Влияние лактоферрина из молозива коров на интенсивность перекисных процессов в фрагментах печени при их гипотермическом хранении
Изучалась антиоксидантная (АО) активность железо-связывающего белка лактоферрина (ЛФ) из нативного и лиофилизированного молозива коров на модели гипотермического хранения фрагментов печени крыс. При оценке перекисного окисления липидов (ПОЛ), которые интенсифицируются в мембранах при холодовом хране...
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Проблемы криобиологии и криомедицины |
|---|---|
| Дата: | 2002 |
| Автори: | , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Російська |
| Опубліковано: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2002
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/134656 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Влияние лактоферрина из молозива коров на интенсивность перекисных процессов в фрагментах печени при их гипотермическом хранении / Б.П. Сандомирский, С.Е. Гальченко, Е.С. Гальченко // Проблемы криобиологии. — 2002. — № 3. — С. 42–47. — Бібліогр.: 8 назв. — рос. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1859900690823905280 |
|---|---|
| author | Сандомирский, Б.П. Гальченко, С.Е. Гальченко, Е.С. |
| author_facet | Сандомирский, Б.П. Гальченко, С.Е. Гальченко, Е.С. |
| citation_txt | Влияние лактоферрина из молозива коров на интенсивность перекисных процессов в фрагментах печени при их гипотермическом хранении / Б.П. Сандомирский, С.Е. Гальченко, Е.С. Гальченко // Проблемы криобиологии. — 2002. — № 3. — С. 42–47. — Бібліогр.: 8 назв. — рос. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Проблемы криобиологии и криомедицины |
| description | Изучалась антиоксидантная (АО) активность железо-связывающего белка лактоферрина (ЛФ) из нативного и лиофилизированного молозива коров на модели гипотермического хранения фрагментов печени крыс. При оценке перекисного окисления липидов (ПОЛ), которые интенсифицируются в мембранах при холодовом хранении фрагментов, показано, что ЛФ как из нативного, так и лиофилизированного молозива оказывает выраженное АО действие и замедляет истощение эндогенных систем АО защиты.
У роботі вивчалась антиоксидантна активність залізозв’язуючого білка лактоферину з нативного і ліофілізованого молозива корів на моделі гіпотермічного зберігання фрагментів печінки щурів. При оцінці перекисного окислення ліпідів, які інтенсифікуються у мембранах при холодовому зберіганні фрагментів, показано, що лактоферин як із нативного, так і ліофілізованого молозива має виражену антиоксидантну дію і уповільнює виснаження ендогенних систем антиоксидантного захисту.
The antioxidative (AO) activity of iron-binding protein lactoferrin (LF) derived from native and lyophilized bovine colostrum in the model of hypothermic storage of rat liver fragments has been studied. While estimating the lipid peroxidation (LPO) intensifying in membranes during cold storage of fragments, it has been shown that lactoferrin both from native and lyophilized colostrum has strong antioxidative effect and slows down the exhaustion of endogenous systems of antioxidative protection.
|
| first_indexed | 2025-12-07T15:57:22Z |
| format | Article |
| fulltext |
ÏÐÎÁËÅÌÛÏÐÎÁËÅÌÛÏÐÎÁËÅÌÛÏÐÎÁËÅÌÛÏÐÎÁËÅÌÛ
ÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈ
2002, ¹ 32002, ¹ 32002, ¹ 32002, ¹ 32002, ¹ 3
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
2002, ¹ 3
42
УДК 591.146.436.2:57.043.085.1 UDC 591.146.436.2:57.043.085.1
Âëèÿíèå ëàêòîôåððèíà èç ìîëîçèâà êîðîâ íà èíòåíñèâíîñòü
ïåðåêèñíûõ ïðîöåññîâ â ôðàãìåíòàõ ïå÷åíè
ïðè èõ ãèïîòåðìè÷åñêîì õðàíåíèè
Á.Ï. ÑÀÍÄÎÌÈÐÑÊÈÉ, Ñ.Å. ÃÀËÜ×ÅÍÊÎ, Å.Ñ. ÃÀËÜ×ÅÍÊÎ
Èíñòèòóò ïðîáëåì êðèîáèîëîãèè è êðèîìåäèöèíû ÍÀÍ Óêðàèíû, ã. Õàðüêîâ
Effect of Lactoferrin Derived From Bovine Colostrum on the Intensity
of Peroxidative Processes in Liver Fragments
under their Hypothermic Storage
SANDOMIRSKY B.P., GALCHENKO S.E., GALCHENKO E.S.
Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine of the National Academy
of Sciences of the Ukraine, Kharkov
Изучалась антиоксидантная (АО) активность железо-связывающего белка лактоферрина (ЛФ) из нативного и
лиофилизированного молозива коров на модели гипотермического хранения фрагментов печени крыс. При оценке перекисного
окисления липидов (ПОЛ), которые интенсифицируются в мембранах при холодовом хранении фрагментов, показано, что ЛФ
как из нативного, так и лиофилизированного молозива оказывает выраженное АО действие и замедляет истощение эндогенных
систем АО защиты.
У роботі вивчалась антиоксидантна активність залізозв’язуючого білка лактоферину з нативного і ліофілізованого молозива
корів на моделі гіпотермічного зберігання фрагментів печінки щурів. При оцінці перекисного окислення ліпідів, які
інтенсифікуються у мембранах при холодовому зберіганні фрагментів, показано, що лактоферин як із нативного, так і
ліофілізованого молозива має виражену антиоксидантну дію і уповільнює виснаження ендогенних систем антиоксидантного
захисту.
