Скорость морфогенеза эмбрионов человека после криоконсервирования
Изучали скорость морфогенеза нативными и криоконсервированными эмбрионами человека. Показано, что после криоконсервирования ускоряются темпы дробления, что выражается в раннем формировании бластоцисты и увеличении общего количества бластомеров. Факторы криоконсервирования оказывают влияние на способ...
Збережено в:
| Дата: | 2005 |
|---|---|
| Автор: | |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Russian |
| Опубліковано: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2005
|
| Назва видання: | Проблемы криобиологии и криомедицины |
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/134620 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Скорость морфогенеза эмбрионов человека после криоконсервирования / М.П. Петрушко // Проблемы криобиологии. — 2005. — Т. 15, № 1. — С. 56-62. — Бібліогр.: 17 назв. — рос. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-134620 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-1346202025-02-10T01:15:05Z Скорость морфогенеза эмбрионов человека после криоконсервирования Rate of human embryo morphogenesis after cryopreservation Петрушко, М.П. Криоконсервирование биообъектов Изучали скорость морфогенеза нативными и криоконсервированными эмбрионами человека. Показано, что после криоконсервирования ускоряются темпы дробления, что выражается в раннем формировании бластоцисты и увеличении общего количества бластомеров. Факторы криоконсервирования оказывают влияние на способность бластоцисты к выходу из zona pellucida, что требует проведения вспомогательного “вылупления”. Вивчали швидкість морфогенезу нативними і кріоконсервованими ембріонами людини. Показано, що після кріоконсервування відбувається прискорення темпів дроблення, що виражається в ранньому формуванні бластоцисти і збільшенні загальної кількості бластомерів. Фактори кріоконсервування впливають на здатність бластоцисти до виходу з zona pellucida, що вимагає проведення процедури допоміжного “вилуплення”. There was studied the morphogenesis rate by both native and cryopreserved human embryos. Cleavage rate after cryopreservation was shown to accelerate, that manifested in an early blastocyst formation and increase of total blastomere amount. Cryopreservation factors were shown to influence the blastocyst capability of leaving zona pellucida, that requires the procedure of assisted hatching to be performed. 2005 Article Скорость морфогенеза эмбрионов человека после криоконсервирования / М.П. Петрушко // Проблемы криобиологии. — 2005. — Т. 15, № 1. — С. 56-62. — Бібліогр.: 17 назв. — рос. https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/134620 618.2/4:615.361.013.014.41:616.089.843 ru Проблемы криобиологии и криомедицины application/pdf Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Russian |
| topic |
Криоконсервирование биообъектов Криоконсервирование биообъектов |
| spellingShingle |
Криоконсервирование биообъектов Криоконсервирование биообъектов Петрушко, М.П. Скорость морфогенеза эмбрионов человека после криоконсервирования Проблемы криобиологии и криомедицины |
| description |
Изучали скорость морфогенеза нативными и криоконсервированными эмбрионами человека. Показано, что после криоконсервирования ускоряются темпы дробления, что выражается в раннем формировании бластоцисты и увеличении общего количества бластомеров. Факторы криоконсервирования оказывают влияние на способность бластоцисты к выходу из zona pellucida, что требует проведения вспомогательного “вылупления”. |
| format |
Article |
| author |
Петрушко, М.П. |
| author_facet |
Петрушко, М.П. |
| author_sort |
Петрушко, М.П. |
| title |
Скорость морфогенеза эмбрионов человека после криоконсервирования |
| title_short |
Скорость морфогенеза эмбрионов человека после криоконсервирования |
| title_full |
Скорость морфогенеза эмбрионов человека после криоконсервирования |
| title_fullStr |
Скорость морфогенеза эмбрионов человека после криоконсервирования |
| title_full_unstemmed |
Скорость морфогенеза эмбрионов человека после криоконсервирования |
| title_sort |
скорость морфогенеза эмбрионов человека после криоконсервирования |
| publisher |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| publishDate |
2005 |
| topic_facet |
Криоконсервирование биообъектов |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/134620 |
| citation_txt |
Скорость морфогенеза эмбрионов человека после криоконсервирования / М.П. Петрушко // Проблемы криобиологии. — 2005. — Т. 15, № 1. — С. 56-62. — Бібліогр.: 17 назв. — рос. |
| series |
Проблемы криобиологии и криомедицины |
| work_keys_str_mv |
AT petruškomp skorostʹmorfogenezaémbrionovčelovekaposlekriokonservirovaniâ AT petruškomp rateofhumanembryomorphogenesisaftercryopreservation |
| first_indexed |
2025-12-02T10:27:34Z |
| last_indexed |
2025-12-02T10:27:34Z |
| _version_ |
1850391925335523328 |
| fulltext |
56ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 15, 2005, №1
PROBLEMS
OF CRYOBILOGY
Vol. 15, 2005, №1
УДК 618.2/4:615.361.013.014.41:616.089.843
Скорость морфогенеза эмбрионов человека после
криоконсервирования
М.П. ПЕТРУШКО
Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины, г. Харьков
Rate of Human Embryo Morphogenesis after Cryopreservation
M.P. PETRUSHKO
Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine of the National Academy
of Sciences of the Ukraine, Kharkov
Изучали скорость морфогенеза нативными и криоконсервированными эмбрионами человека. Показано, что после
криоконсервирования ускоряются темпы дробления, что выражается в раннем формировании бластоцисты и увеличении
общего количества бластомеров. Факторы криоконсервирования оказывают влияние на способность бластоцисты к выходу из
zona pellucida, что требует проведения вспомогательного “вылупления”.
