Структурна організація 5S рибосомної ДНК Rosa rugosa
З метою вивчення молекулярної організації ділянки геному, що кодує 5S рРНК у диплоїдного виду Rosa rugosa, клоновано та секвеновано декілька повторюваних одиниць 5S рДНК. Аналіз отриманих послідовностей показав наявність в геномі єдиного за довжиною повторюваної одиниці варіанта 5S рДНК, який містит...
Gespeichert in:
| Datum: | 2014 |
|---|---|
| Hauptverfasser: | , |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | Russian |
| Veröffentlicht: |
Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України
2014
|
| Schriftenreihe: | Цитология и генетика |
| Schlagworte: | |
| Online Zugang: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/126612 |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Zitieren: | Структурна організація 5S рибосомної ДНК Rosa rugosa / Ю.О. Тинкевич, Р.А. Волков // Цитология и генетика. — 2014. — Т. 48, № 1. — С. 3-9. — Бібліогр.: 28 назв. — укр. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-126612 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-1266122025-02-23T18:56:18Z Структурна організація 5S рибосомної ДНК Rosa rugosa Структурная организация 5S рибосомной ДНК Structural organization of 5S ribosomal DNA in Rosa rugosa Тинкевич, Ю.О. Волков, Р.А. Оригинальные работы З метою вивчення молекулярної організації ділянки геному, що кодує 5S рРНК у диплоїдного виду Rosa rugosa, клоновано та секвеновано декілька повторюваних одиниць 5S рДНК. Аналіз отриманих послідовностей показав наявність в геномі єдиного за довжиною повторюваної одиниці варіанта 5S рДНК, який містить інтактні промоторні елементи в міжгенному спейсері (МГС) й імовірно є транскрипційно активним. Знайдено також невелику кількість 5S рДНК-псевдогенів, у яких повністю втрачено МГС та частину кодуючої ділянки. Високий рівень подібності (від 93,7 до 97,5 %), виявлений при порівнянні послідовностей МГС мажорних варіантів 5S рДНК східноазійської R. rugosa та північноамериканської R. nitida, свідчить про відносно недавню дивергенцію цих видів. С целью изучения молекулярной организации участка генома, кодирующего 5S рРНК у диплоидного вида Rosa rugosa, клонированы и секвенированы несколько повторяющихся единиц 5S рДНК. Анализ полученных последовательностей показал наличие в геноме единственной по длине повторяющейся единицы варианта 5S рДНК, который содержит интактные промоторные элементы в межгенном спейсере (МГС) и, вероятно, является транскрипционно активным. Обнаружено также ограниченное количест-во 5S рДНК-псевдогенов, у которых полностью ут-рачены МГС и часть кодирующего участка. Высокий уровень сходства (от 93,7 до 97,5 %), выявленный при сравнении МГС мажорных вариантов 5S рДНК восточноазиатской R. rugosa и североамериканской R. nitida, свидетельствует об относительно недавней дивергенции этих видов. For studying the molecular organization of the genomic region coding for 5S rRNA in the diploid species Rosa rugosa, several 5S rDNA repeat units were cloned and sequenced. An analysis of the obtained sequences revealed that in the genome only one length variant of the 5S rDNA repeated unit is present that contains intact promoter elements in the intergenic spacer (IGS) and appears to be transcriptionally active. In addition, a limited number of 5S rDNA pseudogenes were detected with a complete loss of the IGS and a portion of the coding region. The high level of sequence similarity (from 93.7 to 97.5%), revealed by comparing the IGS of the major 5S rDNA variants of East Asian R. rugosa and North American R. nitida, indicates a relatively recent divergence of these species. 2014 Article Структурна організація 5S рибосомної ДНК Rosa rugosa / Ю.О. Тинкевич, Р.А. Волков // Цитология и генетика. — 2014. — Т. 48, № 1. — С. 3-9. — Бібліогр.: 28 назв. — укр. 0564-3783 DOI: 10.3103/S0095452714010095 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/126612 577.212.3:595.789 ru Цитология и генетика application/pdf Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Russian |
| topic |
Оригинальные работы Оригинальные работы |
| spellingShingle |
Оригинальные работы Оригинальные работы Тинкевич, Ю.О. Волков, Р.А. Структурна організація 5S рибосомної ДНК Rosa rugosa Цитология и генетика |
| description |
З метою вивчення молекулярної організації ділянки геному, що кодує 5S рРНК у диплоїдного виду Rosa rugosa, клоновано та секвеновано декілька повторюваних одиниць 5S рДНК. Аналіз отриманих послідовностей показав наявність в геномі єдиного за довжиною повторюваної одиниці варіанта 5S рДНК, який містить інтактні промоторні елементи в міжгенному спейсері (МГС) й імовірно є транскрипційно активним. Знайдено також невелику кількість 5S рДНК-псевдогенів, у яких повністю втрачено МГС та частину кодуючої ділянки. Високий рівень подібності (від 93,7 до 97,5 %), виявлений при порівнянні послідовностей МГС мажорних варіантів 5S рДНК східноазійської R. rugosa та північноамериканської R. nitida, свідчить про відносно недавню дивергенцію цих видів. |
| format |
Article |
| author |
Тинкевич, Ю.О. Волков, Р.А. |
| author_facet |
Тинкевич, Ю.О. Волков, Р.А. |
| author_sort |
Тинкевич, Ю.О. |
| title |
Структурна організація 5S рибосомної ДНК Rosa rugosa |
| title_short |
Структурна організація 5S рибосомної ДНК Rosa rugosa |
| title_full |
Структурна організація 5S рибосомної ДНК Rosa rugosa |
| title_fullStr |
Структурна організація 5S рибосомної ДНК Rosa rugosa |
| title_full_unstemmed |
Структурна організація 5S рибосомної ДНК Rosa rugosa |
| title_sort |
структурна організація 5s рибосомної днк rosa rugosa |
| publisher |
Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України |
| publishDate |
2014 |
| topic_facet |
Оригинальные работы |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/126612 |
| citation_txt |
Структурна організація 5S рибосомної ДНК Rosa rugosa / Ю.О. Тинкевич, Р.А. Волков // Цитология и генетика. — 2014. — Т. 48, № 1. — С. 3-9. — Бібліогр.: 28 назв. — укр. |
| series |
Цитология и генетика |
| work_keys_str_mv |
AT tinkevičûo strukturnaorganízacíâ5sribosomnoídnkrosarugosa AT volkovra strukturnaorganízacíâ5sribosomnoídnkrosarugosa AT tinkevičûo strukturnaâorganizaciâ5sribosomnojdnk AT volkovra strukturnaâorganizaciâ5sribosomnojdnk AT tinkevičûo structuralorganizationof5sribosomaldnainrosarugosa AT volkovra structuralorganizationof5sribosomaldnainrosarugosa |
| first_indexed |
2025-11-24T12:29:29Z |
| last_indexed |
2025-11-24T12:29:29Z |
| _version_ |
1849674819988094976 |
| fulltext |
3ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2014. Ò. 48. ¹ 1
ОРИГИНАЛЬНЫЕ РАБОТЫ
УДК 577.212.3:595.789
Ю.О. ТИНКЕВИЧ, Р.А. ВОЛКОВ
Чернівецький національний університет ім. Ю. Федьковича
E-mail: ra.volkov@gmail.com
CТРУКТУРНА ОРГАНІЗАЦІЯ
5S РИБОСОМНОЇ ДНК ROSA RUGOSA
© Þ.Î. ÒÈÍÊÅÂÈ×, Ð.À. ÂÎËÊÎÂ, 2014
Ç ìåòîþ âèâ÷åííÿ ìîëåêóëÿðíî¿ îðãàí³çàö³¿ ä³ëÿíêè ãå-
íîìó, ùî êîäóº 5S ðÐÍÊ ó äèïëî¿äíîãî âèäó Rosa rugosa,
êëîíîâàíî òà ñåêâåíîâàíî äåê³ëüêà ïîâòîðþâàíèõ îäè-
íèöü 5S ðÄÍÊ. Àíàë³ç îòðèìàíèõ ïîñë³äîâíîñòåé ïî-
êàçàâ íàÿâí³ñòü â ãåíîì³ ºäèíîãî çà äîâæèíîþ ïîâòî-
ðþâàíî¿ îäèíèö³ âàð³àíòà 5S ðÄÍÊ, ÿêèé ì³ñòèòü ³í-
òàêòí³ ïðîìîòîðí³ åëåìåíòè â ì³æãåííîìó ñïåéñåð³
(ÌÃÑ) é ³ìîâ³ðíî º òðàíñêðèïö³éíî àêòèâíèì. Çíàé-
äåíî òàêîæ íåâåëèêó ê³ëüê³ñòü 5S ðÄÍÊ-ïñåâäîãåí³â,
ó ÿêèõ ïîâí³ñòþ âòðà÷åíî ÌÃÑ òà ÷àñòèíó êîäóþ÷î¿
ä³ëÿíêè. Âèñîêèé ð³âåíü ïîä³áíîñò³ (â³ä 93,7 äî 97,5 %),
âèÿâëåíèé ïðè ïîð³âíÿíí³ ïîñë³äîâíîñòåé ÌÃÑ ìàæîð-
íèõ âàð³àíò³â 5S ðÄÍÊ ñõ³äíîàç³éñüêî¿ R. rugosa òà ï³â-
í³÷íîàìåðèêàíñüêî¿ R. nitida, ñâ³ä÷èòü ïðî â³äíîñíî íå-
äàâíþ äèâåðãåíö³þ öèõ âèä³â.
