Модификация транспорта ионов H⁺ и связівания дипиридамола с мембранами эритроцитов крысы при гипертоническом воздействии
Saved in:
| Date: | 2002 |
|---|---|
| Main Authors: | , , |
| Format: | Article |
| Language: | Russian |
| Published: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2002
|
| Series: | Проблемы криобиологии и криомедицины |
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/137067 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Модификация транспорта ионов H⁺ и связівания дипиридамола с мембранами эритроцитов крысы при гипертоническом воздействии / А.Н. Балакирев, Ф. Абу-Аль Асаль, В.В. Рамазанов // Проблемы криобиологии. — 2002. — № 3. — С. 84–86. — Бібліогр.: 3 назв. — рос. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-137067 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-1370672025-02-09T22:01:51Z Модификация транспорта ионов H⁺ и связівания дипиридамола с мембранами эритроцитов крысы при гипертоническом воздействии Modification of H⁺ Ion Transport and Binding of Dipyridamol with Membranes of Rat’s Erythrocytes under Hypertonic Effect Балакирев, А.Н. Абу-Аль Асаль, Ф. Рамазанов, В.В. Краткие сообщения 2002 Article Модификация транспорта ионов H⁺ и связівания дипиридамола с мембранами эритроцитов крысы при гипертоническом воздействии / А.Н. Балакирев, Ф. Абу-Аль Асаль, В.В. Рамазанов // Проблемы криобиологии. — 2002. — № 3. — С. 84–86. — Бібліогр.: 3 назв. — рос. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/137067 577.352.465:612.111 ru Проблемы криобиологии и криомедицины application/pdf Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Russian |
| topic |
Краткие сообщения Краткие сообщения |
| spellingShingle |
Краткие сообщения Краткие сообщения Балакирев, А.Н. Абу-Аль Асаль, Ф. Рамазанов, В.В. Модификация транспорта ионов H⁺ и связівания дипиридамола с мембранами эритроцитов крысы при гипертоническом воздействии Проблемы криобиологии и криомедицины |
| format |
Article |
| author |
Балакирев, А.Н. Абу-Аль Асаль, Ф. Рамазанов, В.В. |
| author_facet |
Балакирев, А.Н. Абу-Аль Асаль, Ф. Рамазанов, В.В. |
| author_sort |
Балакирев, А.Н. |
| title |
Модификация транспорта ионов H⁺ и связівания дипиридамола с мембранами эритроцитов крысы при гипертоническом воздействии |
| title_short |
Модификация транспорта ионов H⁺ и связівания дипиридамола с мембранами эритроцитов крысы при гипертоническом воздействии |
| title_full |
Модификация транспорта ионов H⁺ и связівания дипиридамола с мембранами эритроцитов крысы при гипертоническом воздействии |
| title_fullStr |
Модификация транспорта ионов H⁺ и связівания дипиридамола с мембранами эритроцитов крысы при гипертоническом воздействии |
| title_full_unstemmed |
Модификация транспорта ионов H⁺ и связівания дипиридамола с мембранами эритроцитов крысы при гипертоническом воздействии |
| title_sort |
модификация транспорта ионов h⁺ и связівания дипиридамола с мембранами эритроцитов крысы при гипертоническом воздействии |
| publisher |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| publishDate |
2002 |
| topic_facet |
Краткие сообщения |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/137067 |
| citation_txt |
Модификация транспорта ионов H⁺ и связівания дипиридамола с мембранами эритроцитов крысы при гипертоническом воздействии / А.Н. Балакирев, Ф. Абу-Аль Асаль, В.В. Рамазанов // Проблемы криобиологии. — 2002. — № 3. — С. 84–86. — Бібліогр.: 3 назв. — рос. |
| series |
Проблемы криобиологии и криомедицины |
| work_keys_str_mv |