Ключевые слова: криоконсервирование, эмбрионы человека, морфогенез.
Вивчали швидкість морфогенезу нативними і кріоконсервованими ембріонами людини. Показано, що після
кріоконсервування відбувається прискорення темпів дроблення, що виражається в ранньому формуванні бластоцисти і
збільшенні загальної кількості бластомерів. Фактори кріоконсервування впливають на здатність бластоцисти до виходу з zona
pellucida, що вимагає проведення процедури допоміжного “вилуплення”.
Ключові слова: кріоконсервування, ембріони людини, морфогенез.
There was studied the morphogenesis rate by both native and cryopreserved human embryos. Cleavage rate after cryopreservation
was shown to accelerate, that manifested in an early blastocyst formation and increase of total blastomere amount. Cryopreservation
factors were shown to influence the blastocyst capability of leaving zona pellucida, that requires the procedure of assisted
hatching to be performed.
Key-words: cryopreservation, human embryos, morphogenesis.
UDC 618.2/4:615.361.013.014.41:616.089.843
Адрес для корреспонденции: Петрушко М.П., Институт проблем
криобиологии и криомедицины НАН Украины, ул. Переяславская,
23, г. Харьков, Украина 61015; тел.:+38 (057) 772-11-19, факс: +38
(057) 772-00-84, e-mail: cryo@online.kharkov.ua
Address for correspondence: Petrushko M.P., Institute for Problems
of Cryobiology&Cryomedicine of the Natl. Acad. Sci. of Ukraine, 23,
Pereyaslavskaya str.,Kharkov, Ukraine 61015; tel.:+38 (057) 7721119,
fax: +38 (057) 7720084, e-mail:cryo@online.kharkov.ua
Долгосрочное хранение эмбрионов человека
при низких температурах является перспективным
направлением их дальнейшего использования во
вспомогательных репродуктивных технологиях.
После отогрева необходима тщательная оценка
морфологических параметров эмбрионов: учи-
тывают количество бластомеров, их форму,
размеры, расположение и степень фрагментации
цитоплазмы. Повреждения, встречающиеся после
криоконсервирования, как правило, механической
или осмотической природы: деформации и разрыв
zona pellucida, лизис бластомеров, выход фрагмен-
тов цитоплазмы в перивителлиновое пространство
[14]. Объективным критерием морфофункци-
ональной целостности деконсервированных
эмбрионов является способность к возобновлению
митоза с дальнейшим дроблением in vitro до
стадии бластоцисты [3].
Первые деления эмбрионов человека имеют
ряд специфических особенностей, в частности,
относительно медленный темп, асинхронность,
наличие компактизации, при которой между
клетками эмбриона устанавливается система
щелевых контактов. Этот процесс заканчивается
Long-term storage of human embryos at low
temperatures is known to be a perspective trend for
their further use in assisted reproduction technologies
After thawing we need a thorough evaluation of
morphological parameters of embryos: we take into
account the number of blastomeres, their shape, sizes,
location and cytoplasm fragmentation degree.
Damages occurred after cryopreservation are mostly
of mechanical either osmotic origin: zona pellucida
deformations and break, blastomere lysis, cytoplasm
fragments release into perivitelline space [14].
Capability of renewing mitosis with further in vitro
cleavage up to the stage of blastocyst is known to be
an o bjective criterion of morphofunctional integrity
of frozen-thawed embryos [3].
