Липиды микроорганизмов как источник биотоплива
Представлены основные исследования и экспериментальные данные, направленные на поиск активных продуцентов липидов среди разных видов микроорганизмов, возможные пути оптимизации процесса липидообразования у наиболее перспективных штаммов. Показано, что поддерживая необходимые условия культивирования,...
Saved in:
| Published in: | Цитология и генетика |
|---|---|
| Date: | 2013 |
| Main Authors: | , , |
| Format: | Article |
| Language: | Russian |
| Published: |
Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України
2013
|
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/126600 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Липиды микроорганизмов как источник биотоплива / А.Ф. Ткаченко, Е.А. Тигунова, С.М. Шульга // Цитология и генетика. — 2013. — Т. 47, № 6. — С. 22-29. — Бібліогр.: 24 назв. — рос. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-126600 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Ткаченко, А.Ф. Тигунова, Е.А. Шульга, С.М. 2017-11-28T16:22:22Z 2017-11-28T16:22:22Z 2013 Липиды микроорганизмов как источник биотоплива / А.Ф. Ткаченко, Е.А. Тигунова, С.М. Шульга // Цитология и генетика. — 2013. — Т. 47, № 6. — С. 22-29. — Бібліогр.: 24 назв. — рос. 0564-3783 DOI: 10.3103/S0095452713060054 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/126600 579.222 Представлены основные исследования и экспериментальные данные, направленные на поиск активных продуцентов липидов среди разных видов микроорганизмов, возможные пути оптимизации процесса липидообразования у наиболее перспективных штаммов. Показано, что поддерживая необходимые условия культивирования, можно управлять энзиматическим процессом образования липидов. Рассмотрено влияние на рост, развитие и биохимическую активность микроорганизмов состава среды, температуры, аэрации и окислительно-восстановительных условий. Изменение этих факторов влияло на биосинтетическую деятельность микроорганизмов, липогенную активность и на состав синтезируемых липидов. Способность дрожжей к липидообразованию, а также относительно быстрая возможность замены состава липидов и их количества с помощью направленного культивирования дает возможность сделать вывод, что полученные микробиологическим синтезом липиды могут быть источником биотоплива для производства в промышленных масштабах. Представлено основні напрямки досліджень і експериментальні дані, направлені на пошук активних продуцентів ліпідів серед різних видів дріжджів, та шляхи оптимізації процесу ліпідоутворення у най-більш перспективних штамів. Показано, що підтримуючи необхідні умови культивування, можна керувати ходом ензиматичних процесів. Розглянуто вплив на ріст, розвиток та біохімічну активність мікроорганізмів складу середовища, температури, аерації та окислювально-відновних умов. Зміна цих факторів впливала на біосинтетичну діяльність мікроорганізмів, ліпогенну активність дріжджів та склад ліпідів, що синтезуються ними. Властивість дріжджів до ліпідоутворення та відносно швидка можливість змінення кількості та складу ліпідів за допомогою направленого культивування дає змогу зробити висновок про те, що отримані мікробіоло-гічним синтезом ліпіди можуть слугувати джерелом сировини для одержання біопалива в промислових масштабах. This review presents the main directions and experimental data aimed at searching for active producers of lipids among different species of microorganisms and ways to optimize the lipidogenesis process in the most promising stains. It was shown that enzymatic processes can be directed by maintaining the necessary cultivation conditions. The influence on the growth, development, and biochemical activity of the microbial medium composition and temperature and the aeration and oxidation reduction conditions was considered. Changes in these factors affected the biosynthetic activity of microorganisms and lipidogenic yeasts and the composition of synthesized lipids. The ability of lipidogenic yeasts, as well as the relatively rapid ability of changing the amount and composition of lipids by direct cultivation, leads to the conclusion that lipids obtained by microbial synthesis can be a source of commercial raw materials for biofuel. ru Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України Цитология и генетика Оригинальные работы Липиды микроорганизмов как источник биотоплива Ліпіди мікроорганізмів як джерело для біопалива Microbial lipids as a source of biofuel Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Липиды микроорганизмов как источник биотоплива |
| spellingShingle |
Липиды микроорганизмов как источник биотоплива Ткаченко, А.Ф. Тигунова, Е.А. Шульга, С.М. Оригинальные работы |
| title_short |
Липиды микроорганизмов как источник биотоплива |
| title_full |
Липиды микроорганизмов как источник биотоплива |
| title_fullStr |
Липиды микроорганизмов как источник биотоплива |
| title_full_unstemmed |
Липиды микроорганизмов как источник биотоплива |
| title_sort |
липиды микроорганизмов как источник биотоплива |
| author |
Ткаченко, А.Ф. Тигунова, Е.А. Шульга, С.М. |
| author_facet |
Ткаченко, А.Ф. Тигунова, Е.А. Шульга, С.М. |
| topic |
Оригинальные работы |
| topic_facet |
Оригинальные работы |
| publishDate |
2013 |
| language |
Russian |
| container_title |
Цитология и генетика |
| publisher |
Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Ліпіди мікроорганізмів як джерело для біопалива Microbial lipids as a source of biofuel |
| description |
Представлены основные исследования и экспериментальные данные, направленные на поиск активных продуцентов липидов среди разных видов микроорганизмов, возможные пути оптимизации процесса липидообразования у наиболее перспективных штаммов. Показано, что поддерживая необходимые условия культивирования, можно управлять энзиматическим процессом образования липидов. Рассмотрено влияние на рост, развитие и биохимическую активность микроорганизмов состава среды, температуры, аэрации и окислительно-восстановительных условий. Изменение этих факторов влияло на биосинтетическую деятельность микроорганизмов, липогенную активность и на состав синтезируемых липидов. Способность дрожжей к липидообразованию, а также относительно быстрая возможность замены состава липидов и их количества с помощью направленного культивирования дает возможность сделать вывод, что полученные микробиологическим синтезом липиды могут быть источником биотоплива для производства в промышленных масштабах.
Представлено основні напрямки досліджень і експериментальні дані, направлені на пошук активних продуцентів ліпідів серед різних видів дріжджів, та шляхи оптимізації процесу ліпідоутворення у най-більш перспективних штамів. Показано, що підтримуючи необхідні умови культивування, можна керувати ходом ензиматичних процесів. Розглянуто вплив на ріст, розвиток та біохімічну активність мікроорганізмів складу середовища, температури, аерації та окислювально-відновних умов. Зміна цих факторів впливала на біосинтетичну діяльність мікроорганізмів, ліпогенну активність дріжджів та склад ліпідів, що синтезуються ними. Властивість дріжджів до ліпідоутворення та відносно швидка можливість змінення кількості та складу ліпідів за допомогою направленого культивування дає змогу зробити висновок про те, що отримані мікробіоло-гічним синтезом ліпіди можуть слугувати джерелом сировини для одержання біопалива в промислових масштабах.
This review presents the main directions and experimental data aimed at searching for active producers of lipids among different species of microorganisms and ways to optimize the lipidogenesis process in the most promising stains. It was shown that enzymatic processes can be directed by maintaining the necessary cultivation conditions. The influence on the growth, development, and biochemical activity of the microbial medium composition and temperature and the aeration and oxidation reduction conditions was considered. Changes in these factors affected the biosynthetic activity of microorganisms and lipidogenic yeasts and the composition of synthesized lipids. The ability of lipidogenic yeasts, as well as the relatively rapid ability of changing the amount and composition of lipids by direct cultivation, leads to the conclusion that lipids obtained by microbial synthesis can be a source of commercial raw materials for biofuel.
|
| issn |
0564-3783 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/126600 |
| citation_txt |
Липиды микроорганизмов как источник биотоплива / А.Ф. Ткаченко, Е.А. Тигунова, С.М. Шульга // Цитология и генетика. — 2013. — Т. 47, № 6. — С. 22-29. — Бібліогр.: 24 назв. — рос. |
| work_keys_str_mv |
AT tkačenkoaf lipidymikroorganizmovkakistočnikbiotopliva AT tigunovaea lipidymikroorganizmovkakistočnikbiotopliva AT šulʹgasm lipidymikroorganizmovkakistočnikbiotopliva AT tkačenkoaf lípídimíkroorganízmívâkdžerelodlâbíopaliva AT tigunovaea lípídimíkroorganízmívâkdžerelodlâbíopaliva AT šulʹgasm lípídimíkroorganízmívâkdžerelodlâbíopaliva AT tkačenkoaf microbiallipidsasasourceofbiofuel AT tigunovaea microbiallipidsasasourceofbiofuel AT šulʹgasm microbiallipidsasasourceofbiofuel |
| first_indexed |
2025-11-26T09:58:12Z |
| last_indexed |
2025-11-26T09:58:12Z |
| _version_ |
1850618310643679232 |
| fulltext |
22 ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2013. Ò. 47. ¹ 6
Ïðåäñòàâëåíû îñíîâíûå èññëåäîâàíèÿ è ýêñïåðèìåí-
òàëüíûå äàííûå, íàïðàâëåííûå íà ïîèñê àêòèâíûõ ïðî-
äóöåíòîâ ëèïèäîâ ñðåäè ðàçíûõ âèäîâ ìèêðîîðãàíèç-
ìîâ, âîçìîæíûå ïóòè îïòèìèçàöèè ïðîöåññà ëèïèäî-
îáðàçîâàíèÿ ó íàèáîëåå ïåðñïåêòèâíûõ øòàììîâ. Ïî-
êàçàíî, ÷òî ïîääåðæèâàÿ íåîáõîäèìûå óñëîâèÿ êóëü-
òèâèðîâàíèÿ, ìîæíî óïðàâëÿòü ýíçèìàòè÷åñêèì ïðî-
öåññîì îáðàçîâàíèÿ ëèïèäîâ. Ðàññìîòðåíî âëèÿíèå íà
ðîñò, ðàçâèòèå è áèîõèìè÷åñêóþ àêòèâíîñòü ìèêðî-
îðãàíèçìîâ ñîñòàâà ñðåäû, òåìïåðàòóðû, àýðàöèè è
îêèñëèòåëüíî-âîññòàíîâèòåëüíûõ óñëîâèé. Èçìåíåíèå
ýòèõ ôàêòîðîâ âëèÿëî íà áèîñèíòåòè÷åñêóþ äåÿ-
òåëüíîñòü ìèêðîîðãàíèçìîâ, ëèïîãåííóþ àêòèâíîñòü
è íà ñîñòàâ ñèíòåçèðóåìûõ ëèïèäîâ. Ñïîñîáíîñòü
äðîææåé ê ëèïèäîîáðàçîâàíèþ, à òàêæå îòíîñè-
òåëüíî áûñòðàÿ âîçìîæíîñòü çàìåíû ñîñòàâà ëèïè-
äîâ è èõ êîëè÷åñòâà ñ ïîìîùüþ íàïðàâëåííîãî êóëü-
òèâèðîâàíèÿ äàåò âîçìîæíîñòü ñäåëàòü âûâîä, ÷òî
ïîëó÷åííûå ìèêðîáèîëîãè÷åñêèì ñèíòåçîì ëèïèäû
ìîãóò áûòü èñòî÷íèêîì áèîòîïëèâà äëÿ ïðîèçâîä-
ñòâà â ïðîìûøëåííûõ ìàñøòàáàõ.