The antioxidative (AO) activity of iron-binding protein lactoferrin (LF) derived from native and lyophilized bovine colostrum in
the model of hypothermic storage of rat liver fragments has been studied. While estimating the lipid peroxidation (LPO) intensifying
in membranes during cold storage of fragments, it has been shown that lactoferrin both from native and lyophilized colostrum has
strong antioxidative effect and slows down the exhaustion of endogenous systems of antioxidative protection.
Процесс жизнедеятельности клеток и тканей
сопровождается ПОЛ, при котором образуются
продукты, влияющие на физиологическое и струк-
турное состояние клеток. В норме эти процессы
находятся под контролем АО систем, но при
некоторых патологических состояниях возможна
активация ПОЛ. Важным результатом ПОЛ является
образование в системе свободных радикалов,
промежуточных (диеновые конъюгаты) и конечных
продуктов (малоновый диальдегид, эпоксиды и
близкие к ним соединения), которые негативно
влияют на структуру и состав фосфолипидов, а также
могут приводить к повреждениям белков и
нуклеиновых кислот [2].
Активными катализаторами процессов ПОЛ
являются ионы металлов переменной валентности
(Fe, Cu, Mn, Co), из них наиболее выраженный Fe2+.
Ионы Fe2+ непосредственно окисляются молеку-
лярным О2, формируя радикалы Н2О
•, способные
индуцировать ПОЛ и реагировать с гидропе-
рекисями. В последнем случае также формируются
свободные радикалы, инициирующие новые цепи
окисления. Ускорение ПОЛ может происходить и в
результате уменьшения резервов АО. Дефект в какой-
либо цепи АО защиты приводит к активации ПОЛ.
Один из возможных путей АО защиты на этапе
индукции ПОЛ состоит в удалении ионов металлов
переменной валентности из гидрофобной фазы
The process of cells and tissues vital activity is
accompanied with LPO, when there have formed the
products significantly affecting physiological, metabolic
and structural cell state. In the norm these processes are
under the control of antioxidative systems (AS), however
under some pathological states the LPO activation is
possible. Formation in the system of free radicals,
intermediate (diene conjugates) and final products (malone
dialdehyde, epoxides and close to them compounds),
negatively affecting the structure and composition of
phospholipids and may cause the protein and nucleic acid
damages, has been an important LPO result [2].
Metal ions of an alternating valency (Fe, Cu, Mn,
Co) are active catalysers of LPO processes, among which
Fe2+ is the most manifested. Fe2+ ions are directly oxidised
by molecular O2 by forming H2O
• radicals, capable of
LPO induction and reaction with hydrogen peroxides.
In the latter case free radicals, initiating new oxidation
chains, have been also formed. LPO acceleration may
also occur in the result of the reduction of AO stocks.
The effect in any of the chains of antioxidative protection
causes the LPO activation. One of the possible ways
of AO protection at the stage of LPO induction consists
in the removal of metal ions of alternating valency out of
the membrane hydrophobic phase and extracellular
medium by means of chelators. Lactoferrin (LF), that is
a protein fraction of cow milk can be such a chelator,
especially its high content is noted in colostrum [7]. It
ÏÐÎÁËÅÌÛÏÐÎÁËÅÌÛÏÐÎÁËÅÌÛÏÐÎÁËÅÌÛÏÐÎÁËÅÌÛ
ÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈ
2002, ¹ 32002, ¹ 32002, ¹ 32002, ¹ 32002, ¹ 3
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
2002, ¹ 3
43
мембран и из внеклеточной среды с помощью
хелаторов. Таким хелатором может выступать ЛФ –
белковая фракция коровьего молока, особенно его
большое содержание отмечается в молозиве [7]. Он
обладает рядом функциональных свойств, способен
связывать и транспортировать Fe2+ [4, 6]. Роль ЛФ в
механизме действия АО защиты исследована
недостаточно.
Адекватной моделью изучения влияния ЛФ из
молозива коров на биологические объекты может
быть модель гипотермического хранения фраг-
ментов печени крыс. Цель работы – изучение
влияния ЛФ из нативного и лиофилизированного
молозива коров на интенсивность перекисных
процессов в фрагментах печени в условиях гипотер-
мического хранения.
В работе использовали молозиво коров 2-3-х суток
лактации. Молозиво замораживали и хранили в
жидком азоте. Лиофилизацию проводили на установке
УЗВ-10. Регидратацию молозива осуществляли
дистиллированной водой.
Получали ЛФ по методу [5]. Молозиво центри-
фугировали 15 мин при 3000 об/мин на центрифуге
ОПн-3. Полученную плазму подкисляли раствором
HCl до рН 4,6 и центрифугированием разделяли на
препарат казеина и сыворотку. Из сыворотки после
подщелачивания NaOH до pH 8,0 сульфатом
аммония (в области от 30 до 80 % насыщения)
осаждали фракцию белков, которая содержит ЛФ.
Осадок растворяли в воде и раствор подкисляли до
рН 4,0 для осаждения α-лактальбумина в
изоэлектрической точке. Раствор центрифугировали,
отбирали надосадок и его рН доводили до 7,0.
Концентрацию белка определяли по методу Лоури [8].
Фрагменты печени крыс получали продав-
ливанием ее через решетку с диаметром отверстий
0,8 мм, трижды отмывали средой 199 и исследовали
после 30 мин (контроль), 24, 48 и 72 ч хранения при
температуре 4°С в той же среде. В опытных пробах
среда дополнительно содержала 5 мг/мл ЛФ. Для
определения уровня ПОЛ фрагменты печени крыс
гомогенизировали в 100 мМ трис-HCl буфере (рН 7,4)
и фильтровали через нейлоновую ткань. Соотношение
навески ткани и объема среды гомогенизации 1:3.