Primary cleavages of human embryos possess a
number of specific peculiarities, in particular, a relatively
slow rate, asynchronicity, compactness when among
the embryo cells it is established the system of slot
contacts. This process finishes with blastocyst
formation (final stage of early embryonic development)
capable of existing in vitro and possessing the primary
differentiation on a distinctly manifested inner cell mass
and trophectoderm [1].
КРИОКОНСЕРВИРОВАНИЕ
БИООБЪЕКТОВ
CRYOPRESERVATION
OF BIOSYSTEMS
57
формированием бластоцисты (последняя стадия
раннего эмбрионального развития), способной
существовать in vitro и обладающей первой
дифференцировкой на четко выраженную внутрен-
нюю клеточную массу и трофэктодерму [1].
По данным [4] частота формирования бласто-
цисты нативными эмбрионами составляет 30-40%.
Сведения о частоте образования бластоцист
деконсервированными эмбрионами человека
единичны, поскольку эмбрионы, как правило,
переносят либо сразу после оттаивания, либо после
их краткосрочного культивирования [5]. Данные о
формировании замороженно-оттаянными эмбрио-
нами различных типов бластоцист и общем
количестве бластомеров в таких эмбрионах
отсутствуют.
Цель исследования – определение выжи-
ваемости эмбрионов человека после криоконсер-
вирования, изучение скорости морфогенеза и
сопоставление количества бластомеров в экви-
валентных стадиях формирования бластоцисты
нативными и деконсервированными эмбрионами.
Материалы и методы
Эмбрионы были получены в циклах лечения
бесплодия методом экстракорпорального оплодо-
творения (ЭКО) инсеминацией in vitro аспириро-
ванных ооцитов пациентки спермиями мужа.
Индукцию суперовуляции, аспирацию ооцитов,
подготовку спермиев к оплодотворению, культи-
вирование гамет и эмбрионов проводили по
стандартной технологии ЭКО [2].
Эмбрионы, которые культивировали in vitro в
течение 120 ч, были разделены на две группы: 1 –
контрольная, 2 – исследуемая. Показатель
формирования бластоцист рассчитывали как отно-
шение эмбрионов, сформировавших бластоцисты,
к общему количеству эмбрионов, полученных в
данной группе .
Замораживание-оттаивание проводили по
методу Lassalle с модификацией [8]. Эмбрионы
охлаждали со скоростью 2°С/мин от 22 до 5,5°С.
После “сидинга” охлаждение вели со скоростью
0,3°С/мин до –35°С. Затем соломинки погружали
в жидкий азот.
Оттаивание эмбрионов происходило быстро
инкубированием соломинок при комнатной
температуре в течение 30с. После отогрева
эмбрионы переносили в среды с убывающей
концентрацией растворов криопротекторов.
Морфологическую оценку эмбрионов прово-
дили через час после деконсервирования и через
120 ч культивирования в среде IVF-medium (Меdi-
Cult, Дания) микроскопированием (Olympus IX-60,
×400).
According to the data [4] the rate of blastocyst
formation by native embryos makes 30-40%. The data
on the rate of blastocyst formation by frozen-thawed
human embryos are not numerous, for the embryos
are transferred as a rule either immediately after
thawing or following their short-term culturing [5]. No
data are available on forming various blastocyst types
by frozen-thawed embryos, and neither on the total
blastomere number in such embryos.
Present study was aimed to determining the human
embryo viability following the cryopreservation,
studying the rate of morphogenesis and comparing the
blastomeres number in equivalent blastocyst formation
steps by native and frozen-thawed embryos.
Materials and methods
Embryos were obtained during treatment cycles
using of infertility IVF by in vitro insemination of the
patient’s aspirated oocytes by husband’s sperm.
Superovulation induction, oocytes aspiration, sperm
preparing for fertilization and gametes and embryo
culturing were done according to the standard IVF
protocol [2].
Embryos which were in vitro cultured for 120 hours
were divided into 2 groups: control group 1, group under
study 2. Blastocyst formation index was calculated on
the number of embryos obtained in this group.
Freeze-thawing was accomplished according to the
modified Lassalle method [8]. Embryos were cooled
from 22 to 5.5°C with the rate of 2°C/min. Following
seeding the cooling was performed with the rate of
0.3°C/min down to –35°C, followed by immersing the
straws into liquid nitrogen.
Embryo thawing was done in a quick mode by a
30-sec straws incubation at room temperature. After
thawing the embryos were transferred into media with
the decreasing concentration of cryoprotectant
solutions.
