — рос. |
| series |
Цитология и генетика |
| work_keys_str_mv |
AT matveevana protivovirusnaâaktivnostʹékstraktovtransgennyhrasteniicikoriâisalatasgenominterferonaα2bčeloveka AT kudrâvecûi protivovirusnaâaktivnostʹékstraktovtransgennyhrasteniicikoriâisalatasgenominterferonaα2bčeloveka AT lihovaaa protivovirusnaâaktivnostʹékstraktovtransgennyhrasteniicikoriâisalatasgenominterferonaα2bčeloveka AT šahovskiiam protivovirusnaâaktivnostʹékstraktovtransgennyhrasteniicikoriâisalatasgenominterferonaα2bčeloveka AT bezdenežnyhna protivovirusnaâaktivnostʹékstraktovtransgennyhrasteniicikoriâisalatasgenominterferonaα2bčeloveka AT kvaskoeû protivovirusnaâaktivnostʹékstraktovtransgennyhrasteniicikoriâisalatasgenominterferonaα2bčeloveka AT matveevana protivírusnaaktivnístʹekstraktívtransgennihroslincikoríûtasalatuzgenomínterferonuα2blûdini AT kudrâvecûi protivírusnaaktivnístʹekstraktívtransgennihroslincikoríûtasalatuzgenomínterferonuα2blûdini AT lihovaaa protivírusnaaktivnístʹekstraktívtransgennihroslincikoríûtasalatuzgenomínterferonuα2blûdini AT šahovskiiam protivírusnaaktivnístʹekstraktívtransgennihroslincikoríûtasalatuzgenomínterferonuα2blûdini AT bezdenežnyhna protivírusnaaktivnístʹekstraktívtransgennihroslincikoríûtasalatuzgenomínterferonuα2blûdini AT kvaskoeû protivírusnaaktivnístʹekstraktívtransgennihroslincikoríûtasalatuzgenomínterferonuα2blûdini AT matveevana antiviralactivityofextractsoftransgeniccichoryandlettuceplantswiththehumaninterferonalpha2bgene AT kudrâvecûi antiviralactivityofextractsoftransgeniccichoryandlettuceplantswiththehumaninterferonalpha2bgene AT lihovaaa antiviralactivityofextractsoftransgeniccichoryandlettuceplantswiththehumaninterferonalpha2bgene AT šahovskiiam antiviralactivityofextractsoftransgeniccichoryandlettuceplantswiththehumaninterferonalpha2bgene AT bezdenežnyhna antiviralactivityofextractsoftransgeniccichoryandlettuceplantswiththehumaninterferonalpha2bgene AT kvaskoeû antiviralactivityofextractsoftransgeniccichoryandlettuceplantswiththehumaninterferonalpha2bgene |
| first_indexed |
2025-12-01T18:08:59Z |
| last_indexed |
2025-12-01T18:08:59Z |
| _version_ |
1850330359253696512 |
| fulltext |
28 ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2012. ¹ 5
УДК 57.085:57.088
Н.А. МАТВЕЕВА 1, Ю.И. КУДРЯВЕЦ 2, А.А. ЛИХОВА 2,
А.М. ШАХОВСКИЙ 1, Н.А. БЕЗДЕНЕЖНЫХ 2,
Е.Ю. КВАСКО 1
1 Институт клеточной биологии и генетической инженерии
НАН Украины, Киев
2 Институт экспериментальной патологии, онкологии
и радиобиологии им. Р.Е. Кавецкого НАН Украины, Киев
E-mail: joyna56@gmail.com
ПРОТИВОВИРУСНАЯ АКТИВНОСТЬ
ЭКСТРАКТОВ ТРАНСГЕННЫХ
РАСТЕНИЙ ЦИКОРИЯ И САЛАТА
С ГЕНОМ ИНТЕРФЕРОНА- 2b
ЧЕЛОВЕКА
Èçó÷åíà áèîëîãè÷åñêàÿ àêòèâíîñòü áåëêîâûõ ýêñ-
òðàêòîâ òðàíñãåííûõ ðàñòåíèé Cichorium intybus L.
è Lactuca sativa L. ñ ãåíîì èíòåðôåðîíà- 2b ÷åëîâåêà
ïî îòíîøåíèþ ê âèðóñó âåçèêóëÿðíîãî ñòîìàòèòà.
Ýêñòðàêòû èç òðàíñãåííûõ êîðíåé öèêîðèÿ è ñà-
ëàòà, ïîëó÷åííûõ ïîñëå òðàíñôîðìàöèè A. rhizoge-
nes, îáëàäàëè ïðîòèâîâèðóñíîé àêòèâíîñòüþ â ïðå-
äåëàõ 1620–5400 ÌÅ/ã ìàññû, à ýêñòðàêòû èç ëèñ-
òüåâ ðàñòåíèé öèêîðèÿ, òðàíñôîðìèðîâàííûõ A.
tumefaciens – äî 9375 ÌÅ/ã. Ïîêàçàíà çàâèñèìîñòü
ïðîòèâîâèðóñíîé àêòèâíîñòè ðàñòèòåëüíûõ ýêñòðàê-
òîâ èç êîðíåé èëè ëèñòüåâ îò âåêòîðà, èñïîëüçî-
âàííîãî äëÿ òðàíñôîðìàöèè ðàñòåíèé. Ïðîòèâîâè-
ðóñíîé àêòèâíîñòüþ îáëàäàëè ýêñòðàêòû èç êîð-
íåé ðàñòåíèé, ïîëó÷åííûõ ïðè òðàíñôîðìàöèè ñ
ïîìîùüþ A. rhizogenes, â òî æå âðåìÿ òàêàÿ àêòèâ-
íîñòü ó ýêñòðàêòîâ èç ëèñòüåâ îòñóòñòâîâàëà.
Ââåäåíèå. Áèîëîãè÷åñêàÿ àêòèâíîñòü èíòåð-
ôåðîíîâ íàïðàâëåíà, êàê èçâåñòíî, íà çàùè-
òó îðãàíèçìà îò ðàçëè÷íûõ ïàòîãåíîâ: âèðó-
ñîâ, áàêòåðèé, ïðîñòåéøèõ, ÷óæåðîäíûõ êëå-
òîê è äð. Âñå êëåòêè îðãàíèçìà (êðîìå òðîì-
áîöèòîâ è ýðèòðîöèòîâ) íåñóò ðåöåïòîðû ê
èíòåðôåðîíàì (ÈÔÍ) è ìîãóò âûðàáàòûâàòü
ýòè áåëêè â îòâåò íà ñîîòâåòñòâóþùèå èíäóê-
òîðû. Íàðÿäó ñ ÷ðåçâû÷àéíî âûñîêîé óäåëü-
íîé àíòèâèðóñíîé àêòèâíîñòüþ â îðãàíèçìå
ÈÔÍ àêòèâíî âîâëå÷åíû â ðåãóëÿöèþ èì-
ìóííûõ ðåàêöèé è êëåòî÷íîãî ãîìåîñòàçà: îíè
àêòèâèðóþò âñå çâåíüÿ ñïåöèôè÷åñêîãî è íå-
ñïåöèôè÷åñêîãî èììóíèòåòà, à òàêæå åñòåñò-
âåííûå êèëëåðû è ìàêðîôàãè, ñòèìóëèðóþò
ýêñïðåññèþ àíòèãåíîâ ãèñòîñîâìåñòèìîñòè è
àêòèâèðóþò äåíäðèòíûå êëåòêè, ñòèìóëèðóþò
ïðîëèôåðàöèþ Ò-êëåòîê ïàìÿòè è àêòèâíîñòü
Ò-êëåòî÷íûõ ýôôåêòîðîâ. ÈÔÍ óñèëèâàþò
ýêñïðåññèþ ðåöåïòîðîâ ãîðìîíîâ, ðåãóëèðóþò
ïðîäóêöèþ ðÿäà öèòîêèíîâ è ýêñïðåññèþ èõ
ðåöåïòîðîâ, ñòèìóëèðóþò äèôôåðåíöèðîâêó
è êîíòðîëèðóþò ïðîëèôåðàòèâíûé ïîòåíöè-
àë êëåòîê, îãðàíè÷èâàþò î÷àãè âîñïàëåíèÿ è
ïîäàâëÿþò îïóõîëåâûé àíãèîãåíåç.
Èíòåðôåðîíû îáëàäàþò âûðàæåííîé ïðîòè-
âîîïóõîëåâîé àêòèâíîñòüþ, îáóñëîâëåííîé èõ
äåéñòâèåì êàê íà îðãàíèçì, òàê è íà îïó-
õîëåâûå êëåòêè. Îíè ïîäàâëÿþò êàíöåðîãå-
íåç, èíäóöèðîâàííûé ðàçëè÷íûìè àãåíòàìè,
èíãèáèðóþò ïðîëèôåðàöèþ è ìåòàñòàçèðî-
âàíèå îïóõîëåâûõ êëåòîê, ïîäàâëÿþò â íèõ
ýêñïðåññèþ îíêîãåíîâ è óñèëèâàþò àïîïòîç,
ïîäàâëÿþò àíãèîãåíåç â îïóõîëåâîé òêàíè,
ïîâûøàþò åå ÷óâñòâèòåëüíîñòü ê òåðàïåâ-
òè÷åñêèì âîçäåéñòâèÿì è ò.ä. Ïîýòîìó èíòåð-
ôåðîíîòåðàïèÿ íå ñëó÷àéíî âñå ÷àùå ïðè-
ìåíÿåòñÿ ïðè ëå÷åíèè áîëüíûõ çëîêà÷åñòâåí-
íûìè íîâîîáðàçîâàíèÿìè â ðàçëè÷íûõ ðåæè-
ìàõ – êàê â ðåæèìå ìîíîòåðàïèè, òàê è ïðè
êîìáèíèðîâàííîì ëå÷åíèè [1–5].