AT balakirevan modifikaciâtransportaionovhisvâzívaniâdipiridamolasmembranamiéritrocitovkrysyprigipertoničeskomvozdeistvii AT abualʹasalʹf modifikaciâtransportaionovhisvâzívaniâdipiridamolasmembranamiéritrocitovkrysyprigipertoničeskomvozdeistvii AT ramazanovvv modifikaciâtransportaionovhisvâzívaniâdipiridamolasmembranamiéritrocitovkrysyprigipertoničeskomvozdeistvii AT balakirevan modificationofhiontransportandbindingofdipyridamolwithmembranesofratserythrocytesunderhypertoniceffect AT abualʹasalʹf modificationofhiontransportandbindingofdipyridamolwithmembranesofratserythrocytesunderhypertoniceffect AT ramazanovvv modificationofhiontransportandbindingofdipyridamolwithmembranesofratserythrocytesunderhypertoniceffect |
| first_indexed |
2025-12-01T06:38:41Z |
| last_indexed |
2025-12-01T06:38:41Z |
| _version_ |
1850286929660084224 |
| fulltext |
ÏÐÎÁËÅÌÛÏÐÎÁËÅÌÛÏÐÎÁËÅÌÛÏÐÎÁËÅÌÛÏÐÎÁËÅÌÛ
ÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈ
2002, ¹ 32002, ¹ 32002, ¹ 32002, ¹ 32002, ¹ 3
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
2002, ¹ 3
84
УДК 577.352.465:612.111 UDC 577.352.465:612.111
Ìîäèôèêàöèÿ òðàíñïîðòà èîíîâ Í+ è ñâÿçûâàíèÿ äèïèðèäàìîëà ñ
ìåìáðàíàìè ýðèòðîöèòîâ êðûñû ïðè ãèïåðòîíè÷åñêîì âîçäåéñòâèè
À.Í. ÁÀËÀÊÈÐÅÂ, Ô. ÀÁÓ-ÀËÜ ÀÑÀËÜ, Â.Â. ÐÀÌÀÇÀÍÎÂ
Èíñòèòóò ïðîáëåì êðèîáèîëîãèè è êðèîìåäèöèíû ÍÀÍ Óêðàèíû, ã. Õàðüêîâ
Modification of H+ Ion Transport and Binding of Dipyridamol with Membranes
of Rat’s Erythrocytes under Hypertonic Effect
BALAKIREV A.N., ABU-AL ASAL F., RAMAZANOV V.V.
Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine of the National Academy
of Sciences of the Ukraine, Kharkov
гипотермического хранения нервной ткани, что
приводит к их гибели после замораживания-отогрева.
ENCs morphometrical study has shown, that during the
process of hypothermic storage average sizes of cells
reduced in such a way: in 1 hour of storage – down to 80,
and in 3 hours – down to 75% of initial ones. This is explained
by the effect on cells of the osmotically active sucrose
solution. ENCs freeze-thawing resulted in an increase in
their average sizes approximately up to 115% of initial ones,
that pointed to the augmentation of a number of plasmatic
membrane damages in a suspension.
The studied damages indicate the accumulation in INC of
non-lethal damages during the process of nerve tissue
hypothermic storage, that results in their death after freeze-
thawing.
Литература
1. Сукач А.Н., Петренко А.Ю., Плачинта М.С. Криокон-
сервирование эмбриональных нервных клеток крысы с
использованием ДМСО // Пробл. криобиологии.– 2001.–
№3.– С. 61-62.
2. Петренко А.Ю., Грищук В.П. Влияние замораживания-
отогрева под защитой диметилсульфоксида на
сохранность изолированных гепатоцитов крыс // Физико-
химические свойства и биологическое действие
криопротекторов.– Харьков, 1990.– С. 109-114.
Поступило 16.04.2002 References
1. Sukach A.N., Petrenko A.Yu., Plachinta M.S. Cryopreservation
of rat embryonic neuronal cells using DMSO // Problems of
Cryobiology.– 2001.– N3.– P.61-62.
2. Petrenko A.Yu., Grischuk V.P. Effect of freeze-thawing under
dimethyl sulfoxide protection on viability of isolated rat
hepatocytes // Physical and chemical properties and biological
effects of cryoprotectants.– Kharkov, 1990.– P.109-114.
Accepted in 16.04.2002
Обмен внутриклеточного хлорида на внеклеточный
сульфат в эритроцитах человека осуществляется по двум
механизмам: выход хлорида и протона по каналу и
обмен внутриклеточного хлорида на сульфат и протон
[3]. При этом происходит закисление среды с
последующим ее защелачиванием. Фаза закисления
менее чувствительна к ингибиторам, изменениям
температуры и гипертоническому воздействию [1]. Цель
работы – выявить характер обмена хлорида на сульфат в
эритроцитах крысы.