Embryos were morphologically estimated with
microscope (Olympus IX-60, ×400), in 1 hour after
thawing and in 120 hours of culturing in IVF medium
(Medi-Cult, Denmark).
Blastocysts were classified according to Gardner
[10]: early compacted embryo with the start of
cavitation; cavited blastocele occupies less than a half
of embryo size; expanded blastocele occupies more
than a half of embryo size with clearly seen
trophectoderm and inner cell mass; blastocyst in the
stage of hatching: thinning and break of zona
pellucida, while trophectoderm leaves the membrane.
Fixed blastocysts were prepared according to
Tarkovsky method [13]. Blastomere number was
calculated while there was counted the level of nuclei
basophility, presence of nucleoli and amount of pyknotic
cells.
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 15, 2005, №1
PROBLEMS
OF CRYOBILOGY
Vol. 15, 2005, №1
58
Statistical results were processed using Excel
software (Microsoft Office 2000) Statistical signi-
ficance of the differences was determined by Student’s
criterion.
Results and discussion
The total number of 334 oocytes was aspirated in
the control group and 342 ones in the group under study,
that made 11.5±0.8 and 12.7±0.8 oocytes per patient,
respectively. The number of fertilized oocytes made
272 (81.4%) and 292 (85.4%). Blastocyst stage was
reached by 78 (50%) of 156 control group embryos.
After thawing the 163 embryos of the studied group
16 (9.8) of them completely lyzed, 21 (12.9%) embryos
retained less than 50%, in the rest ones (77.3%) more
than 50% blastomeres were intact.
Following culturing the blastocyst stages reached
24 (16.3%), that was significantly lower than in the
control group (p<0.01), while at 100% blastomeres
integrity the number of blastocysts was the highest
(53.3%), which is comparable with the number of
blastocysts formed by native embryos.
The table presents blastocysts number in equivalent
development stages of native and cryopreserved
embryos in 120 hours of culturing.
As the table demonstrates, frequency of reaching
the stage of blastocyst leaving the membrane is
significantly higher than for cryopreserved ones, whilst
diverse blastomere number is peculiar for equivalent
development stages (Figure).
Frozen-thawed embryos demonstrate the acce-
lerated cleavage rates comparing to native ones.
Studied index for blastocyst maturation in culture
is often used as prognostic one at the end of IFV
treatment cycle [5].
To analyze the blastocyst cleavage rate by native
and frozen-thawed embryos in vitro up to blastocyst
stage there has been carried out a considerable pro-
found research.
The data are contradictory however. Some authors
consider the number of embryos capable of developing
up to the blastocyst stage following freeze-thawing
decreases twice if compared with native control [6].
Other researchers noticed that cryopreservation
showed no effect on blastocyst rate formation [16].
This index is to depends rather on culturing conditions:
nutritive media composition and presence of co-
culturing systems [9].
Rate of blastocyst formation is influenced by
blastomere integrity following freeze-thawing. Thus at
100% blastomere integrity the rate of blastocyst
formation makes more than 40%, while the damage
of 50% of cells causes the value reduction down to 20%.
The question of fragmentation influence on blasto-
cyst formation is presently under active discussion. The
Бластоцисты классифицировали по Gardner [10]:
ранняя – компактизированный эмбрион с началом
кавитации; кавитированная – бластоцель занимает
менее половины объема эмбриона; экспанди-
рованная – бластоцель занимает более половины
объема эмбриона с хорошо выраженной трофо-
эктодермой и внутренней клеточной массой;
бластоциста в стадии “вылупления”– истончение
и разрыв zona pellucida, при которых трофо-
эктодерма выходит из оболочки.
Фиксированные препараты бластоцист готовили
по методу Тарковского [13]. Подсчитывали коли-
чество бластомеров, при этом учитывали степень
базофильности ядер, наличие ядрышек и коли-
чество пикнотических клеток.
Статистический анализ полученных резуль-
татов проводили с использованием компьютерной
программы Exel из пакета программ Мicrosoft
Office 2000. Достоверность различий определяли
с помощью критериев Стьюдента.
Результаты и обсуждение
Всего было аспирировано 334 ооцита в контроль-
ной группе и 342 ооцита в исследуемой группе, что
составило 11,5±0,8 и 12,7±0,8 ооцитов на пациентку
соответственно. Оплодотворилось 272 (81,4%) и
292 (85,4%) ооцита. Из 156 эмбрионов контрольной
группы 78 (50,0%) достигли стадии бластоцисты.