Уровень спонтанного, Fe2+- и аскорбат-индуци-
рованного ПОЛ в гомогенате определяли по скорости
накопления активных продуктов тиобарбитуровой
кислотой (ТБКАП), т.е. продуктов, реагирующих с
ней, согласно методу [3]. При спонтанном ПОЛ среда
инкубации содержала 100 ммоль трис-HCl буфера
(рН 7,4) и 2,5 мл исследуемого гомогената, при
индуцированном ПОЛ – дополнительно 0,5 ммоль
аскорбата или 12 мкмоль соли Мора. Реакцию
проводили на водяной бане при температуре 37°С в
течение 15 мин.
Хемилюминесцентный (ХЛ) анализ выполняли на
хемилюминометре, работающем в режиме счета
фотонов. В ячейку хемилюминометра, содержащую
1 мл физиологического раствора (рН 7,4) и 100 мкл
possesses the series of functional properties, capable of
Fe2+ binding and transporting [4, 6]. Lactoferrin role in
the effect mechanism of AO protection has been
insufficiently studied.
The model for rat liver fragments’ hypothermic storage
can be an adequate model for studying the effect of
lactoferrin, derived from bovine colostrum, on biological
objects.
The aim of given work was to study the effect of
LF derived from native and lyophilised bovine colostrum,
on the intensity of peroxidative processes in liver
fragments under the conditions of hypothermic storage.
Bovine colostrum of 2-3 days of lactation was used in
the work. Colostrum was frozen and stored under liquid
nitrogen. Lyophilisation was done by means of UZV-10
device. Colostrum rehydration was accomplished by
distilled water.
LF was obtained according to the method [5].
Colostrum was centrifuged within 15 min under 3000
rot/min by means of OPn-3 centrifuge. Obtained plasm
was acidified by HCl solution up to pH 4,6 and sedimented
on casein and serum.
Protein fraction containing lactoferrin, was sedimented
out of serum following NaOH alkalization by ammonium
sulphate up to 8,0 (within the range from 30 to 80%
saturation). Sediment was dissolved in a water and
solution was acidified up to pH 4,0 for α-lactate albumin
sedimentation in isoelectric point. Solution was centrifuged,
sediment was removed and its pH was approached to
7.0. Protein concentration was determined according to
the Lowry method [8].
Rat liver fragments were obtained by means of liver
pressing through a lattice with the holes diameter of 0.8
mm, three times washing-out by the 199 medium and
studied in 30 min (the control), 24, 48 and 72hrs of storage
under the temperature of 4°C in the same medium. In
the experimental samples the medium additionally
comprised 5mg/ml of LF. To determine the LPO level rat
liver fragments were homogenised in 100 mM tris-HCl
buffer (pH 7.4) and filtered through a nylon tissue. The
ratio of tissue and the volume of homogenisation medium
made 1:3. The level of spontaneous, Fe2+- and ascorbate-
induced LPO in homogenate was detected by the
accumulation rate of TBA-active products (TBAAP),
i.e. the products, reacting with thiobarbituric acid,
according to the method [3]. During spontaneous LPO
the incubation medium comprised 100 mM tris-HCl-buffer
(pH 7.4) and 2.5 ml of studied homogenate, at induced
LPO it additionally contained 0.5 mM ascorbate or 12µM
of Mour’s salt. Reaction was accomplished in water
bath under the temperature of 37°C within 15 min.
Chemiluminescence (Chl) analysis was done in
chemiluminometer, working in the regimen of photon
calculation. Into a chemiluminometer cell, containing 1
ml of physiological solution (pH 7.4) and 100µl of rat
liver homogenate fragments we have added 100 µl of
Mour’s salt in final concentration of 5x10–2 M or 100 µl
5% H2O2, and light sum of chemiluminescence in relative
units was recorded within 10 and 60 s, correspondingly [1].
ÏÐÎÁËÅÌÛÏÐÎÁËÅÌÛÏÐÎÁËÅÌÛÏÐÎÁËÅÌÛÏÐÎÁËÅÌÛ
ÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈ
2002, ¹ 32002, ¹ 32002, ¹ 32002, ¹ 32002, ¹ 3
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
2002, ¹ 3
44
гомогената фрагментов печени крыс, добав-
ляли 100 мкл раствора соли Мора в конечной
концентрации 5×10-2 моль или 100 мкл 5%-й
Н2О2, светосумму ХЛ регистрировали в
течение 10 и 60 с соответственно и выражали
в условных единицах [1].
Наиболее чувствительным методом
определения свободнорадикальных интер-
медиатов является метод, основанный на
измерении интенсивности ХЛ электронно-
возбужденных продуктов, которые образуются
при рекомбинации свободных радикалов. По
сути это косвенный метод регистрации
липидных радикалов, так как позволяет
определить не сами радикалы, а те из
молекулярных продуктов, которые оказы-
ваются в возбужденном состоянии при их
рекомбинации.
В табл. 1 представлены данные по интен-
сивности ХЛ модельной системы, индуци-
рованной Fe2+, в зависимости от срока
гипотермического хранения фрагментов
печени, а также наличия или отсутствия ЛФ из
Таблица 1. Интенсивность ХЛ (усл.ед.), индуцированной Fe2+,
в зависимости от источника ЛФ и срока гипотермического
хранения фрагментов печени крыс
Table 1. Chemiluminescence intensity (relative units), induced by
Fe2+, depending on the LF source and term of rat liver fragments’
hypothermic storage
Примечания: 1–различия достоверны по сравнению с контролем, р<0,05;
2–различия достоверны по сравнению с тем же сроком
хранения без ЛФ, р<0,05.