В эксперименте использовали эритроциты крови
крыс, полученные декапитацией 18-месячных живот-
ных. Отмытые эритроциты с гематокритом 70 %
разводили до 20 % средой, содержащей (ммоль/л):
KCl – 90, NaCl – 45, сахарозы – 44, триса – 10, рН 7,4,
добавляли ДИДС в конечной концентрации 50 мкмоль/л,
суспензию клеток инкубировали 60 мин при 37°С. После
обработки эритроциты отмывали средой инкубации. В
термостатируемую ячейку с рН электродом,
содержащую сульфатные среды, вносили эритроциты и
изменения рН контролировали самописцем. Белые тени
получали с помощью лизиса эритроцитов на ледяной
бане в среде, содержащей 1 ммоль/л ЭДТА, 5 ммоль/л
триса, рН 8 в течение 10 мин. Полученный гемолизат
центрифугировали при 4°С на центрифуге в течение
15 мин при 15000 об/мин. Осадок отмывали 4 раза
Exchange of intracellular chloride to extracellular
sulphate in human erythrocytes is accomplished by two
mechanisms: release of chloride along the channel and
the exchange of intracellular chloride for sulphate and
proton [3]. In this case the medium pH changes by such
a way, that the phase of acidification is less sensitive
than the phase of alkalisation to the inhibitors, changes
of temperature and hypertonic effect [1]. The aim of the
work is to reveal the character of chloride exchange to
sulphate in rat’s erythrocytes.
In the experiment we used erythrocytes of rat’s blood,
obtained after decapitation of 18 months’ animals.
Washed-out with 70% hematocrit erythrocytes were
diluted down to 20% with the medium, containing:
KCl – 90 mM/l, NaCl – 45, sucrose – 44, tris - 10,
pH 7.4, DIDS was added under final concentration of
50 mcM/l, cell suspension was incubated for 60 min at
37°C. After the treatment the erythrocytes were washed-
out with incubation medium. The erythrocytes were
placed into a thermostated well with pH electrode,
containing sulphate media and the changes in pH were
controlled with a recorder. White ghosts were obtained
by lysis of erythrocytes on ice bath in the medium,
containing 1 mM/l EDTA, 5 mM tris, pH 8 during 10 min.
Obtained hemolysate was centrifuged at 4°C by the
centrifuge during 15 min at 1500 rot/min. The sediment
ÏÐÎÁËÅÌÛÏÐÎÁËÅÌÛÏÐÎÁËÅÌÛÏÐÎÁËÅÌÛÏÐÎÁËÅÌÛ
ÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈ
2002, ¹ 32002, ¹ 32002, ¹ 32002, ¹ 32002, ¹ 3
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
2002, ¹ 3
85
Степень блокирования (%) транспорта ионов Н+ в эритроцитах, находящихся в
различных средах
Blockage rate (%) of H+ ion transport in erythrocytes being in various media
гемолизирующей средой. Получен-
ные белые тени хранили на льду не
более 30 мин до эксперимента .
Интенсивность роста поляризации
флуоресценции дипиридамола
измеряли при титровании его белы-
ми тенями эритроцитов во флуори-
метрической кювете. Содержание
белка в белых тенях эритроцитов
определяли методом Лоури.
ДИДС и дипиридамол в исполь-
зованных концентрациях в изотони-
ческой сульфатной среде не блоки-
руют выхода протонов из клетки,
тогда как вход блокируется на 57 и
63% соответственно (таблица) .
Гипертонические среды вызывают
блокирование как выхода, так и входа
протонов и индуцируют инги-
биторное действие дипиридамола
при выходе протонов из клетки. При
транспорте протонов в клетку рост
степени ингибирования отражает
аддитивное действие блокаторов и
гипертонических сред. Титрование
дипиридамола тенями эритроцитов
вызывает рост поляризации флуо-
ресценции как в изотонической, так и в гипер-
тонической сульфатной средах. Однако в гипертони-
ческой среде степень поляризации флуоресценции
выше, чем в изотонической (рисунок). Титрование
тенями, полученными из ДИДС обработанных эритро-
цитов, приводит к редукции нарастания поляризации
флуоресценции дипиридамола в гипертонической
сульфатной среде. Если среда инкубации, наряду с
изотоническим сульфатом, содержала гипертони-
ческую сахарозу, то это значительно подавляло рост
поляризации дипиридамола при титровании его
тенями контрольных эритроцитов.