Êëþ÷îâ³ ñëîâà: 5S ðÄÍÊ, ìîëåêóëÿðíà åâîëþö³ÿ òà ô³-
ëîãåí³ÿ, Rosa.
Âñòóï. Çíà÷í³ óñï³õè, äîñÿãíåí³ îñòàíí³ìè ðî-
êàìè â òàêñîíî쳿 êâ³òêîâèõ ðîñëèí, ïðèçâåëè
äî ïåðåãëÿäó óñòàëåíèõ ïîãëÿä³â, ùî ôîðìóâà-
ëèñü ïðîòÿãîì äâîõ ñòîð³÷ [1–5]. Òàêà ñèòóàö³ÿ
ïîâ’ÿçàíà ³ç âèêîðèñòàííÿì ó ô³ëîãåíåòè÷íèõ ³
òàêñîíîì³÷íèõ äîñë³äæåííÿõ âèùèõ ðîñëèí ìî-
ëåêóëÿðíèõ ìàðêåð³â íà îñíîâ³ ïîë³ìîðô³çìó
íóêëåîòèäíèõ ïîñë³äîâíîñòåé ÄÍÊ, çîêðåìà ä³-
ëÿíîê ãåíîìó, ùî êîäóþòü ðèáîñîìí³ ÐÍÊ
(ðÄÍÊ) [1, 2, 6–9].
Çàñòîñóâàííÿ íóêëåîòèäíî¿ ïîñë³äîâíîñò³
5S ðÄÍÊ ÿê ìîëåêóëÿðíîãî ìàðêåðà äîçâî-
ëèëî âäîñêîíàëèòè ñèñòåìàòèêó òà ô³ëîãåí³þ
áàãàòüîõ ãðóï ðîñëèí, ùî ïîâ’ÿçàíî ³ç îñîáëè-
âîñòÿìè ñòðóêòóðíî¿ îðãàí³çàö³¿ öèõ ãåí³â [2,
7, 10]. 5S ðÄÍÊ íàëåæèòü äî êëàñó òàíäåì-
íèõ ïîâòîðþâàíèõ ïîñë³äîâíîñòåé. Äî ñêëàäó
ïîâòîðþâàíî¿ ä³ëÿíêè 5S ðÄÍÊ âõîäÿòü åâî-
ëþö³éíî êîíñåðâàòèâíà êîäóþ÷à ä³ëÿíêà òà âà-
ð³àáåëüíèé ì³æãåííèé ñïåéñåð (ÌÃÑ). Òðàíñ-
êðèïö³þ 5S ðÄÍÊ çàáåçïå÷óº ÐÍÊ-ïîë³ìåðà-
çà ²²². Ìóòàö³¿, ùî âèíèêàþòü ó ÌÃÑ, íîñÿòü
ïåðåâàæíî íåéòðàëüíèé õàðàêòåð, çàâäÿêè ÷îìó
óíèêàþòü 䳿 äîáîðó ³ çäàòí³ äî íàêîïè÷åííÿ.
Òàêèì ÷èíîì, ÌÃÑ åâîëþö³îíóº ç á³ëüøîþ
øâèäê³ñòþ, í³æ ³íø³ ä³ëÿíêè ãåíîìó, ùî äîç-
âîëÿº âèÿâèòè ð³çíèöþ ó ïîñë³äîâíîñò³ ÌÃÑ
ó áëèçüêîñïîð³äíåíèõ âèä³â, à ³íêîëè – â îê-
ðåìèõ ïîïóëÿö³é [11, 12]. Ïîâòîðè 5S ðÄÍÊ
îðãàí³çîâàí³ â ãåíîì³ ó êëàñòåðè, ùî ëîêà-
ë³çîâàí³ íà îäí³é ÷è äåê³ëüêîõ õðîìîñîìàõ.
ʳëüê³ñòü ïîâòîð³â íà ãåíîì ñêëàäຠó âèùèõ
ðîñëèí â³ä äåê³ëüêîõ ñîòåíü äî òèñÿ÷³ [13].
Îñîáëèâ³ñòþ åâîëþö³¿ ðèáîñîìíèõ ãåí³â, ÿê ³
³íøèõ ïîâòîðþâàíèõ ïîñë³äîâíîñòåé, º ÿâè-
ùå êîíöåðòíî¿ (óçãîäæåíî¿) åâîëþö³¿ [14]. Öå
ÿâèùå ïîëÿãຠó çäàòíîñò³ äî ãîìîãåí³çàö³¿
(âèð³âíþâàííÿ ð³çíèö³) âñ³õ ïîñë³äîâíîñòåé
â ìåæàõ êëàñòåðà, à ³íêîëè – ³ ì³æ êëàñòåðà-
ìè. Äëÿ 5S ðÄÍÊ ãîìîãåí³çàö³ÿ, îñîáëèâî ì³æ
ïîñë³äîâíîñòÿìè ç ð³çíèõ êëàñòåð³â, íå çàâæ-
äè â³äáóâàºòüñÿ øâèäêî òà åôåêòèâíî, òîìó
ìîæëèâå îäíî÷àñíå ³ñíóâàííÿ â ãåíîì³ äâîõ òà
á³ëüøå âàð³àíò³â 5S ðÄÍÊ, ùî â³äð³çíÿþòüñÿ çà
íóêëåîòèäíîþ ïîñë³äîâí³ñòþ. Çîêðåìà, öå äàº
ìîæëèâ³ñòü ðîçð³çíÿòè ãåíîìè áàòüê³âñüêèõ
ôîðì ó àëîïîë³ïëî¿äíèõ âèä³â ÷åðåç áàãàòî ïî-
êîë³íü ï³ñëÿ ¿õíüîãî âèíèêíåííÿ [15].
4
Þ.Î. Òèíêåâè÷, Ð.À. Âîëêîâ
ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2014. Ò. 48. ¹ 1
Îðãàí³çàö³ÿ 5S ðÄÍÊ âèâ÷åíà íåîäíîð³ä-
íî ñåðåä ð³çíèõ ãðóï êâ³òêîâèõ ðîñëèí. Äëÿ
ïðåäñòàâíèê³â äåÿêèõ òàêñîí³â, çîêðåìà ðîäó
Rosa L., º ëèøå ïîîäèíîê³ â³äîìîñò³ ïðî ñòðóê-
òóðó 5S ðÄÍÊ [16, 17], ïðîòå ñàìå äëÿ âèâ÷åí-
íÿ ô³ëîãåí³¿ òàêèõ ãðóï, ÿê ð³ä Rosa, äå çíà÷-
íèé â³äñîòîê ñêëàäàþòü âèäè àëîïîë³ïëî¿äíî-
ãî ïîõîäæåííÿ, ïåðñïåêòèâíèì º âèêîðèñòàí-
íÿ 5S ðÄÍÊ ÿê ìîëåêóëÿðíîãî ìàðêåðà ÌÃÑ.
Êëþ÷åì äî ðîçóì³ííÿ ïðîöåñ³â ìîëåêóëÿðíî¿
åâîëþö³¿ ó ãåíîìàõ ïîë³ïëî¿äíèõ âèä³â Rosa
ìîæå áóòè âèâ÷åííÿ ãåíåòè÷íî¿ ñòðóêòóðè ¿õ
³ìîâ³ðíèõ äèïëî¿äíèõ ïîïåðåäíèê³â, äî ÿêèõ,
çîêðåìà, â³äíîñÿòü øèïøèíó çìîðøêóâàòó – Ro-
sa rugosa Thunb. Íàøèìè ïîïåðåäí³ìè äîñë³ä-
æåííÿìè 5S ðÄÍÊ ïðåäñòàâíèê³â ðîäó Rosa
ïðîäåìîíñòðîâàíî ìîæëèâ³ñòü âèêîðèñòàííÿ 5S
ðÄÍÊ ÿê ìîëåêóëÿðíîãî ìàðêåðà ó òàêñîíî-
ì³÷íèõ äîñë³äæåííÿõ ö³º¿ ãðóïè [17].  íàø³é ëà-
áîðàòî𳿠òàêîæ ïðîâåäåíî äîñë³äæåííÿ îðãà-
í³çàö³¿ 5S ðÄÍÊ ³íøîãî äèïëî¿äíîãî ïðåäñòàâ-
íèêà ðîäó – R. nitida Willd. [18]. Ïîð³âíÿâøè
íóêëåîòèäíó ñòðóêòóðó ÌÃÑ ð³çíèõ äèïëî¿ä³â,
ìîæíà ñêëàñòè óÿâëåííÿ ïðî øâèäê³ñòü ìî-
ëåêóëÿðíî¿ åâîëþö³¿ íåêîäóþ÷èõ ïîñë³äîâíîñ-
òåé â ðîä³ Rosa L. Òîìó ìåòîþ äàíî¿ ðîáî-
òè áóëè êëîíóâàííÿ, ðîçøèôðîâêà òà àíàë³ç
íóêëåîòèäíî¿ ïîñë³äîâíîñò³ ÌÃÑ 5S ðÄÍÊ R.
rugosa.