Notes: 1 – differences are significant comparing to the control,
p<0.05;
2 – differences are significant comparing to the same
term of storage without LF, p<0.05.
нативного и лиофилизированного молозива коров в
среде хранения.
При хранении фрагментов в среде без ЛФ
интенсивность ХЛ, индуцированной Fe2+, а
следовательно, и количество свободных радикалов
достоверно выше контроля уже через 24 ч. При
наличии в среде хранения ЛФ как из нативного, так и
лиофилизированного молозива различия по сравнению
с контролем наблюдаются только к 72-м часам
хранения. При этом различия в интенсивности ХЛ
фрагментов, хранившихся в среде с ЛФ, становятся
достоверными уже через 24 ч хранения. Таким
образом, представленные данные свидетельствуют
о том, что ЛФ, введенный в среду хранения,
препятствует образованию свободных радикалов в
фрагментах печени при всех изученных сроках
хранения. При этом ЛФ снижает интенсивность ХЛ
в 2,4 и 1,6 раза к 48 и 72 часам хранения соот-
ветственно.
Интенсивность ХЛ, индуцированной перекисью
водорода, отражает устойчивость биологического
объекта к перекисному окислению, которая зависит
от многих факторов, в том числе от структурной
организации биологических мембран, количества
ненасыщенных жирных кислот и АО биоэнергетики
клеток и т.д.
Как видно из табл. 2, интенсивность ХЛ, а
следовательно, и устойчивость фрагментов печени
к перекисному окислению даже при хранении без ЛФ
отличается от контроля через 48 ч хранения, в то
время как интенсивность ХЛ, индуцированной Fe2+,
к 24-м часам хранения. Можно предположить, что
АО системы, обезвреживающие свободные
радикалы и перекиси, сохраняют свою активность
до 24-х часов хранения, а затем наблюдается их
истощение, что и приводит к резкому росту ХЛ к 48
ямерВ
ч,яиненарх
,egarotsfomreT
srh
ФЛзеБ
FLtuohtiW
ФЛкинчотсИ
ecruosFL
еонвитаН
овизолом
murtsolocevitaN
�наворизилифоиЛ
овизоломеон
desilihpoyL
murtsoloc
К 5,0ьлортно
5,0lortnocehT 581±7881 361±1371 171±9981
42 822±2762 1 161±5971 2 581±4881 2
84 934±1884 1 291±1302 2 861±0991 2
27 108±3178 1 196±1865 2,1 907±9355 2,1
The most susceptible method for the determination
of free radical intermediates is the method, based on the
measuring the chemiluminescence intensity in
electronically-excited products, formed during free radical
recombination. In point of fact, this is an indirect method
for lipid radicals registration, because it allows to determine
not radicals themselves, but those molecular products,
which occurred to be at excited state during their
recombination.
In the Table 1 there are the data on the ChL intensity
of modelling system, induced by Fe2+, depending on the
term of liver fragment hypothermic storage, as well as
the presence or absence of LF, derived from native or
lyophilised bovine colostrum in the storage medium.
During the fragments storage in the medium without
LF, the ChL intensity, induced by Fe2+, and consequently,
the amount of free radicals are significantly higher than
the control already by 24hrs. When LF derived both from
native and lyophilised colostrum is present in the storage
medium, the differences comparing to the control are
observed only by 72 hrs’ storage. Thereat the differences
in the ChL intensity of the fragments, stored in the LF-
comprised medium, were considerable by 24-hrs’ storage.
Thus, the data presented testify to the fact that LF,
introduced into the storage medium, prevents the formation
of free radicals in liver fragments in all studied terms of
storage. Thereat LF reduces the ChL intensity by 2,4
and 1,6 times in 48 and 72-hrs of storage, correspondingly.
Chemiluminescence intensity, induced by hydrogen
peroxide, has reflected the biological object resistance to
peroxidation, which depends on many factors, and
structural organisation of biological membranes as well,
the amount of non-saturated fatty acids and AO of cell
bioenergetics etc.
As the Table 2 shows, the chemiluminescence
intensity, and consequently, the resistance of liver
ÏÐÎÁËÅÌÛÏÐÎÁËÅÌÛÏÐÎÁËÅÌÛÏÐÎÁËÅÌÛÏÐÎÁËÅÌÛ
ÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈ
2002, ¹ 32002, ¹ 32002, ¹ 32002, ¹ 32002, ¹ 3
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
2002, ¹ 3
45
Таблица 2. Интенсивность ХЛ (усл. ед. ×102), индуцированной
H2O2, в зависимости от источника ЛФ и срока
гипотермического хранения фрагментов печени крыс.
Table 2. Chemiluminescence intensity (relative units ×102),
induced by H2O2, depending on the LF source and term of rat
liver fragments’ hypothermic storage
Примечания: 1–различия достоверны по сравнению с контролем, р<0,05;
2–различия достоверны по сравнению с тем же сроком хранения
без ЛФ, р<0,05.
Notes: 1 – differences are significant comparing to the control, p<0.05;
2 – differences are significant comparing to the same term of
storage without LF, p<0.05.
и особенно к 72-м часам хранения. Если в среде
хранения содержится ЛФ, интенсивность ХЛ
достоверно отличается от контроля только к 72-м
часам хранения, но в этом случае она ниже ХЛ
гомогената фрагментов, хранившихся без ЛФ. Если
интенсивность ХЛ биоматериала, хранившегося без
ЛФ, увеличивается в 6,4 раза, то при хранении с ЛФ
– в 3,3 раза.