Ñåìåéñòâî èíòåðôåðîíîâ ïðåäñòàâëåíî òðå-
ìÿ òèïàìè – I, II è III. Èíòåðôåðîí I òèïà
÷åëîâåêà âêëþ÷àåò íåñêîëüêî ïîäòèïîâ, îñíîâ-
íûìè èç êîòîðûõ ÿâëÿþòñÿ ÈÔÍ-àëüôà è
ÈÔÍ-áåòà.  áîëüøèíñòâå ñëó÷àåâ ÈÔÍ îáëà-
äàþò âèäîâîé ñïåöèôè÷íîñòüþ, ò.å. ïðîÿâëÿ-
þò àíòèâèðóñíóþ àêòèâíîñòü ëèøü â êëåòêàõ
òîãî æå âèäà, îäíàêî íåêîòîðûå ñóáòèïû ÈÔÍ
îáëàäàþò è ìåæâèäîâîé àêòèâíîñòüþ [6].
Óñòàíîâëåíî, ÷òî èíòåðôåðîí I òèïà ÷åëî-
âåêà ìîæåò ïðîÿâëÿòü àíòèâèðóñíóþ àêòèâ-
© Í.À. ÌÀÒÂÅÅÂÀ, Þ.È. ÊÓÄÐßÂÅÖ, À.À. ËÈÕÎÂÀ,
À.Ì. ØÀÕÎÂÑÊÈÉ, Í.À. ÁÅÇÄÅÍÅÆÍÛÕ,
Å.Þ. ÊÂÀÑÊÎ, 2012
29
Ïðîòèâîâèðóñíàÿ àêòèâíîñòü ýêñòðàêòîâ òðàíñãåííûõ ðàñòåíèé öèêîðèÿ è ñàëàòà
ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2012. ¹ 5
íîñòü â íåêîòîðûõ ðàñòåíèÿõ, íàïðèìåð, â
ëèñòüÿõ òàáàêà ïðîòèâ âèðóñà òàáà÷íîé ìî-
çàèêè (â 10–1000 ðàç âûøå, ÷åì â êëåòêàõ
÷åëîâåêà) [7]. Ñîçäàíèå ðåêîìáèíàíòíûõ òåõ-
íîëîãèé îáóñëîâèëî ïîïûòêè ïåðåíåñåíèÿ
ãåíîâ ÈÔÍ ÷åëîâåêà â êëåòêè ðàñòåíèé íå
òîëüêî êàê ôàêòîðîâ ïðîòèâîâèðóñíîé çàùè-
òû ðàñòåíèé, íî è êàê àëüòåðíàòèâó ñèíòåçó
ýòîãî áåëêà â áàêòåðèàëüíûõ ñèñòåìàõ. Òàê, äëÿ
ýòîé öåëè èñïîëüçîâàëè ðàñòåíèÿ òàáàêà [8],
êàðòîôåëÿ [9], ñàëàòà [10], ðèñà [11], ìîðêî-
âè [12], ðÿñêè [13], ïðè÷åì ðåêîìáèíàíòíûé
ÈÔÍ, ñèíòåçèðîâàííûé â ðàñòåíèÿõ, îáëàäàë
áèîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòüþ [14]. Èññëåäîâà-
íèÿ ïîêàçàëè, ÷òî êëåòêè ðàñòåíèé ÿâëÿþò-
ñÿ äîñòàòî÷íî ýôôåêòèâíûìè áèîðåàêòîðà-
ìè äëÿ ïðîèçâîäñòâà íå òîëüêî ðàçëè÷íûõ
ñóáòèïîâ ÈÔÍ, íî è äðóãèõ ðåêîìáèíàíò-
íûõ áåëêîâ, âêëþ÷àÿ âèðóñíûå è áàêòåðèàëü-
íûå áåëêè, íåêîòîðûå ãîðìîíû è äð. Â
ïîñëåäíèå äåñÿòèëåòèÿ àêòèâíî ðàçâèâàåòñÿ
íîâîå íàïðàâëåíèå áèîòåõíîëîãèè, ñîçäàíèå
ðàñòåíèé – «ñúåäîáíûõ âàêöèí» [15–18]. Òà-
êèå ðàñòåíèÿ ïðåäñòàâëÿþò ñîáîé òðàíñôîð-
ìàíòû, íåñóùèå ãåíû áàêòåðèàëüíûõ àíòè-
ãåíîâ, êîòîðûå âûñòóïàþò â êà÷åñòâå èì-
ìóíîãåííûõ áåëêîâ [19–21].
Èçó÷åíèå áèîòåõíîëîãè÷åñêèõ àñïåêòîâ ñèí-
òåçà ïîëíîöåííîãî áèîëîãè÷åñêè àêòèâíîãî
ÈÔÍ ïðîäåìîíñòðèðîâàëî î÷åâèäíûå ïðåè-
ìóùåñòâà íàðàáîòêè ýòîãî öèòîêèíà â ðàñòå-
íèÿõ, êîòîðûå âûðàæàþòñÿ íå òîëüêî â êà÷åñòâå
áåëêà, íî è â ýêîíîìè÷íîñòè åãî ïðîèçâîä-
ñòâà. Âìåñòå ñ òåì, íåñìîòðÿ íà ìíîãîëåòíèå
èññëåäîâàíèÿ, íåêîòîðûå àñïåêòû íàðàáîòêè
ÈÔÍ ìëåêîïèòàþùèõ â ðàñòåíèÿõ îñòàþò-
ñÿ íåèññëåäîâàííûìè. Ïðåæäå âñåãî ïðîäîë-
æàåòñÿ ïîèñê ðàñòåíèé, â êëåòêàõ êîòîðûõ
ìîæíî ïîëó÷èòü íàèáîëåå âûñîêèé óðîâåíü
ñèíòåçà áèîàêòèâíîãî ÈÔÍ, à òàêæå ñïî-
ñîáîâ òðàíñãåíåçà – ââåäåíèå ãåíîâ ÈÔÍ
â ñîñòàâ ÿäåðíîé èëè õëîðîïëàñòíîé ÄÍÊ ñ
ïîìîùüþ ðàçëè÷íûõ ìåòîäîâ è âåêòîðîâ.
Îñòàåòñÿ òàêæå íåäîñòàòî÷íî èçó÷åííîé áèî-
ëîãè÷åñêàÿ àêòèâíîñòü ÈÔÍ â ñîñòàâå êëåòîê
ðàñòåíèé ïðè ïðîõîæäåíèè æåëóäî÷íî-êè-
øå÷íîãî òðàêòà è ìíîãèå äðóãèå àñïåêòû.
 íàñòîÿùåé ðàáîòå èçó÷åíà ýêñïðåññèÿ ãå-
íà èíòåðôåðîíà- 2b â òðàíñãåííûõ ðàñòåíèÿõ
öèêîðèÿ è ñàëàòà, ïîëó÷åííûõ ñ ïîìîùüþ àãðî-
áàêòåðèàëüíîé òðàíñôîðìàöèè, à òàêæå ôóíê-
öèîíàëüíàÿ àêòèâíîñòü ýòîãî öèòîêèíà èç
ýêñòðàêòîâ òðàíñãåííûõ ðàñòåíèé, ñîçäàííûõ
ïðè èñïîëüçîâàíèè ðàçëè÷íûõ âåêòîðîâ.
Ìàòåðèàëû è ìåòîäû. Òðàíñãåííûå ðàñòå-
íèÿ öèêîðèÿ è ñàëàòà ïîëó÷àëè ïóòåì òðàíñ-
ôîðìàöèè ëèñòîâûõ ýêñïëàíòîâ ñ ïîìîùüþ
áàêòåðèé A. rhizogenes (âåêòîð ðÑÂ161 [12]) è
A. tumefaciens (âåêòîð ðÑÂ124 [22]). Âåêòîðíûå
êîíñòðóêöèè ðÑÂ161 è ðÑÂ124 èìåëè öåëåâîé
ãåí ifn- 2b ïîä êîíòðîëåì ñîîòâåòñòâåííî êîð-
íåñïåöèôè÷íîãî ïðîìîòîðà ñàõàðíîé ñâåêëû
Mll è 35S ïðîìîòîðà âèðóñà ìîçàèêè öâåòíîé
êàïóñòû, à òàêæå ñåëåêòèâíûé ãåí nptII (íåî-
ìèöèíôîñôîòðàíñôåðàçû ²²) ïîä êîíòðîëåì
ïðîìîòîðà ãåíà íîïàëèíñèíòåòàçû è êàëü-
ðåòèêóëèíîâûé ñèãíàë [23] ïåðåä êîäèðóþ-
ùåé ÷àñòüþ ãåíà ifn- 2b. Ðàñòåíèÿ êóëüòèâè-
ðîâàëè â ñòåðèëüíûõ óñëîâèÿõ ïðè 16-÷àñîâîì
ñâåòîâîì ôîòîïåðèîäå è òåìïåðàòóðå +24 °Ñ.
Äëÿ èññëåäîâàíèÿ òðàíñêðèáèðîâàíèÿ ïå-
ðåíåñåííûõ ãåíîâ â òðàíñôîðìèðîâàííûõ ëè-
íèÿõ ðàñòåíèé ïðîâîäèëè ïîëèìåðàçíóþ öåï-
íóþ ðåàêöèþ, ñîâìåùåííóþ ñ îáðàòíîé òðàíñ-
êðèïöèåé (ÎÒ–ÏÖÐ). Ñóììàðíóþ ÐÍÊ âûäå-
ëÿëè ïî ìåòîäèêå [24]. Ïðåïàðàòû ñóììàðíîé
ÐÍÊ, îáðàáîòàííûå ÄÍÊàçîé I (ñâîáîäíîé
îò ÐÍÊàçû), ñëóæèëè ìàòðèöåé äëÿ ñèíòåçà
ïåðâîé öåïè êÄÍÊ. Ñèíòåç êÄÍÊ îñóùåñò-
âëÿëè ñ ïîìîùüþ íàáîðà ðåàêòèâîâ «Fermen-
tas» (Ëèòâà) ïî ìåòîäèêå, îïèñàííîé â ñòà-
òüå [25]. Àìïëèôèêàöèþ ïðîâîäèëè ïðàéìå-
ðàìè, ñïåöèôè÷íûìè ê ãåíàì ifn- 2b (5 -ttgatgc-
tcctggcacag-3 , 5 -ttctgctctgacaacctc-3 , 396 ï.í.)