Полученные результаты показывают, что выход Н+
не чувствителен к ингибиторам по сравнению с его
входом. В [1] отмечалось, что обмен внутриклеточного
хлорида на внеклеточный сульфат для эритроцитов
человека осуществляется по двум механизмам:
канальному и обменному, что, вероятно, характерно и
для эритроцитов крысы. Использование гипертони-
ческих сред индуцирует ингибиторное действие
дипиридамола на выход протонов из клетки (таблица),
однако только гипертоническая сульфатная среда
вызывает рост степени поляризации флуоресценции
дипиридамола с тенями, а гипертоническая сахарозная
среда редуцирует этот показатель (рисунок). Такой
результат указывает на то, что рост ионной силы
приводит к увеличению связывания дипиридамола с
анионным каналом, однако рост осмотического
градиента на мембране также является весомым
фактором в изменении ингибиторной силы данного
блокатора.
Полученные результаты после обработки эритроци-
тов ДИДС указывают, что остаточная поляризация
флуоресценции дипиридамола в изотонической
сульфатной среде обусловлена связыванием его не с
анионным каналом, а с поверхностью мембраны.
Незначительное влияние гипертонической сульфатной
was washed-out 4 times with hemolysing medium.
Resulted white ghosts were stored on ice not more than
30 min before the experiment. The intensity of the growth
of dipyridamol fluorescence polarisation was measured
during its titration by white ghosts of erythrocytes in
fluorimetric cuvette. Protein content in white ghosts of
erythrocytes was determined with Loury method.
DIDS and dipyridamol of the used concentrations in
isotonic sulphate medium do not block the release of
protons out of a cell, meanwhile the entering is blocked
by 57 and 63%, correspondingly (Table). Hypertonic
media cause the blocking of both release and entering
of protons and induced inhibitory effect of dipyridamol
at the proton release out of a cell. During the transport
of protons into a cell the growth of inhibition degree
reflects an additive effect of blockers and hypertonic
media. Titration of dipyridamol with the ghosts of
erythrocytes causes the growth of fluorescence
polarisation both in isotonic and hypertonic sulphate
media. However in hypertonic medium the degree of
fluorescence polarisation is higher than in isotonic one
(Figure). Titration by the ghosts, obtained from DIDS-
treated erythrocytes, results in the reduction of
accumulation of dipyridamol fluorescence polarisation
in hypertonic sulphate medium. If incubation medium
along with isotonic sulphate contained hypertonic
sucrose, then this considerably suppressed the growth
of dipyridamol polarisation during its titration by the
ghosts of the control erythrocytes.
The obtained results demonstrate that the H+
releasing phase is not sensitive to the inhibitors in
comparison with the one of H+ entering. The paper [1]
showed that the exchange of intracellular chloride to
extracellular sulphate for human erythrocytes is
accomplished by two mechanisms: channel and
exchange, that is characteristic for rat’s erythrocytes.
Usage of hypertonic media induces an inhibitory effect
тропснарТ
Нвонои +
H+ snoi
tropsnart
ыротибигнИ
srotibihnI aNМ21,0
2
OS
4
aNМ1
2
OS
4
aNМ21,0
2
OS
4
+
/ызорахасМ68,0
esorcus
иктелкзИ
llecafotuO
К ьлортно
lortnoC � 6±93 5±33
ломадирипиД
)л/ьломкм003(
003(lomadirypiD
)l/lomcm
0 9±67 7±26
СДИД
)л/ьломкм5,0(
SDID
)l/lomcm5.0(
0 8±25 4±13
уктелкВ
llecaotnI
К ьлортно
lortnoC � 6±44 6±15
ломадирипиД
)л/ьломкм003(
lomadirypiD
)l/lomcm003(
7±36 6±88 7±68
СДИД
)л/ьломкм5,0(
SDID
)l/lomcm5.0(
8±75 6±28 8±28
ÏÐÎÁËÅÌÛÏÐÎÁËÅÌÛÏÐÎÁËÅÌÛÏÐÎÁËÅÌÛÏÐÎÁËÅÌÛ
ÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈ
2002, ¹ 32002, ¹ 32002, ¹ 32002, ¹ 32002, ¹ 3
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
2002, ¹ 3
86
0
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
0 200 400 600
1
2
3
4
5
Рост поляризации флуоресценции дипиридамола в различных средах (моль/л)
при титровании белыми тенями эритроцитов:
1 – 0,12 сульфата натрия; 2 – 1,0 сульфата натрия; 3 – 0,12 сульфата натрия
(обработка ДИДС); 4 – 1,0 сульфата натрия (обработка ДИДС); 5 – 0,12 сульфата
натрия и 0,86 М сахарозы.