Полученные данные свидетельствуют, что
железосвязывающие свойства ЛФ являются
эффективным АО, препятствующим инициации
процессов ПОЛ, и при этом устойчивость
биологических объектов к перекисному окислению
остается неизменной длительное время, что может
Примечания. 1–различия достоверны по сравнению с контролем, р<0,05;
2–различия достоверны по сравнению с тем же сроком хранения
без ЛФ, р<0,05.
Notes: 1 – differences are significant comparing to the control, p<0.05;
2 – differences are significant comparing to the same term of
storage without LF, p<0.05.
Таблица 3. Влияние ЛФ на уровень образования ТБКАП
(нмоль/г ткани) в фрагментах печени крыс при их
гипотермическом хранении
Table 3. The effect of LF on the level of TBAAP forming
(nmol /g of tissue) in rat liver fragments under their hypothermic
storage
быть связано с меньшей нагрузкой на
эндогенные АО системы.
Если результаты, приведенные в табл.1,
характеризуют начальные этапы ПОЛ в
биологических объектах, то уровень ТБКАП
позволяет определить количество конечных
продуктов этого процесса.
При изучении влияния ЛФ из нативного
и лиофилизированного молозива коров на
уровень образования ТБКАП в фрагментах
печени крыс в зависимости от срока
гипотермического хранения были получены
результаты, приведенные в табл.3. Через
2-е суток гипотермического хранения
фрагментов без ЛФ отмечалось более чем
в два раза увеличение количества ТБКАП,
что свидельствует об интенсификации
перекисных процессов в мембранах
клеток. Наличие в среде ЛФ из нативного
молозива способствует подавлению
накопления конечного продукта ПОЛ до
48 ч хранения. Подобный эффект ингиби-
рования образования ТБКАП получен и при
ямерВ
ч,яиненарх
,egarotsfomreT
srh
ФЛзеБ
FLtuohtiW
ФЛкинчотсИ
ecruosFL
еонвитаН
овизолом
murtsolocevitaN
�наворизилифоиЛ
овизоломеон
desilihpoyL
murtsoloc
К 5,0ьлортно
5,0lortnocehT 5,0±1,5 3,0±3,5 4,0±9,4
42 3,0±8,5 4,0±2,5 4,0±5,5
84 7,0±9,01 1 4,0±9,5 2 5,0±7,5 2
27 9,0±4,21 1 8,0±1,11 2,1 0,1±8,11 2,1
ямерВ
ч,яиненарх
,egarotsfomreT
srh
ФЛзеБ
FLtuohtiW
ФЛкинчотсИ
ecruosFL
еонвитаН
овизолом
murtsolocevitaN
�наворизилифоиЛ
овизоломеон
desilihpoyL
murtsoloc
К 5,0ьлортно
5,0lortnocehT 351±2781 971±2371 161±3291
42 312±5722 181±4981 571±6302
84 485±5846 1 241±3991 2 381±5212 2
27 3111±62911 1 125±1275 2,1 845±4465 2,1
fragments to lipid peroxidation during the storage
without LF differ from the control by 48 hrs of
storage, while the ChL intensity, induced by Fe2+,
differs from the control by 24 hrs of storage. It
may be supposed that AO systems rendering
harmless free radicals and peroxides, keep their
activity up to 24 hrs of storage, and then their
exhausting is observed, that results in a sharp
growth of ChL by 48 hrs, and especially, by 72
hrs of storage. When a storage medium contains
LF, the ChL intensity significantly differs from the
control only by 72 hrs of storage, but even in this
case it is lower that ChL of fragment homogenate,
stored without LF. While the ChL intensity of
the biomaterial stored without LF, increases by
6.4 times, in the case of storage with LF this index
rises by 3.3 times.
The data obtained testify to the fact that iron-
binding LF property is an efficient AO, preventing
the initiation of LPO processes, and thereat the
resistance of biological objects to peroxidation has
remained unchangeable for a long time, that may
be related to lesser loading to endogenous AO systems.
While the results, given in the Table 1, characterise
the initial LPO stages in biological objects, the level of
TBAAP allows to determine the amount of final products
of this process.
When studying the effect of LF derived from native
and lyophilised bovine colostrum at the level of TBAAP
forming in rat liver fragments depending on the term of
hypothermic storage, the results, presented in the Table 3,
have been obtained. In 2 days of the fragments’
hypothermic storage without LF, more than twice
TBAAP increase was noted, that testified to the
intensification of peroxidative processes in cell
membranes. The presence in the medium of LF derived
ÏÐÎÁËÅÌÛÏÐÎÁËÅÌÛÏÐÎÁËÅÌÛÏÐÎÁËÅÌÛÏÐÎÁËÅÌÛ
ÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈ
2002, ¹ 32002, ¹ 32002, ¹ 32002, ¹ 32002, ¹ 3
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
2002, ¹ 3
46
использовании ЛФ из лиофилизированного молозива.
Для подтверждения противоокислительного
механизма действия ЛФ было изучено образование
ТБКАП в экспериментальных условиях, указанных
в табл.4. Полученные данные свидетельствуют о
том, что ЛФ снижает уровень как Fe2+-, так и
аскорбат-индуцированного образования конечных
продуктов ПОЛ. Это может быть объяснено только
Таблица 4. Влияние ЛФ на спонтанное, Fe2+- и аскорбат-
индуцированное образование ТБКАП (нмоль/г ткани) в фрагментах
печени при их гипотермическом хранении
Table 4. LF effect on the spontaneous, Fe2+- and ascorbate-induced
TBAAP forming (nMol/g of tissue) in liver fragments under their hypo-
thermic storage
Примечания. 1 – различия достоверны по сравнению с контролем, р<0,05;
2 – различия достоверны по сравнению с тем же сроком хранения
без ЛФ, р<0,05.