è nptII (5 -cctgaatgaactccaggacgaggca-3 è 5 -gc-
tctagatccagagtcccgctcagaag-3 , 622 ï.í.). Îòðèöà-
òåëüíûì êîíòðîëåì íà ïðèñóòñòâèå â ïðîáå
ÐÍÊ îñòàòêîâ ÄÍÊ, êîòîðàÿ ìîæåò áûòü ìà-
òðèöåé äëÿ ÏÖÐ, ñëóæèëà ðåàêöèîííàÿ ñìåñü
áåç îáðàòíîé òðàíñêðèïòàçû (5 ìêë). Ñóì-
ìàðíóþ ÄÍÊ àãðîáàêòåðèé, èñïîëüçóåìóþ êàê
ïîëîæèòåëüíûé êîíòðîëü â ÏÖÐ, ýêñòðàãè-
ðîâàëè ïî ìåòîäèêå [26].
Äëÿ ïðèãîòîâëåíèÿ áåëêîâûõ ýêñòðàêòîâ
ðàñòèòåëüíûé ìàòåðèàë (êîðíè èëè ëèñòüÿ)
âçâåøèâàëè, ïîìåùàëè â ôàðôîðîâóþ ñòóïêó,
äîáàâëÿëè 100 ìÌ Tris-HCl, ðÍ 8,0 (5 ìÌ
Na2ÝÄTA, 100 ìÌ NaCl, 10 ìÌ ìåðêàïòî-
ýòàíîëà, 2,5 % ïîëèâèíèëïèððîëèäîíà, 1 %
ñàõàðîçû) è ðàñòèðàëè íà õîëîäó. Çàòåì ìà-
30
Í.À. Ìàòâååâà, Þ.È. Êóäðÿâåö, À.À. Ëèõîâà è äð.
ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2012. ¹ 5
òåðèàë ïåðåíîñèëè â öåíòðèôóæíóþ ïðîáèð-
êó è öåòðèôóãèðîâàëè 5 ìèí ïðè 10 000 g
(+4 °Ñ). Íàäîñàäî÷íóþ æèäêîñòü îòáèðàëè,
ïåðåíîñèëè â ÷èñòóþ ïðîáèðêó è öåíòðè-
ôóãèðîâàëè 25 ìèí ïðè 16 000 g (+4 °Ñ). Â
àëèêâîòå ïîëó÷åííîãî ñóïåðíàòàíòà îïðåäå-
ëÿëè êîíöåíòðàöèþ áåëêà ïî ìåòîäó Áðåä-
ôîðäà [27].
Ïðîòèâîâèðóñíóþ àêòèâíîñòü ýêñòðàêòîâ
òðàíñãåííûõ ðàñòåíèé óñòàíàâëèâàëè ñ ïîìî-
ùüþ ìèêðîìåòîäà ïî ñíèæåíèþ öèòîïàòè-
÷åñêîãî äåéñòâèÿ (ÖÏÄ) âèðóñà âåçèêóëÿðíîãî
ñòîìàòèòà (ÂÂÑ, øòàìì Èíäèàíà) â êëåòêàõ
ïî÷êè áûêà ëèíèè MDBK, âûñîêî÷óâñòâè-
òåëüíûõ ê àíòèâèðóñíîìó äåéñòâèþ ÈÔÍ-
àëüôà ÷åëîâåêà [28]. Êëåòî÷íàÿ ëèíèÿ MDBK
è ÂÂÑ øòàììà Èíäèàíà áûëè ïðåäîñòàâëåíû
Êëåòî÷íûì áàíêîì ëèíèé èç òêàíåé ÷åëî-
âåêà è æèâîòíûõ Èíñòèòóòà ýêñïåðèìåíòàëü-
íîé ïàòîëîãèè, îíêîëîãèè è ðàäèîáèîëîãèè
èì. Ð.Å. Êàâåöêîãî ÍÀÍ Óêðàèíû.
Ñóáñòðàò-çàâèñèìûå êëåòêè MDBK ðó-
òèííî êóëüòèâèðîâàëè â ïèòàòåëüíîé ñðåäå
DMEM («Sigma», ÑØÀ) ñ 10 % èíàêòèâèðî-
âàííîé ñûâîðîòêè íîâîðîæäåííîãî òåëåíêà
(ÑÍÒ) («Sigma», ÑØÀ), 40 ìêã/ìë ãåíòàìè-
öèíà â óâëàæíåííîé àòìîñôåðå ñ 5 % ÑÎ2
ïðè 37 °Ñ. Ïåðåñåâ êëåòîê îñóùåñòâëÿëè ñ
ïîìîùüþ ðàñòâîðà âåðñåíà.
 ëóíêè 96-ëóíî÷íîãî ïëàíøåòà («Ñàíòå-
Ëàá», Óêðàèíà) âíîñèëè ïî 200 ìêë ñóñïåí-
çèè êëåòîê MDBK â ñðåäå DMEM ñ 5 %
ÑÍÒ èç ðàñ÷åòà 2·104 êëåòîê íà ëóíêó. ×å-
ðåç 24 ÷ â ëóíêè ïëàíøåòà âíîñèëè èñõîä-
íûé ðàñòâîð îáðàçöîâ è òèòðîâàëè 5- èëè
2-êðàòíûìè ðàçâåäåíèÿìè, èñïîëüçóÿ ÷åòûðå
ðÿäà ïàðàëëåëåé äëÿ êàæäîãî îáðàçöà. ×åðåç
24 ÷ â ëóíêè âíîñèëè 100 ÖÏÄ/50 ÂÂÑ â
ñðåäå DMEM ñ 2 % ÑÍÒ. Ðåçóëüòàòû ðåãè-
ñòðèðîâàëè ÷åðåç 24 ÷ âèçóàëüíî ïðè 100 %
ÖÏÄ â êîíòðîëå âèðóñà, à òàêæå ñ ïîìî-
ùüþ îêðàñêè êëåòîê êðèñòàëëè÷åñêèì ôèîëå-
òîâûì. Çà îäíó åäèíèöó àêòèâíîñòè ÈÔÍ
ïðèíèìàëè ðàçâåäåíèå îáðàçöîâ, ïðè êîòîðîì
50 % êëåòî÷íîãî ìîíîñëîÿ çàùèùåíû îò
öèòîïàòè÷åñêîãî äåéñòâèÿ ÂÂÑ.  êà÷åñòâå
ñòàíäàðòà èñïîëüçîâàëè ìåæäóíàðîäíûé ñòàí-
äàðò èíòåðôåðîíà-àëüôà, ïîëó÷åííûé èç ÂÎÇ
(2nd WHO International Standard 1999. Inter-
feron alpha 2b Human, rDNA E. ñoli derived-
95/566, 70000 IU per ampoule). Ñðåäíèé òèòð
ÈÔÍ îïðåäåëÿëè ïî Ðèäó è Ìåí÷ó è âûðà-
æàëè â ìåæäóíàðîäíûõ åäèíèöàõ (ÌÅ) íà 1 ìë
ýêñòðàêòà (ÌÅ/ìë), ÌÅ/ã ìàññû ðàñòåíèÿ èëè
ÌÅ/ìã îáùåãî ðàñòâîðèìîãî áåëêà.
Ðåçóëüòàòû èññëåäîâàíèé è èõ îáñóæäåíèå.
Ãåíåòè÷åñêóþ òðàíñôîðìàöèþ ñ èñïîëüçîâà-
íèåì áàêòåðèé ðîäà Agrobacterium äîñòàòî÷íî
÷àñòî ïðèìåíÿþò äëÿ ïîëó÷åíèÿ òðàíñãåííûõ
ðàñòåíèé, â òîì ÷èñëå è ñ ãåíàìè ÈÔÍ [12, 29],
ïîñêîëüêó ýòè áàêòåðèè èìåþò ïðèðîäíóþ
ñïîñîáíîñòü ïåðåíîñèòü ñîáñòâåííóþ ÄÍÊ â
êëåòêè ðàñòåíèé (â ïðèðîäå ýòî îáðàçîâàíèå
«êîðîí÷àòûõ ãàëëîâ» ïðè èíôèöèðîâàíèè
A. tumefaciens èëè «áîðîäàòûõ» êîðíåé ïðè
çàðàæåíèè A. rhizogenes). Ýòîò ìåòîä ãåíå-
òè÷åñêîé òðàíñôîðìàöèè ÿâëÿåòñÿ äîñòàòî÷-
íî ïðîñòûì, íå òðåáóåò ñïåöèàëüíîãî îáîðó-
äîâàíèÿ è ìîæåò áûòü ïðèìåíåí äëÿ òðàíñ-
ôîðìàöèè ðàçíûõ âèäîâ ðàñòåíèé [30].
 ýêñïåðèìåíòàõ èñïîëüçîâàëè ýêñòðàêòû
òðàíñãåííûõ ðàñòåíèé öèêîðèÿ è ñàëàòà, íå-
ñóùèõ ãåí èíòåðôåðîíà, à òàêæå ýêñòðàêòû
íåòðàíñôîðìèðîâàííûõ ðàñòåíèé â êà÷åñòâå
êîíòðîëÿ. Òðàíñãåííûå ðàñòåíèÿ ïîëó÷åíû
íàìè ðàíåå ïóòåì òðàíñôîðìàöèè ñ ïîìîùüþ
A. tumefaciens [22] èëè A. rhizogenes [25]. Ìå-
òîäîì ÏÖÐ ðàíåå áûëî ïîêàçàíî, ÷òî
ýòè ðàñòåíèÿ èìåëè êàê ñåëåêòèâíûé ãåí
íåîìèöèíôîñôîòðàíñôåðàçû nptII, òàê è öå-
ëåâîé ãåí èíòåðôåðîíà ifn- 2b [22, 25]. Âìåñòå
ñ òåì èçâåñòíî, ÷òî ïðè òðàíñôîðìàöèè ÿäåð-
íîé ÄÍÊ âîçíèêàåò òàê íàçûâàåìîå ÿâëåíèå
«ìîë÷àíèÿ» ãåíîâ, ïðè êîòîðîì îòñóòñòâóåò
ñèíòåç ìÐÍÊ è, ñîîòâåòñòâåííî, íå ñèíòåçè-
ðóåòñÿ öåëåâîé áåëîê. Ïîýòîìó áûë ïðîâå-
äåí àíàëèç ïîëó÷åííûõ «áîðîäàòûõ» êîðíåé
è ðåãåíåðèðîâàííûõ òðàíñãåííûõ ðàñòåíèé ñ
èñïîëüçîâàíèåì ÎÒ-ÏÖÐ. Ïî ðåçóëüòàòàì
àíàëèçîâ â ïÿòè èç 9 èññëåäîâàííûõ ëèíèé
öèêîðèÿ (÷åòûðå ëèíèè êîðíåé è ðåãåíåðàí-
òîâ, òðàíñôîðìèðîâàííûõ ðÑÂ161, è îäíà ëè-
íèÿ ðàñòåíèé, òðàíñôîðìèðîâàííûõ ðÑÂ124)
áûëà îïðåäåëåíà òðàíñêðèïöèÿ ãåíà ifn- 2b
(òàáëèöà è ðèñ. 1). Â òî æå âðåìÿ ó ðàñòåíèé
âñåõ èññëåäîâàííûõ ëèíèé äåòåêòèðîâàëè
ìÐÍÊ ñåëåêòèâíîãî ãåíà nptII, ÷òî âïîëíå
îáúÿñíèìî, òàê êàê ñåëåêöèÿ ðàñòåíèé ïðî-
âîäèëàñü ïóòåì îòáîðà ëèíèé, óñòîé÷èâûõ ê
êàíàìèöèíó.