После деконсервирования 163 эмбрионов
исследуемой группы 16 (9,8%) лизировали пол-
ностью, в 21 (12,9 %) сохранилось менее 50%, в
остальных эмбрионах (77,3%) были интактными
более 50% бластомеров. После культивирования
стадии бластоцисты достигли 24 (16,3%), что
достоверно ниже, чем в контрольной группе
(p<0,01). Причем при 100%-й сохранности
бластомеров выход бластоцист был наибольшим
(53,3%), что сопоставимо с количеством бласто-
цист, сформированных нативными эмбрионами.
Количество бластомеров в эквивалентных
стадиях развития нативных и криоконсервиро-
ванных эмбрионов через 120 ч культивирования
представлено в таблице.
Как видно из таблицы, частота достижения
стадии вышедшей из оболочки бластоцисты для
нативных эмбрионов достоверно выше, чем для
криоконсервированных. В то же время экви-
валентные стадии развития характеризуются
разным количеством бластомеров (рисунок).
Деконсервированные эмбрионы демонстрируют
ускоренные темпы дробления по сравнению с
нативными.
Изучаемый нами показатель созревания блас-
то-цист в культуре часто используют как прогно-
стический при исходе лечебного цикла ЭКО [5].
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 15, 2005, №1
PROBLEMS
OF CRYOBILOGY
Vol. 15, 2005, №1
59
Частота формирования различных типов бластоцист и общее количество
бластомеров в нативных и деконсервированных эмбрионах человека
Rate of various types of blastocyst formation and total number of blastomeres
in native and frozen-thawed human embryos
Для анализа частоты дроб-
ления нативными и деконсерви-
рованными эмбрионами in vitro
до стадии бластоцисты про-
ведено много исследований.
Однако сообщения носят про-
тиворечивый характер. Одни
авторы считают, что количест-
во эмбрионов, способных разви-
ться до стадии бластоцисты
после деконсервирования, сни-
жается в два раза по срав-
нению с нативным контролем
[6]. Другие отмечают, что
криоконсервирование не влияет
на частоту формирования блас-
тоцист [16]. Этот показатель
зависит, скорее всего, от усло-
вий культивирования: состава
питательных сред и наличия
систем сокультивирования [9].
На частоту образования блас-
тоцист оказывает влияние со-
Примечание:* – p<0,1 – по сравнению со второй группой.
Notes: * – p<0.1 comparing to group 2.
хранность бластомеров после деконсервирования.
Так, при 100%-й сохранности бластомеров частота
формирования бластоцист составляет более 40%,
при повреждении 50% клеток этот показатель сни-
жается до 20%.
Активно дискутируется вопрос влияния фраг-
ментации на формирование бластоцисты. Одни
авторы считают, что фрагментация существенно
затрудняет формирование бластоцисты [17], другие
полагают, что клеточная фрагментация не приводит
к нарушению их развития [15]. Если фрагментация
не затрагивает ту часть бластомеров, в которой
локализованы наиболее существенные для разви-
тия компоненты сигнальных путей (рецепторы
факторов роста, регуляторные домены апоптоз-
специфических белков), она не является летальной
для эмбриона. Соответственно эмбрионы с различ-
ными типами пространственной фрагментации
имеют разный потенциал развития и последующей
имплантации.
Кроме того, предполагают, что в процессе фраг-
ментации бластомеры теряют важную состав-
ляющую часть цитоплазмы, а вместе с ней клеточ-
ные органоиды, мРНК и белки [4].
Важным показателем скорости морфогенеза
предымплантационных эмбрионов человека
является четкая корреляция между временем их
культивирования in vitro и количеством бласто-
меров. Показано, что в результате повреждения
отдельных бластомеров количество клеток в
ранней бластоцисте снижается с 58±3,4 для
нативных эмбрионов до 45±3,7 для декон-
idea of some authors is that the fragmentation is greatly
impeding the blastocyst formation [17], another theory
supposes the cell fragmentation not to trouble their
development [15]. It would not be lethal for an embryo
if the fragmentation does not affect the part of blasto-
meres where the most important for development
signal pathways components are localized (growth
factor receptors, regulatory domains of apoptosis-
specific proteins). Respectively, the embryos with
different types of spatial fragmentation have various
development potential and the one for further implan-
tation.
Also, there is a supposition that during fragmentation
the blastomeres lose a very important cytoplasm
component, and along with it the cellular organoids, as
well as mRNA and proteins [4].