Notes: 1 – differences are significantcomparing to the control, p<0.05;
2 – differences are significant comparing to the same term of
storage without LF, p<0.05.
тем, что ЛФ уменьшает эффективную концентрацию
Fe2+ , тем самым снижая активацию процессов ПОЛ
на этапе образования свободных радикалов и
разветвления цепей пероксидации. Меньший уровень
аскорбат-индуцированной пероксидации в присут-
ствии ЛФ также подтверждает, что в этом случае
меньшее количество Fe2+ доступно для восста-
новления аскорбатом.
Следовательно, полученные данные свидетель-
ствуют о наличии у ЛФ антиокислительных свойств,
что связано, по-видимому, с его хелаторными
способностями по отношению к Fe2+. Проведенные
исследования показывают, что ЛФ как из лиофи-
лизированного, так и нативного молозива коров в
равной степени обладает АО свойствами.
Увеличение интенсивности пероксидации липи-
дов в процессе гипотермического хранения в
присутствии ЛФ может быть объяснено умень-
шением его количества из-за вовлечения в процессы
метаболизма или исчерпанием его хелаторной емкости
адерС
яиненарх
egarotS
muidem
еинавозарбО
БТ К ПА
gnimrofPAABT
ч,яиненархямерВ
srh,egarotsfomreT
К 5,0ьлортно
5,0lortnoC 42 84
ФЛзеБ
FLtuohtiW
еоннатнопС
suoenatnopS 2,0±9,4 6,0±8,8 1 1,1±1,51 1
eF +2 �наворицудни�
еон
eF +2 decudni
3,0±9,5 7,0±1,01 1 9,1±7,12 1
�ицудни�таброксА
еоннавор
decudni�etabrocsA
6,0±2,01 9,0±4,41 1 5,2±0,23 1
иивтстусирпВ
ФЛ
FLehtnI
ecneserp
еоннатнопС
suoenatnopS 3,0±2,5 3,0±8,5 2 7,0±4,9 2,1
eF +2 �наворицудни�
еон
eF +2 decudni�
4,0±6,5 4,0±2,6 2 2,1±3,31 2,1
�ицудни�таброксА
еоннавор
decudni�etabrocsA
4,0±9,9 6,0±2,8 2,1 5,1±9,81 2,1
from native colostrum promotes to the suppression of
the LPO final product accumulation up to 48 hrs. Such
an inhibiting effect of the TBAAP formation was also
achieved when using LF derived from lyophilised
colostrum.
To confirm antioxidative mechanism of the LF effect
we have studied the TBAAP forming under experimental
conditions, noted in the Table 4. Obtained data testify,
that LF reduces the level of both Fe2+ and
ascorbate-induced formation of final LPO
products. This may be explained only by
the fact that LF reduces an efficient Fe2+
concentration, decreasing the activation of
LPO processes at the stage of free radicals
forming and branching of peroxidation
chains. Lesser level of ascorbate-induced
peroxidation in the LF presence has also
confirmed, that in this case the amount of
Fe2+ is accessible to be recovered by
ascorbate. Therefore obtained data confirm
the presence of antioxidative properties in
LF, that is, obviously, related to its chelatory
characteristics in respect of Fe2+. Carried-
out investigations have demonstrated, that
both lyophilised and native LF derived
from bovine colostrum in an equal value
possessed AO properties.
Augmentation of the intensity of lipid
peroxidation during the process of
hypothermic storage in the LF presence
may be explained by the reduction of its
amount owing to the involvement into the
metabolism processes or exhausting of its
chelatory capacity (one molecule of LF is
capable of binding with Fe2+ ions). The
reduction of endogenous antioxidants in a
tissue is also possible. To reveal the most
probable cause of the mentioned above
phenomenon we have added LF in 5mg/
ml final concentration into the incubation medium after
24hrs of hypothermic storage. LPO characteristics under
this condition are given in the Table 5.
According to the data presented, it has been seen,
that additional introduction of LF into the storage medium
did not prevent the development of LPO processes
comparing to first 48 hrs of storage, but considerably
delayed both the TBAAP accumulation in tissue and an
increase of ChL intensity up to 96 hrs of storage.
Thus, according to the results obtained it may be
concluded the following: LF derived from bovine
colostrum shows manifested AO effect under
hypothermic storage of rat liver fragments. During the
storage of tissue fragments the LF protective effect
decreases, but can be partially compensated by its
additional introduction. The presence of LF in a storage
medium slows down the exhaustion of endogenous
systems of AO protection. Colostrum lyophilisation
does not decrease AO properties of LF, being its
component.
ÏÐÎÁËÅÌÛÏÐÎÁËÅÌÛÏÐÎÁËÅÌÛÏÐÎÁËÅÌÛÏÐÎÁËÅÌÛ
ÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈ
2002, ¹ 32002, ¹ 32002, ¹ 32002, ¹ 32002, ¹ 3
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
2002, ¹ 3
47
Таблица 5. Влияние дополнительного введения ЛФ в среду после 24-х
часов гипотермического хранения фрагментов печени на показатели
перекисного окисления
Table 5. Effect of additional LF introduction into the medium in 24 hrs of liver
fragments’ hypothermic storage on the peroxidation indices
Примечания: 1 – различия недостоверны по сравнению с контролем, р>0,05;
2 – различия достоверны по сравнению с хранением без
дополнительного введения без ЛФ, р<0,05.