Êëþ÷åâûå ñëîâà: äðîææè, Rhodotorula gracilis, Pichia
anomala, ìèêðîáíûå ëèïèäû, áèîòîïëèâî.
 íàñòîÿùåå âðåìÿ âåäóòñÿ ïîèñêè íîâûõ
èñòî÷íèêîâ ïîëó÷åíèÿ ëèïèäîâ, â òîì ÷èñëå è
íà òåõíè÷åñêèå íóæäû. Ýòèì èñòî÷íèêîì ìîãóò
ñòàòü ìèêðîîðãàíèçìû, ëèïèäû êîòîðûõ ïîñëå
ñîîòâåòñòâóþùåé îáðàáîòêè (ðèñ. 1) ïðèãîäíû
äëÿ èñïîëüçîâàíèÿ â ðàçëè÷íûõ îòðàñëÿõ
ïðîìûøëåííîñòè, ÷òî ïîçâîëèò âûñâîáîäèòü
çíà÷èòåëüíûå êîëè÷åñòâà ìàñåë æèâîòíîãî è
ðàñòèòåëüíîãî ïðîèñõîæäåíèÿ [1].
 ïðîöåññå êóëüòèâèðîâàíèÿ ìèêðîîðãàíèç-
ìîâ íà ðàçëè÷íûõ ñðåäàõ ïîëó÷àþòñÿ òðè êëàññà
ëèïèäîâ: ïðîñòûå, ñëîæíûå è ïðîèçâîäíûå ëè-
ïèäîâ. Ïðîñòûå ëèïèäû – íåéòðàëüíûå æèðû è
âîñêè. Íåéòðàëüíûå æèðû (îñíîâíûå çàïàñíûå
êîìïîíåíòû êëåòêè) – ýôèðû ãëèöåðèíà è
æèðíûõ êèñëîò, îñíîâíóþ ìàññó êîòîðûõ ñîñ-
òàâëÿþò òðèàöèëãëèöåðèäû (ìîíî- è äèãëèöåðè-
äû). Âîñêè – ýôèðû æèðíûõ êèñëîò èëè ìîíî-
îêñèêèñëîò è àëèôàòè÷åñêèõ ñïèðòîâ ñ äëèí-
íîé óãëåðîäíîé öåïüþ, êîòîðûå ïî ñòðóêòóðå
è ñâîéñòâàì áëèçêè ê íåéòðàëüíûì ëèïèäàì.
Íàèáîëüøåå êîëè÷åñòâî íåéòðàëüíûõ ëèïèäîâ
ñèíòåçèðóþò äðîææè è ìèöåëèàëüíûå ãðèáû.
Ïðîäóöåíòàìè ñëîæíûõ ëèïèäîâ ÿâëÿþòñÿ â
îñíîâíîì áàêòåðèè [1–6].
Ñëîæíûå ëèïèäû äåëÿòñÿ íà äâå ãðóïïû:
ôîñôîëèïèäû è ãëèêîëèïèäû. Ôîñôîëèïèäû
(ôîñôîãëèöåðèäû è ñôèíãîëèïèäû) âõîäÿò â
ñîñòàâ ðàçëè÷íûõ êëåòî÷íûõ ìåìáðàí. Èõ ìî-
ëåêóëû ïîëÿðíû, è ïðè ðÍ 7,0 ôîñôàòíàÿ
ãðóïïà íåñåò îòðèöàòåëüíûé çàðÿä. Êîíöåíò-
ðàò ôîñôîëèïèäîâ íàõîäèò ïðèìåíåíèå â êà-
÷åñòâå àíòèêîððîçèéíîé ïðèñàäêè ê ìàñëàì è
êàê äîáàâêà ïðè ôëîòàöèè ðàçëè÷íûõ ìèíå-
ðàëîâ. Ãëèêîëèïèäû â îòëè÷èå îò ôîñôîëèïè-
äîâ íå ñîäåðæàò ìîëåêóëû ôîñôîðíîé êèñëî-
òû, íî òàêæå ÿâëÿþòñÿ ñèëüíîïîëÿðíûìè ñîå-
äèíåíèÿìè çà ñ÷åò íàëè÷èÿ â ìîëåêóëå ãèäðî-
ôèëüíûõ óãëåâîäíûõ ãðóïï (îñòàòêîâ ãëþêîçû,
ìàííîçû, ãàëàêòîçû è äð.).
Êàê âèäíî èç ðèñ. 2, íàèáîëüøóþ ÷àñòü ôðàê-
öèé ðàçëè÷íûõ ìèêðîîðãàíèçìîâ çàíèìàþò
òðèãëèöåðèäû (îêîëî 75 %).
Ê ïðîèçâîäíûì ëèïèäîâ îòíîñÿò æèðíûå
êèñëîòû, ñïèðòû, óãëåâîäîðîäû, âèòàìèíû Ä,
Å è Ê. Æèðíûå êèñëîòû ïðåäñòàâëåíû íàñû-
ùåííûìè è íåíàñûùåííûìè ñ îäíîé äâîéíîé
ñâÿçüþ êèñëîòàìè íîðìàëüíîãî ñòðîåíèÿ è ÷åò-
íûì êîëè÷åñòâîì óãëåðîäíûõ àòîìîâ (ïàëüìè-
òèíîâàÿ, ñòåàðèíîâàÿ, îëåèíîâàÿ). Ñðåäè äèå-
íîâûõ æèðíûõ êèñëîò ìîæíî âûäåëèòü ëèíî-
ëåâóþ. Äâîéíûå ñâÿçè â íåíàñûùåííûõ æèðíûõ
êèñëîòàõ ìèêðîáíûõ ëèïèäîâ ÷àñòî ðàñïîëà-
ãàþòñÿ òàê, ÷òî äåëÿò èõ íà ÷àñòè, êîëè÷åñòâî
óãëåðîäíûõ àòîìîâ â êîòîðûõ êðàòíî òðåì.
Ñïèðòû, ïðèñóòñòâóþùèå â ëèïèäàõ, äåëÿò-
ñÿ íà òðè ãðóïïû: 1) ñïèðòû ñ ïðÿìîé öåïüþ;
2) ñïèðòû ñ -èîíîâûì êîëüöîì, âêëþ÷àþùèå
âèòàìèí À è êàðîòèíîèäû; 3) ñòåðèíû – êîì-
ïîíåíòû íåîìûëÿåìîé ÷àñòè ëèïèäîâ (íàïðè-
ìåð ýðãîñòåðèí, îáëó÷åíèå êîòîðîãî óëüòðàôèî-
ëåòîâûì ñâåòîì ïîçâîëÿåò ïîëó÷àòü âèòàìèí Ä2).
УДК 579.222
А.Ф. ТКАЧЕНКО, Е.А. ТИГУНОВА, С.М. ШУЛЬГА
ГУ «Институт пищевой биотехнологии и геномики» НАН Украины, Киев
E-mail: Shulga5@i.ua
ЛИПИДЫ МИКРООРГАНИЗМОВ КАК ИСТОЧНИК БИОТОПЛИВА
© À.Ô. ÒÊÀ×ÅÍÊÎ, Å.À. ÒÈÃÓÍÎÂÀ, Ñ.Ì. ØÓËÜÃÀ,
2013
23
Ëèïèäû ìèêðîîðãàíèçìîâ êàê èñòî÷íèê áèîòîïëèâà
ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2013. Ò. 47. ¹ 6
Òåõíîëîãè÷åñêèé ïðîöåññ ïîëó÷åíèÿ ìèêðîá-
íûõ ëèïèäîâ, â îòëè÷èå îò ïîëó÷åíèÿ ðàñòè-
òåëüíûõ æèðîâ, âêëþ÷àåò ñòàäèþ ãëóáîêîãî
ðàçðóøåíèÿ êëåòî÷íîé ñòðóêòóðû è âûäåëåíèÿ
ëèïèäîâ ìåòîäîì ýêñòðàêöèè â íåïîëÿðíîì
ðàñòâîðèòåëå. Ïðè ýòîì ïîëó÷àþò îäíîâðåìåí-
íî äâà ãîòîâûõ ïðîäóêòà: ìèêðîáíûé æèð
(áèîæèð) è îáåçæèðåííûé áåëêîâûé ïðåïàðàò
(áèîøðîò). Íî ýêñòðàêöèîííûé ñïîñîá èçâëå-
÷åíèÿ æèðîâ ïîëÿðíûìè ðàñòâîðèòåëÿìè î÷åíü
âçðûâî- è ïîæàðîîïàñíûé. Ïîýòîìó ñåé÷àñ îò-
êàçûâàþòñÿ îò ýòîãî ìåòîäà, ïûòàÿñü íàéòè
àëüòåðíàòèâó [1–6].