Ìàòåð³àëè ³ ìåòîäè. Ìàòåð³àëîì äëÿ äîñë³ä-
æåííÿ áóâ çðàçîê Rosa rugosa, íàäàíèé Áîòàí³÷-
íèì ñàäîì ×åðí³âåöüêîãî íàö³îíàëüíîãî óí³-
âåðñèòåòó. Çàãàëüíó ÄÍÊ åêñòðàãóâàëè çã³äíî
ç³ ñòàíäàðòíèì ïðîòîêîëîì. ßê äåòåðãåíò âèêî-
ðèñòîâóâàëè öåòàâëîí [19, 20].
Ïîâòîðþâàíó ä³ëÿíêó 5S ðÄÍÊ àìïë³ô³êó-
âàëè çà äîïîìîãîþ ïîë³ìåðàçíî¿ ëàíöþãîâî¿
ðåàêö³¿ (ÏËÐ). Äëÿ öüîãî çàñòîñîâóâàëè ïàðó
óí³âåðñàëüíèõ ïðàéìåð³â 5S-14a-Not (5 -CAAT
GCGGCCGCGAGAGTAGTACTAGGATGCG
TGAC-3 ) i 5S-15-Not (5 -CATTGCGGCCGCT
TATCGGAGTTCTGATGGGA-3 ), ùî º êîìï-
ëåìåíòàðíèìè äî ä³ëÿíîê êîäóþ÷î¿ ïîñë³äîâ-
íîñò³ 5S ðÄÍÊ äâîäîëüíèõ ðîñëèí òà ì³ñòÿòü íà
5 -ê³íö³ äîäàòêîâèé ñàéò âï³çíàâàííÿ ðåñòðèê-
òàçè NotI (GCGGCCGC), ÿêèé âèêîðèñòîâóâà-
ëè äëÿ êëîíóâàííÿ ÏËÐ-ïðîäóêò³â. Çàñòîñîâàí³
ïðàéìåðè çàáåçïå÷óþòü àìïë³ô³êàö³þ ïîâíîãî
ÌÃÑ òà ôëàíêóþ÷èõ ä³ëÿíîê êîäóþ÷î¿ ïîñë³-
äîâíîñò³ (ðèñ. 1). Ðåàêö³éíà ñóì³ø çàãàëüíèì
îá’ºìîì 25 ìêë ì³ñòèëà íàñòóïí³ êîìïîíåíòè:
0,1 ìêã çàãàëüíî¿ ãåíîìíî¿ ÄÍÊ, 1,0 îä. àêò.
ÄÍÊ-ïîë³ìåðàçè (HotStartTaq DNA polymera-
se, «Qiagen», ÑØÀ), 0,1 ìÌ ñóì³ø³ äåçîêñèðè-
áîíóêëåîòèäòðèôîñôàò³â, 1 × áóôåð äëÿ ÏËÐ òà
0,5 ìêÌ êîæíîãî ç äâîõ ïðàéìåð³â – 5S-14a-
Not i 5S-15-Not.
ÏËÐ çä³éñíþâàëè ³ç âèêîðèñòàííÿì àìïë³-
ô³êàòîðà MiniCycler (MJ Research Inc., ÑØÀ)
çà òàêîþ ïðîãðàìîþ: 1) ïî÷àòêîâà àêòèâàö³ÿ
ÄÍÊ-ïîë³ìåðàçè – 95 ºÑ, 15 õâ; 2) äåíàòóðà-
ö³ÿ ÄÍÊ – 94 ºÑ, 45 ñ; 3) ã³áðèäèçàö³ÿ ïðàé-
ìåð³â – 55 ºÑ, 1 õâ; 4) ñèíòåç ÄÍÊ – 72 ºÑ,
2,5 õâ; 5) çàê³í÷åííÿ àìïë³ô³êàö³¿ – 72 ºÑ, 8 õâ;
6) ïðèïèíåííÿ ðåàêö³¿ – 4 ºÑ. Çàãàëüíà ê³ëü-
ê³ñòü öèêë³â àìïë³ô³êàö³¿ – 35. Ïðîäóêòè ÏËÐ
àíàë³çóâàëè çà äîïîìîãîþ åëåêòðîôîðåçó â 2%-
íîìó àãàðîçíîìó ãåë³.
Ïðè êëîíóâàíí³ ÏËÐ-ïðîäóêòè îáðîáëÿëè
ðåñòðèêòàçîþ NotI òà ë³ãóâàëè ïî êîìïë³ìåí-
òàðíèõ ëèïêèõ ê³íöÿõ ó ñàéò Eco52² ïëàçì³äè
pLitmus 38³ ç âèêîðèñòàííÿì Ò4 ÄÍÊ-ë³ãàçè
(«Fermentas», Ëèòâà). Òðàíñôîðìàö³þ êîìïå-
òåíòíèõ êë³òèí ë³í³¿ Escherichia coli XL-blue
ïðîâîäèëè ìåòîäîì åëåêòðîïîðàö³¿ ç âèêîðèñ-
òàííÿì ïðèëàäó E. coli Pulser («BioRad», ÑØÀ).
Êëîíè, ùî ì³ñòèëè ðåêîìá³íàíòí³ ïëàçì³äè, âè-
ÿâëÿëè ìåòîäîì blue-white colony selection òà ïå-
ðåâ³ðÿëè ðåñòðèêòàçíèì êàðòóâàííÿì. Ïëàçì³-
äè âèä³ëÿëè çà äîïîìîãîþ ëóæíîãî ë³çèñó [19].
Ôåðìåíòàòèâí³ ðåàêö³¿ ïðîâîäèëè çã³äíî ç ðå-
êîìåíäàö³ÿìè ô³ðìè-ïîñòà÷àëüíèêà.
Ðåêîìá³íàíòí³ ïëàçì³äè, ùî ì³ñòèëè ³íñåð-
òè 5S ðÄÍÊ, ñåêâåíóâàëè ç âèêîðèñòàííÿì
Big Due Terminator Cycle Sequencing Kit íà
ïðèëàä³ ABI Prism 310 (PE Applied Biosystems,
ÑØÀ). Ïåðâèííó îáðîáêó îòðèìàíî¿ íóêëåî-
òèäíî¿ ïîñë³äîâíîñò³ ïðîâîäèëè çà äîïîìîãîþ
êîìï’þòåðíî¿ ïðîãðàìè Chromas òà ïàêåòó ïðî-
ãðàì êîìï’þòåðíî¿ îáðîáêè äàíèõ DNASTAR
[21]. Âèð³âíþâàííÿ ïîñë³äîâíîñòåé çä³éñíþâà-
ëè ìåòîäîì Clustal V [22]. Äëÿ ïîøóêó ïîñë³-
äîâíîñòåé ó áàç³ äàíèõ Genbank êîðèñòóâàëèñü
ïðîãðàìîþ BLAST [23].
Ðåçóëüòàòè äîñë³äæåíü òà ¿õ îáãîâîðåííÿ. Çà
äîïîìîãîþ åëåêòðîôîðåòè÷íîãî àíàë³çó îòðè-
ìàíèõ ÏËÐ-ïðîäóêò³â âñòàíîâëåíî ³ñíóâàííÿ â
ãåíîì³ R. rugosa ëèøå îäíîãî âàð³àíòà 5S ðÄÍÊ
ïîñë³äîâíîñòåé ³ç äîâæèíîþ ïîâòîðþâàíî¿ îäè-
íèö³ â ìåæàõ áëèçüêî 520–550 ï.í. Îòðè-
5
Còðóêòóðíà îðãàí³çàö³ÿ 5S ðèáîñîìíî¿ ÄÍÊ Rosa rugosa
ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2014. Ò. 48. ¹ 1 5
ìàí³ ÏËÐ-ïðîäóêòè êëîíîâàíî ó áàêòåð³àëüíèé
âåêòîð.
²ç âèêîðèñòàííÿì blue-white colony selection
â³ä³áðàíî 12 êîëîí³é òðàíñôîðìàíò³â, ç ÿêèõ âè-
ä³ëåíî çðàçêè ïëàçì³äíî¿ ÄÍÊ. Äëÿ ïåðåâ³ðêè
íàÿâíîñò³ ³íñåðòó 5S ðÄÍÊ ïðîâåëè îáðîáêó
öèõ ïëàçì³ä ðåñòðèêòàçîþ Eco52I, ùî ïðèçâî-
äèëà äî óòâîðåííÿ äâîõ ôðàãìåíò³â ÄÍÊ íà
åëåêòðîôîðåãðàì³. Ôðàãìåíò á³ëüøîãî ðîçì³ðó
äëÿ âñ³õ çðàçê³â ìàâ äîâæèíó ïðèáëèçíî 2800–
2900 ï.í., ùî â³äïîâ³äຠðîçì³ðó ë³í³éíî¿ ÄÍÊ
âåêòîðà pLitmus 38. Ôðàãìåíò ìåíøîãî ðîçì³-
ðó â á³ëüøîñò³ çðàçê³â (çîêðåìà, êëîí pRoru-
T1) ìàâ äîâæèíó ïðèáëèçíî 530 ï.í., ùî â³ä-
ïîâ³äຠðîçì³ðó ÏËÐ-ïðîäóêòó 5S ðÄÍÊ R. ru-
gosa, ïðîòå äëÿ êëîíó pRoru-T54 çàô³êñîâàíî
íåçâè÷àéíèé ðîçì³ð ³íñåðòó ~600 ï.í. Çàãàëîì
³äåíòèô³êîâàíî ï’ÿòü ïëàçì³ä ç³ âñòàâêîþ, ç
ÿêèõ äëÿ ñåêâåíóâàííÿ â³ä³áðàíî äâ³ – pRoru-
T1 òà pRoru-T54.