Notes: 1 – differences are insignificant comparing to the control, p>0.05;
2 – differences are significant comparing to the storage without
additional injection of LF, p<0.05.
Литература
1. Белизи С., Назарова И.А., Климова И.А. и др. Анти-
оксидантные свойства лактоферрина из женского молока //
Бюл. эксперим. биол. и мед.– 1999.– №5.– С. 523-525.
2. Белоус А.М., Конник К.Т. Физиологическая роль железа.–Киев:
Наук.думка, 1991.– 104 с.
3. Овсянников С.Е., Никитченко Ю.В., Мазалов В.К.,
Луговой В.И. Перекисное окисление липидов в динамике
самоотогрева после острого охлаждения организма крыс //
Пробл. криобиологии.– 1996. - №1. - С. 37-40.
4. Сухарев А.Е. Лактоферрин, его свойства и значение в
патологии // Патологическая физиология и эксп. терапия.–
1992.– №3.– С.55-58.
5. Якубовская Р.И., Немцова Е.Р., Коханова И.Д. и др.
Лактоферрин человека: получение высокоочищенных
препаратов из молока женщин, некоторые физико-химические
свойства и распределение в нормальных и опухолевых
тканях // Вопр. мед. химии.– 1986.– 32, №6.– С. 75-79.
6. Baveye S., Elass E., Mazurier J. et al. Lactoferrin: a multifunctional
glycoprоtein involved in the modulation of the inflammatory
process // Clin. Chem. Lab. Med.– 1999.– №37.– P. 281-286.
7. Lonnerdal B., Iyers S. Lactoferrin: molecular structure and
biological function // Annu. Rev. Nutr.– 1995.– №5.– P. 93-100.
8. Lowry O.H., Rosenbrough N.J., Farr A.L. et al. Protein
measurement with the Folin phenol reagent // J. Biol. Chem. –
1951.– V.193.– P. 265-275.
Поступила 09.04.2002
References
1. Belizi S., Nazarova I.A., Klimova I.A. et al. Antioxidative
properties of lactoferrin derived from women’s milk // Bul.
Experim. Biol. and Med.– 1999.– N5.– P. 523-525.
2. Belous A.M., Konnik K.T. Physiological role of iron.– Kiev:
Nauk.dumka, 1991.– 104p.
3. Ovsyannikov S.E., Nikitchenko Yu.V., Mazalov V.K., Lugovoj V.I.
Lipid peroxidation in the dynamics of self-warming after a sharp
cooling of rat organism // Problems of Cryobiology.– 1996.– N1.–
P. 37-40.
4. Sukharev A.E. Lactoferrin, its properties and value in a patho-
logy // Pathological Physiology and Experim. Therapy.– 1992.–
N3.– P. 55-58.
5. Yakubovskaya R.I., Nemtsova E.R., Kohanova I.D. et al. Human
lactoferrin: obtaining of highly purified preparations derived from
women’s milk, some physical and chemical properties and
distribution in normal and tumor tissues // Voprosy Med. Khimii.–
1986.– 32.– N6.– P. 75-79.
6. Baveye S., Elass E., Mazurier J. et al. Lactoferrin: a multifunctional
glycoprоtein involved in the modulation of the inflammatory
process // Clin. Chem. Lab. Med.– 1999.– №37.– P. 281-286.
7. Lonnerdal B., Iyers S. Lactoferrin: molecular structure and
biological function // Annu. Rev. Nutr.– 1995.– №5.– P. 93-100.
8. Lowry O.H., Rosenbrough N.J., Farr A.L. et al. Protein
measurement with the Folin phenol reagent // J. Biol. Chem. –
1951.– V.193.– P. 265-275.
Accepted in 09.04.2002
(одна молекула ЛФ способна связать
два иона Fe2+). Возможно также умень-
шение эндогенных АО в ткани. Для
выяснения наиболее вероятной причи-
ны указанного выше явления в среду
инкубации после 24-х часов гипо-
термического хранения был добавлен
ЛФ в конечной концентрации 5 мг/мл.
Характеристики ПОЛ при этом усло-
вии приведены в табл. 5.
Из представленных данных видно,
что дополнительное введение в среду
хранения ЛФ, хотя и не предотвращает
развитие процессов ПОЛ, как в первые
48 ч хранения, но достоверно замед-
ляет как накопление ТБКАП в ткани,
так и увеличение интенсивности ХЛ до
96 ч хранения.
Таким образом, из полученных
результатов можно сделать следую-
щие выводы: ЛФ из молозива коров
оказывает выраженное АО действие
при гипотермическом хранении фраг-
ментов печени крыс. Во время хране-
ния фрагментов ткани защитное
действие ЛФ снижается, но может
быть в некоторой степени компен-
сировано дополнительным его введе-
нием. Наличие ЛФ в среде хранения
замедляет истощение эндогенных
систем АО защиты. Лиофилизация
молозива не снижает АО свойств
входящего в его состав ЛФ.