Íåêîòîðûå ëèïèäû, ïîëó÷àåìûå èç ìèêðî-
îðãàíèçìîâ, íå èìåþò àíàëîãîâ â ðàñòèòåëüíûõ
è æèâîòíûõ êëåòêàõ. Íàïðèìåð, ïîëè- -ãèäðîê-
ñèáóòèðàò (ÏÃÁ) – ýòî òåðìîïëàñòè÷íûé ïîëè-
ýôèð, ñîñòîÿùèé èç ïîâòîðÿþùèõñÿ áëîêîâ
(–ÑÍ(ÑÍ3)–ÑÍ2–ÑΖΖ). Êàê óñòàíîâëåíî
áîëåå 50 ëåò íàçàä, îí ÿâëÿåòñÿ ðåçåðâíûì
ýíåðãîçàïàñàþùèì ñîåäèíåíèåì è íàêàïëèâà-
åòñÿ ñàìûìè ðàçíîîáðàçíûìè ìèêðîîðãàíèç-
ìàìè (íàïðèìåð, Alcaligenes, Azotobacter, Bacil-
lus, Nocardia, Pseudomonas è Rhizobium). Â íåêî-
òîðûõ óñëîâèÿõ îòäåëüíûå âèäû, â ÷àñòíîñòè
Alcaligenes eutrophus è Azotobacter beijerinckii, ñïî-
ñîáíû àêêóìóëèðîâàòü ýòîò ïîëèìåðíûé ìàòå-
ðèàë â òàêîì êîëè÷åñòâå, ÷òî îí ñîñòàâëÿåò äî
70 % èõ ñóõîé ìàññû (ðèñ. 3).
Íàêîïëåíèþ ÏÃÁ âíóòðè êëåòîê ïðè ðîñòå
íà óãëåâîäàõ èëè äðóãèõ èñòî÷íèêàõ óãëåðîäà,
íàïðèìåð ìåòàíîëå, ñïîñîáñòâóåò íåäîñòàòîê
ôîñôîðà èëè àçîòà. Ïîýòîìó îáðàçîâàíèå ýòî-
ãî ïîëèìåðà ìîæåò áûòü îäíîñòàäèéíûì ïðî-
öåññîì, ïðè êîòîðîì ëèìèòèðóþùèì ôàêòîðîì
ñ ñàìîãî íà÷àëà ðîñòà ÿâëÿåòñÿ îïðåäåëåííîå
ïèòàòåëüíîå âåùåñòâî. Ïðîöåññ ìîæåò áûòü è
äâóõñòàäèéíûì, êîãäà ìèêðîîðãàíèçìû ñíà÷àëà
ðàñòÿò â ñðåäå, ñîäåðæàùåé äîñòàòî÷íîå êîëè-
÷åñòâî ïèòàòåëüíûõ âåùåñòâ, äëÿ íàêîïëåíèÿ
áèîìàññû, à çàòåì ïåðåâîäÿò â óñëîâèÿ, ãäå
ëèìèòèðóþùèì ðîñò ôàêòîðîì ñëóæèò êàêîé-
ëèáî êîìïîíåíò ñðåäû, êðîìå óãëåðîäà, ÷òî âû-
çûâàåò çíà÷èòåëüíîå ïîâûøåíèå óðîâíÿ âíóò-
ðèêëåòî÷íîãî ÏÃÁ. Ê íàêîïëåíèþ ÏÃÁ ñïî-
ñîáíû ìíîãèå âèäû, íî âûõîä ïðîäóêòà è ìî-
Ðèñ. 1. Îáùåå ñîäåðæàíèå ëèïèäîâ ó íåêîòîðûõ ìèêðîîðãàíèçìîâ. Ïî ãîðèçîíòàëè – êîíöåíòðàöèÿ ëèïè-
äîâ, % îò ÑÂÊ (ñóõèõ âåùåñòâ êëåòêè)
Ðèñ. 2. Óñðåäíåííûé ôðàêöèîííûé ñîñòàâ ëèïèäîâ
ìèêðîîðãàíèçìîâ: 1 – òðèãëèöåðèäû, 75 %; 2 – ñòå-
ðèíîâûå ýôèðû è âîñêà, 2 %; 3 – ôîñôîëèïèäû,
3 %; 4 – ñòåðèíû, 4, %; 5 – ìîíî- è äèàöèëãëèöå-
ðèäû, 5 %; 6 – ñâîáîäíûå æèðíûå êèñëîòû, 10 %
24
À.Ô. Òêà÷åíêî, Å.À. Òèãóíîâà, Ñ.Ì. Øóëüãà
ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2013. Ò. 47. ¹ 6
ëåêóëÿðíàÿ ìàññà ñèíòåçèðóåìîãî ïîëèìåðà ó
íèõ îáû÷íî íåäîñòàòî÷íû äëÿ èñïîëüçîâàíèÿ
ýòèõ îðãàíèçìîâ â ïðîìûøëåííîì ïðîèçâîäñò-
âå. Íåîáõîäèìî, ÷òîáû ñîäåðæàíèå ÏÃÁ â áèî-
ìàññå ñîñòàâëÿëî íå ìåíåå 30–40 % (ïî âåñó),
à ìîëåêóëÿðíàÿ ìàññà ïîëèìåðà áûëà ïîðÿäêà
200000–300000. Ïîñêîëüêó ÏÃÁ îáðàçóåòñÿ â âè-
äå âíóòðèêëåòî÷íûõ ãðàíóë, åãî ýêñòðàãèðóþò
èç ìèêðîîðãàíèçìîâ ïîñëå ðàçðóøåíèÿ êëå-
òîê. Ïðåäïî÷òèòåëüíûì ìåòîäîì åãî î÷èñòêè
ñëóæèò ýêñòðàêöèÿ ðàñòâîðèòåëÿìè òèïà ãàëî-
ãåíèðîâàííûõ óãëåâîäîðîäîâ, íàïðèìåð 1,2-äè-
õëîðýòàíîì. Àëüòåðíàòèâíûé ïîäõîä ê ïîëó-
÷åíèþ ïîëèìåðà â ïðèãîäíîì ê èñïîëüçîâà-
íèþ âèäå ñîñòîèò â ïðåññîâàíèè â ôîðìàõ
èëè ýêñòðóçèè âûñóøåííûõ êëåòîê ñàìîãî
ìèêðîîðãàíèçìà ñ ñîäåðæàíèåì ÏÃÁ ïî âåñó
íå ìåíåå 50 %. Äëÿ ïîëó÷åíèÿ êîìïîçèöèè,
ïðèãîäíîé ê ñîçäàíèþ ïðåäìåòîâ îïðåäåëåí-
íîé ôîðìû, êëåòêè ðàçðóøàþò è ïðè íåîá-
õîäèìîñòè ñìåøèâàþò ñ íóæíûì êîëè÷åñòâîì
ýêñòðàãèðîâàííîãî ïîëèìåðà. Îäèí èç òåõíî-
ëîãè÷åñêèõ ïîäõîäîâ ê èçìåíåíèþ ïîëèìåðíûõ
ñâîéñòâ ÏÃÁ ïðåäóñìàòðèâàåò èçìåíåíèå ñîñ-
òàâà ãîìîïîëèìåðà in situ. Ýòîò ðåçåðâíûé ýíåð-
ãåòè÷åñêèé ìàòåðèàë ÿâëÿåòñÿ ïðîñòûì ïîëè-
ýôèðîì ìîíîìåðà ð-ãèäðîêñèáóòèðàòà. Îäíàêî
ñåé÷àñ óñòàíîâëåíî, ÷òî âî ìíîãèõ ñëó÷àÿõ
îí ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé áîëåå ñëîæíûé ãåòåðî-
ïîëèìåð ðàçíûõ æèðíûõ -ãèäðîêñèêèñëîò. Ñëå-
äîâàòåëüíî, ñîñòàâ ýòîãî ïîëèìåðà ìîæíî ìå-
íÿòü â ïðîöåññå ðîñòà ìèêðîîðãàíèçìà, íà-
ïðèìåð äîáàâëåíèåì ïðîïèîíîâîé êèñëîòû ê
êóëüòóðàëüíîé ñðåäå: òàêèì ñïîñîáîì â îáðà-
çóþùèéñÿ ñîïîëèìåð ââîäÿòñÿ îñòàòêè -ãèäðî-
êñèâàëåðàòà. Ýòî â ñâîþ î÷åðåäü èçìåíÿåò ðåî-
ëîãè÷åñêèå ñâîéñòâà ïîëèìåðà.