31
Ïðîòèâîâèðóñíàÿ àêòèâíîñòü ýêñòðàêòîâ òðàíñãåííûõ ðàñòåíèé öèêîðèÿ è ñàëàòà
ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2012. ¹ 5
Àíàëèç íà ïðîòèâîâèðóñíóþ àêòèâíîñòü
âûÿâèë, ÷òî ýêñòðàêòû èç êîðíåé òðåõ ëè-
íèé (âåêòîð ðÑÂ161) öèêîðèÿ îáëàäàëè ïðîòè-
âîâèðóñíîé àêòèâíîñòüþ ïî îòíîøåíèþ ê
ÂÂÑ â ïðåäåëàõ èëè 1620…2250 ÌÅ/ã ñûðîé
ìàññû ðàñòåíèé, èëè 358…1203 ÌÅ/ìã îáùåãî
ðàñòâîðèìîãî áåëêà. Âìåñòå ñ òåì ó ðàñòåíèé
îäíîé ëèíèè, íåñìîòðÿ íà íàëè÷èå ìÐÍÊ ïî
äàííûì ÎÒ-ÏÖÐ àíàëèçà, àêòèâíîñòü ïðî-
òèâ ÂÂÑ îòñóòñòâîâàëà, ÷òî ìîæåò áûòü ðå-
çóëüòàòîì íàðóøåíèÿ ñëåäóþùåãî çà òðàíñ-
êðèïöèåé çâåíà – ïðîöåññà òðàíñëÿöèè, ïîñò-
òðàíñëÿöèîííûõ èçìåíåíèé èëè î÷åíü ìàëîãî
êîëè÷åñòâà ñèíòåçèðóåìîãî áåëêà.
Èç ïÿòè èññëåäîâàííûõ ëèíèé ðÑÂ124 öè-
êîðèÿ â ýêñòðàêòàõ òîëüêî ó îäíîé âûÿâëåíà
ïðîòèâîâèðóñíàÿ àêòèâíîñòü; åå óðîâåíü áûë
çíà÷èòåëüíî âûøå, ÷åì â ýêñòðàêòàõ «áîðî-
äàòûõ» êîðíåé, è ñîñòàâèë 9327 ÌÅ/ã ìàññû
èëè 3291 ÌÅ/ìã áåëêà. Ñëåäóåò îòìåòèòü, ÷òî
ó ÷åòûðåõ ëèíèé ðàñòåíèé, íå ñîäåðæàùèõ
ÈÔÍ-ïîäîáíîé áèîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè,
Ðèñ. 1. Ýëåêòðîôîðåãðàììà ðåçóëüòàòîâ ÎÒ-ÏÖÐ
àíàëèçà òðàíñãåííûõ ëèíèé öèêîðèÿ (1, 2, 5, 6 –
êîðíè; 3, 4, 7, 8 – ëèñòüÿ), ïîëó÷åííûõ ñ èñïîëü-
çîâàíèåì âåêòîðà ðÑÂ161: 1–4 – nptII; 5–8 – ifn- 2b;
÷åòíûå òðåêè – ñèíòåç îáðàòíûõ òðàíñêðèïòîâ â
ïðèñóòñòâèè îáðàòíîé òðàíñêðèïòàçû, íå÷åòíûå –
áåç îáðàòíîé òðàíñêðèïòàçû
Ïðîòèâîâèðóñíàÿ àêòèâíîñòü áåëêîâûõ ýêñòðàêòîâ è ðåçóëüòàòû ÎÒ-ÏÖÐ àíàëèçà
òðàíñãåííûõ êîðíåé è ðàñòåíèé öèêîðèÿ è ñàëàòà
¹ ëèíèè Âåêòîð Îáðàçåö
Àêòèâíîñòü ÎÒ-ÏÖÐ àíàëèç
ÌÅ/ã ìàññû
ÌÅ/ìã
îáùåãî
áåëêà
nptII ifn- 2b
C. intybus
161/6
161/13
161/21
161/14
124/22
124/8
124/8/6
124/7
124/5
Ê
pCB161(Mll::HuINFa-2b)
pCB161(Mll::HuINFa-2b)
pCB161(Mll::HuINFa-2b)
pCB161(Mll::HuINFa-2b)
pCB124(35S::HuINFa-2b)
pCB124(35S::HuINFa-2b)
pCB124(35S::HuINFa-2b)
pCB124(35S::HuINFa-2b)
pCB124(35S::HuINFa-2b)
Êîíòðîëü
Êîðíè
Ëèñòüÿ
Êîðíè
Ëèñòüÿ
Êîðíè
Ëèñòüÿ
Êîðíè
Ëèñòüÿ
Ëèñòüÿ
Ëèñòüÿ
Ëèñòüÿ
Ëèñòüÿ
Ëèñòüÿ
2250
288
1620
0
0
0
2160
0
0
0
0
9327
0
358,34
262,69
1203,56
0
0
0
587,72
0
0
0
0
3291,44
0
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
–
+
+
+
+
+
+
+
–
–
–
–
+
–
L. sativa
161/1
161/3
161/10
161/17
Ê
pCB161(Mll::HuINFa-2b)
pCB161(Mll::HuINFa-2b)
pCB161(Mll::HuINFa-2b)
pCB161(Mll::HuINFa-2b)
Êîíòðîëü
Êîðíè
Ëèñòüÿ
Êîðíè
Ëèñòüÿ
Êîðíè
Êîðíè
Êîðíè
5400
0
5400
0
2250
2880
0
2527,84
0
17646,12
0
1259,54
2730,55
0
+
+
+
+
+
+
–
+
+
+
+
+
+
–
32
Í.À. Ìàòâååâà, Þ.È. Êóäðÿâåö, À.À. Ëèõîâà è äð.
ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2012. ¹ 5
íå îáíàðóæåíû è ìÐÍÊ ãåíà èíòåðôåðîíà,
÷òî ñâèäåòåëüñòâóåò î «ìîë÷àíèè» ãåíà. Îòñóò-
ñòâèå ýêñïðåññèè ïåðåíåñåííûõ ãåíîâ îáóñ-
ëîâëåíî, êàê èçâåñòíî, ðàçíûìè ïðè÷èíàìè,
è â ðÿäå ñëó÷àåâ ýòî ïðîèñõîäèò ïðè òðàíñ-
ôîðìàöèè ÿäåðíîé ÄÍÊ [31]. Çàêîíîìåðíî,
÷òî íàðóøåíèå ýêñïðåññèè ãåíà ÈÔÍ óæå
íà óðîâíå òðàíñêðèïöèè ñîîòâåòñòâóåò è îò-
ñóòñòâèþ áèîëîãè÷åñêîãî ýôôåêòà ïðîäóêòà
ýòîãî ãåíà – ïðîòèâèâèðóñíîé àêòèâíîñòè.
Áåëêîâûå ýêñòðàêòû èç êîðíåé ÷åòûðåõ
ïðîàíàëèçèðîâàííûõ ëèíèé ñàëàòà (âåêòîð
ðÑÂ161) îáëàäàëè àêòèâíîñòüþ â ïðåäåëàõ
2250–5400 ÌÅ/ã ñûðîé ìàññû ðàñòåíèé èëè
1259–17646 ÌÅ/ìã îáùåãî ðàñòâîðèìîãî áåë-
êà. Îäíàêî ýêñòðàêòû èç ëèñòüåâ, ðåãåíåðè-
ðîâàííûõ èç «áîðîäàòûõ» êîðíåé ñàëàòà, àêòèâ-
íîñòüþ ïðîòèâ ÂÂÑ íå îáëàäàëè (òàáëèöà),
õîòÿ ìÐÍÊ ãåíà ifn- 2b è äåòåêòèðîâàëèñü â
ýòèõ ðàñòåíèÿõ (ðèñ. 2). Òàêîé ðåçóëüòàò ìîæ-
íî áûëî îæèäàòü, ïîñêîëüêó â âåêòîðå ðÑÂ161,
èñïîëüçîâàííîì äëÿ òðàíñôîðìàöèè, ãåí ifn-
2b íàõîäèòñÿ ïîä êîðíåñïåöèôè÷íûì ïðî-
ìîòîðîì Mll [32]. Âìåñòå ñ òåì ðàíåå ïðè èñ-
ïîëüçîâàíèè òîãî æå âåêòîðà óñòàíîâëåíî, ÷òî
àêòèâíûé èíòåðôåðîí- 2b ñèíòåçèðîâàëñÿ íå
òîëüêî â êîðíÿõ, íî è â ëèñòüÿõ ìîðêîâè [12].