яиволсУ
атнемирепскэ
tnemirepxE
snoitidnoc
ямерВ
ч,яиненарх
fomreT
srh,egarots
ьлетазакопйымеачузИ
xednideidutS
�орицудни,ЛХ
яаннав
eF +2 .де.лсу,
eF +2 decudni�
stinu.ler,LhC
�,ЛХ
�наворицудни
Няан
2
О
2
.де.лсу × 01 2
H
2
O
2
decudni�
stinU.ler,LhC
× 01 2
ьневорУ
БТ К ПА
levelPAABT
К зебьлортно
ФЛ
tuohtiwlortnoC
FL
84 725±3215 806±1796 7,0±3,01
27 238±2349 5811±92131 9,0±9,21
69 5811±24211 3191±58791 1,1±7,51
зеБ
огоньлетинлопод
ФЛяинедевв
tuohtiW
FLlanoitidda
noitcudortni
84 561±3191 891±1212 5,0±2,6
27 804±1275 928±8128 7,0±8,01
69 6931±72111 1 8151±53181 1 2,1±1,31 1
еоньлетинлопоД
ФЛеинедевв
FLlanoitiddA
noitcudortni
84 991±5702 702±5232 6,0±3,5
27 154±1314 2 362±9792 2 8,0±0,7 2
69 368±3997 2 156±7896 2 7,0±3,9 2
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-134656 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7673 |
| language | Russian |
| last_indexed | 2025-12-07T15:57:22Z |
| publishDate | 2002 |
| publisher | Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Сандомирский, Б.П. Гальченко, С.Е. Гальченко, Е.С. 2018-06-13T19:17:45Z 2018-06-13T19:17:45Z 2002 Влияние лактоферрина из молозива коров на интенсивность перекисных процессов в фрагментах печени при их гипотермическом хранении / Б.П. Сандомирский, С.Е. Гальченко, Е.С. Гальченко // Проблемы криобиологии. — 2002. — № 3. — С. 42–47. — Бібліогр.: 8 назв. — рос. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/134656 591.146.436.2:57.043.085.1 Изучалась антиоксидантная (АО) активность железо-связывающего белка лактоферрина (ЛФ) из нативного и лиофилизированного молозива коров на модели гипотермического хранения фрагментов печени крыс. При оценке перекисного окисления липидов (ПОЛ), которые интенсифицируются в мембранах при холодовом хранении фрагментов, показано, что ЛФ как из нативного, так и лиофилизированного молозива оказывает выраженное АО действие и замедляет истощение эндогенных систем АО защиты. У роботі вивчалась антиоксидантна активність залізозв’язуючого білка лактоферину з нативного і ліофілізованого молозива корів на моделі гіпотермічного зберігання фрагментів печінки щурів. При оцінці перекисного окислення ліпідів, які інтенсифікуються у мембранах при холодовому зберіганні фрагментів, показано, що лактоферин як із нативного, так і ліофілізованого молозива має виражену антиоксидантну дію і уповільнює виснаження ендогенних систем антиоксидантного захисту. The antioxidative (AO) activity of iron-binding protein lactoferrin (LF) derived from native and lyophilized bovine colostrum in the model of hypothermic storage of rat liver fragments has been studied. While estimating the lipid peroxidation (LPO) intensifying in membranes during cold storage of fragments, it has been shown that lactoferrin both from native and lyophilized colostrum has strong antioxidative effect and slows down the exhaustion of endogenous systems of antioxidative protection. ru Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии и криомедицины Криоконсервация биообъектов Влияние лактоферрина из молозива коров на интенсивность перекисных процессов в фрагментах печени при их гипотермическом хранении Effect of Lactoferrin Derived From Bovine Colostrum on the Intensity of Peroxidative Processes in Liver Fragments under their Hypothermic Storage Article published earlier |
| spellingShingle | Влияние лактоферрина из молозива коров на интенсивность перекисных процессов в фрагментах печени при их гипотермическом хранении Сандомирский, Б.П. Гальченко, С.Е. Гальченко, Е.С. Криоконсервация биообъектов |
| title | Влияние лактоферрина из молозива коров на интенсивность перекисных процессов в фрагментах печени при их гипотермическом хранении |
| title_alt | Effect of Lactoferrin Derived From Bovine Colostrum on the Intensity of Peroxidative Processes in Liver Fragments under their Hypothermic Storage |
| title_full | Влияние лактоферрина из молозива коров на интенсивность перекисных процессов в фрагментах печени при их гипотермическом хранении |
| title_fullStr | Влияние лактоферрина из молозива коров на интенсивность перекисных процессов в фрагментах печени при их гипотермическом хранении |
| title_full_unstemmed | Влияние лактоферрина из молозива коров на интенсивность перекисных процессов в фрагментах печени при их гипотермическом хранении |
| title_short | Влияние лактоферрина из молозива коров на интенсивность перекисных процессов в фрагментах печени при их гипотермическом хранении |
| title_sort | влияние лактоферрина из молозива коров на интенсивность перекисных процессов в фрагментах печени при их гипотермическом хранении |
| topic | Криоконсервация биообъектов |
| topic_facet | Криоконсервация биообъектов |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/134656 |
| work_keys_str_mv | AT sandomirskiibp vliânielaktoferrinaizmolozivakorovnaintensivnostʹperekisnyhprocessovvfragmentahpečenipriihgipotermičeskomhranenii AT galʹčenkose vliânielaktoferrinaizmolozivakorovnaintensivnostʹperekisnyhprocessovvfragmentahpečenipriihgipotermičeskomhranenii AT galʹčenkoes vliânielaktoferrinaizmolozivakorovnaintensivnostʹperekisnyhprocessovvfragmentahpečenipriihgipotermičeskomhranenii AT sandomirskiibp effectoflactoferrinderivedfrombovinecolostrumontheintensityofperoxidativeprocessesinliverfragmentsundertheirhypothermicstorage AT galʹčenkose effectoflactoferrinderivedfrombovinecolostrumontheintensityofperoxidativeprocessesinliverfragmentsundertheirhypothermicstorage AT galʹčenkoes effectoflactoferrinderivedfrombovinecolostrumontheintensityofperoxidativeprocessesinliverfragmentsundertheirhypothermicstorage |