Ïîÿâëåíèå íà ðûíêå ñèíòåçèðóåìûõ ìèêðî-
áàìè ãåòåðîïîëèìåðîâ ÏÃÁ âðÿä ëè îêàæåò
ñóùåñòâåííîå âëèÿíèå íà èíäóñòðèþ ïëàñòìàññ;
îäíàêî ïîëåçíûå ñâîéñòâà ýòîãî ïîëèìåðà, îñî-
áåííî åãî ïîäâåðæåííîñòü áèîäåãðàäàöèè, ìî-
ãóò ñïîñîáñòâîâàòü åãî ïðèìåíåíèþ â ðÿäå îá-
ëàñòåé.
Äëÿ ïðîìûøëåííîãî èñïîëüçîâàíèÿ âàæ-
íîå çíà÷åíèå èìååò ñïîñîáíîñòü àêòèâíî íà-
êàïëèâàòü ëèïèäû. Ýòîé ñïîñîáíîñòüþ îáëà-
äàþò íåìíîãèå ìèêðîîðãàíèçìû, â ïåðâóþ î÷å-
ðåäü äðîææè. Ïðîöåññ îáðàçîâàíèÿ ëèïèäîâ ó
áîëüøèíñòâà äðîææåé ñîñòîèò èç äâóõ ÷åòêî
ðàçãðàíè÷åííûõ ñòàäèé. Ïåðâàÿ ñòàäèÿ õàðàê-
òåðèçóåòñÿ áûñòðûì îáðàçîâàíèåì áåëêà â óñ-
ëîâèÿõ óñèëåííîãî ñíàáæåíèÿ êóëüòóðû àçî-
òîì è ñîïðîâîæäàåòñÿ ìåäëåííûì íàêîïëåíèåì
ëèïèäîâ (â îñíîâíîì ãëèöåðîôîñôàòîâ è íåéò-
ðàëüíûõ æèðîâ). Äëÿ âòîðîé ñòàäèè õàðàêòåðíî
ïðåêðàùåíèå ðîñòà äðîææåé è óñèëåííîå íà-
êîïëåíèå ëèïèäîâ (â îñíîâíîì íåéòðàëüíûõ).
Òèïè÷íûìè ëèïèäîîáðàçîâàòåëÿìè ÿâëÿ-
þòñÿ äðîææè Cryptococcus terricolus. Îíè ìîãóò
ñèíòåçèðîâàòü áîëüøîå êîëè÷åñòâî ëèïèäîâ
(äî 60 % îò ñóõîé ìàññû) â ëþáûõ óñëîâèÿõ [8].
Ðèñ. 3. Äðîææåâàÿ êëåòêà Candida utilis ñ ëèïèäíûìè
âêëþ÷åíèÿìè (áàð – 1 ìêì)
Ðèñ. 4. Øòàììû äðîææåé ñ ïîâûøåííûì ñèíòåçîì
ëèïèäîâ: ïî âåðòèêàëè – æèðîâîé êîýôèöèåíò, åä.;
ïî ãîðèçîíòàëè: 1 – Candida valida Y-691; 2 – Can-
dida utilis L-35; 3 – Pichia anomala M-1; 4 – Pichia
polymorpha V-1; 5 – Pichia anomala L-1; 6 – Rho-
dotorula glutinis K-1; 7 – Rhodotorula gracilis SK-4; 8 –
Saccharomyces cerevisiae M-5; 9 – Saccharomyces uva-
rum H-7
25
Ëèïèäû ìèêðîîðãàíèçìîâ êàê èñòî÷íèê áèîòîïëèâà
ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2013. Ò. 47. ¹ 6
Èç äðóãèõ ëèïèäîîáðàçóþùèõ äðîææåé ïðî-
ìûøëåííûé èíòåðåñ ïðåäñòàâëÿþò äðîææè Ñ.
guilliermondii, óòèëèçèðóþùèå àëêàíû. Îíè ñèíòå-
çèðóþò â îñíîâíîì ôîñôîëèïèäû. Íàêàïëè-
âàþò áîëüøèå êîëè÷åñòâà ëèïèäîâ è àêòèâíî
ðàçâèâàþòñÿ íà óãëåâîäíûõ ñóáñòðàòàõ (íà ìå-
ëàññå, ãèäðîëèçàòàõ òîðôà è äðåâåñèíû) òàêæå
äðîææè âèäîâ Lipomyces lipoferus è Rhodotorula
gracilis. Ó ýòèõ âèäîâ äðîææåé ëèïîãåíåç ñèëü-
íî çàâèñèò îò óñëîâèé êóëüòèâèðîâàíèÿ. Ýòè
ïðîäóöåíòû íàêàïëèâàþò çíà÷èòåëüíûå êîëè-
÷åñòâà (äî 70 %) òðèàöèëãëèöåðèäîâ [9].
Ìèêðîñêîïè÷åñêèå ãðèáû ïîêà íå èìåþò
áîëüøîãî ðàñïðîñòðàíåíèÿ â ïîëó÷åíèè ëè-
ïèäîâ, õîòÿ æèð ãðèáîâ ïî ñâîåìó ñîñòàâó
áëèçîê ê ðàñòèòåëüíîìó. Âûõîä æèðîâ ó Asp.
terreus, íàïðèìåð, íà óãëåâîäíûõ ñðåäàõ äî-
ñòèãàåò 51 % îò ñóõèõ âåùåñòâ êëåòêè (ÑÂÊ).
Ëèïèäíûé ñîñòàâ ãðèáîâ ïðåäñòàâëåí â îñíîâ-
íîì íåéòðàëüíûìè æèðàìè è ôîñôîëèïèäà-
ìè. Â ïðèðîäå íàèáîëåå ðàñïðîñòðàíåíû òàêèå
ëèïèäîîáðàçîâàòåëè, êàê Rhodotorula è Pichia.
Îíè ìîãó ïðîäóöèðîâàòü ëèïèäû â ïðåäåëàõ
30–40 % îò ÑÂÊ.
 ðåçóëüòàòå ñêðèíèíãà äðîææåâûõ êóëüòóð
ïðîäóöåíòîâ ëèïèäîâ (ðèñ. 4) áûëè îòîáðàíû
øòàììû ñ ïîâûøåííûì ëèïîãåíåçîì [10]. Ýô-
ôåêòèâíîñòü ñèíòåçà ëèïèäîâ îïðåäåëÿëè ïî
æèðîâîìó êîýôôèöèåíòó.
Âàæíî îòìåòèòü, ÷òî íàêîïëåíèå ëèïèäîâ
ìèêðîîðãàíèçìàìè â áîëüøèõ êîëè÷åñòâàõ íå
ÿâëÿåòñÿ íîðìîé äëÿ êëåòêè, ýòî ñêîðåå îòâåò
íà ñòðåññîâóþ ñèòóàöèþ [11–13]. Ïðîöåññ ëè-
ïèäîîáðàçîâàíèÿ ìîæíî óñëîâíî ðàçäåëèòü íà
äâå ñòàäèè, â êîòîðîì ïåðâîé ÿâëÿåòñÿ ñáà-
ëàíñèðîâàííûé ðîñò ìèêðîîðãàíèçìîâ â ñðåäå
ñî âñåìè íåîáõîäèìûìè ïèòàòåëüíûìè âåùåñò-
âàìè, íà âòîðîé æå ñòàäèè – ñîáñòâåííî ëèïî-
ãåíåçà (íàêîïëåíèÿ ëèïèäîâ) îäèí èç èñòî÷-
íèêîâ ïèòàíèÿ ëèìèòèðóåò, â òîì ÷èñëå è Î2.
Ðÿä àâòîðîâ [14–18] óòâåðæäàþò, ÷òî êèñëîðîä
ñïîñîáñòâóåò ïðîöåññàì ëèïèäîîáðàçîâàíèÿ. Â
ðåçóëüòàòå èññëåäîâàíèé óñòàíîâëåíî, ÷òî äëÿ
ìàêñèìàëüíîãî íàêîïëåíèÿ áèîìàññû è ëèïè-
äîâ ñêîðîñòü àýðàöèè ðàçíàÿ [14]. Îò èíòåí-
ñèâíîñòè àýðàöèè çàâèñèò ñèíòåç ôîñôîãëè-
öåðèäîâ, æèðíûõ êèñëîò è òðèàöèëãëèöåðè-
äîâ. Ïðè íåäîñòàòî÷íîé àýðàöèè ëèïèäû ñî-
äåðæàò â 4 ðàçà ìåíüøå òðèàöèëãëèöåðèäîâ,
â 2 ðàçà áîëüøå ôîñôîãëèöåðèäîâ è â 8 ðàç
áîëüøå æèðíûõ êèñëîò, ÷åì ïðè íîðìàëüíîé
àýðàöèè [15]. Ïðè èíòåíñèôèêàöèè àýðàöèè
âîçðàñòàåò ñòåïåíü íåíàñûùåííîñòè ëèïèäîâ è
óâåëè÷èâàåòñÿ îòíîñèòåëüíîå êîëè÷åñòâî âñåõ
ãðóïï íåíàñûùåííûõ êèñëîò. Òàê, äëÿ ñèíòåçà
Òàáëèöà 1. Âëèÿíèå ñêîðîñòè àýðàöèè ñðåäû
íà íàêîïëåíèÿ áèîìàññû è ñèíòåç ëèïèäîâ
ó Rhodotorula gracilis SK-4, ã/ë
Ñêîðîñòü àýðàöèè,
ã Î2/ë·÷–1 Áèîìàññà Ëèïèäû
0,6
1,2
2
2,6
3,2
6
12
20
8
10
12
14
15
16
13
12
4
6
8
8,5
9,0
9,5
12
10
Ðèñ. 5. Ñèíòåç ëèïèäîâ Rhodotorula gracilis SK-4 íà
ñðåäàõ ñ ðàçíûìè ìîíîñàõàðèäàìè: ïî âåðòèêàëè –
êîíöåíòðàöèÿ ëèïèäîâ, ã/ë
Ðèñ. 6. Ëèïèäîîáðàçîâàíèå è ðîñò äðîææåé íà ðàç-
íûõ èñòî÷íèêàõ àçîòà: ïî âåðòèêàëè – êîíöåíòðàöèÿ
ëèïèäîâ, ã/ë
26
À.Ô. Òêà÷åíêî, Å.À. Òèãóíîâà, Ñ.Ì. Øóëüãà
ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2013. Ò. 47. ¹ 6
áèîìàññû ó Rhodotorula gacilis SK-4 ìàêñè-
ìàëüíàÿ ñêîðîñòü ðàñòâîðåíèÿ êèñëîðîäà ñîñ-
òàâëÿåò 6 ã Î2/ë·÷–1, à äëÿ ïîëó÷åíèÿ ëèïè-
äîâ – 12 ã Î2/ë·÷–1 [14] (òàáë. 1).