Êîìï’þòåðíà îáðîáêà îòðèìàíèõ â ðåçóëü-
òàò³ ñåêâåíóâàííÿ ïîñë³äîâíîñòåé ïîêàçàëà, ùî
êëîí pRoru-T1 ì³ñòèòü ÌÃÑ 5S ðÄÍÊ, ôëàí-
êîâàíèé ç îáîõ áîê³â ôðàãìåíòàìè êîäóþ÷î¿
ïîñë³äîâíîñò³. Áåçïîñåðåäíüî ç ïîë³ë³íêåðíè-
ìè ä³ëÿíêàìè âåêòîðà ìåæóþòü ïîñë³äîâíîñò³
ïðàéìåð³â, âèêîðèñòàíèõ ïðè ïðîâåäåíí³ ÏËÐ.
Çàãàëüíà äîâæèíà ³íñåðòó ñòàíîâèëà 524 ï.í.
Ñòðóêòóðà âñòàâêè êëîíó pRoru-T54 âèÿâèëàñü
á³ëüø ñêëàäíîþ.  í³é çíàéäåíî äâ³ ïîñë³äîâ-
íîñò³ ð³çíîãî ðîçì³ðó, ùî ðîçì³ùóâàëèñü îäíà
çà îäíîþ, ³ êîæíà ç íèõ îáìåæóâàëàñü ç äâîõ
áîê³â ïàðîþ ïðàéìåð³â. Î÷åâèäíî, â äàíîìó âè-
ïàäêó ó âåêòîð êëîíîâàíî îäðàçó äâ³ êîﳿ ÏËÐ-
ïðîäóêò³â. Äîâæèíà êîðîòêîãî ³íñåðòó ñòàíî-
âèëà 79 ï.í., äîâãîãî – 526 ï.í. Êîðîòêèé ³í-
ñåðò ì³ñòèâ íóêëåîòèäíó ïîñë³äîâí³ñòü ôðàã-
ìåíòà êîäóþ÷î¿ ä³ëÿíêè 5S ðÄÍÊ. Öåé ôàêò
âêàçóº íà íàÿâí³ñòü âêîðî÷åíèõ ì³íîðíèõ âàð³-
àíò³â 5S ðÄÍÊ ó ãåíîì³ R. rugosa, ùî ïðèñóòí³ â
íåçíà÷í³é ê³ëüêîñò³, çàâäÿêè ÷îìó âîíè íå âè-
ÿâëÿþòüñÿ ïðè åëåêòðîôîðåòè÷íîìó ðîçä³ëåíí³
ÏËÐ-ïðîäóêò³â. Òå, ùî êîäóþ÷à ä³ëÿíêà â êî-
ðîòêîìó ³íñåðò³ º íåïîâíîþ, à ÌÃÑ â³äñóòí³é,
äîçâîëÿº â³äíåñòè öþ ïîñë³äîâí³ñòü äî ãðóïè
ïñåâäîãåí³â.
Âèçíà÷åííÿ ìåæ êîäóþ÷î¿ ä³ëÿíêè äîçâî-
ëèëî âñòàíîâèòè ðîçì³ðè ÌÃÑ, ùî ñêëàäàþòü
äëÿ ïîñë³äîâíîñòåé pRoru-T1 ³ äîâãîãî ³íñåðòó
pRoru-T54, – 410 òà 412 ï.í. â³äïîâ³äíî. Ïî-
ä³áí³ ðîçì³ðè – 400 òà 392 ï.í. – âñòàíîâëåí³
íàìè ðàí³øå äëÿ îñíîâíîãî (ìàæîðíîãî) âàð³-
àíòà ÌÃÑ ³íøîãî äèïëî¿äíîãî âèäó – R. nitida
[18].  ö³ëîìó íàâåäåí³ çíà÷åííÿ äîâæèí ÌÃÑ
ïîòðàïëÿþòü â õàðàêòåðí³ äëÿ åóêàð³îò³â ìåæ³
â³ä 200 äî 900 ï.í. [24, 25]. Äîâæèíà àìïë³ô³êî-
Ðèñ. 1. Ñòðóêòóðíà îðãàí³çàö³ÿ 5S ðÄÍÊ Rosa rugosa. Íàâåäåíî ôðàãìåíòè âèð³âíþâàííÿ íóêëåîòèäíèõ
ïîñë³äîâíîñòåé ÌÃÑ, ùî ì³ñòÿòü ðåãóëÿòîðí³ åëåìåíòè. Ñòð³ëêàìè âêàçàíî ðîçòàøóâàííÿ ïðàéìåð³â Pr1 òà
Pr2. Æèðíèì êóðñèâîì ïîçíà÷åíî ìîòèâè çîâí³øíüîãî ïðîìîòîðà òà òåðì³íàòîðà
6
Þ.Î. Òèíêåâè÷, Ð.À. Âîëêîâ
ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2014. Ò. 48. ¹ 1
âàíèõ ôðàãìåíò³â êîäóþ÷î¿ ä³ëÿíêè ñòàíîâèòü
57 ï.í. (âêëþ÷àþ÷è ïîñë³äîâí³ñòü ïðàéìåðà
5S-14a-Not) òà 56 ï.í. (âêëþ÷àþ÷è ïîñë³äîâ-
í³ñòü ïðàéìåðà 5S-15-Not), ùî ðàçîì ³ç ÷àñ-
òèíîþ, ÿêà çàëèøàºòüñÿ íåàìïë³ô³êîâàíîþ, ñòà-
íîâèòü 120 ï.í. Òàêèé ðîçì³ð êîäóþ÷î¿ ä³ëÿí-
êè º õàðàêòåðíèì äëÿ ïåðåâàæíî¿ á³ëüøîñò³ âè-
ä³â âèùèõ ðîñëèí [24]. Ó äâîõ ïðîàíàë³çîâàíèõ
íàìè ïîñë³äîâíîñòÿõ 5S ðÐÍÊ R. rugosa íå çíàé-
äåíî ìóòàö³é â êîäóþ÷³é ä³ëÿíö³. Ïîñë³äîâíîñ-
ò³ êîäóþ÷î¿ ä³ëÿíêè òà ì³æãåííîãî ñïåéñåðà ³ñ-
òîòíî â³äð³çíÿþòüñÿ çà íóêëåîòèäíèì ñêëàäîì.
Òàê, äëÿ pRoru-T1 ³ pRoru-T54 â³äñîòîê À-Ò
ïàð ñòàíîâèòü 45,1 â êîäóþ÷³é ä³ëÿíö³ ³ 62,0 –
â ÌÃÑ.
Âèð³âíþâàííÿ îòðèìàíèõ íóêëåîòèäíèõ ïî-
ñë³äîâíîñòåé ïîêàçàëî, ùî ð³âåíü ïîä³áíîñò³
ì³æ ïîâòîðàìè 5S ðÄÍÊ ç êëîí³â pRoru-T1 ³
pRoru-T54 ñòàíîâèòü 98,7 %. Ïðè öüîìó â ìå-
æàõ êîäóþ÷î¿ ä³ëÿíêè â³äì³ííîñòåé íå âèÿâëå-
íî, à â ÌÃÑ çíàéäåíî ëèøå îäíó äâîíóêëåîòèä-
íó äåëåö³þ òà äâ³ îäíîíóêëåîòèäí³ òðàíñâåðñ³¿.
Ïîñë³äîâí³ñòü ïñåâäîãåíà ç êëîíó pRoru-T54
ì³ñòèòü äâà ïðàéìåðè, ì³æ ÿêèìè ðîçì³ùåíèé
ôðàãìåíò ç 3 -ê³íöÿ êîäóþ÷î¿ ä³ëÿíêè äîâæè-
íîþ 29 ï.í. Ïîð³âíÿíî ç àíàëîã³÷íèì ôðàã-
ìåíòîì â ïîñë³äîâíîñòÿõ pRoru-T1 ³ pRoru-T54
çíàéäåíî òðè íóêëåîòèäí³ çàì³íè – îäíó òðàí-
çèö³þ ³ äâ³ òðàíñâåðñ³¿.