Clear correlation of their in vitro culturing time and
blastomere amount is an important index of morpho-
genesis rate of pre-implantation human embryos. As
a result of certain blastomeres damaging the cells
amount in early blastocyst was shown to decrease from
58±3.4 for native embryos down to 45±3.7 for frozen-
thawed ones. Thus the work [11] is of interest where
the 4-cell embryo blastomere was removed and there
was found a correlation of a statistically significant
decrease of cells number in blastocyst in native and
control embryos.
Number of blastocysts is the major criterion for a
vital embryo estimation following freeze-thawing [7].
However cleavage rates and blastocyst formation rate
in 120 hours of culturing are the more reliable viability
criterion.
тсицотсалбыпиТ
sepyttsycotsalB
воноирбмэовтсечилоК
)%(.сба
)%(rebmun.sba,soyrbmeforebmuN
вворемотсалбовтсечилоК
m±Mханоирбмэ
niseremotsalbforebmuN
m±Msoyrbme
хынвитаН
evitaN
-оннежоромаЗ
хынняатто
dewaht-nezorF
хынвитаН
evitaN
-оннежоромаЗ
хынняатто
dewaht-nezorF
яяннаР
ylraE )2,91(51 )3,33(8 *5,2±45 1,2±1,36
яаннаворитиваК
detativaC )7,7(6 )52(6 *1,2±4,56 6,3±2,28
яаннавориднапскЭ
dednapxE )4,51(21 )3,33(8 *8,3±67 7,1±6,69
иидатсВ
"яинелпулыв"
"gnihctah"foegatS *)7,75(54 )3,8(2 *6,2±78 5,4±5,521
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 15, 2005, №1
PROBLEMS
OF CRYOBILOGY
Vol. 15, 2005, №1
в c г d
e fд е
60
a a б b
Различные степени зрелости бластоцист человека и соответствующее им количество бластомеров: а – ранняя,
нативный препарат, ув.400; б – общее количество бластомеров (32), фиксированный препарат, ув.600; в –
экспандированная, нативный препарат, ув.400; г – общее количество бластомеров (63), фиксированный препарат,
ув.600; д – в стадии “вылупления”, нативный препарат, ув.400; е – общее количество бластомеров (132),
фиксированный препарат, ув. 600.
Different maturation degree of human blastocysts and the corresponding number of blastomeres: a – early, native preparation,
×400; b – total number of blastomeres (32), fixed preparation, ×600; c – expanded, native preparation, ×400; d – total number
of blastomeres (63), fixed preparation, ×600; e – stage of “hatching”, native preparation, x400; f – total number of blastomeres
(132), fixed preparation, ×600.
сервированных. В связи с этим представляет
интерес работа [11] по удалению бластомера
4-клеточного эмбриона и обнаружению корреляции
в достоверном снижении количества клеток в
бластоцисте в нативных и контрольных эмбрионах.
Количество бластомеров является основным
критерием для прижизненной оценки эмбрионов
Blastocyst’s capability of leaving zona pellucida
is another vital index for blastocyst integrity.
Transparent membrane during fertilization process
has a protective function and promotes blastomeres
compactization. During pre-implantation development
of embryo we observed a thinning of zona pellucida.
It is thrown off prior to or during the implantation due
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 15, 2005, №1
PROBLEMS
OF CRYOBILOGY
Vol. 15, 2005, №1
61
после замораживания-оттаивания. Однако темпы
дробления и частота формирования бластоцист
через 120 ч культивирования являются более
надежным критерием жизнеспособности [7].
Другой важный показатель полноценности бласто-
цисты – ee способность к высвобождению из zona
pellucida.
Прозрачная оболочка в процессах оплодот-
ворения выполняет защитную функцию, способ-
ствует компактизации бластомеров. Во время
предымплантационного развития эмбриона наблю-
дается истончение zona pellucida. Она либо
сбрасывается до или во время имплантации
благодаря действию самого зародыша, либо раст-
воряется под действием маточного секрета и фер-
ментов зародыша. Однако до 70% бластоцист не
высвобождаются из zona pellucida из-за проис-
ходящих в ней молекулярных изменений. Считают,
что модификация гликопротеинов приводит к
неспособности zona pellucida расщепляться под
действием литических ферментов. Кроме того,
культивирование in vitro из-за отсутствия литичес-
ких ферментов в среде индуцирует затвердевание
этой оболочки.
В работе [12] показано, что 100% криокон-
сервированных двухдневных эмбрионов выходят
из оболочки только после вспомогательного
“вылупления”. В нашей работе отмечено, что
нативные эмбрионы достигают этой стадии в 57,7,
а после криоконсервирования в 8,3% случаев.