Ëèïèäû, ñèíòåçèðóåìûå áàêòåðèÿìè, ðàç-
ëè÷íû ïî ñâîåìó ñîñòàâó, òàê êàê âêëþ÷àþò
â îñíîâíîì ñëîæíûå ëèïèäû, òîãäà êàê íåéò-
ðàëüíûå æèðû ñîñòàâëÿþò íåçíà÷èòåëüíóþ
÷àñòü áèîìàññû. Ïðè ýòîì áàêòåðèè ïðîèçâî-
äÿò ðàçíîîáðàçíûå æèðíûå êèñëîòû (ñîäåð-
æàùèå îò 10 äî 20 àòîìîâ óãëåðîäà), ÷òî âàæ-
íî äëÿ ïðîìûøëåííîãî ïîëó÷åíèÿ ñïåöèôè-
÷åñêèõ æèðíûõ êèñëîò. Îñíîâíóþ ðîëü â
ïðîöåññå áèîñèíòåçà ëèïèäîâ èãðàþò ðàçëè÷-
íûå øòàììû äðîææåé. Îíè èñïîëüçóþò òå æå
èñòî÷íèêè ñûðüÿ, ÷òî è äëÿ ïîëó÷åíèÿ êîð-
ìîâîãî áåëêà, ïðè÷åì îò öåííîñòè óãëåðîä-
íîãî ïèòàíèÿ çàâèñÿò âûõîä áèîìàññû, êîëè-
÷åñòâî è ñîñòàâ ñèíòåçèðóåìûõ ëèïèäîâ. Äëÿ
îáåñïå÷åíèÿ íàïðàâëåííîãî áèîñèíòåçà ëèïè-
äîâ â ïèòàòåëüíîé ñðåäå óïîòðåáëÿþòñÿ ëåãêî
àññèìèëèðóåìûå èñòî÷íèêè àçîòà [14].
Íà ñäâèã áèîñèíòåçà â ñòîðîíó îáðàçîâàíèÿ
ëèïèäîâ èëè áåëêà âëèÿåò ñîîòíîøåíèå óãëå-
ðîäà è àçîòà â ñðåäå (ðèñ. 6). Òàê, ïîâûøåíèå
êîíöåíòðàöèè àçîòà âûçûâàåò ñíèæåíèå ëè-
ïèäîîáðàçîâàíèÿ, à íåäîñòàòîê àçîòà ïðè îáå-
ñïå÷åííîñòè óãëåðîäîì âåäåò ê ïîíèæåíèþ
âûõîäà áåëêîâûõ âåùåñòâ è âûñîêîìó ïðîöåíò-
íîìó ñîäåðæàíèþ æèðà [19–21].
Óñòàíîâëåíî, ÷òî îïòèìàëüíîå ñîîòíîøå-
íèå N:Ñ òåì ìåíüøå, ÷åì òðóäíîäîñòóïíåå
äëÿ äðîææåé èñòî÷íèê óãëåðîäà. Îáû÷íî äëÿ
óãëåâîäîðîäíîãî ñûðüÿ ñîîòíîøåíèå N:C =
= 1:30, à äëÿ óãëåâîäíîãî – 1:40. Íàêîïëå-
íèå ëèïèäîâ âîçìîæíî òîëüêî ïðè íàëè÷èè
â ñðåäå ôîñôîðà. Ïðè åãî íåäîñòàòêå èñòî÷-
íèêè óãëåðîäà èñïîëüçóþòñÿ íå ïîëíîñòüþ, à
ïðè èçáûòêå íàêàïëèâàþòñÿ íåëèïèäíûå ïðî-
äóêòû. Èç áåçàçîòèñòûõ ìèíåðàëüíûõ ñîëåé íà
ðîñò è íàêîïëåíèå ëèïèäîâ äðîææàìè íàèáî-
ëåå ñèëüíîå âëèÿíèå îêàçûâàëè ôîñôàòû. Íîð-
ìàëüíûé õîä íàêîïëåíèÿ ëèïèäîâ âîçìîæåí
òîëüêî ïðè íàëè÷èè â ñðåäå îïðåäåëåííûõ äîç
óñâîÿåìîãî ôîñôîðà. Îäíàêî â çàâèñèìîñòè îò
ñâîéñòâ äðîææåé-ëèïèäîîáðàçîâàòåëåé îïòè-
ìàëüíàÿ êîíöåíòðàöèÿ ôîñôîðà â ñðåäå ìîæåò
áûòü ðàçëè÷íîé. Íåäîñòàòîê ôîñôîðà â ñðåäå
ïðèâîäèë ê íåïîëíîìó èñïîëüçîâàíèþ ñàõàðà
ñðåäû, èçáûòîê æå ìåíÿë íàïðàâëåíèå ïðîöåñ-
ñà â ñòîðîíó óñèëåíèÿ íåëèïèäíîé ôàçû ðîñòà
äðîææåé (ðèñ. 7). Èññëåäîâàíèå ñèíòåçà ëèïè-
äîâ ó Rh. gracilis SK-4 ïîêàçàëî [22], ÷òî ïîâû-
øåíèå êîíöåíòðàöèè â ñðåäå ôîñôîðà ïîäàâëÿ-
ëî âêëþ÷åíèå àöåòàòà-Ñ14 â æèðíûå êèñëîòû è
íåîìûëÿåìûå ëèïèäû. Òàêîå äåéñòâèå ôîñ-
ôîðíûõ ñîëåé ìîæíî îáúÿñíèòü èõ ðîëüþ â
ìåòàáîëè÷åñêèõ ïðîöåññàõ äðîææåâîé êëåòêè.
Íåäîñòàòîê ôîñôîðà â ñðåäå âëèÿë íà ïðîöåñ-
Ðèñ. 7. Ôðàêöèîííûé ñîñòàâ ëèïèäîâ äðîææåé ïîä
äåéñòâèåì ôîñôàòîâ: ïî âåðòèêàëè – êîëè÷åñòâî, %;
ïî ãîðèçîíòàëè: 1 – ôîñôîëèïèäû; 2 – íå èäåíòè-
ôèöèðîâàíî; 3 – ñòåðèíû; 4 – ìîíî- è äèãëèöåðè-
äû; 5 – æèðíûå êèñëîòû; 6 – òðèãëèöåðèäû
Ðèñ. 8. Ðîñò è ëèïèäîîáðàçîâàíèå äðîææåé (ïî
âåðòèêàëè, ã/ë) íà ðàçíûõ êîíöåíòðàöèÿõ èîíîâ
ìàãíèÿ; ïî ãîðèçîíòàëè – êîíöåíòðàöèÿ ñóëüôàòà
ìàãíèÿ, ã/ë
Ðèñ. 9. Ðîñò è ëèïèäîîáðàçîâàíèå äðîææåé (ïî
âåðòèêàëè, ã/ë) íà ðàçíûõ êîíöåíòðàöèÿõ èîíîâ
êàëèÿ; ïî ãîðèçîíòàëè – êîíöåíòðàöèÿ õëîðèñòîãî
êàëèÿ, ã/ë
27ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2013. Ò. 47. ¹ 6
Ëèïèäû ìèêðîîðãàíèçìîâ êàê èñòî÷íèê áèîòîïëèâà
ñû ñèíòåçà áåëêà. Îáèëüíîå ñíàáæåíèå ôîñôî-
ðîì ñïîñîáñòâîâàëî ïîâûøåííîìó ñèíòåçó
áåëêà, à íåäîñòàòîê – óñèëåíèþ ëèïèäîîáðà-
çîâàíèÿ.
Òàêèì îáðàçîì, â èçâåñòíîé ñòåïåíè äåéñò-
âèå ôîñôàòîâ íà ëèïîãåíåç äðîææåé àíàëîãè÷-
íî äåéñòâèþ ñîëåé àçîòà: èçáûòîê óãíåòàåò, à
íåäîñòàòîê ñòèìóëèðóåò ïðîöåññû áèîñèíòåçà
ëèïèäîâ. Îäíàêî ïîâûøåíèå êîëè÷åñòâà ëèïè-
äîâ â äðîææàõ ïðè íåäîñòàòêå ôîñôîðà ãîðàçäî
ìåíüøå, ÷åì ïðè íåäîñòàòêå àçîòà.