Âîçìîæíî, äåéñòâèå ïðîìîòîðà Mll âèäî-
ñïåöèôè÷íî. Òàêèì îáðàçîì, èñïîëüçîâàíèå
êîðíåñïåöèôè÷íîãî ïðîìîòîðà Mll íåöåëå-
ñîîáðàçíî â òîì ñëó÷àå, êîãäà öåëüþ ðàáî-
òû ÿâëÿåòñÿ ñèíòåç öåëåâûõ áåëêîâ â íàä-
çåìíîé ÷àñòè ðàñòåíèé ñàëàòà è öèêîðèÿ.
Îäíàêî ïðîìîòîð ìîæåò áûòü óñïåøíî èñ-
ïîëüçîâàí â âåêòîðàõ ïðè òðàíñôîðìàöèè ðàñ-
òåíèé ýòèõ âèäîâ äëÿ ñèíòåçà öåëåâûõ ïðî-
äóêòîâ â êîðíÿõ.
Òàêèì îáðàçîì, óðîâåíü àêòèâíîñòè ïðîòèâ
ÂÂÑ ïîëó÷åííûõ íàìè ëèíèé öèêîðèÿ ñîñ-
òàâëÿë 1620–9327 ÌÅ/ã ñûðîé ìàññû ðàñ-
òåíèé, ñàëàòà – 2250–5400 ÌÅ/ã, ÷òî ÿâëÿ-
åòñÿ äîñòàòî÷íî âûñîêèì ïîêàçàòåëåì. Òàê, â
ðÿäå ðàáîò [33–35] ïðîäåìîíñòðèðîâàíî, ÷òî
èíòåðôåðîí- 2b ÷åëîâåêà íå òîëüêî ìîæåò
ñèíòåçèðîâàòüñÿ â ðàñòèòåëüíûõ êëåòêàõ, íî
è îáëàäàåò ñîîòâåòñòâóþùåé áèîëîãè÷åñêîé
àêòèâíîñòüþ. Óðîâåíü ïðîòèâîâèðóñíîé àê-
òèâíîñòè ýêñòðàêòîâ òðàíñãåííûõ ðàñòåíèé
êîëåáëåòñÿ â äîñòàòî÷íî øèðîêèõ ïðåäåëàõ.
Íàïðèìåð, â ðàñòåíèÿõ ñàëàòà ñ ãåíîì èí-
òåðôåðîíà- 2b ÷åëîâåêà àêòèâíîñòü ïðîòèâ
âèðóñà âåçèêóëÿðíîãî ñòîìàòèòà ñîñòàâëÿëà
448 ÌÅ/ã ìàññû ðàñòåíèé [36], àêòèâíîñòü ýêñ-
òðàêòîâ èç ðàñòåíèé êàðòîôåëÿ – 560 ÌÅ/ã
[9], 923–3029 ÌÅ/ã [37] è 512–2048 ÌÅ/ã
òêàíè, ðàñòåíèé òàáàêà (òðàíçèåíòíàÿ ýêñ-
ïðåññèÿ) – äî 3200 ÌÅ/ã ñûðîé ìàññû [38] è
çàâèñåëà îò òèïà èñõîäíîãî ìàòåðèàëà (êîð-
íè, ëèñòüÿ, ñåìåíà [11]), à òàêæå âîçðàñòà
ìàòåðèàëà (íàïðèìåð, ìîëîäûå èëè çðåëûå
ëèñòüÿ [12]).
Î÷åíü âûñîêèé óðîâåíü àêòèâíîñòè ðàñ-
òèòåëüíûõ ýêñòðàêòîâ ïîêàçàí ó òðàíñãåííûõ
ðàñòåíèé ìîðêîâè, ïðè÷åì àêòèâíîñòü ýêñ-
Ðèñ. 2. Ýëåêòðîôîðåãðàììà ðåçóëüòàòîâ ÎÒ-ÏÖÐ
àíàëèçà òðàíñãåííûõ ëèíèé ñàëàòà (1–4 – êîðíè;
5–8 – ëèñòüÿ): à – nptII; á – ifn- 2b; íå÷åòíûå òðå-
êè – ñèíòåç îáðàòíûõ òðàíñêðèïòîâ â ïðèñóòñòâèè
îáðàòíîé òðàíñêðèïòàçû, ÷åòíûå – áåç îáðàòíîé
òðàíñêðèïòàçû
33
Ïðîòèâîâèðóñíàÿ àêòèâíîñòü ýêñòðàêòîâ òðàíñãåííûõ ðàñòåíèé öèêîðèÿ è ñàëàòà
ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2012. ¹ 5
òðàêòîâ èç ìîëîäûõ ëèñòüåâ áûëà âûøå, ÷åì
ó çðåëûõ, è ñîñòàâëÿëà äî 50 000 ÌÅ/ã ñûðîé
ìàññû [12].
Ðåçóëüòàòû ïðîâåäåííûõ ýêñïåðèìåíòîâ ïî-
êàçàëè, ÷òî ðàñòåíèÿ öèêîðèÿ è ñàëàòà ÿâ-
ëÿþòñÿ äîñòàòî÷íî ýôôåêòèâíîé áèîòåõíî-
ëîãè÷åñêîé ñèñòåìîé íàðàáîòêè ðåêîìáè-
íàíòíîãî èíòåðôåðîíà- 2b, ïîñêîëüêó êëåòêè
òðàíñãåííûõ ðàñòåíèé, èìåþùèå ãåí èíòåð-
ôåðîíà- 2b ÷åëîâåêà, ìîãóò ñèíòåçèðîâàòü
ñîîòâåòñòâóþùèé áåëîê. Ýêñòðàêòû, ïîëó-
÷åííûå èç òðàíñãåííûõ ðàñòåíèé, äåìîíñò-
ðèðîâàëè ñïåöèôè÷åñêóþ áèîëîãè÷åñêóþ
àêòèâíîñòü – ïîäàâëÿëè äåéñòâèå öèòîïàòî-
ãåííîãî âèðóñà ÂÂÑ â êëåòî÷íîé ñèñòåìå,
âûñîêîñïåöèôè÷íîé äëÿ àëüôà-èíòåðôåðîíà
÷åëîâåêà: êàê èçâåñòíî, êëåòêè ëèíèè MDBK
íåñóò íà ñâîåé ïîâåðõíîñòè ðåöåïòîðû, êî-
òîðûå ñ âûñîêîé ýôôåêòèâíîñòüþ âçàèìî-
äåéñòâóþò èìåííî ñ ÈÔÍ-àëüôà ÷åëîâåêà
(îäíà åäèíèöà àêòèâíîñòè ÈÔÍ â ýòîé
ñèñòåìå ñîîòâåòñòâóåò 1 ÌÅ).
Êîìïîíåíòû ýêñòðàêòîâ ðàñòåíèé ìîãóò
ñîäåðæàòü âåùåñòâà, ñïîñîáíûå ìîäèôèöè-
ðîâàòü äåéñòâèå ÈÔÍ íà êëåòêè – ïîäàâëÿòü
èëè, íàïðîòèâ, ñòèìóëèðîâàòü åãî àêòèâíîñòü,
èëè æå îáëàäàòü ñîáñòâåííîé àíòèâèðóñíîé
àêòèâíîñòüþ íåèíòåðôåðîíîâîãî ïëàíà. Äëÿ
âûÿñíåíèÿ ýòîãî îáñòîÿòåëüñòâà ìû îïðåäå-
ëÿëè íàëè÷èå àíòèâèðóñíîé àêòèâíîñòè â ýêñò-
ðàêòàõ êîíòðîëüíûõ ðàñòåíèé, à òàêæå êîíò-
ðîëüíûõ îáðàçöàõ, â êîòîðûå äîáàâëÿëè èç-
âåñòíîå êîëè÷åñòâî ðåêîìáèíàíòíîãî èíòåðôå-
ðîíà- 2b ÷åëîâåêà. Óñòàíîâëåíî, ÷òî ýêñòðàêòû
êîíòðîëüíûõ ðàñòåíèé öèêîðèÿ íå ñîäåð-
æàëè âåùåñòâ ñ àíòèâèðóñíîé àêòèâíîñòüþ,
à òàêæå âåùåñòâ, ñòèìóëèðóþùèõ èëè èíãè-
áèðóþùèõ äåéñòâèå ðåêîìáèíàíòíîãî èíòåð-
ôåðîíà- 2b. Òàêèì îáðàçîì, íàìè ïîêàçàíî,
÷òî áèîëîãè÷åñêàÿ (ïðîòèâîâèðóñíàÿ) àêòèâ-
íîñòü èíòåðôåðîíà- 2b â êëåòêàõ öèêîðèÿ è
ñàëàòà íå ïîäâåðãàåòñÿ êàêîé-ëèáî ìîäèôè-
êàöèè äðóãèìè êîìïîíåíòàìè ðàñòåíèÿ, ïðè-
ñóòñòâóþùèìè â ýêñòðàêòàõ.
Ïîñêîëüêó ðàñòåíèÿ öèêîðèÿ è ñàëàòà ÿâ-
ëÿþòñÿ âîçìîæíûì îáúåêòîì äëÿ ãåíåòè÷åñêîé
òðàíñôîðìàöèè (ëåãêî êóëüòèâèðóþòñÿ in vitro,
îáëàäàþò âûñîêîé ñïîñîáíîñòüþ ê ðåãåíåðà-
öèè, ëåãêî òðàíñôîðìèðóþòñÿ ñ ïîìîùüþ
áàêòåðèé ðîäà Agrobacterium), à ýêñòðàêòû
òðàíñãåííûõ ðàñòåíèé îáëàäàþò áèîëîãè÷åñ-
êîé àêòèâíîñòüþ, îíè ìîãóò áûòü èñïîëüçî-
âàíû è äëÿ ñîçäàíèÿ ðàñòåíèé ñ äðóãèìè ãå-
íàìè, ïðåäñòàâëÿþùèìè ïðàêòè÷åñêèé èíòå-
ðåñ. Â ñâÿçè ñ òåì, ÷òî îáà âèäà ðàñòåíèé
ïðèìåíÿþòñÿ â ïèùó áåç òåðìîîáðàáîòêè,
òðàíñãåííûå ðàñòåíèÿ, äåìîíñòðèðóþùèå ïðî-
òèâèâèðóñíóþ àêòèâíîñòü, ìîãóò áûòü èñïîëü-
çîâàíû â êà÷åñòâå «ñúåäîáíûõ âàêöèí».
