Optimization of transfection methods for Huh­7 and Vero cells: a comparative study

Optimization of transfection methods for Huh­7 and Vero cells: a comparative study

Availability of an efficient transfection protocol is the first determinant in success of gene transferring studies in mammalian cells which is accomplished experimentally for every single cell type. Herein, we provide data of a comparative study on optimization of transfection condition by electrop...

Full description

Saved in:
Bibliographic Details
Published in:Цитология и генетика
Date:2012
Main Authors: Hashemi, A., Roohvand, F., Ghahremani, M.H., Aghasadeghi, M.R., Vahabpour, R., Motevali, F., Memarnejadian, A.
Format: Article
Language:English
Published: Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України 2012
Subjects:
Оригинальные работы
Online Access:https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/126499
Tags: Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
Journal Title:Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Cite this:Optimization of transfection methods for Huh­7 and Vero cells: a comparative study / A. Hashemi, F. Roohvand, M.H. Ghahremani, M.R. Aghasadeghi, R. Vahabpour, F. Motevali, A. Memarnejadian // Цитология и генетика. — 2012. — Т. 46, № 6. — С. 19-27. — Бібліогр.: 37 назв. — англ.

Institution

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
id nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-126499
record_format dspace
spelling Hashemi, A.
Roohvand, F.
Ghahremani, M.H.
Aghasadeghi, M.R.
Vahabpour, R.
Motevali, F.
Memarnejadian, A.
2017-11-25T14:05:11Z
2017-11-25T14:05:11Z
2012
Optimization of transfection methods for Huh­7 and Vero cells: a comparative study / A. Hashemi, F. Roohvand, M.H. Ghahremani, M.R. Aghasadeghi, R. Vahabpour, F. Motevali, A. Memarnejadian // Цитология и генетика. — 2012. — Т. 46, № 6. — С. 19-27. — Бібліогр.: 37 назв. — англ.
0564-3783
DOI: 10.3103/S0095452712060035
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/126499
Availability of an efficient transfection protocol is the first determinant in success of gene transferring studies in mammalian cells which is accomplished experimentally for every single cell type. Herein, we provide data of a comparative study on optimization of transfection condition by electroporation and chemical methods for Huh-7 and Vero cells. Different cell confluencies, DNA/reagent ratios and total transfection volumes were optimized for two chemical reagents including jetPEI™ and Lipofectamine™ 2000. Besides, the effects of electric field strength and pulse length were investigated to improve electroporation efficiency. Transfection of cells by pEGFP-N1 vector and tracking the expression of GFP by FACS and Fluorescence Microscopy analysis were the employed methods to evaluate transfection efficiencies. Optimized electroporation protocols yielded 63.73 ± ± 2.36 and 73.9 ± 1.6 % of transfection in Huh-7 and Vero cells respectively, while maximum achieved level of transfection by jetPEI™ was respectively 14.2 ± 0.69 and 28 ± 1.11 % for the same cells. Post transfectional chilling of the cells did not improve electrotransfection efficiency of Huh-7 cells. Compared to chemical based reagents, electroporation showed the superior levels of transfection in both cell lines. The presented protocols should satisfy most of the experimental applications requiring high transfection efficiencies of these two cell lines.
Наличие эффективного протокола трансфекции является первым условием успешных исследований по переносу генов в клетки млекопитающих, что достигается экспериментально для каждого конкретного типа клеток. Здесь мы приводим данные сравнительного исследования по оптимизации условий трансфекции клеток Huh-7 и Vero с помощью электропорации и химическими методами. Для двух химических соединений, jetPEI™ и Lipofectamine™ 2000, были оптимизированы сочетания различных клеток, соотношения ДНК/реагент и общие объемы трансфекции. Кроме того, для улучшения эффективности электропорации было изучено влияние силы электрического поля и длины импульса. Трансфекция клеток с помощью вектора pEGFP-N1, определение экспрессии GFP с помощью FACS и флюоресцентная микроскопия были использованы для оценки эффективности трансфекции. В оптимизированных протоколах достигалась трансфекция на уровне 63.73 ± 2.36 и 73.9 ± 1.6 % в клетках Huh-7 и Vero соответственно, в то время как максимальный уровень трансфекции с помощью jetPEI™ составлял 14.2 ± 0.69 и 28 ± 1.11 % для тех же клеток. Охлаждение клеток после трансфекции не улучшало эффективность электротрансфекции клеток Huh-7. В обеих клеточных линиях электропорация позволила достичь более высокого уровня трансфекции по сравнению с использованием химических реагентов. Представленный протокол может быть пригодным для большинства экспериментальных манипуляций, которые требуют высокого уровня трансфекции исследуемых клеточных линий.
A.H received a fellowship from graduate school of Pasteur Institute to pursue this study in the Ph.D. program. Portions of this study were supported by a grant (ACIP-AP20, 2010) from RIP of Pasteur Institute Paris and Pasteur Institute of Iran.
en
Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України
Цитология и генетика
Оригинальные работы
Optimization of transfection methods for Huh­7 and Vero cells: a comparative study
Оптимизация методов трансфекции клеток huh-7 и Vero: сравнительный анализ
Article
published earlier
institution Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection DSpace DC
title Optimization of transfection methods for Huh­7 and Vero cells: a comparative study
spellingShingle Optimization of transfection methods for Huh­7 and Vero cells: a comparative study