Ïîøóê âàæëèâèõ äëÿ ³í³ö³àö³¿ òðàíñêðèïö³¿
åëåìåíò³â ïîêàçàâ, ùî â ÌÃÑ êëîí³â pRoru-T1
³ pRoru-T54 ïðèñóòí³ ñèãíàëè, ùî â³äïîâ³äàþòü
çîâí³øí³ì ðåãóëÿòîðíèì åëåìåíòàì ïðîìîòîðà
5S ðÄÍÊ [26]. Äî òàêèõ ñèãíàë³â íàëåæèòü øåñòè-
íóêëåîòèäíèé ìîòèâ ÒÀÒÀÒÀ, ðîçì³ùåíèé íà
3 -ê³íö³ ÌÃÑ â ïîçèö³¿ –28 ï.í. â³ä 5 -ê³íöÿ
êîäóþ÷î¿ ä³ëÿíêè, à òàêîæ ìîòèâè GC òà C â
ïîçèö³ÿõ –12 òà –1 ï.í. â³äïîâ³äíî (ðèñ. 1). Áåç-
ïîñåðåäíüî ï³ñëÿ 3 -ê³íöÿ êîäóþ÷î¿ ä³ëÿíêè òà-
êîæ ëîêàë³çîâàíà ïîñë³äîâí³ñòü îë³ãî-Ò, ùî âè-
êîíóº ôóíêö³þ òåðì³íàòîðà òðàíñêðèïö³¿ ÐÍÊ-
ïîë³ìåðàçè ²²² [26].
 ñåðåäí³é ÷àñòèí³ ÌÃÑ (ïîçèö³ÿ –255) çíà-
éäåíî ä³ëÿíêó, ùî ñêëàäàºòüñÿ ç ÷îòèðüîõ êî-
ðîòêèõ ñóáïîâòîð³â, äîâæèíà ÿêèõ êîëèâàºòüñÿ
â³ä 6 äî 9 ï.í. (ðèñ. 2). Êîíñåíñóñíà ïîñë³äîâ-
í³ñòü öèõ ñóáïîâòîð³â âèãëÿäຠÿê ÒÒGGGÑÑ.
Äëÿ ïîð³âíÿííÿ ñòðóêòóðíî¿ îðãàí³çàö³¿ ïî-
âòîðþâàíèõ îäèíèöü 5S ðÄÍÊ R. rugosa òà R.
nitida ç ³íøèìè ïðåäñòàâíèêàìè ðîäèíè Rosa-
ceae âèêîðèñòîâóâàëè ïîñë³äîâíîñò³ ç áàçè
äàíèõ GenBank. Âñ³ íàÿâí³ â GenBank ïîñë³äîâ-
íîñò³ 5S ðÄÍÊ ðîçîöâ³òèõ íàëåæàòü ïðåäñòàâ-
íèêàì îäí³º¿ òðèáè – Sanguisorbeae, ùî â³äíî-
ñèòüñÿ äî ï³äðîäèíè Rosoideae. Âñòàíîâëåíî, ùî
â ìåæàõ êîäóþ÷î¿ ä³ëÿíêè ì³æ ïîñë³äîâíîñ-
òÿìè 5S ðÄÍÊ R. rugosa òà ³íøèõ ðîçîöâ³òèõ
³ñíóþòü ëèøå ïîîäèíîê³ íóêëåîòèäí³ çàì³íè.
Íà ïðîòèâàãó öüîìó ïîä³áí³ñòü ì³æ ÌÃÑ âèä³â
ðîäó Rosa òà ïðåäñòàâíèê³â òðèáè Sanguisorbeae
âèÿâèëàñü íèçüêîþ. Çà ðåçóëüòàòàìè âèð³âíþ-
âàííÿ ïîñë³äîâíîñòåé ÌÃÑ ðîçðàõîâàíî â³äñî-
гâåíü ïîä³áíîñò³ ÌÃÑ 5S ðÄÍÊ ïðåäñòàâíèê³â ï³äðîäèíè Rosoideae
Ïðèì³òêà. Rosa rugosa: 1 – pRoru-T1; 2 – pRoru-T54; Rosa nitida: 3 – pRoni-T30, 4 – pRoni-T32, 5 –
pRoni-T31 (ì³íîðíèé âàð³àíò ³ç âêîðî÷åíèì ÌÃÑ) [18]; 6 – Sanguisorba officinalis (GenBank Accession No
EU931696.1); 7 – Cliffortia arborea (EU931700); 8 – Cliffortia graminea (EU931711); 9 – Acaena cylindristachya
(EU931697); 10 – Acaena latebrosa (EU931698).
Íîìåð
êëîíà
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
– 98,3
–
96,3
96,3
–
97,5
97,5
99,5
–
93,7
94,7
94,7
92,2
–
36,7
36,4
40,0
40,0
36,4
–
26,5
26,6
27,6
27,7
34,5
35,6
–
40,3
39,2
33,3
37,8
41,7
76,0
85,1
–
39,9
40,2
33,8
32,2
35,9
72,4
65,9
76,4
–
36,0
35,6
36,3
34,6
35,4
78,9
73,4
75,7
64,0
–
7
Còðóêòóðíà îðãàí³çàö³ÿ 5S ðèáîñîìíî¿ ÄÍÊ Rosa rugosa
ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2014. Ò. 48. ¹ 1
òîê ïîä³áíîñò³ ì³æ íèìè (òàáëèöÿ). Öåé ïîêàç-
íèê ñêëàäàâ 98,3 % äëÿ ÌÃÑ äâîõ ³íñåðò³â 5S
ðÄÍÊ R. rugosa òà çíàõîäèâñÿ â ìåæàõ 92,2–
99,5 % ì³æ ð³çíèìè êëîíàìè R. nitida. Âèñî-
êîþ áóëà òàêîæ ïîä³áí³ñòü ì³æ ÌÃÑ îáîõ äè-
ïëî¿äíèõ âèä³â ðîäó Rosa – â³ä 93,7 äî 97,5 %.
Îäíàê ãîìîëîã³ÿ ì³æ ïîñë³äîâíîñòÿìè ÌÃÑ R.
rugosa òà ³íøèõ ïðåäñòàâíèê³â Rosaceae âèÿâè-
ëàñü íåçíà÷íîþ ³ íå ïåðåâèùóâàëà 40,3 %. Ïðè
öüîìó çîíàìè ç íàéâèùèì ð³âíåì ïîä³áíîñò³
ì³æ âñ³ìà âèêîðèñòàíèìè ïîñë³äîâíîñòÿìè âè-
ÿâèëèñü 3 -ê³íöåâà ä³ëÿíêà ÌÃÑ, ÿêà ì³ñòèòü
çîâí³øí³ åëåìåíòè ïðîìîòîðà ÐÍÊ-ïîë³ìåðàçè
²²², òà öåíòðàëüíà ÷àñòèíà, ùî â³äïîâ³äຠçîí³
ñóáïîâòîð³â.
ßê ïîêàçàâ àíàë³ç, ñòðóêòóðíà îðãàí³çàö³ÿ ïî-
ñë³äîâíîñòåé ìàæîðíîãî êëàñó 5S ðÄÍÊ R. ru-
gosa º àíàëîã³÷íîþ äî öèõ ãåí³â ³ç ³íøèõ åóêà-
ð³îòè÷íèõ îðãàí³çì³â [10, 11, 22, 24]. Âèñîêèé
ð³âåíü íóêëåîòèäíî¿ ãîìîëî㳿 êîäóþ÷î¿ ä³ëÿí-
êè ãåí³â 5S ðÐÍÊ ÿê óñåðåäèí³ ðîäó, òàê ³ â ïî-
ð³âíÿíí³ ç ³íøèìè ïðåäñòàâíèêàìè ðîçîöâ³òèõ
óçãîäæóºòüñÿ ç óÿâëåííÿìè ïðî íèçüêó øâèä-
ê³ñòü ¿¿ ìîëåêóëÿðíî¿ åâîëþö³¿ [6, 14, 15, 26].
Íåçíà÷íà ê³ëüê³ñòü ìóòàö³é â äâîõ äîñë³äæåíèõ
êëîíàõ ÌÃÑ R. rugosa ñâ³ä÷èòü ïðî ³ñíóâàí-
íÿ ïðîöåñ³â ãîìîãåí³çàö³¿ ì³æ òàíäåìíèìè
ïîâòîðàìè 5S ðÄÍÊ [14], ïðîòå ïîñë³äîâí³ñòü
êîðîòêîãî ³íñåðòó êëîíó pRoru-T54, ³ìîâ³ðíî,
óíèêëà ãîìîãåí³çàö³¿. Ïîâíà â³äñóòí³ñòü ÌÃÑ
ðàçîì ç åëåìåíòàìè ïðîìîòîðó ÐÍÊ-ïîë³ìå-
ðàçè ²²², ÷àñòêîâà åë³ì³íàö³ÿ êîäóþ÷î¿ ä³ëÿí-
êè òà íàÿâí³ ìóòàö³¿ ó ¿¿ ñêëàä³ º ÿñêðàâèì
ñâ³ä÷åííÿì ïåðåòâîðåííÿ ó ïñåâäîãåí. Ïåðåäó-
ìîâîþ âèíèêíåííÿ ïñåâäîãåíà ìîæå áóòè çì³-
íà ëîêàë³çàö³¿ îêðåìîãî ïîâòîðó 5S ðÄÍÊ ó
ãåíîì³, íàñë³äêîì ÷îãî º â³äñóòí³ñòü ãîìîãåí³-
çàö³¿ ³ç ôóíêö³îíàëüíî ïîâíîö³ííèìè ïîâòî-
ðàìè [28]. Öåé ïðîöåñ ³ìîâ³ðíî º ñåëåêòèâíî
íåéòðàëüíèì, îñê³ëüêè ïîñë³äîâí³ñòü ïñåâäî-
ãåíà íå çàçíຠåë³ì³íàö³¿, íåçâàæàþ÷è íà âòðà-
òó íåþ ôóíêö³¿ êîäóâàííÿ 5S ðÐÍÊ. Îñòàí-
íº ï³äòâåðäæóº òî÷êó çîðó, ùî ãåíîì ðîñëèí
ì³ñòèòü á³ëüøå ïîâòîð³â 5S ðÄÍÊ, í³æ íåîá-
õ³äíî äëÿ çàáåçïå÷åííÿ íîðìàëüíîãî á³îãåíå-
çó ðèáîñîì.