Âûâîäû. Ðåçóëüòàòû èññëåäîâàíèé ïîêà-
çàëè, ÷òî ó ëèíèé ñàëàòà è öèêîðèÿ, òðàíñôîð-
ìèðîâàííûõ âåêòîðàìè ðÑÂ124 è ðÑÂ161 è
èìåþùèõ ãåí ifn- 2b ÷åëîâåêà, âûÿâëåíà ïðî-
òèâîâèðóñíàÿ àêòèâíîñòü ïî îòíîøåíèþ ê
ÂÂÑ, ò.å. ïåðåíåñåííûé ãåí íå òîëüêî ïðè-
ñóòñòâóåò â ãåíîìå ðàñòåíèÿ, íî è àêòèâíî
ôóíêöèîíèðóåò. Âìåñòå ñ òåì ó ðÿäà ðàñòåíèé
îáíàðóæåíî ÿâëåíèå «ìîë÷àíèÿ» ãåíà è, ñî-
îòâåòñòâåííî, îòñóòñòâèå ÈÔÍ-ñïåöèôè÷åñ-
êîé áèîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè â ýêñòðàêòàõ.
Ó ÷àñòè ëèíèé, íàñìîòðÿ íà ñèíòåç îáðàòíûõ
òðàíñêðèïòîâ, áèîëîãè÷åñêàÿ àêòèâíîñòü ýêñ-
òðàêòîâ ðàñòåíèé íå îáíàðóæåíà.
Íàèáîëüøàÿ ïðîòèâîâèðóñíàÿ àêòèâíîñòü
âûÿâëåíà ó ðàñòåíèé, ïîëó÷åííûõ ïîñëå òðàíñ-
ôîðìàöèè âåêòîðîì ðÑÂ124 ñ ãåíîì èíòåð-
ôåðîíà- 2b ÷åëîâåêà ïîä 35S ïðîìîòîðîì
âèðóñà ìîçàèêè öâåòíîé êàïóñòû. Ýêñïåðè-
ìåíòû ïîêàçàëè, ÷òî êîðíåñïåöèôè÷íûé ïðî-
ìîòîð Mll òàêæå ìîæåò áûòü èñïîëüçîâàí äëÿ
ñîçäàíèÿ âåêòîðîâ ïðè ïîëó÷åíèè òðàíñãåí-
íûõ êîðíåé è ðàñòåíèé öèêîðèÿ, à òàêæå
ñàëàòà ñ ãåíîì èíòåðôåðîíà- 2b, îäíàêî ïðîòè-
âîâèðóñíîé àêòèâíîñòüþ â ýòîì ñëó÷àå îáëà-
äàþò òîëüêî òðàíñãåííûå êîðíè. Ìàêñèìàëü-
íàÿ àêòèâíîñòü ýêñòðàêòîâ ðàñòåíèé öèêîðèÿ
è ñàëàòà ñîñòàâëÿëà äî 9327 è 5200 ÌÅ/ã
ìàññû ñîîòâåòñòâåííî, ÷òî ïîçâîëÿåò èñïîëü-
çîâàòü ðàñòåíèÿ äëÿ ïðîäóöèðîâàíèÿ áèîëî-
ãè÷åñêè àêòèâíîãî èíòåðôåðîíà.
N.À. Matvieieva, Yu.I. Kudryavets, O.O. Lichova,
A.M. Schachovsky, N.O. Bezdenezhnykh,
O.Yu Kvasko
ANTIVIRAL ACTIVITY OF EXTRACTS
OF TRANSGENIC CICHORY AND LETTUCE
PLANTS WITH THE HUMAN INTERFERON
ALPHA-2b GENE
Biological activity of protein extracts from trans-
genic plants of chicory Cichorium intybus L. and let-
34
Í.À. Ìàòâååâà, Þ.È. Êóäðÿâåö, À.À. Ëèõîâà è äð.
ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2012. ¹ 5
tuce Lactuca sativa L. with human interferon 2b gene
was investigated against vesicular stomatitis virus. It
was shown that the extracts from the hairy roots of
chicory and lettuce transformed by A. rhizogenes pos-
sess the antiviral activity 1620…5400 IU/g weight, and
the extracts from leaves of the plants transformed by
A. tumefaciens – till 9375 IU/g weight. Dependence of
plant extract biological activity on the transformation
vector was shown.
Í.À. Ìàò⺺âà, Þ.É. Êóäðÿâåöü, Î.Î. Ëèõîâà,
À.Ì. Øàõîâñüêèé, Í.Î. Áåçäºíºæíèõ, Î.Þ. Êâàñêî
ÏÐÎÒȲÐÓÑÍÀ ÀÊÒÈÂͲÑÒÜ
ÅÊÑÒÐÀÊҲ ÒÐÀÍÑÃÅÍÍÈÕ ÐÎÑËÈÍ
ÖÈÊÎÐ²Þ ÒÀ ÑÀËÀÒÓ Ç ÃÅÍÎÌ
²ÍÒÅÐÔÅÐÎÍÓ- 2b ËÞÄÈÍÈ
Äîñë³äæåíî ïðîòèâ³ðóñíó àêòèâí³ñòü åêñòðàêò³â
òðàíñãåííèõ ðîñëèí öèêîð³þ Cichorium intybus L.
òà ñàëàòó Lactuca sativa L. ç ãåíîì ³íòåðôåðîíó- 2b
ëþäèíè â³äíîñíî â³ðóñó âåçèêóëÿðíîãî ñòîìàòèòó.
Ïîêàçàíî, ùî åêñòðàêòè ç òðàíñãåííèõ êîðåí³â
öèêîð³þ òà ñàëàòó, îòðèìàíèõ çà äîïîìîãîþ A. rhi-
zogenes, ìàþòü ïðîòèâ³ðóñíó àêòèâí³ñòü â 1620–
5400 ÌÅ/ã ìàñè, à åêñòðàêò³â ç ëèñòê³â ðîñëèí
öèêîð³þ, òðàíñôîðìîâàíèõ A. t umefaciens – äî
9375 ÌÅ/ã. Âñòàíîâëåíî çàëåæí³ñòü ð³âíÿ á³îëî-
ã³÷íî¿ àêòèâíîñò³ ðîñëèííèõ åêñòðàêò³â ç êîðåí³â
àáî ëèñòê³â â³ä âåêòîðà, âèêîðèñòàíîãî äëÿ òðàíñ-
ôîðìàö³¿.
ÑÏÈÑÎÊ ËÈÒÅÐÀÒÓÐÛ
1. Goldstein D., Laszlo J. The role of interferon in
cancer therapy : A current perspective // Cancer
J. Clin. – 1988. – 38, ¹ 5. – Ð. 258–277.
2. Sievert W. Management issues in chronic viral hep-
atitis: hepatitis C //J. Gastroenterol. Hepatol. –
2002 – 17, ¹ 4. – Ð. 415–422.
3. Apisarnthanarax N., Talpur R., Duvic M. Treatment
of cutaneous T cell lymphoma: current status and
future directions // Amer. J. Clin. Dermatol. –
2002. – 3, ¹ 3. – Ð. 193–215.
4. Âîðîíöîâà À.Ë., Êóäðÿâåö Þ.È., Æèëü÷óê Â.Å.
Èíòåðôåðîíû è èõ ïðèìåíåíèå â êëèíè÷åñêîé
îíêîëîãèè // Çäîðîâüå æåíùèíû. – 2003. – 4,
¹ 16. – Ñ. 8–14.
5. Âîðîíöîâà À.Ë., Êóäðÿâåöü Þ.É. Öèòîê³íè â
òåðàﳿ çëîÿê³ñíèõ íîâîóòâîðåíü // Îíêîëîã³ÿ :
Âèáðàí³ ëåêö³¿ äëÿ ñòóäåíò³â ³ ë³êàð³â / Çà ðåä.
Â.Ô. ×åõóíà. – Ê.: Çäîðîâ’ÿ Óêðà¿íè, 2010. –
Ñ. 597–612.
6. Áåëîöêèé Ñ.Ì., Ñïèâàê Í.ß. Èíòåðôåðîíû. Áèî-
ëîãè÷åñêèå è êëèíè÷åñêèå ýôôåêòû. – Êèåâ :
Ôèòîñîöèîöåíòð, 2006. – 288 ñ.
7. Orchansky P., Rubinstein M., Sela I. Human inter-
ferons protect plants from virus infection (tobacco
mosaic virus/enzyme-linked immunosorbent as-
say/glycosidases) // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. –
1982. – 79, ¹ 7. – Ð. 2278–2280.
8. Arlen P.A., Falconer R., Cherukumilli S., Cole A.,
Cole A.M., Oishi K.K., Daniel H. Field production
and functional evaluation of chloroplast-derived
interferon- 2b // Plant Biotechnol. J. – 2007. –
5, ¹ 4. – Ð. 511–525.
9. Ohya K., Matsumura T., Ohashi K. et al. Expres-
sion of two subtypes of human IFN- in trans-
genic potato plants // J. Interferon & Cytokine
Res. – 2001. – 21, ¹ 8. – Ð. 595–602.
10. Jing Lia, Min Chena, Xian-Wei Liua et al. Transient
expression of an active human interferon-beta in
lettuce // Sci. Hort. – 2007. – 112, ¹ 3. – P. 258–
265.
11. Masumura T., Morita S., Miki Y. et al. Produc-
tion of biologically active human interferon- in
transgenic rice // Plant Biotechnol. – 2006. – 23,
¹ 1. – Ð. 91–97.
12. Luchakivskaya Y., Kishchenko O., Gerasymenko I.,
Olevinskaya Z., Simonenko Y., Spivak M., Kuchuk M.
High-level expression of human interferon alpha-
2b in transgenic carrot (Daucus carota L.) plants//
Plant Cell Rep. – 2011. – 30, ¹ 3. – Ð. 407–415.
13. De Leede L.G., Humphries J.E., Bechet A.C., Van
Hoogdalem E.J., Verrijk R., Spencer D.G. Novel con-
trolled-release Lemna-derived IFN-alpha2b (Loc-
teron): pharmacokinetics, pharmacodynamics, and
tolerability in a phase I clinical trial // J. Interferon
Cytokine Res. – 2008. – 28, ¹ 2. – Ð. 113–
122.