Hashemi, A.
Roohvand, F.
Ghahremani, M.H.
Aghasadeghi, M.R.
Vahabpour, R.
Motevali, F.
Memarnejadian, A.
Оригинальные работы
title_short Optimization of transfection methods for Huh­7 and Vero cells: a comparative study
title_full Optimization of transfection methods for Huh­7 and Vero cells: a comparative study
title_fullStr Optimization of transfection methods for Huh­7 and Vero cells: a comparative study
title_full_unstemmed Optimization of transfection methods for Huh­7 and Vero cells: a comparative study
title_sort optimization of transfection methods for huh­7 and vero cells: a comparative study
author Hashemi, A.
Roohvand, F.
Ghahremani, M.H.
Aghasadeghi, M.R.
Vahabpour, R.
Motevali, F.
Memarnejadian, A.
author_facet Hashemi, A.
Roohvand, F.
Ghahremani, M.H.
Aghasadeghi, M.R.
Vahabpour, R.
Motevali, F.
Memarnejadian, A.
topic Оригинальные работы
topic_facet Оригинальные работы
publishDate 2012
language English
container_title Цитология и генетика
publisher Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України
format Article
title_alt Оптимизация методов трансфекции клеток huh-7 и Vero: сравнительный анализ
description Availability of an efficient transfection protocol is the first determinant in success of gene transferring studies in mammalian cells which is accomplished experimentally for every single cell type. Herein, we provide data of a comparative study on optimization of transfection condition by electroporation and chemical methods for Huh-7 and Vero cells. Different cell confluencies, DNA/reagent ratios and total transfection volumes were optimized for two chemical reagents including jetPEI™ and Lipofectamine™ 2000. Besides, the effects of electric field strength and pulse length were investigated to improve electroporation efficiency. Transfection of cells by pEGFP-N1 vector and tracking the expression of GFP by FACS and Fluorescence Microscopy analysis were the employed methods to evaluate transfection efficiencies. Optimized electroporation protocols yielded 63.73 ± ± 2.36 and 73.9 ± 1.6 % of transfection in Huh-7 and Vero cells respectively, while maximum achieved level of transfection by jetPEI™ was respectively 14.2 ± 0.69 and 28 ± 1.11 % for the same cells. Post transfectional chilling of the cells did not improve electrotransfection efficiency of Huh-7 cells. Compared to chemical based reagents, electroporation showed the superior levels of transfection in both cell lines. The presented protocols should satisfy most of the experimental applications requiring high transfection efficiencies of these two cell lines. Наличие эффективного протокола трансфекции является первым условием успешных исследований по переносу генов в клетки млекопитающих, что достигается экспериментально для каждого конкретного типа клеток. Здесь мы приводим данные сравнительного исследования по оптимизации условий трансфекции клеток Huh-7 и Vero с помощью электропорации и химическими методами. Для двух химических соединений, jetPEI™ и Lipofectamine™ 2000, были оптимизированы сочетания различных клеток, соотношения ДНК/реагент и общие объемы трансфекции. Кроме того, для улучшения эффективности электропорации было изучено влияние силы электрического поля и длины импульса. Трансфекция клеток с помощью вектора pEGFP-N1, определение экспрессии GFP с помощью FACS и флюоресцентная микроскопия были использованы для оценки эффективности трансфекции. В оптимизированных протоколах достигалась трансфекция на уровне 63.73 ± 2.36 и 73.9 ± 1.6 % в клетках Huh-7 и Vero соответственно, в то время как максимальный уровень трансфекции с помощью jetPEI™ составлял 14.2 ± 0.69 и 28 ± 1.11 % для тех же клеток. Охлаждение клеток после трансфекции не улучшало эффективность электротрансфекции клеток Huh-7. В обеих клеточных линиях электропорация позволила достичь более высокого уровня трансфекции по сравнению с использованием химических реагентов. Представленный протокол может быть пригодным для большинства экспериментальных манипуляций, которые требуют высокого уровня трансфекции исследуемых клеточных линий.
issn 0564-3783
url https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/126499
citation_txt Optimization of transfection methods for Huh­7 and Vero cells: a comparative study / A. Hashemi, F. Roohvand, M.H. Ghahremani, M.R. Aghasadeghi, R. Vahabpour, F. Motevali, A. Memarnejadian // Цитология и генетика. — 2012. — Т. 46, № 6. — С. 19-27. — Бібліогр.: 37 назв. — англ.
work_keys_str_mv AT hashemia optimizationoftransfectionmethodsforhuh7andverocellsacomparativestudy
AT roohvandf optimizationoftransfectionmethodsforhuh7andverocellsacomparativestudy
AT ghahremanimh optimizationoftransfectionmethodsforhuh7andverocellsacomparativestudy
AT aghasadeghimr optimizationoftransfectionmethodsforhuh7andverocellsacomparativestudy
AT vahabpourr optimizationoftransfectionmethodsforhuh7andverocellsacomparativestudy
AT motevalif optimizationoftransfectionmethodsforhuh7andverocellsacomparativestudy
AT memarnejadiana optimizationoftransfectionmethodsforhuh7andverocellsacomparativestudy
AT hashemia optimizaciâmetodovtransfekciikletokhuh7iverosravnitelʹnyianaliz
AT roohvandf optimizaciâmetodovtransfekciikletokhuh7iverosravnitelʹnyianaliz
AT ghahremanimh optimizaciâmetodovtransfekciikletokhuh7iverosravnitelʹnyianaliz
AT aghasadeghimr optimizaciâmetodovtransfekciikletokhuh7iverosravnitelʹnyianaliz
AT vahabpourr optimizaciâmetodovtransfekciikletokhuh7iverosravnitelʹnyianaliz
AT motevalif optimizaciâmetodovtransfekciikletokhuh7iverosravnitelʹnyianaliz
AT memarnejadiana optimizaciâmetodovtransfekciikletokhuh7iverosravnitelʹnyianaliz
first_indexed 2025-12-07T19:03:50Z
last_indexed 2025-12-07T19:03:50Z
_version_ 1850877391385133056

Similar Items