Âîçäåéñòâèå îñòàëüíûõ ýëåìåíòîâ ñðåäû
(ìèêðî- è ìàêðîýëåìåíòîâ) ñêàçûâàåòñÿ íà
èíòåíñèâíîñòè ðîñòà äðîææåé è ñêîðîñòè óòè-
ëèçàöèè èñòî÷íèêà óãëåðîäà, ÷òî âëèÿåò è íà
êîëè÷åñòâî íàêîïëåííûõ ëèïèäîâ, íî íå íà èõ
êà÷åñòâî [1].
Èññëåäîâàíèÿ ïîêàçàëè, ÷òî ìàãíèé íå îêà-
çûâàåò çàìåòíîãî âëèÿíèÿ íà ëèïîãåíåç äðîæ-
æåé, õîòÿ íà ñòåïåíè èñïîëüçîâàíèÿ ðåäóöè-
ðóþùèõ âåùåñòâ ñðåäû è íàêîïëåíèÿ áèîìàñ-
ñû äðîææåé äîáàâëåíèå â ñðåäó ñåðíîêèñëî-
ãî ìàãíèÿ îêàçûâàëî ïîëîæèòåëüíîå âëèÿíèå
(ðèñ. 8). Íàèáîëüøåå êîëè÷åñòâî ëèïèäîâ â
ïðîöåíòàõ ê ñóõèì âåùåñòâàì êëåòîê ñèíòåçè-
ðîâàëè äðîææè ïðè äîáàâëåíèè 2,5 ã/ë ñåðíî-
êèñëîãî ìàãíèÿ. Âíåñåíèå áîëüøèõ êîëè÷åñòâ
ñåðíîêèñëîãî ìàãíèÿ (20 è 10 ã/ë) ïðèâîäèëî ê
çàìåòíîìó òîðìîæåíèþ ñèíòåçà ëèïèäîâ äðîæ-
æàìè [1].
Äîáàâëåíèå ñîëåé êàëèÿ ïðèâîäèëî ê íåêî-
òîðîìó óëó÷øåíèþ ñòåïåíè èñïîëüçîâàíèÿ ÐÂ
ñðåäû è ïîâûøåíèþ îáùåãî âûõîäà äðîææå-
âîé áèîìàññû (ðèñ. 9). Âìåñòå ñ òåì èîíû
êàëèÿ îêàçûâàëè ïîëîæèòåëüíîå âëèÿíèå è
íà áèîñèíòåç äðîææàìè ëèïèäîâ. Ïî ñâîåìó
äåéñòâèþ ââåäåíèå â ñðåäó êàëèÿ àíàëîãè÷íî
ââåäåíèþ ìàãíèÿ. Íå îêàçûâàÿ íåïîñðåäñòâåí-
íîãî âëèÿíèÿ íà ëèïîãåíåç äðîææåé, èîíû
êàëèÿ è ìàãíèÿ â èçâåñòíîé ìåðå âëèÿëè íà
ñòåïåíü èñïîëüçîâàíèÿ óãëåðîäà è àçîòà ñðåäû,
à òàêæå íà ñêîðîñòü íàêîïëåíèÿ äðîææåâîé
áèîìàññû.  ñâîþ î÷åðåäü ýòî ñïîñîáñòâîâàëî
íåêîòîðîìó óâåëè÷åíèþ îáùåãî âûõîäà ëèïèä-
íîé ïðîäóêöèè äðîææåé [22–24].
Íà ôðàêöèîííûé ñîñòàâ ñèíòåçèðóåìûõ ëè-
ïèäîâ îêàçûâàþò äðóãèå óñëîâèÿ êóëüòèâèðî-
âàíèÿ – ðÍ è òåìïåðàòóðà (ðèñ. 10). Ïîâûøåíèå
ðÍ ñðåäû âåäåò ê óâåëè÷åíèþ ñîäåðæàíèÿ
ôîñôîãëèöåðèäîâ è æèðíûõ êèñëîò ïðè îäíî-
âðåìåííîì ñíèæåíèè êîëè÷åñòâà òðèàöèëãëè-
öåðèäîâ [1].
Îïòèìàëüíûå òåìïåðàòóðû ðîñòà è ëèïèäî-
îáðàçîâàíèÿ äëÿ êëåòîê ñîâïàäàëè, ïðè÷åì ñî-
äåðæàíèå ëèïèäîâ íå çàâèñåëî îò òåìïåðàòóðû
êóëüòèâèðîâàíèÿ. Îäíàêî ðåãóëèðóÿ òåìïåðà-
òóðó, ìîæíî ñîçäàâàòü ðàçíûå ñîîòíîøåíèÿ íà-
ñûùåííûõ è íåíàñûùåííûõ æèðíûõ êèñëîò â
ñîñòàâå ôîñôîëèïèäíûõ ìåìáðàí (òàáë. 2).
Ñëåäóåò îòìåòèòü, ÷òî íå âñå ìèêðîîðãàíèç-
ìû ìîãóò áûòü ïðîäóöåíòàìè ëèïèäîâ. Ñðåäè
áîëåå 1000 âèäîâ äðîææåé òîëüêî 25 ìîãóò
íàêàïëèâàòü ñâûøå 20 % (â ñóõîé áèîìàññå)
ëèïèäîâ. Äëÿ ãðèáîâ ýòîò ïîêàçàòåëü åùå íèæå,
ñðåäè áîëåå 60 000 âèäîâ òîëüêî 50 ñïîñîáíû ê
íàêîïëåíèþ ëèïèäîâ [16].
Cïîñîáíîñòü äðîææåé ê ëèïèäîîáðàçîâà-
íèþ è ñðàâíèòåëüíî áûñòðàÿ âîçìîæíîñòü èç-
ìåíåíèÿ êîëè÷åñòâà è ñîñòàâà ëèïèäîâ ñ ïî-
ìîùüþ íàïðàâëåííîãî êóëüòèâèðîâàíèÿ ïî-
çâîëÿþò ïðåäïîëàãàòü, ÷òî ïîëó÷åíèå ëèïè-
äîâ ìèêðîáèîëîãè÷åñêèì ñèíòåçîì ñ èñïîëü-
çîâàíèåì îòõîäîâ ïðîìûøëåííîñòè è ïðîäóê-
òèâíûì øòàììîì – íàïðàâëåíèå ïåðñïåêòèâíîå
è ýêîíîìè÷åñêè âûãîäíîå.
Ðèñ. 10. Ñèíòåç áèîìàññû è ëèïèäîâ äðîææåé (ïî
âåðòèêàëè, ã/ë) íà ðàçíûõ ðÍ ñðåäû(ïî ãîðèçîíòàëè)
Òàáëèöà 2. Âëèÿíèå òåìïåðàòóðû êóëüòèâèðîâàíèÿ
íà ðîñò è ëèïèäîîáðàçîâàíèå Rhodotorula
gracilis SK-4, ã/ë
Òåìïåðàòóðà,
ºÑ Áèîìàññà Ëèïèäû
25
28
31
34
37
40
13
14
14,5
16
13,5
12
6
7,2
8,0
8,5
9,5
8
28
À.Ô. Òêà÷åíêî, Å.À. Òèãóíîâà, Ñ.Ì. Øóëüãà
ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2013. Ò. 47. ¹ 6
A. Tkachenko, O. Tigunova, S. Shulga
State organization «Institute of Food Biotechnology
and Genomics» of National Academy of Sciences
of Ukraine, Kyiv
E-mail: Shulga5@i.ua
MICROBIAL LIPIDS
AS A SOURCE FOR BIOFUEL
This review presents the main directions and experimen-
tal data to search among the different species of yeast –
active producers of lipids and the ways to lipidogenesis
process optimization in the most promising stains. It was
shown that enzymatic processes course can be directed
with maintaining the necessary cultivation conditions.
The influence on the growth, development and biochem-
ical activity of microbial medium composition, tempera-
ture, aeration and oxidation-reduction conditions was
considered. These factors changing have affected the
microorganisms biosynthetic activity, lipidogenic yeasts
activity and synthesized lipids composition. Lipidogenic
yeasts ability and relatively rapid ability on changing the
amount and composition of lipids by the direct culti-
vation leads to the conclusion that lipids obtained by
microbial synthesis can be a source of commercial raw
materials for biofuel.
À.Ô. Òêà÷åíêî, Î.Î. Ò³ãóíîâà, Ñ.Ì. Øóëüãà
˲ϲÄÈ Ì²ÊÐÎÎÐÃÀͲÇ̲Â
ßÊ ÄÆÅÐÅËÎ ÄËß Á²ÎÏÀËÈÂÀ
Ïðåäñòàâëåíî îñíîâí³ íàïðÿìêè äîñë³äæåíü ³ åêñ-
ïåðèìåíòàëüí³ äàí³, íàïðàâëåí³ íà ïîøóê àêòèâíèõ
ïðîäóöåíò³â ë³ï³ä³â ñåðåä ð³çíèõ âèä³â äð³æäæ³â,
òà øëÿõè îïòèì³çàö³¿ ïðîöåñó ë³ï³äîóòâîðåííÿ ó
íàéá³ëüø ïåðñïåêòèâíèõ øòàì³â. Ïîêàçàíî, ùî ï³ä-
òðèìóþ÷è íåîáõ³äí³ óìîâè êóëüòèâóâàííÿ, ìîæíà
êåðóâàòè õîäîì åíçèìàòè÷íèõ ïðîöåñ³â. Ðîçãëÿíóòî
âïëèâ íà ð³ñò, ðîçâèòîê òà á³îõ³ì³÷íó àêòèâí³ñòü
ì³êðîîðãàí³çì³â ñêëàäó ñåðåäîâèùà, òåìïåðàòóðè,
àåðàö³¿ òà îêèñëþâàëüíî-â³äíîâíèõ óìîâ. Çì³íà
öèõ ôàêòîð³â âïëèâàëà íà á³îñèíòåòè÷íó ä³ÿëüí³ñòü
ì³êðîîðãàí³çì³â, ë³ïîãåííó àêòèâí³ñòü äð³æäæ³â òà
ñêëàä ë³ï³ä³â, ùî ñèíòåçóþòüñÿ íèìè. Âëàñòèâ³ñòü
äð³æäæ³â äî ë³ï³äîóòâîðåííÿ òà â³äíîñíî øâèäêà
ìîæëèâ³ñòü çì³íåííÿ ê³ëüêîñò³ òà ñêëàäó ë³ï³ä³â çà
äîïîìîãîþ íàïðàâëåíîãî êóëüòèâóâàííÿ äຠçìîãó
çðîáèòè âèñíîâîê ïðî òå, ùî îòðèìàí³ ì³êðîá³î-
ëîã³÷íèì ñèíòåçîì ë³ï³äè ìîæóòü ñëóãóâàòè äæåðå-
ëîì ñèðîâèíè äëÿ îäåðæàííÿ á³îïàëèâà â ïðîìèñ-
ëîâèõ ìàñøòàáàõ.