14. Tzy-Li Chen, Yi-Ling Lin, Yi-Ling Lee et al. Ex-
pression of bioactive human interferon-gamma in
transgenic rice cell suspension cultures // Trans-
genic Res. – 2004. – 13, ¹ 5. – P. 499–510.
15. Streatfield S.J. Mucosal immunization using re-
combinant plant-based oral vaccines// Methods. –
2006. – 38, ¹ 2. – Ð. 150–157.
16. Aziz M. A., Singh S., Anand Kumar P., Bhatnagar R.
Expression of protective antigen in transgenic
plants: a step towards edible vaccine against an-
thrax // Biochem. Biophys. Res. Communs. –
2002. – 299, ¹ 3. – P. 345–351.
17. Rigano M.M., Walmsley A.M. Expression systems
and developments in plant-made vaccines // Im-
munol. Cell Biol. – 2005. – 83, ¹ 3. – Ð. 271–
277.
18. Tae-Geum Kim, Moon-Sik Yang. Current trends
in edible vaccine development using transgenic
plants // Biotechnol. and Bioprocess Engineering. –
2010. – 15, ¹ 1. – Ð. 61–65.
19. Franconi R., Di Bonito P., Dibello F., Accardi L.,
Muller A., Cirilli A., Simeone P., Donà M.G., Venuti A.,
Giorgi C. Plant-derived human papillomavirus 16
35
Ïðîòèâîâèðóñíàÿ àêòèâíîñòü ýêñòðàêòîâ òðàíñãåííûõ ðàñòåíèé öèêîðèÿ è ñàëàòà
ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2012. ¹ 5
E7 oncoprotein induces immune response and spe-
cific tumor protection // Cancer Res. – 2002. –
62, ¹ 13. – Ð. 3654–3658.
20. Rigano M.M., Dreitz S., Kipnis A.P., Izzo A.A.,
Walmsley A.M. Oral immunogenicity of a plant-
made, subunit, tuberculosis vaccine // Vaccine. –
2006. – 24, ¹ 5. – Ð. 691–695.
21. Young Sook Kim, Bang Geul Kim, Tae Geum Kim et
al. Expression of a cholera toxin B subunit in trans-
genic lettuce (Lactuca sativa L.) using Agrobacteri-
um-mediated transformation system // Plant Cell,
Tissue and Organ Culture. – 2006. – 87, ¹ 2. –
Ð. 203–210.
22. Ìàò⺺âà Í.À., Øàõîâñüêèé À.Ì., Ãåðàñèìåíêî
².Ì., Êâàñêî Î.Þ., Êó÷óê Í.Â. Ïåðåíåñåííÿ ãåíà
á³îñèíòåçó ³íòåðôåðîíó- 2b â ðîñëèíè öèêîð³þ
(Cichorium intybus L.) ìåòîäîì àãðîáàêòåð³àëüíî¿
òðàíñôîðìàö³¿ // Biopolym. and Cell. – 2009. –
25, ¹ 2. – Ñ. 120–125.
23. Borisjuk N., Borisjuk L., Logendra S., Petersen F.,
Gleba Y., Raskin I. Production of recombinant pro-
teins in plant root exudates // Nat. Biotechnol. –
1999. – 17, ¹ 5. – Ð. 466–469.
24. Logemann J., Schell J., Willmitzer L. Improved meth-
od for the isolation of RNA from plant tissues //
Anal. Âiochem. – 1987. – 163, ¹ 1. – P. 16–20.
25. Ìàò⺺âà Í.À., ʳùåíêî Î.Ì., Øàõîâñüêèé À.Ì.,
Êó÷óê Ì.Â. Ñèíòåç ³íóë³íó â «áîðîäàòèõ êîðåíÿõ»
öèêîð³þ, òðàíñôîðìîâàíîãî çà äîïîìîãîþ Agro-
bacterium rhizogenes // Á³îòåõíîëîã³ÿ. – 2011. –
4, ¹ 3 – Ñ. 56–63.
26. Àðìèòèäæ Ô., Óîëäåí Ð., Äðåéïåð Äæ. Âûäåëå-
íèå òîòàëüíûõ ïðåïàðàòîâ íóêëåèíîâûõ êèñëîò
èç A. tumefaciens // Ãåííàÿ èíæåíåðèÿ ðàñòå-
íèé. – Ì.: Ìèð, 1991. – Ñ. 76–78.
27. Bradford M.M. A rapid and sensitive method for
the quantification of microgram quantities of pro-
tein utilizing the principle of protein-dye binding //
Anal. Biochem. – 1976. – 7, ¹ 72. – Ð. 248–254.
28. Rubinstein S., Familletti Ph., Petska S. Convenient
assay for interferons // J. Virol. – 1981. – 37, ¹ 2. –
Ð. 755–758.
29. Chen T.L., Lin Y.L., Lee Y.L., Yang N.S., Chan
M.T. Expression of bioactive human interferon-
gamma in transgenic rice cell suspension cultures //
Transgenic Res. – 2004. – 13, ¹ 5. – Ð. 499–510.
30. Tepfer D. Genetic transformation using Agrobacteri-
um rhizogenes // Physiol. Plant. – 1990. – 79, ¹ 1. –
P. 140–146.
31. Kooter J.M., Matzke M.A., Meyer P. Listening to
the silent genes: transgene silencing, gene regula-
tion and pathogen control // Trends Plant Sci. –
1999. – 4, ¹ 9. – P. 340–347.
32. Oltmanns H., Kloos D.U., Briess W. et al. Taproot
promoters cause tissue specific gene expression
within the storage root of sugar beet // Planta. –
2006. – 224, ¹ 1. – P. 485–495.
33. Jarosinski K.W., Jia W., Sekellick M.J., Marcus
P.I., Schat K.A. Cellular responses in chickens
treated with IFN-alpha orally or inoculated with
recombinant Marek’s disease virus expressing IFN-
alpha// J. Interferon Cytokine Res. – 2001. – 21,
¹ 5. – Ð. 287–296.
34. Ohya K., Matsumura T., Itchoda N., Ohashi K.,
Onuma M., Sugimoto C. Ability of orally adminis-
tered IFN-alpha-containing transgenic potato ex-
tracts to inhibit Listeria monocytogenes infection//
J. Interferon Cytokine Res. – 2005. – 25, ¹ 8. –
Ð. 459–466.
35. Zhen Zhu, Hughes K.W., Leaf Huang, Baolin Sun,
Chunming Liu, Yuing Li. Expression of human
-interferon cDNA in transgenic rice plants //
Plant Ñell, Tissue and Organ Culture. – 1994. –
36, ¹ 2. – Ð. 197–204.
36. Øåëóäüêî Þ.Â., Ãåðàñèìåíêî È.Ì., Ùåðáàê Í.Ë.
è äð. Ï åðñïåêòèâû ïðèìåíåíèÿ â âåòåðèíàðíîé
ìåäèöèíå òðàíñãåííûõ ðàñòåíèé, ñèíòåçèðóþùèõ
ôèçèîëîãè÷åñêè àêòèâíûé èíòåðôåðîí 2b
÷åëîâåêà // Âåòåðèíàð. ìåäèöèíà. – 2009. – 92. –
Ñ. 528–532.
37. Sawahel W.A. The production of transgenic potato
plants expressing human alpha-interferon using
lipofectin-mediated transformation // Cell Mol.
Biol. Lett. – 2002. – 7, ¹ 1. – Ð. 19–29.
38. Sindarovska Y.R., Gerasymenko I.M., Sheludko Y.V.,
Olevinskaja Z.M., Spivak N.Y., Kuchuk N.V. Pro-
duction of human interferon alpha 2b in plants
of Nicotiana excelsior by Agrobacterium-mediated
transient expression // Cytol. Genet. – 2010. – 44,
¹ 5. – Ð. 313–316.