Íåñïîä³âàíèì º âèÿâëåíèé íàìè ôàêò âè-
ñîêî¿ ïîä³áíîñò³ ïîñë³äîâíîñò³ ÌÃÑ äâîõ äè-
ïëî¿äíèõ âèä³â ð³çíîãî ãåîãðàô³÷íîãî ïîõîä-
æåííÿ – R. rugosa (Ñõ³äíà Àç³ÿ) òà R. nitida
(ϳâí³÷íà Àìåðèêà). ²ìîâ³ðíèì ïîÿñíåííÿì
öüîãî ìîæå áóòè òå, ùî ðàä³àö³ÿ çãàäàíèõ âè-
ä³â â³ä ñï³ëüíîãî ïðåäêà ³ ì³ãðàö³ÿ R. nitida äî
ϳâí³÷íî¿ Àìåðèêè ìàëà ì³ñöå ó ïîð³âíÿíî íå-
äàëåêîìó ãåîëîã³÷íîìó ìèíóëîìó.  òîé æå ÷àñ
R. nitida (òà äåÿê³ ³íø³ âèäè ðîäó Rosa [17]) íà
â³äì³íó â³ä R. rugosa ì³ñòèòü ó ãåíîì³ ì³íîðíèé
âàð³àíò 5S ðÄÍÊ, ÿêèé âèíèê çà ðàõóíîê äåëå-
ö³¿ ÷àñòèíè (196 ï.í.) ÌÃÑ [18]. ²ìîâ³ðíî, öåé
ì³íîðíèé âàð³àíò âòðà÷åíèé ç ãåíîìó R. rugosa
ï³ñëÿ äèâåðãåíö³¿ â³ä ñï³ëüíîãî ïðåäêà.
Ïîðÿä ç öèì íèçüêèé ð³âåíü ïîä³áíîñò³ ì³æ
ÌÃÑ Rosa òà ³íøèìè ïðåäñòàâíèêàìè ï³äðîäè-
íè Rosoideae âêàçóº íà âèñîêó øâèäê³ñòü åâîëþ-
ö³¿ ö³º¿ ä³ëÿíêè ãåíîìó ³ çíà÷íó ô³ëîãåíåòè÷íó
â³äñòàíü ì³æ òðèáàìè Sanguisorbeae òà Roseae â
ìåæàõ ï³äðîäèíè. Îñíîâí³ ä³ëÿíêè ãîìîëî㳿
çíàõîäÿòüñÿ â äèñòàëüí³é òà öåíòðàëüí³é ÷àñ-
òèíàõ ÌÃÑ. ²ñíóâàííÿ âèñîêîãî ð³âíÿ ïîä³á-
íîñò³ â äèñòàëüí³é çîí³ ñïåéñåðà ïîâ’ÿçàíî ç
ðîçòàøóâàííÿì ó í³é çîâí³øí³õ ðåãóëÿòîðíèõ
ä³ëÿíîê. Òàêèì ÷èíîì, ìóòàö³¿, ùî âèíèêàþòü
â ö³é çîí³, íå çàâæäè º åâîëþö³éíî íåéòðàëü-
íèìè ³ ìîæóòü çàçíàâàòè åë³ì³íàö³¿ çà 䳿 ñòàá³-
ë³çóþ÷îãî äîáîðó. Ùî ñòîñóºòüñÿ öåíòðàëüíî¿
÷àñòèíè ÌÃÑ, òî â äàíîìó âèïàäêó ³ñíóâàííÿ
ãðóïè ñóáïîâòîð³â ç âèñîêèì ð³âíåì ãîìîëî㳿 ó
ð³çíèõ âèä³â, î÷åâèäíî, ïîòðåáóº ïîøóêó ³íøî-
ãî ïîÿñíåííÿ. ²ìîâ³ðíî, ùî öÿ ïîñë³äîâí³ñòü
âèíèêëà íà ðàíí³õ åòàïàõ åâîëþö³¿ òàêñîíó, äî
ðàä³àö³¿ òðèá Sanguisorbeae òà Roseae, ùî ïåðåä-
áà÷ຠìîíîô³ëåòè÷íå ïîõîäæåííÿ âñ³º¿ ï³äðî-
Ðèñ. 2. Ïîð³âíÿííÿ ïåðâèííî¿ íóêëåîòèä-
íî¿ ïîñë³äîâíîñò³ çîíè ñóáïîâòîð³â â öåíò-
ðàëüí³é ÷àñòèí³ ÌÃÑ 5S ðÄÍÊ ïðåäñ-
òàâíèê³â ï³äðîäèíè Rosoideae (GenBank
Acc. Nos, äèâ. òàáëèöþ)
8
Þ.Î. Òèíêåâè÷, Ð.À. Âîëêîâ
ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2014. Ò. 48. ¹ 1
äèíè. Ïðîòå, âñòàíîâëåííÿ ïðè÷èí òà ìåõàí³ç-
ì³â êîíñåðâàö³¿ ö³º¿ ä³ëÿíêè ïîòðåáóº ïîäàëü-
øèõ äîñë³äæåíü.
Âèñíîâêè. Âèõîäÿ÷è ç îòðèìàíèõ åêñïåðè-
ìåíòàëüíèõ äàíèõ, ìîæíà êîíñòàòóâàòè, ùî â
ãåíîì³ R. rugosa ïðèñóòí³é ºäèíèé ìàæîðíèé
òèï ôóíêö³îíàëüíî àêòèâíèõ ïîñë³äîâíîñòåé
5S ðÄÍÊ. Êîäóþ÷à ä³ëÿíêà äåìîíñòðóº âèñîêó
³äåíòè÷í³ñòü â ìåæàõ ï³äðîäèíè Rosoideae. Íà
â³äì³íó â³ä öüîãî ÌÃÑ çàçíàâ øâèäêî¿ åâîëþ-
ö³¿ âíàñë³äîê íàêîïè÷åííÿ ñåëåêòèâíî íåéò-
ðàëüíèõ ìóòàö³é. Âèñîêà øâèäê³ñòü åâîëþö³¿
ÌÃÑ îáìåæóº ìîæëèâ³ñòü éîãî âèêîðèñòàííÿ
â äîñë³äæåííÿõ ô³ëîãåí³¿ òà ñèñòåìàòèêè òàê-
ñîí³â âèñîêîãî ðàíãó. Ãîìîãåíí³ñòü ïîñë³äîâ-
íîñòåé ÌÃÑ ç ãåíîìó R. rugosa, ùî êîíòðîëþ-
ºòüñÿ êîíöåðòíîþ åâîëþö³ºþ, â³äêðèâຠïåðñ-
ïåêòèâè âèêîðèñòàííÿ éîãî ÿê ìîëåêóëÿðíîãî
ìàðêåðà äëÿ âèâ÷åííÿ òàêñîíî쳿 òà åâîëþö³¿
ðîäó Rosa.
Y.O. Tynkevich, R.A. Volkov
Yurii Fedkovych University of Chernivtsi, Ukraine
E-mail: ra.volkov@gmail.com
STRUCTURAL ORGANIZATION
OF 5S RIBOSOMAL DNA OF ROSA RUGOSA
In order to clarify molecular organization of the genomic
region encoding 5S rRNA in diploid species Rosa ru-
gosa several 5S rDNA repeated units were cloned and
sequenced. Analysis of the obtained sequences revealed
that only one length variant of 5S rDNA repeated units,
which contains intact promoter elements in the inter-
genic spacer region (IGS) and appears to be transcrip-
tionally active is present in the genome. Additionally,
a limited number of 5S rDNA pseudogenes lacking a
portion of coding sequence and the complete IGS was
detected. A high level of sequence similarity (from 93,7
to 97,5 %) between the IGS of major 5S rDNA variants
of East Asian R. rugosa and North American R. nitida
was found indicating comparatively recent divergence of
these species.