Выводы
Нативные и замороженно-оттаянные эмбрионы
человека характеризуются разной скоростью
морфогенеза. После криоконсервирования эм-
брионы демонстрируют ускоренные темпы
дробления, что выражается в раннем фор-
мировании бластоцисты и увеличении общего
количества бластомеров.
Факторы криоконсервирования оказывают
влияние на способность бластоцисты к выходу из
zona pellucida, что требует проведения вспо-
могательного “вылупления”.
to the effect of fetus itself, either is it is dissolved under
the effect of uterus secrete and fetus enzymes.
However up to 70% of blastocysts is not released out
of zona pellucida because of occurred molecular
alterations. Glycoprotein modification is thought to
result in incapability of zona pellucida to dissolve while
influenced by lytic enzymes. Also, an in vitro culturing
induces this membrane solidification because of the
absence of lytic enzymes in the medium.
The paper [12] demonstrates that 100% of cryo-
preserved two-day embryos leave the membrane only
following the auxiliary “hatching”. This work noted na-
tive embryos reached this state in 57.7% of cases and
after cryopreservation in 8.3%.
Conclusions
Native and frozen-thawed human embryos are
known to have different morphogenesis rates. Having
survived cryopreservation the embryos demonstrate
accelerated cleavage rates, manifested in an early
blastocyst formation and increase of total blastomere
number.
Cryopreservation factors affect the blastocyst
capability of leaving zona pellucida, that requires the
necessity of assisted “hatching”.
Литература
Дыбан А.П., Баранов В.С. Цитогенетика развития
млекопитающих.– М.:Наука, 1978.– 216 с.
Элдер К. Лабораторные процедуры. Вourn-Hallam group,
1990.– 23 c.
Burns W., Gaudet T.,Martin M. et al. Survival of cryo-
preservation and thawing with all blastomeres intact identifies
multicell embryos with superior frozen embryo transfer
outcome // Fert.Ster.–1999.– Vol. 72.–P. 527-532.
Devreker F., Hardy K., Van der Bergh et al. Amino acids
promote human blastocyst develo pment in vitro // Hum.
Reprod.– 2001.– Vol. 16.– P. 749-756.
References
Dyban A.P., Baranov V.S. Cytogenetics of mammals
development.– Moscow: Nauka, 1978.– 216 p.
Elder K. Laboratory procedures. Bourn-Hallam group, 1990.–
23 p.
Burns W., Gaudet T.,Martin M. et al. Survival of cryo-
preservation and thawing with all blastomeres intact identifies
multicell embryos with superior frozen embryo transfer
outcome // Fert.Ster.–1999.– Vol. 72.–P. 527-532.
Devreker F., Hardy K., Van der Bergh et al. Amino acids
promote human blastocyst development in vitro // Hum.
Reprod.– 2001.– Vol. 16.– P. 749-756.
Edgar D., Bourne H., Speirs S. et al. A quantitative analysis
of the impact of cryopreservation on the implantation potential
of human early cleavage stage embryos // Hum. Reprod.–
2000.– Vol. 15.– P. 175-179.
Elst V.D., Abbeel E.V., Vitrier S. et al. Selective transfer of
cryopreserved human embryos with further cleavage after
thawing increases delivery and implantation rates //Hum.
Reprod.– 1997.– Vol. 12.– P. 1513-1521.
Guerif F., Bidault R., Cadoret V et al. Parameters guiding
selection of best embryos for transfer after cryopreservation:
a reappraisal // Hum. Reprod.– 2002.– Vol. 17.– P. 1321-1326.
Lassale B., Testard J., Renard J. Human embryo features
that influence the success of cryopreservation with the use
of 1,2-propanediol // Fertil. Steril.– 1985.– Vol. 44.– P. 645-651.
Rienzi L., Ubaldi F., Iacobelli M. et al. Day 3 embryo transfer
with combined evaluation at the pronuclear and cleavage
stages compares favourably with day 5 blastocyst transfer //
Hum. Reprod.– 2002.– Vol. 17.– P. 1852–1855
Schoolcraft W., Gardner D., Lane M et al. Blastocyst culture
and transfer: analysis of results and parametrs affecting
outcome in two IVF programs // Fertil. Steril.– 1999.– Vol. 72.–
P. 604-609.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
1.
2.
3.
4.
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 15, 2005, №1
PROBLEMS
OF CRYOBILOGY
Vol. 15, 2005, №1
62
Edgar D., Bourne H., Speirs S. et al. A quantitative analysis
of the impact of cryopreservation on the implantation potential
of human early cleavage stage embryos // Hum. Reprod.–
2000.– Vol. 15.– P. 175-179.