Polarisation growth of dipyridamol fluorescence in various media (M/l) during titration
with white ghosts of erythrocytes:
1 – 0.12 sodium sulphate; 2 – 1.0 sodium sulphate; 3 - 0.12 sodium sulphate (DIDS
treatment); 4 – 1.0 sodium sulphate (DIDS treatment); 5 – 0.12 sodium sulphate and
0.86 M sucrose
Концентрация белка, мкг/мл
Protein concentration, mcg/ml
Литература
1. Рамазанов В.В., Лупилова Н.А., Тодрин А.Ф., Бондарен-
ко Т.П. Осмотическая модификация транспорта протонов в
эритроцитах в сульфатной среде // Пробл. криобиологии. –
1999.– №4.– С. 34-41.
2. Cabantchik Z.J., Knauf P.A., Rostein A. The anion transport
system of the red blood cell // Biochem. Biophys. Acta.– 1978.–
V.515.– P. 239-302.
3. Red cell membranes - a methodological approach / Eds.
Ellory J.C., Young J.D.– Academic press, 1982. - 369 p.
Поступило 26.03.2002
References
1. Ramazanov V.V., Lupilova N.A., Todrin A.F., Bondarenko T.P.
Proton transport osmotic modification in erythrocytes in a
sulphatic medium // Problems of Cryobiology.– 1999.– N4.–
P. 34-41.
2. Cabantchik Z.J., Knauf P.A., Rostein A. The anion transport
system of the red blood cell // Biochem. Biophys. Acta.– 1978.–
V.515.– P. 239-302.
3. Red cell membranes - a methodological approach / Eds.
Ellory J.C., Young J.D. – Academic press, 1982. - 369 p.
Accepted in 26.03.2002
среды на действие ДИДС, видимо, обусловлено тем,
что он связывается только с анионным каналом и с более
высоким сродством, чем дипиридамол [2].
Таким образом, комбинирование эритроцитов
крысы с незабуференной сульфатной средой вызывает
её закисление с последующей фазой защелачивания. При
этом фаза закисления менее чувствительна к ингибито-
рам анион-транспортной системы, чем фаза защела-
чивания. Гипертоническое воздействие стимулирует
ингибиторную силу дипиридамола на фазу закисления.
Гипертоническая сульфатная среда вызывает больший
рост поляризации флуоресценции дипиридамола в
присутствии теней эритроцитов, тогда как гипер-
тоническая сахарозная среда подавляет рост данного
показателя.
of dipyridamol on the release of protons out of a
cell (Table), but only hypertonic sulphate
medium causes the growth of the degree of
dipyridamol fluorescence polarisation with the
ghosts and hypertonic sucrose medium reduces
this index (Figure). Such a result points to the
fact that the growth of ionic strength results in
an increase in dipyridamol binding with anion
channel, however the growth of osmotic gradient
on membrane is also powerful factor in the
change of inhibitory strength of this blocker.
The obtained results after the treatment of
erythrocytes with DIDS show that residual
polarisation of dipyridamol fluorescence in
isotonic sulphate medium is stipulated by its
binding not with anion channel but the surface
of membrane. A slight effect of hypertonic
sulphate medium on DIDS effect is likely
stipulated by the fact, that it binds only with
anion channel and with higher affinity than
dipyridamol [2].
Thus the combination of rat’s erythrocytes with
non-buffered sulphate medium causes its acidification
with the following alkalisation phase. In this case the
phase of acidification is less sensitive to the inhibitors
of anion-transport system that the phase of
alkalisation. Hypertonic effect stimulates an inhibitory
strength of dipyridamol on the phase of acidification.
Hypertonic sulphate medium causes a larger growth
of dipyridamol fluorescence polarisation in the
presence of erythrocyte ghosts, meanwhile
hypertonic sucrose medium suppresses the rise in
this index.
П
ол
яр
из
ац
ия
Po
la
ris
at
io
n
|