Þ.Î. Òûíêåâè÷, Ð.À. Âîëêîâ
CÒÐÓÊÒÓÐÍÀß ÎÐÃÀÍÈÇÀÖÈß
5S ÐÈÁÎÑÎÌÍÎÉ ÄÍÊ ROSA RUGOSA
Ñ öåëüþ èçó÷åíèÿ ìîëåêóëÿðíîé îðãàíèçàöèè ó÷àñò-
êà ãåíîìà, êîäèðóþùåãî 5S ðÐÍÊ ó äèïëîèäíîãî
âèäà Rosa rugosa, êëîíèðîâàíû è ñåêâåíèðîâàíû íå-
ñêîëüêî ïîâòîðÿþùèõñÿ åäèíèö 5S ðÄÍÊ. Àíàëèç
ïîëó÷åííûõ ïîñëåäîâàòåëüíîñòåé ïîêàçàë íàëè÷èå â
ãåíîìå åäèíñòâåííîé ïî äëèíå ïîâòîðÿþùåéñÿ åäè-
íèöû âàðèàíòà 5S ðÄÍÊ, êîòîðûé ñîäåðæèò èíòàêò-
íûå ïðîìîòîðíûå ýëåìåíòû â ìåæãåííîì ñïåéñåðå
(ÌÃÑ) è, âåðîÿòíî, ÿâëÿåòñÿ òðàíñêðèïöèîííî àê-
òèâíûì. Îáíàðóæåíî òàêæå îãðàíè÷åííîå êîëè÷åñò-
âî 5S ðÄÍÊ-ïñåâäîãåíîâ, ó êîòîðûõ ïîëíîñòüþ óò-
ðà÷åíû ÌÃÑ è ÷àñòü êîäèðóþùåãî ó÷àñòêà. Âûñîêèé
óðîâåíü ñõîäñòâà (îò 93,7 äî 97,5 %), âûÿâëåííûé
ïðè ñðàâíåíèè ÌÃÑ ìàæîðíûõ âàðèàíòîâ 5S ðÄÍÊ
âîñòî÷íîàçèàòñêîé R. rugosa è ñåâåðîàìåðèêàíñêîé
R. nitida, ñâèäåòåëüñòâóåò îá îòíîñèòåëüíî íåäàâíåé
äèâåðãåíöèè ýòèõ âèäîâ.
ÑÏÈÑÎÊ Ë²ÒÅÐÀÒÓÐÈ
1. Volkov R.A., Zanke C., Panchuk I.I., Hemleben V. Mo-
lecular evolution of 5S rDNA of Solanum species
(sect. Petota): application for molecular phylogeny
and breeding // Theor. Appl. Genet. – 2001. –
103. – P. 1273–1282.
2. Komarova N.Y., Grimm G.W., Hemleben V., Volkov R.A.
Molecular evolution of 35S rDNA and taxonomic
status of Lycopersicon within Solanum sect. Petota //
Plant Syst. Evol. – 2008. – 276, ¹ 1/2. – P. 59–71.
3. Goncharov N.P., Golovnina K.A., Kondratenko E.Y.
Taxonomy and molecular phylogeny of natural and
artificial wheat species // Breed. Sci. – 2009. – 59. –
P. 492–498.
4. Martínez-Azorín M., Crespo M., Juan A., Fay M.
Molecular phylogenetics of subfamily Ornithogaloi-
deae (Hyacinthaceae) based on nuclear and plas-
tid DNA regions, including a new taxonomic ar-
rangement // Ann. Bot. – 2010. – 107. – P. 1–37.
5. Shulaev V., Korban S., Sosinski B. et al. Multiple
models for rosaceae genomics // Plant Phys. –
2008. – 147. – P. 985–1003.
6. Volkov R.A., Panchuk I.I., Borisjuk L.G., Borisjuk M.V.
Plant rDNA: Organization, evolution, and use //
Cytology and Genetics. – 2003. – 37, ¹ 1. – P.
68–72.
7. Blattner F.R. Progress in phylogenetic analysis and a
new infrageneric classification of the barley genus
Hordeum (Poaceae: Triticeae) // Breed. Sci. – 2009. –
59. – P. 471–480.
8. Volkov R.A., Kozeretska I.A., Kyryachenko S.S. et al.
Molecular evolution and variability of ITS1–ITS2
in populations of Deschampsia antarctica from two
regions of the maritime Antarctic // Pol. Sci. –
2010. – 4, ¹ 3. – P. 469–478.
9. Wisseman V. The genus Rosa (Rosoideae, Rosaceae)
revisited: molecular analysis of nrITS-1 and atpB–
rbcL intergenic spacer (IGS) versus conventional
taxonomy // Bot. J. Linn. Soc. – 2005. – 147. –
P. 275–290.
10. Grimm G.W., Denk T. The reticulate origin of modern
plane trees (Platanus, Platanaceae): A nuclear marker
puzzle // Taxon. – 2010. – 59, ¹ 1. – P. 134–147.
9
Còðóêòóðíà îðãàí³çàö³ÿ 5S ðèáîñîìíî¿ ÄÍÊ Rosa rugosa
ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2014. Ò. 48. ¹ 1
11. Poczai P., Hyvönen J. Nuclear ribosomal spacer re-
gions in plant phylogenetics: problems and pros-
pects // Mol. Biol. Rep. – 2010. – 37. – P. 1897–
1912.
12. Denk T., Grimm G. The oaks of western Eurasia : Tra-
ditional classifications and evidence from two nuclear
markers // Taxon. – 2010. – 59. – P. 351–366.
13. Cloix C., Tutois S., Mathieu O. et al. Analysis of 5S
rDNA arrays in Arabidopsis thaliana: physical map-
ping and chromosome-specific polymorphisms //
Genome Res. – 2000. – 10. – P. 679–690.
14. Coen E.S., Thoday J.M., Dover G. Rate of turnover
of structural variants in the rDNA gene family of
Drosophila melanogaster // Nature. – 1982. – 295,
¹ 5850. – P. 564–568.
15. Fulnecek J., Lim K.Y., Leitch A.R. et al. Evolution
and structure of 5S rDNA loci in allotetraploid Ni-
cotiana tabacum and its putative parental species //
Heredity. – 2002. – 88. – P. 19–25.
16. Lim K.Y., Werlemark G., Matyasek R. et al. Evo-
lutionary implication of permanent odd polyploidy
in the stable sexual, pentaploid of Rosa canina L. //
Heredity. – 2005. – 94. – P. 501–506.
17. Òèíêåâè÷ Þ.Î., Ñåðáåíþê Ì.Ï., Âîëêîâ Ð.À. Ïîë³-
ìîðô³çì 5S ðÄÍÊ âèä³â ðîäó Rosa L. // Íàóê. ³ñí.
×åðí³â. óí-òó. – 2009. – ¹ 455. – Ñ. 142–144.
18. Òèíêåâè÷ Þ.Î., Âîëêîâ Ð.À. Ñòðóêòóðíà îðãàí³-
çàö³ÿ 5S ðèáîñîìàëüíî¿ ÄÍÊ Rosa nitida Wild. //
³ñí. Óêð. ò-âà ãåíåòèê³â ³ ñåëåêö³îíåð³â. – 2011. –
9, ¹ 2. – Ñ. 276–282.
19. Sambrook J., Fritsch E., Maniatis T. Molecular clo-
ning. Cold Spring Harbor. – New York : Cold Spring
Harbor Laboratory, 1989.
20. Ïàí÷óê ².²., Âîëêîâ Ð.À. Ïðàêòèêóì ç ìîëåêóëÿðíî¿
ãåíåòèêè. – ×åðí³âö³ : Ðóòà, 2007. – 120 ñ.
21. DNASTAR, 1998. MegAlign 3.18 edit. Software
distributed by DNASTAR Inc., Madison, WI, USA.
22. Higgins D.G., Bleasby A.J., Fuchs R. CLUSTAL V: imp-
roved software for multiple sequence alignment //
Bioinformatics. – 1992. – 8. – P. 189–191.
23. Altschul S.F., Madden T.L., Schaffer A.A. et al. Gap-
ped BLAST and PSIBLAST: a new generation of
protein database search programs // Nucl. Acids
Res. – 1997. – 25. – P. 3389–3402.
24. Singh D., Ahuja P.S. 5S rDNA gene diversity in tea
(Camellia sinensis (L.) O. Kuntze) and its use for
variety identification // Genome. – 2006. – 49. –
P. 91–96.
25. Cherevatov O.V., Volkov R.A. Organization of 5S ri-
bosomal DNA of Melitaea trivia // Cytology and
Genetics. – 2011. – 45, ¹ 2. – P. 115–120.
26. Douet J., Tourmente S. Transcription of the 5S rRNA
heterochromatic genes is epigenetically controlled in
Arabidopsis thaliana and Xenopus laevis // Heredity. –
2007. – 99. – P. 5–13.
27. Suzuki H., Moriwaki K., Sakura S. Sequences and
evolutionary analysis of mouse 5S rDNAs // Mol.
Biol. Evol. – 1994. – 11. – P. 704–710.
28. Takahata N., Kimura M. A model of evolutionary
base substitutions and its application with special
reference to rapid change of pseudogenes // Gene-
tics. – 1981. – 98. – P. 641–657.