Elst V.D., Abbeel E.V., Vitrier S. et al. Selective transfer of
cryopreserved human embryos with further cleavage after
thawing increases delivery and implantation rates //Hum.
Reprod.– 1997.– Vol. 12.– P. 1513-1521.
Guerif F., Bidault R., Cadoret V et al. Parameters guiding
selection of best embryos for transfer after cryopreservation:
a reappraisal // Hum. Reprod.– 2002.– Vol. 17.– P. 1321-1326.
Lassale B., Testard J., Renard J. Human embryo features
that influence the success of cryopreservation with the use
of 1,2-propanediol // Fertil.Steril.– 1985.– Vol. 44.– P. 645-651.
Rienzi L., Ubaldi F., Iacobelli M. et al. Day 3 embryo transfer
with combined evaluation at the pronuclear and cleavage
stages compares favourably with day 5 blastocyst transfer //
Hum Reprod.– 2002.– Vol. 17.– P. 1852–1855.
Schoolcraft W., Gardner D., Lane M et al. Blastocyst culture
and transfer: analysis of results and parametrs affecting
outcome in two IVF programs // Fertil.Steril.– 1999.– Vol. 72.–
P. 604-609.
Somers G., Trounson A., Wilton L. Allocation of cells to the
inner cell mass and trophectoderm of 3/4 mouse embryos //
Reprod. Fertil.– 1990.– Vol. 2.– P. 51-59.
Stein A. Assisted hatching by partial zona dissection in human
preembryos in patients with reccurent implantation failure
after in vitro fertilization // Fertil. Steril.– 1995.– Vol.63.–
P. 838-841.
Tarkowsky A. An air-drying method for chromosome
preparation from mouse eggs // Cytogenetics.– 1966.– Vol. 5.–
P. 394-400.
Van den Abbel E., Camus M., Van Waesberghe L. Viability
of partially damaged human embryos after cryopreservation //
Hum.Reprod.– 1997.– Vol. 12.– P. 2006-2010.
Van Royen E, Mangelschots K, De Neubourg D. et al.
Characterization of a top quality embryo, a step towards single-
embryo transfer // Hum. Reprod.– 1999.– Vol. 14.– P. 2345-2349.
Zeibe S., Lundin K., Loft A. et al. FISH analysis for
chromosomes 13, 16, 18,21,22, X and Y in all blastomeres of
IVF pre-embryos from 144 randomly selected donated human
oocytes and impact on pre-embryo morphology // Hum.Reprod.–
2003.– P. 2575-2581.
Ziebe S, Petersen K, Lindenberg S. Embryo morphology or
cleavage stage: how to select the best embryos for
transfer after in-vitro fertilization // Hum Reprod.–1997.–
Vol. 12.–P. 1545-1549.
Поступила 11.05.2004
Somers G., Trounson A., Wilton L. Allocation of cells to the
inner cell mass and trophectoderm of 3/4 mouse embryos //
Reprod. Fertil.– 1990.– Vol. 2.– P. 51-59.
Stein A. Assisted hatching by partial zona dissection in human
preembryos in patients with reccurent implantation failure after
in vitro fertilization // Fertil. Steril.– 1995.– Vol. 63.– P. 838-841.
Tarkowsky A. An air-drying method for chromosome
preparation from mouse eggs // Cytogenetics.– 1966.– Vol. 5.–
P. 394-400.
Van den Abbel E., Camus M., Van Waesberghe L. Viability
of partially damaged human embryos after cryopreservation //
Hum. Reprod.– 1997.– Vol. 12.– P. 2006-2010.
Van Royen E, Mangelschots K, De Neubourg D. et al.
Characterization of a top quality embryo, a step towards single-
embryo transfer // Hum. Reprod.– 1999.– Vol. 14.– P. 2345–
2349.
Zeibe S., Lundin K., Loft A. et al. FISH analysis for
chromosomes 13, 16, 18,21,22, X and Y in all blastomeres of
IVF pre-embryos from 144 randomly selected donated human
oocytes and impact on pre-embryo morphology // Hum.Reprod.–
2003.– P. 2575-2581.
Ziebe S, Petersen K, Lindenberg S. Embryo morphology or
cleavage stage: how to select the best embryos for
transfer after in-vitro fertilization // Hum Reprod.–1997.–
Vol. 12.– P. 1545–1549.
Accepted in 11.05.2004
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 15, 2005, №1
PROBLEMS
OF CRYOBILOGY
Vol. 15, 2005, №1
|