ÑÏÈÑÎÊ ËÈÒÅÐÀÒÓÐÛ
1. Òêà÷åíêî À.Ô., Òèãóíîâà Å.À., Øóëüãà Ñ.Ì. Ìèêðîá-
íûå ëèïèäû – àëüòåðíàòèâíûé èñòî÷íèê ñûðüÿ
äëÿ áèîòîïëèâà // ̳êðîá³îëîã³ÿ ³ á³îòåõíîëîã³ÿ. –
2012. – 3. – Ñ. 17–33.
2. Carioca J.O.B. Biofuels : Problems, challenges and
perspectives // Biotechnol. J. – 2010 – 5. – P. 260–
273.
3. Hirsch R.L., Bezdek R., Wendling R. Peaking of word
oil production and its mitigation // AIChE J. –
2006. – 52 – P. 2–8.
4. Kerr R.A. Ñlimate change : Global warming is chang-
ing the world // Science – 2007. – 316. – P. 188–
190.
5. Îë³éíè÷óê Ñ., Êèçþí Ã., Øèÿí Ï., Ñîñíèöüêèé Â.
Ñó÷àñí³ é ïåðñïåêòèâí³ òåõíîëî㳿 âèðîáíèöòâà
á³îïàëèâ íà ñâ³òîâîìó ðèíêó. Õàð÷îâà ³ ïåðåðîáíà
ïðîìèñëîâ³ñòü. – 2009. – 6, ¹ 358. – C. 11–
13.
6. ϳäãîðñüêèé Â.Ñ., ²óòèíñüêà Ã.Î., Ïèðîã Ò.Ï.
²íòåíñèô³êàö³ÿ òåõíîëîã³é ì³êðîáíîãî ñèíòåçó. –
Ê.: Íàóê. äóìêà, 2010. – 328 ñ.
7. Çàëàøêî Ì.Â. Áèîñèíòåç ëèïèäîâ äðîææàìè. –
Ì.: Íàóêà è òåõíèêà, 1971. – 216 ñ.
8. Asselinean J., Lederer E. Chemistry and metabolism
of bacterial lipids // Lipid metabolism. – New York,
1960. – 200 p.
9. Ãóáàðåâ Å.Ì. Îñíîâíûå ïðîöåññû îáìåíà âåùåñòâ
ó ìèêðîáîâ. Ì.: Ìèð, 1961. – 165 ñ.
10. Øóëüãà Ñ.Ì., Òêà÷åíêî À.Ô., Áåéêî Í.Å. è äð.
Áèîñèíòåç ëèïèäîâ äðîææàìè Rhodotorula gra-
cilis // Áèîòåõíîëîãèÿ – 2010. – 3, ¹ 3 . – Ñ. 58–
65.
11. Ãàíáàðîâ Õ.Ã., Àáäóëãàìèäîâà Ñ.Ì. Èçó÷åíèå âíóò-
ðèïîïóëÿöèîííûõ ìîðôî-êóëüòóðàëüíûõ èçìå-
íåíèé äðîææåâûõ ãðèáîâ, õðàíèâøèõñÿ â êîë-
ëåêöèè êóëüòóð // Âåñí. Áàêèí. ãîñ. óí-òà. Ñåð.
áèîë. íàóê. – 2007. – 1. – C. 42–46.
12. Ïîõèëåíêî Â.Ä., Áàðàíîâ À.Ì., Äåòóøåâ Ê.Â. Ìå-
òîäû äëèòåëüíîãî õðàíåíèÿ êîëëåêöèîííûõ êóëüòóð
ìèêðîîðãàíèçìîâ è òåíäåíöèè ðàçâèòèÿ // Èçâ.
âûñø. ó÷åá. çàâåäåíèé. Ïîâîëæñêèé ðåãèîí. –
2009. – 4. – C. 99–121.
13. Ëóêèí À.À. Ýêñïåðèìåíòàëüíûå èññëåäîâàíèÿ
äèññîöèàöèè ó Bacillus brevis var. G.-B. : Àâòîðåô.
äèñ. … êàíä. áèîë. íàóê. – Ì., 1965. – 20 c.
14. Shulga S.M., Tkachenko A.F., Beyko N.E. Biosyn-
thesis of lipids by the yeast Rhodotorula gracilis //
BioMicroWord 2009 (Lisbon, 2–4 Dec., 2009). –
P. 385.
15. Øóëüãà Ñ.Ì., Ò³ãóíîâà Î.Î., Òêà÷åíêî À.Ô. òà ³í.
Âïëèâ ë³îô³ëüíîãî âèñóøóâàííÿ íà æèòòºçäàò-
í³ñòü äð³æäæ³â Pichia anomala // Á³îòåõíîëîã³ÿ. –
2011. – 4, ¹ 4. – C. 83–86.
16. Rattray J.B., Schibeci A., Kidby D.K. Lipids of
yeasts // Bacteriol Rew. – 1975. – 39, ¹ 3. – P. 197–
231.
17. Hall M.J., Ratledge C. Lipid accumulation in an
oleaginous yeast (Candida 107) growing on glucose
under various conditions in a one- and two-stage
29ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2013. Ò. 47. ¹ 6
Ëèïèäû ìèêðîîðãàíèçìîâ êàê èñòî÷íèê áèîòîïëèâà
continuous culture // Appl. Environ. Microbiol. –
1977. – 33, ¹ 3. – P. 577–584.
18. Êîðîíåëëè Ò.Â. Ëèïèäû ìèêîáàêòåðèé è ðîäñò-
âåííûõ ìèêðîîðãàíèçìîâ. – Ì.: Èçä-âî Ìîñê.
óí-òà, 1984. – 160 ñ.
19. Ratledge C., Wynn J. The biochemistry and mo-
lecular biology of lipid accumulation in oleaginous
microorganisms // Adv. Appl. Microbiol. – 2002. –
51. – P. 1–44.
20. Alvarez H., Steinbuchel A. Triacylglycerols in pro-
karyotic microorganisms // Appl. Microbiol. Bio-
thechnol. – 2002. – 60. – P. 367–376.
21. Meng X., Yang J., Xu X. et al. Biodiesel production
from oleaginous microorganisms // Renewable En-
erg. – 2009. – 34. – P. 1–5.
22. Van Hamme J.D., Ward O.P. Physical and metabol-
ic interactions of Pseudomonas sp. strain JA5-B45
and Rhodococcus sp. stain F9-D79 during growth
on crude oil and effect of a chemical surfactant on
them // Appl. Environ. Microbiol. – 2001. – 67,
¹ 10. – P. 4874–4879.
23. Steen E., Kang Y., Bokinsky G. et al. Microbial pro-
duction of fatty-acid-derived fuels and chemicals
from plant biomass // Nature. – 2010. – 463. –
P. 559–562.
24. Li Q., Du W., Liu D. Perspectives of microbial oils
for biodiesel production // Appl.Microbiol. Biotech-
nol. – 2008. – 80. – P. 749–756.