Íàä³éøëà 19.11.12
<<
/ASCII85EncodePages false
/AllowTransparency false
/AutoPositionEPSFiles true
/AutoRotatePages /None
/Binding /Left
/CalGrayProfile (Dot Gain 20%)
/CalRGBProfile (sRGB IEC61966-2.1)
/CalCMYKProfile (U.S. Web Coated \050SWOP\051 v2)
/sRGBProfile (sRGB IEC61966-2.1)
/CannotEmbedFontPolicy /Error
/CompatibilityLevel 1.4
/CompressObjects /Tags
/CompressPages true
/ConvertImagesToIndexed true
/PassThroughJPEGImages true
/CreateJobTicket false
/DefaultRenderingIntent /Default
/DetectBlends true
/DetectCurves 0.0000
/ColorConversionStrategy /CMYK
/DoThumbnails false
/EmbedAllFonts true
/EmbedOpenType false
/ParseICCProfilesInComments true
/EmbedJobOptions true
/DSCReportingLevel 0
/EmitDSCWarnings false
/EndPage -1
/ImageMemory 1048576
/LockDistillerParams false
/MaxSubsetPct 100
/Optimize true
/OPM 1
/ParseDSCComments true
/ParseDSCCommentsForDocInfo true
/PreserveCopyPage true
/PreserveDICMYKValues true
/PreserveEPSInfo true
/PreserveFlatness true
/PreserveHalftoneInfo false
/PreserveOPIComments false
/PreserveOverprintSettings true
/StartPage 1
/SubsetFonts true
/TransferFunctionInfo /Apply
/UCRandBGInfo /Preserve
/UsePrologue false
/ColorSettingsFile ()
/AlwaysEmbed [ true
]
/NeverEmbed [ true
]
/AntiAliasColorImages false
/CropColorImages true
/ColorImageMinResolution 300
/ColorImageMinResolutionPolicy /OK
/DownsampleColorImages true
/ColorImageDownsampleType /Bicubic
/ColorImageResolution 1200
/ColorImageDepth -1
/ColorImageMinDownsampleDepth 1
/ColorImageDownsampleThreshold 1.50000
/EncodeColorImages false
/ColorImageFilter /DCTEncode
/AutoFilterColorImages true
/ColorImageAutoFilterStrategy /JPEG
/ColorACSImageDict <<
/QFactor 0.15
/HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1]
>>
/ColorImageDict <<
/QFactor 0.15
/HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1]
>>
/JPEG2000ColorACSImageDict <<
/TileWidth 256
/TileHeight 256
/Quality 30
>>
/JPEG2000ColorImageDict <<
/TileWidth 256
/TileHeight 256
/Quality 30
>>
/AntiAliasGrayImages false
/CropGrayImages true
/GrayImageMinResolution 300
/GrayImageMinResolutionPolicy /OK
/DownsampleGrayImages true
/GrayImageDownsampleType /Bicubic
/GrayImageResolution 1200
/GrayImageDepth -1
/GrayImageMinDownsampleDepth 2
/GrayImageDownsampleThreshold 1.50000
/EncodeGrayImages false
/GrayImageFilter /DCTEncode
/AutoFilterGrayImages true
/GrayImageAutoFilterStrategy /JPEG
/GrayACSImageDict <<
/QFactor 0.15
/HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1]
>>
/GrayImageDict <<
/QFactor 0.15
/HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1]
>>
/JPEG2000GrayACSImageDict <<
/TileWidth 256
/TileHeight 256
/Quality 30
>>
/JPEG2000GrayImageDict <<
/TileWidth 256
/TileHeight 256
/Quality 30
>>
/AntiAliasMonoImages false
/CropMonoImages true
/MonoImageMinResolution 1200
/MonoImageMinResolutionPolicy /OK
/DownsampleMonoImages true
/MonoImageDownsampleType /Bicubic
/MonoImageResolution 1200
/MonoImageDepth -1
/MonoImageDownsampleThreshold 1.50000
/EncodeMonoImages false
/MonoImageFilter /CCITTFaxEncode
/MonoImageDict <<
/K -1
>>
/AllowPSXObjects false
/CheckCompliance [
/None
]
/PDFX1aCheck false
/PDFX3Check false
/PDFXCompliantPDFOnly false
/PDFXNoTrimBoxError true
/PDFXTrimBoxToMediaBoxOffset [
0.00000
0.00000
0.00000
0.00000
]
/PDFXSetBleedBoxToMediaBox true
/PDFXBleedBoxToTrimBoxOffset [
0.00000
0.00000
0.00000
0.00000
]
/PDFXOutputIntentProfile (None)
/PDFXOutputConditionIdentifier ()
/PDFXOutputCondition ()
/PDFXRegistryName ()
/PDFXTrapped /False
/CreateJDFFile false
/Description <<
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
/BGR <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>
/CHS <FEFF4f7f75288fd94e9b8bbe5b9a521b5efa7684002000410064006f006200650020005000440046002065876863900275284e8e9ad88d2891cf76845370524d53705237300260a853ef4ee54f7f75280020004100630072006f0062006100740020548c002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e003000204ee553ca66f49ad87248672c676562535f00521b5efa768400200050004400460020658768633002>
/CHT <FEFF4f7f752890194e9b8a2d7f6e5efa7acb7684002000410064006f006200650020005000440046002065874ef69069752865bc9ad854c18cea76845370524d5370523786557406300260a853ef4ee54f7f75280020004100630072006f0062006100740020548c002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e003000204ee553ca66f49ad87248672c4f86958b555f5df25efa7acb76840020005000440046002065874ef63002>
/CZE <FEFF005400610074006f0020006e006100730074006100760065006e00ed00200070006f0075017e0069006a007400650020006b0020007600790074007600e101590065006e00ed00200064006f006b0075006d0065006e0074016f002000410064006f006200650020005000440046002c0020006b00740065007200e90020007300650020006e0065006a006c00e90070006500200068006f006400ed002000700072006f0020006b00760061006c00690074006e00ed0020007400690073006b00200061002000700072006500700072006500730073002e002000200056007900740076006f01590065006e00e900200064006f006b0075006d0065006e007400790020005000440046002000620075006400650020006d006f017e006e00e90020006f007400650076015900ed007400200076002000700072006f006700720061006d0065006300680020004100630072006f00620061007400200061002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e0030002000610020006e006f0076011b006a016100ed00630068002e>
/DAN <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>
/DEU <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>
/ESP <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>
/ETI <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>
/FRA <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>
/GRE <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>
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
/HRV (Za stvaranje Adobe PDF dokumenata najpogodnijih za visokokvalitetni ispis prije tiskanja koristite ove postavke. Stvoreni PDF dokumenti mogu se otvoriti Acrobat i Adobe Reader 5.0 i kasnijim verzijama.)
/HUN <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>
/ITA <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>
/JPN <FEFF9ad854c18cea306a30d730ea30d730ec30b951fa529b7528002000410064006f0062006500200050004400460020658766f8306e4f5c6210306b4f7f75283057307e305930023053306e8a2d5b9a30674f5c62103055308c305f0020005000440046002030d530a130a430eb306f3001004100630072006f0062006100740020304a30883073002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e003000204ee5964d3067958b304f30533068304c3067304d307e305930023053306e8a2d5b9a306b306f30d530a930f330c8306e57cb30818fbc307f304c5fc59808306730593002>
/KOR <FEFFc7740020c124c815c7440020c0acc6a9d558c5ec0020ace0d488c9c80020c2dcd5d80020c778c1c4c5d00020ac00c7a50020c801d569d55c002000410064006f0062006500200050004400460020bb38c11cb97c0020c791c131d569b2c8b2e4002e0020c774b807ac8c0020c791c131b41c00200050004400460020bb38c11cb2940020004100630072006f0062006100740020bc0f002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e00300020c774c0c1c5d0c11c0020c5f40020c2180020c788c2b5b2c8b2e4002e>
/LTH <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>
/LVI <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>
/NLD (Gebruik deze instellingen om Adobe PDF-documenten te maken die zijn geoptimaliseerd voor prepress-afdrukken van hoge kwaliteit. De gemaakte PDF-documenten kunnen worden geopend met Acrobat en Adobe Reader 5.0 en hoger.)
/NOR <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>
/POL <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>
/PTB <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>
/RUM <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>
/RUS <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>
/SKY <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>
/SLV <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>
/SUO <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>
/SVE <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>
/TUR <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>
/UKR <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>
/ENU (Use these settings to create Adobe PDF documents best suited for high-quality prepress printing. Created PDF documents can be opened with Acrobat and Adobe Reader 5.0 and later.)
>>
/Namespace [
(Adobe)
(Common)
(1.0)
]
/OtherNamespaces [
<<
/AsReaderSpreads false
/CropImagesToFrames true
/ErrorControl /WarnAndContinue
/FlattenerIgnoreSpreadOverrides false
/IncludeGuidesGrids false
/IncludeNonPrinting false
/IncludeSlug false
/Namespace [
(Adobe)
(InDesign)
(4.0)
]
/OmitPlacedBitmaps false
/OmitPlacedEPS false
/OmitPlacedPDF false
/SimulateOverprint /Legacy
>>
<<
/AddBleedMarks false
/AddColorBars false
/AddCropMarks false
/AddPageInfo false
/AddRegMarks false
/ConvertColors /ConvertToCMYK
/DestinationProfileName ()
/DestinationProfileSelector /DocumentCMYK
/Downsample16BitImages true
/FlattenerPreset <<
/PresetSelector /MediumResolution
>>
/FormElements false
/GenerateStructure false
/IncludeBookmarks false
/IncludeHyperlinks false
/IncludeInteractive false
/IncludeLayers false
/IncludeProfiles false
/MultimediaHandling /UseObjectSettings
/Namespace [
(Adobe)
(CreativeSuite)
(2.0)
]
/PDFXOutputIntentProfileSelector /DocumentCMYK
/PreserveEditing true
/UntaggedCMYKHandling /LeaveUntagged
/UntaggedRGBHandling /UseDocumentProfile
/UseDocumentBleed false
>>
]
>> setdistillerparams
<<
/HWResolution [2400 2400]
/PageSize [612.000 792.000]
>> setpagedevice
|