Ïîñòóïèëà 08.04.11
<<
/ASCII85EncodePages false
/AllowTransparency false
/AutoPositionEPSFiles true
/AutoRotatePages /None
/Binding /Left
/CalGrayProfile (Dot Gain 20%)
/CalRGBProfile (sRGB IEC61966-2.1)
/CalCMYKProfile (U.S. Web Coated \050SWOP\051 v2)
/sRGBProfile (sRGB IEC61966-2.1)
/CannotEmbedFontPolicy /Error
/CompatibilityLevel 1.4
/CompressObjects /Tags
/CompressPages true
/ConvertImagesToIndexed true
/PassThroughJPEGImages true
/CreateJobTicket false
/DefaultRenderingIntent /Default
/DetectBlends true
/DetectCurves 0.0000
/ColorConversionStrategy /CMYK
/DoThumbnails false
/EmbedAllFonts true
/EmbedOpenType false
/ParseICCProfilesInComments true
/EmbedJobOptions true
/DSCReportingLevel 0
/EmitDSCWarnings false
/EndPage -1
/ImageMemory 1048576
/LockDistillerParams false
/MaxSubsetPct 100
/Optimize true
/OPM 1
/ParseDSCComments true
/ParseDSCCommentsForDocInfo true
/PreserveCopyPage true
/PreserveDICMYKValues true
/PreserveEPSInfo true
/PreserveFlatness true
/PreserveHalftoneInfo false
/PreserveOPIComments false
/PreserveOverprintSettings true
/StartPage 1
/SubsetFonts true
/TransferFunctionInfo /Apply
/UCRandBGInfo /Preserve
/UsePrologue false
/ColorSettingsFile ()
/AlwaysEmbed [ true
]
/NeverEmbed [ true
]
/AntiAliasColorImages false
/CropColorImages true
/ColorImageMinResolution 300
/ColorImageMinResolutionPolicy /OK
/DownsampleColorImages true
/ColorImageDownsampleType /Bicubic
/ColorImageResolution 1200
/ColorImageDepth -1
/ColorImageMinDownsampleDepth 1
/ColorImageDownsampleThreshold 1.50000
/EncodeColorImages false
/ColorImageFilter /DCTEncode
/AutoFilterColorImages true
/ColorImageAutoFilterStrategy /JPEG
/ColorACSImageDict <<
/QFactor 0.15
/HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1]
>>
/ColorImageDict <<
/QFactor 0.15
/HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1]
>>
/JPEG2000ColorACSImageDict <<
/TileWidth 256
/TileHeight 256
/Quality 30
>>
/JPEG2000ColorImageDict <<
/TileWidth 256
/TileHeight 256
/Quality 30
>>
/AntiAliasGrayImages false
/CropGrayImages true
/GrayImageMinResolution 300
/GrayImageMinResolutionPolicy /OK
/DownsampleGrayImages true
/GrayImageDownsampleType /Bicubic
/GrayImageResolution 1200
/GrayImageDepth -1
/GrayImageMinDownsampleDepth 2
/GrayImageDownsampleThreshold 1.50000
/EncodeGrayImages false
/GrayImageFilter /DCTEncode
/AutoFilterGrayImages true
/GrayImageAutoFilterStrategy /JPEG
/GrayACSImageDict <<
/QFactor 0.15
/HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1]
>>
/GrayImageDict <<
/QFactor 0.15
/HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1]
>>
/JPEG2000GrayACSImageDict <<
/TileWidth 256
/TileHeight 256
/Quality 30
>>
/JPEG2000GrayImageDict <<
/TileWidth 256
/TileHeight 256
/Quality 30
>>
/AntiAliasMonoImages false
/CropMonoImages true
/MonoImageMinResolution 1200
/MonoImageMinResolutionPolicy /OK
/DownsampleMonoImages true
/MonoImageDownsampleType /Bicubic
/MonoImageResolution 1200
/MonoImageDepth -1
/MonoImageDownsampleThreshold 1.50000
/EncodeMonoImages false
/MonoImageFilter /CCITTFaxEncode
/MonoImageDict <<
/K -1
>>
/AllowPSXObjects false
/CheckCompliance [
/None
]
/PDFX1aCheck false
/PDFX3Check false
/PDFXCompliantPDFOnly false
/PDFXNoTrimBoxError true
/PDFXTrimBoxToMediaBoxOffset [
0.00000
0.00000
0.00000
0.00000
]
/PDFXSetBleedBoxToMediaBox true
/PDFXBleedBoxToTrimBoxOffset [
0.00000
0.00000
0.00000
0.00000
]
/PDFXOutputIntentProfile (None)
/PDFXOutputConditionIdentifier ()
/PDFXOutputCondition ()
/PDFXRegistryName ()
/PDFXTrapped /False
/CreateJDFFile false
/Description <<
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
/BGR <FEFF04180437043f043e043b043704320430043904420435002004420435043704380020043d0430044104420440043e0439043a0438002c00200437043000200434043000200441044a0437043404300432043004420435002000410064006f00620065002000500044004600200434043e043a0443043c0435043d04420438002c0020043c0430043a04410438043c0430043b043d043e0020043f044004380433043e04340435043d04380020043704300020043204380441043e043a043e043a0430044704350441044204320435043d0020043f04350447043004420020043704300020043f044004350434043f0435044704300442043d04300020043f043e04340433043e0442043e0432043a0430002e002000200421044a04370434043004340435043d043804420435002000500044004600200434043e043a0443043c0435043d044204380020043c043e0433043004420020043404300020044104350020043e0442043204300440044f0442002004410020004100630072006f00620061007400200438002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e00300020043800200441043b0435043404320430044904380020043204350440044104380438002e>
/CHS <FEFF4f7f75288fd94e9b8bbe5b9a521b5efa7684002000410064006f006200650020005000440046002065876863900275284e8e9ad88d2891cf76845370524d53705237300260a853ef4ee54f7f75280020004100630072006f0062006100740020548c002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e003000204ee553ca66f49ad87248672c676562535f00521b5efa768400200050004400460020658768633002>
/CHT <FEFF4f7f752890194e9b8a2d7f6e5efa7acb7684002000410064006f006200650020005000440046002065874ef69069752865bc9ad854c18cea76845370524d5370523786557406300260a853ef4ee54f7f75280020004100630072006f0062006100740020548c002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e003000204ee553ca66f49ad87248672c4f86958b555f5df25efa7acb76840020005000440046002065874ef63002>
/CZE <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>
/DAN <FEFF004200720075006700200069006e0064007300740069006c006c0069006e006700650072006e0065002000740069006c0020006100740020006f007000720065007400740065002000410064006f006200650020005000440046002d0064006f006b0075006d0065006e007400650072002c0020006400650072002000620065006400730074002000650067006e006500720020007300690067002000740069006c002000700072006500700072006500730073002d007500640073006b007200690076006e0069006e00670020006100660020006800f8006a0020006b00760061006c0069007400650074002e0020004400650020006f007000720065007400740065006400650020005000440046002d0064006f006b0075006d0065006e0074006500720020006b0061006e002000e50062006e00650073002000690020004100630072006f00620061007400200065006c006c006500720020004100630072006f006200610074002000520065006100640065007200200035002e00300020006f00670020006e0079006500720065002e>
/DEU <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>
/ESP <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>
/ETI <FEFF004b00610073007500740061006700650020006e0065006900640020007300e4007400740065006900640020006b00760061006c006900740065006500740073006500200074007200fc006b006900650065006c007300650020007000720069006e00740069006d0069007300650020006a0061006f006b007300200073006f00620069006c0069006b0065002000410064006f006200650020005000440046002d0064006f006b0075006d0065006e00740069006400650020006c006f006f006d006900730065006b0073002e00200020004c006f006f0064007500640020005000440046002d0064006f006b0075006d0065006e00740065002000730061006100740065002000610076006100640061002000700072006f006700720061006d006d006900640065006700610020004100630072006f0062006100740020006e0069006e0067002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e00300020006a00610020007500750065006d006100740065002000760065007200730069006f006f006e00690064006500670061002e000d000a>
/FRA <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>
/GRE <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>
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
/HRV (Za stvaranje Adobe PDF dokumenata najpogodnijih za visokokvalitetni ispis prije tiskanja koristite ove postavke. Stvoreni PDF dokumenti mogu se otvoriti Acrobat i Adobe Reader 5.0 i kasnijim verzijama.)
/HUN <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>
/ITA <FEFF005500740069006c0069007a007a006100720065002000710075006500730074006500200069006d0070006f007300740061007a0069006f006e00690020007000650072002000630072006500610072006500200064006f00630075006d0065006e00740069002000410064006f00620065002000500044004600200070006900f900200061006400610074007400690020006100200075006e00610020007000720065007300740061006d0070006100200064006900200061006c007400610020007100750061006c0069007400e0002e0020004900200064006f00630075006d0065006e007400690020005000440046002000630072006500610074006900200070006f00730073006f006e006f0020006500730073006500720065002000610070006500720074006900200063006f006e0020004100630072006f00620061007400200065002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e003000200065002000760065007200730069006f006e006900200073007500630063006500730073006900760065002e>
/JPN <FEFF9ad854c18cea306a30d730ea30d730ec30b951fa529b7528002000410064006f0062006500200050004400460020658766f8306e4f5c6210306b4f7f75283057307e305930023053306e8a2d5b9a30674f5c62103055308c305f0020005000440046002030d530a130a430eb306f3001004100630072006f0062006100740020304a30883073002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e003000204ee5964d3067958b304f30533068304c3067304d307e305930023053306e8a2d5b9a306b306f30d530a930f330c8306e57cb30818fbc307f304c5fc59808306730593002>
/KOR <FEFFc7740020c124c815c7440020c0acc6a9d558c5ec0020ace0d488c9c80020c2dcd5d80020c778c1c4c5d00020ac00c7a50020c801d569d55c002000410064006f0062006500200050004400460020bb38c11cb97c0020c791c131d569b2c8b2e4002e0020c774b807ac8c0020c791c131b41c00200050004400460020bb38c11cb2940020004100630072006f0062006100740020bc0f002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e00300020c774c0c1c5d0c11c0020c5f40020c2180020c788c2b5b2c8b2e4002e>
/LTH <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>
/LVI <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>
/NLD (Gebruik deze instellingen om Adobe PDF-documenten te maken die zijn geoptimaliseerd voor prepress-afdrukken van hoge kwaliteit. De gemaakte PDF-documenten kunnen worden geopend met Acrobat en Adobe Reader 5.0 en hoger.)
/NOR <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>
/POL <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>
/PTB <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>
/RUM <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>
/RUS <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>
/SKY <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>
/SLV <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>
/SUO <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>
/SVE <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>
/TUR <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>
/UKR <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>
/ENU (Use these settings to create Adobe PDF documents best suited for high-quality prepress printing. Created PDF documents can be opened with Acrobat and Adobe Reader 5.0 and later.)
>>
/Namespace [
(Adobe)
(Common)
(1.0)
]
/OtherNamespaces [
<<
/AsReaderSpreads false
/CropImagesToFrames true
/ErrorControl /WarnAndContinue
/FlattenerIgnoreSpreadOverrides false
/IncludeGuidesGrids false
/IncludeNonPrinting false
/IncludeSlug false
/Namespace [
(Adobe)
(InDesign)
(4.0)
]
/OmitPlacedBitmaps false
/OmitPlacedEPS false
/OmitPlacedPDF false
/SimulateOverprint /Legacy
>>
<<
/AddBleedMarks false
/AddColorBars false
/AddCropMarks false
/AddPageInfo false
/AddRegMarks false
/ConvertColors /ConvertToCMYK
/DestinationProfileName ()
/DestinationProfileSelector /DocumentCMYK
/Downsample16BitImages true
/FlattenerPreset <<
/PresetSelector /MediumResolution
>>
/FormElements false
/GenerateStructure false
/IncludeBookmarks false
/IncludeHyperlinks false
/IncludeInteractive false
/IncludeLayers false
/IncludeProfiles false
/MultimediaHandling /UseObjectSettings
/Namespace [
(Adobe)
(CreativeSuite)
(2.0)
]
/PDFXOutputIntentProfileSelector /DocumentCMYK
/PreserveEditing true
/UntaggedCMYKHandling /LeaveUntagged
/UntaggedRGBHandling /UseDocumentProfile
/UseDocumentBleed false
>>
]
>> setdistillerparams
<<
/HWResolution [2400 2400]
/PageSize [612.000 792.000]
>> setpagedevice
|