Гистологический анализ изменений тканей головного мозга крыс с экспериментальным паркинсонизмом до и после трансплантации криоконсервированных эмбриональных нервных клеток

Представлена гистоморфологическая характеристика трансплантата криоконсервированных эмбриональных нервных клеток (ЭНК) у крыс с экспериментальным паркинсонизмом, который был получен двусторонним анодным электролизом черной субстанции. Показано, что пересаженные ЭНК пролиферируют в зоне введения и за...

Повний опис

Збережено в:

Бібліографічні деталі
Дата:	2006
Автори:	Пятикоп, В.А., Карамышев, В.Д., Шеверева, В.М., Дворцевой, В.К.
Формат:	Стаття
Мова:	Russian
Опубліковано:	Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України 2006
Назва видання:	Проблемы криобиологии и криомедицины
Теми:	Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология
Онлайн доступ:	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/137083
Теги:	Додати тег Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
Назва журналу:	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Цитувати:	Гистологический анализ изменений тканей головного мозга крыс с экспериментальным паркинсонизмом до и после трансплантации криоконсервированных эмбриональных нервных клеток / В.А. Пятикоп, В.Д. Карамышев, В.М. Шеверева, В.К. Дворцевой // Проблемы криобиологии. — 2006. — Т. 16, № 2. — С. 211-216. — Бібліогр.: 7 назв. — рос.