Ïîñòóïèëà 15.07.13
<<
/ASCII85EncodePages false
/AllowTransparency false
/AutoPositionEPSFiles true
/AutoRotatePages /None
/Binding /Left
/CalGrayProfile (Dot Gain 20%)
/CalRGBProfile (sRGB IEC61966-2.1)
/CalCMYKProfile (U.S. Web Coated \050SWOP\051 v2)
/sRGBProfile (sRGB IEC61966-2.1)
/CannotEmbedFontPolicy /Error
/CompatibilityLevel 1.4
/CompressObjects /Tags
/CompressPages true
/ConvertImagesToIndexed true
/PassThroughJPEGImages true
/CreateJobTicket false
/DefaultRenderingIntent /Default
/DetectBlends true
/DetectCurves 0.0000
/ColorConversionStrategy /CMYK
/DoThumbnails false
/EmbedAllFonts true
/EmbedOpenType false
/ParseICCProfilesInComments true
/EmbedJobOptions true
/DSCReportingLevel 0
/EmitDSCWarnings false
/EndPage -1
/ImageMemory 1048576
/LockDistillerParams false
/MaxSubsetPct 100
/Optimize true
/OPM 1
/ParseDSCComments true
/ParseDSCCommentsForDocInfo true
/PreserveCopyPage true
/PreserveDICMYKValues true
/PreserveEPSInfo true
/PreserveFlatness true
/PreserveHalftoneInfo false
/PreserveOPIComments false
/PreserveOverprintSettings true
/StartPage 1
/SubsetFonts true
/TransferFunctionInfo /Apply
/UCRandBGInfo /Preserve
/UsePrologue false
/ColorSettingsFile ()
/AlwaysEmbed [ true
]
/NeverEmbed [ true
]
/AntiAliasColorImages false
/CropColorImages true
/ColorImageMinResolution 300
/ColorImageMinResolutionPolicy /OK
/DownsampleColorImages true
/ColorImageDownsampleType /Bicubic
/ColorImageResolution 1200
/ColorImageDepth -1
/ColorImageMinDownsampleDepth 1
/ColorImageDownsampleThreshold 1.50000
/EncodeColorImages false
/ColorImageFilter /DCTEncode
/AutoFilterColorImages true
/ColorImageAutoFilterStrategy /JPEG
/ColorACSImageDict <<
/QFactor 0.15
/HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1]
>>
/ColorImageDict <<
/QFactor 0.15
/HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1]
>>
/JPEG2000ColorACSImageDict <<
/TileWidth 256
/TileHeight 256
/Quality 30
>>
/JPEG2000ColorImageDict <<
/TileWidth 256
/TileHeight 256
/Quality 30
>>
/AntiAliasGrayImages false
/CropGrayImages true
/GrayImageMinResolution 300
/GrayImageMinResolutionPolicy /OK
/DownsampleGrayImages true
/GrayImageDownsampleType /Bicubic
/GrayImageResolution 1200
/GrayImageDepth -1
/GrayImageMinDownsampleDepth 2
/GrayImageDownsampleThreshold 1.50000
/EncodeGrayImages false
/GrayImageFilter /DCTEncode
/AutoFilterGrayImages true
/GrayImageAutoFilterStrategy /JPEG
/GrayACSImageDict <<
/QFactor 0.15
/HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1]
>>
/GrayImageDict <<
/QFactor 0.15
/HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1]
>>
/JPEG2000GrayACSImageDict <<
/TileWidth 256
/TileHeight 256
/Quality 30
>>
/JPEG2000GrayImageDict <<
/TileWidth 256
/TileHeight 256
/Quality 30
>>
/AntiAliasMonoImages false
/CropMonoImages true
/MonoImageMinResolution 1200
/MonoImageMinResolutionPolicy /OK
/DownsampleMonoImages true
/MonoImageDownsampleType /Bicubic
/MonoImageResolution 1200
/MonoImageDepth -1
/MonoImageDownsampleThreshold 1.50000
/EncodeMonoImages false
/MonoImageFilter /CCITTFaxEncode
/MonoImageDict <<
/K -1
>>
/AllowPSXObjects false
/CheckCompliance [
/None
]
/PDFX1aCheck false
/PDFX3Check false
/PDFXCompliantPDFOnly false
/PDFXNoTrimBoxError true
/PDFXTrimBoxToMediaBoxOffset [
0.00000
0.00000
0.00000
0.00000
]
/PDFXSetBleedBoxToMediaBox true
/PDFXBleedBoxToTrimBoxOffset [
0.00000
0.00000
0.00000
0.00000
]
/PDFXOutputIntentProfile (None)
/PDFXOutputConditionIdentifier ()
/PDFXOutputCondition ()
/PDFXRegistryName ()
/PDFXTrapped /False
/CreateJDFFile false
/Description <<
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
/BGR <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>
/CHS <FEFF4f7f75288fd94e9b8bbe5b9a521b5efa7684002000410064006f006200650020005000440046002065876863900275284e8e9ad88d2891cf76845370524d53705237300260a853ef4ee54f7f75280020004100630072006f0062006100740020548c002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e003000204ee553ca66f49ad87248672c676562535f00521b5efa768400200050004400460020658768633002>
/CHT <FEFF4f7f752890194e9b8a2d7f6e5efa7acb7684002000410064006f006200650020005000440046002065874ef69069752865bc9ad854c18cea76845370524d5370523786557406300260a853ef4ee54f7f75280020004100630072006f0062006100740020548c002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e003000204ee553ca66f49ad87248672c4f86958b555f5df25efa7acb76840020005000440046002065874ef63002>
/CZE <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>
/DAN <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>
/DEU <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>
/ESP <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>
/ETI <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>
/FRA <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>
/GRE <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>
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
/HRV (Za stvaranje Adobe PDF dokumenata najpogodnijih za visokokvalitetni ispis prije tiskanja koristite ove postavke. Stvoreni PDF dokumenti mogu se otvoriti Acrobat i Adobe Reader 5.0 i kasnijim verzijama.)
/HUN <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>
/ITA <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>
/JPN <FEFF9ad854c18cea306a30d730ea30d730ec30b951fa529b7528002000410064006f0062006500200050004400460020658766f8306e4f5c6210306b4f7f75283057307e305930023053306e8a2d5b9a30674f5c62103055308c305f0020005000440046002030d530a130a430eb306f3001004100630072006f0062006100740020304a30883073002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e003000204ee5964d3067958b304f30533068304c3067304d307e305930023053306e8a2d5b9a306b306f30d530a930f330c8306e57cb30818fbc307f304c5fc59808306730593002>
/KOR <FEFFc7740020c124c815c7440020c0acc6a9d558c5ec0020ace0d488c9c80020c2dcd5d80020c778c1c4c5d00020ac00c7a50020c801d569d55c002000410064006f0062006500200050004400460020bb38c11cb97c0020c791c131d569b2c8b2e4002e0020c774b807ac8c0020c791c131b41c00200050004400460020bb38c11cb2940020004100630072006f0062006100740020bc0f002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e00300020c774c0c1c5d0c11c0020c5f40020c2180020c788c2b5b2c8b2e4002e>
/LTH <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>
/LVI <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>
/NLD (Gebruik deze instellingen om Adobe PDF-documenten te maken die zijn geoptimaliseerd voor prepress-afdrukken van hoge kwaliteit. De gemaakte PDF-documenten kunnen worden geopend met Acrobat en Adobe Reader 5.0 en hoger.)
/NOR <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>
/POL <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>
/PTB <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>
/RUM <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>
/RUS <FEFF04180441043f043e043b044c04370443043904420435002004340430043d043d044b04350020043d0430044104420440043e0439043a043800200434043b044f00200441043e043704340430043d0438044f00200434043e043a0443043c0435043d0442043e0432002000410064006f006200650020005000440046002c0020043c0430043a04410438043c0430043b044c043d043e0020043f043e04340445043e0434044f04490438044500200434043b044f00200432044b0441043e043a043e043a0430044704350441044204320435043d043d043e0433043e00200434043e043f0435044704300442043d043e0433043e00200432044b0432043e04340430002e002000200421043e043704340430043d043d044b04350020005000440046002d0434043e043a0443043c0435043d0442044b0020043c043e0436043d043e0020043e0442043a0440044b043204300442044c002004410020043f043e043c043e0449044c044e0020004100630072006f00620061007400200438002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e00300020043800200431043e043b043504350020043f043e04370434043d043804450020043204350440044104380439002e>
/SKY <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>
/SLV <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>
/SUO <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>
/SVE <FEFF0041006e007600e4006e00640020006400650020006800e4007200200069006e0073007400e4006c006c006e0069006e006700610072006e00610020006f006d002000640075002000760069006c006c00200073006b006100700061002000410064006f006200650020005000440046002d0064006f006b0075006d0065006e007400200073006f006d002000e400720020006c00e4006d0070006c0069006700610020006600f60072002000700072006500700072006500730073002d007500740073006b00720069006600740020006d006500640020006800f600670020006b00760061006c0069007400650074002e002000200053006b006100700061006400650020005000440046002d0064006f006b0075006d0065006e00740020006b0061006e002000f600700070006e00610073002000690020004100630072006f0062006100740020006f00630068002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e00300020006f00630068002000730065006e006100720065002e>
/TUR <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>
/UKR <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>
/ENU (Use these settings to create Adobe PDF documents best suited for high-quality prepress printing. Created PDF documents can be opened with Acrobat and Adobe Reader 5.0 and later.)
>>
/Namespace [
(Adobe)
(Common)
(1.0)
]
/OtherNamespaces [
<<
/AsReaderSpreads false
/CropImagesToFrames true
/ErrorControl /WarnAndContinue
/FlattenerIgnoreSpreadOverrides false
/IncludeGuidesGrids false
/IncludeNonPrinting false
/IncludeSlug false
/Namespace [
(Adobe)
(InDesign)
(4.0)
]
/OmitPlacedBitmaps false
/OmitPlacedEPS false
/OmitPlacedPDF false
/SimulateOverprint /Legacy
>>
<<
/AddBleedMarks false
/AddColorBars false
/AddCropMarks false
/AddPageInfo false
/AddRegMarks false
/ConvertColors /ConvertToCMYK
/DestinationProfileName ()
/DestinationProfileSelector /DocumentCMYK
/Downsample16BitImages true
/FlattenerPreset <<
/PresetSelector /MediumResolution
>>
/FormElements false
/GenerateStructure false
/IncludeBookmarks false
/IncludeHyperlinks false
/IncludeInteractive false
/IncludeLayers false
/IncludeProfiles false
/MultimediaHandling /UseObjectSettings
/Namespace [
(Adobe)
(CreativeSuite)
(2.0)
]
/PDFXOutputIntentProfileSelector /DocumentCMYK
/PreserveEditing true
/UntaggedCMYKHandling /LeaveUntagged
/UntaggedRGBHandling /UseDocumentProfile
/UseDocumentBleed false
>>
]
>> setdistillerparams
<<
/HWResolution [2400 2400]
/PageSize [612.000 792.000]
>> setpagedevice
|