Репозитарії

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine

id	nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-137083
record_format	dspace
spelling	nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-1370832025-02-09T09:33:40Z Гистологический анализ изменений тканей головного мозга крыс с экспериментальным паркинсонизмом до и после трансплантации криоконсервированных эмбриональных нервных клеток Histological analysis of changes in brain tissues of rats with experimental parkinson disease prior to and after transplantation of cryopreserved embryonic nerve cells Пятикоп, В.А. Карамышев, В.Д. Шеверева, В.М. Дворцевой, В.К. Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Представлена гистоморфологическая характеристика трансплантата криоконсервированных эмбриональных нервных клеток (ЭНК) у крыс с экспериментальным паркинсонизмом, который был получен двусторонним анодным электролизом черной субстанции. Показано, что пересаженные ЭНК пролиферируют в зоне введения и за пределом рубцового вала. Введенные нейробласты распространяются также за пределы зоны пролиферации. Представлено гістоморфологічну характеристику трансплантату кріоконсервованих ембріональних нервових клітин (ЕНК) у щурів з експериментальним паркінсонізмом, який було отримано двостороннім анодним електролізом чорної субстанції. Показано, що пересаджені ЕНК проліферують в зоні введення та за межами рубцевого валу. Нейробласти, які були введені, розповсюджуються також за межі зони проліферації. There are presented histomorphological characteristics of cryopreserved embryonic nerve cells (ENCs) transplants in rats with experimental parkinsonism, induced by bilateral anode electrolysis of substantia nigra. Engrafted ENCs were shown to proliferate within the introduction area and beyond the scar. The introduced neuroblasts are spread beyond the proliferation area as well. 2006 Article Гистологический анализ изменений тканей головного мозга крыс с экспериментальным паркинсонизмом до и после трансплантации криоконсервированных эмбриональных нервных клеток / В.А. Пятикоп, В.Д. Карамышев, В.М. Шеверева, В.К. Дворцевой // Проблемы криобиологии. — 2006. — Т. 16, № 2. — С. 211-216. — Бібліогр.: 7 назв. — рос. https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/137083 615.361.018.8.013.014.41:57.08.41 ru Проблемы криобиологии и криомедицины application/pdf Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
institution	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection	DSpace DC
language	Russian
topic	Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология
spellingShingle	Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Пятикоп, В.А. Карамышев, В.Д. Шеверева, В.М. Дворцевой, В.К. Гистологический анализ изменений тканей головного мозга крыс с экспериментальным паркинсонизмом до и после трансплантации криоконсервированных эмбриональных нервных клеток Проблемы криобиологии и криомедицины
description	Представлена гистоморфологическая характеристика трансплантата криоконсервированных эмбриональных нервных клеток (ЭНК) у крыс с экспериментальным паркинсонизмом, который был получен двусторонним анодным электролизом черной субстанции. Показано, что пересаженные ЭНК пролиферируют в зоне введения и за пределом рубцового вала. Введенные нейробласты распространяются также за пределы зоны пролиферации.
format	Article
author	Пятикоп, В.А. Карамышев, В.Д. Шеверева, В.М. Дворцевой, В.К.
author_facet	Пятикоп, В.А. Карамышев, В.Д. Шеверева, В.М. Дворцевой, В.К.
author_sort	Пятикоп, В.А.
title	Гистологический анализ изменений тканей головного мозга крыс с экспериментальным паркинсонизмом до и после трансплантации криоконсервированных эмбриональных нервных клеток
title_short	Гистологический анализ изменений тканей головного мозга крыс с экспериментальным паркинсонизмом до и после трансплантации криоконсервированных эмбриональных нервных клеток
title_full	Гистологический анализ изменений тканей головного мозга крыс с экспериментальным паркинсонизмом до и после трансплантации криоконсервированных эмбриональных нервных клеток
title_fullStr	Гистологический анализ изменений тканей головного мозга крыс с экспериментальным паркинсонизмом до и после трансплантации криоконсервированных эмбриональных нервных клеток
title_full_unstemmed	Гистологический анализ изменений тканей головного мозга крыс с экспериментальным паркинсонизмом до и после трансплантации криоконсервированных эмбриональных нервных клеток
title_sort	гистологический анализ изменений тканей головного мозга крыс с экспериментальным паркинсонизмом до и после трансплантации криоконсервированных эмбриональных нервных клеток
publisher	Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
publishDate	2006
topic_facet	Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология
url	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/137083
citation_txt	Гистологический анализ изменений тканей головного мозга крыс с экспериментальным паркинсонизмом до и после трансплантации криоконсервированных эмбриональных нервных клеток / В.А. Пятикоп, В.Д. Карамышев, В.М. Шеверева, В.К. Дворцевой // Проблемы криобиологии. — 2006. — Т. 16, № 2. — С. 211-216. — Бібліогр.: 7 назв. — рос.
series	Проблемы криобиологии и криомедицины
work_keys_str_mv	AT pâtikopva gistologičeskijanalizizmenenijtkanejgolovnogomozgakrysséksperimentalʹnymparkinsonizmomdoiposletransplantaciikriokonservirovannyhémbrionalʹnyhnervnyhkletok AT karamyševvd gistologičeskijanalizizmenenijtkanejgolovnogomozgakrysséksperimentalʹnymparkinsonizmomdoiposletransplantaciikriokonservirovannyhémbrionalʹnyhnervnyhkletok AT ševerevavm gistologičeskijanalizizmenenijtkanejgolovnogomozgakrysséksperimentalʹnymparkinsonizmomdoiposletransplantaciikriokonservirovannyhémbrionalʹnyhnervnyhkletok AT dvorcevojvk gistologičeskijanalizizmenenijtkanejgolovnogomozgakrysséksperimentalʹnymparkinsonizmomdoiposletransplantaciikriokonservirovannyhémbrionalʹnyhnervnyhkletok AT pâtikopva histologicalanalysisofchangesinbraintissuesofratswithexperimentalparkinsondiseasepriortoandaftertransplantationofcryopreservedembryonicnervecells AT karamyševvd histologicalanalysisofchangesinbraintissuesofratswithexperimentalparkinsondiseasepriortoandaftertransplantationofcryopreservedembryonicnervecells AT ševerevavm histologicalanalysisofchangesinbraintissuesofratswithexperimentalparkinsondiseasepriortoandaftertransplantationofcryopreservedembryonicnervecells AT dvorcevojvk histologicalanalysisofchangesinbraintissuesofratswithexperimentalparkinsondiseasepriortoandaftertransplantationofcryopreservedembryonicnervecells
first_indexed	2025-11-25T07:02:31Z
last_indexed	2025-11-25T07:02:31Z
_version_	1849744866292006912
fulltext	211 PROBLEMS OF CRYOBIOLOGY Vol. 16, 2006, №2 ПРОБЛЕМЫ КРИОБИОЛОГИИ Т. 16, 2006, №2 УДК 615.361.018.8.013.014.41:57.08.41 В.А. ПЯТИКОП1, В.Д. КАРАМЫШЕВ1, В.М. ШЕВЕРЕВА2, В.К. ДВОРЦЕВОЙ3* Гистологический анализ изменений тканей головного мозга крыс с экспериментальным паркинсонизмом до и после трансплантации криоконсервированных эмбриональных нервных клеток UDC 615.361.018.8.013.014.41:57.08.41 V.A. PYATIKOP1, V.D. KARAMYSHEV1, V.M. SHEVEREVA2, V.K. DVORTSEVOY3* Histological Analysis of Changes in Brain Tissues of Rats with Experimental Parkinson Disease Prior to and After Transplantation of Cryopreserved Embryonic Nerve Cells Представлена гистоморфологическая характеристика трансплантата криоконсервированных эмбриональных нервных клеток (ЭНК) у крыс с экспериментальным паркинсонизмом, который был получен двусторонним анодным электролизом черной субстанции. Показано, что пересаженные ЭНК пролиферируют в зоне введения и за пределом рубцового вала. Введенные нейробласты распространяются также за пределы зоны пролиферации. Ключевые слова: эмбриональные нервные клетки, паркинсонизм, трансплантация. Представлено гістоморфологічну характеристику трансплантату кріоконсервованих ембріональних нервових клітин (ЕНК) у щурів з експериментальним паркінсонізмом, який було отримано двостороннім анодним електролізом чорної субстанції. Показано, що пересаджені ЕНК проліферують в зоні введення та за межами рубцевого валу. Нейробласти, які були введені, розповсюджуються також за межі зони проліферації. Ключові слова: ембріональні нервові клітини, паркінсонізм, трансплантація. There are presented histomorphological characteristics of cryopreserved embryonic nerve cells (ENCs) transplants in rats with experimental parkinsonism, induced by bilateral anode electrolysis of substantia nigra. Engrafted ENCs were shown to proliferate within the introduction area and beyond the scar. The introduced neuroblasts are spread beyond the proliferation area as well. Key-words: embryonic nerve cells, parkinsonism, transplantation. 1Kharkov State Medical University, Kharkov, Ukraine 2Institute of Biology of Kharkov National University, Kharkov, Ukraine 3Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine of the Na- tional Academy of Sciences of Ukraine, Kharkov, Ukraine 1Харьковский государственный медицинский университет 2Институт биологии, Харьковский национальный университет 3Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины, г. Харьков Одним из основных принципов медикамен- тозного лечения паркинсонизма является дофамин- заместительная терапия (ДЗТ) – восполнение недостающего количества дофамина в организме больного путем введения дофасодержащих препаратов [1]. При продолжительном применении ДЗТ в связи с прогрессирующей дегенерацией нигростриарных нейронов, через которые опосре- дуется действие леводопы, и изменениями на синаптическом уровне постепенно снижается эффективность вводимых препаратов, что приво- дит к увеличению их дозировки, и, кроме того, появляются побочные эффекты в виде моторных флуктуаций и дискинезий [5]. Коррекция дисфункций дофаминэргических (ДЭ) структур, приводящая к полному регрессу двигательных нарушений у животных [2, 3], в КРИОМЕДИЦИНА, КЛИНИЧЕСКАЯ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ТРАНСПЛАНТОЛОГИЯ CRYOMEDICINE, CLINICAL AND EXPERIMENTAL TRANSPLANTOLOGY One of the main principles in medicamentous treatment of parkinsonism is a dopamine-substitutive therapy (DST): compensation of dopamine deficiency in a patient’s organism by introducing DOPA- containing preparations [1]. The efficiency of introduced preparations gradually reduces at a long- term DST application due to progressing degeneration of nigrostrial neurons through which the levodopa effect is mediated and owing to the changes at synaptic level, that results in augmentation of their dosage and additional side-effects in the form of motor fluctua- tions and dyskinesia [5]. Correction of dysfunctions in dopaminergic (DE) structures, resulting in a complete regress of locomotory disorders in animals [2, 3] is achieved in numerous experiments by transplantation of dopa- minergic neurons, which source can be either * Автор, которому необходимо направлять корреспонденцию: ул. Переяславская, 23, г. Харьков, Украина 61015; тел.:+38 (057) 373-41-35, факс: +38 (057) 373-30-84, электронная почта: cryo@online.kharkov.ua * To whom correspondence should be addressed: 23, Pereyaslavskaya str., Kharkov, Ukraine 61015; tel.:+380 57 373 4135, fax: +380 57 373 3084, e-mail: cryo@online.kharkov.ua 212 PROBLEMS OF CRYOBIOLOGY Vol. 16, 2006, №2 ПРОБЛЕМЫ КРИОБИОЛОГИИ Т. 16, 2006, №2 многочисленных экспериментах может достигать- ся трансплантацией дофаминэргических нейро- нов, источником которых могут быть как эмбрио- нальные стволовые клетки [6], так и нервные клетки ткани мозга эмбрионов различных сроков гестации [2-4]. Широкое клиническое применение эмбрио- нальных нервных клеток (ЭНК) ограничено отсутствием отработанных эффективных стан- дартных технологий их забора, последующего культивирования, достоверных результатов фундаментальных исследований по возможным последствиям их трансплантации в организм больного, связанных с иммунной несовмести- мостью ЭНК [3]. Цель работы – изучение особенностей гистомор- фологической структуры трансплантата криокон- сервированных ЭНК при экспериментальном паркинсонизме (ЭП) в различные сроки после их введения. Материалы и методы Эмбриональные нервные клетки крыс 17-18 дней гестации получали в условиях стерильности из головного мозга путем механического диспергиро- вания через нейлоновую ткань в растворе Хенкса. Полученную клеточную суспензию трижды цент- рифугировали при 1500 об/мин. Надосадок вместе со стромой, форменными элементами крови и поврежденными клетками удаляли. Количество клеток подсчитывали в камере Горяева, жизнеспо- собность определяли по суправитальному окраши- ванию 1%-м метиленовым синим. Конечная концентрация клеток составляла 10 млн в 1 мл суспензии, жизнеспособность – 92-95%. Морфоло- гическое исследование проводили в световом микроскопе “Биолам” при увеличении в 200 раз. Полученную суспензию ЭНК при температуре 4°С инкубировали в 15%-м растворе 1,2-пропан- диола, приготовленном на растворе Хенкса, содержащим 10% сахарозы. Время эквилибрации клеток с криозащитной средой составляло 10 мин. После инкубации в растворах криопротекторов клеточную суспензию расфасовывали во фторо- пластовые контейнеры высокого давления объе- мом 1 мл, криоконсервировали на замораживателе ЗП-10 (Украина). Замораживание проводили со скоростью 10°С/мин до –80°С с последующим погружением в жидкий азот. Отогрев проводили на водяной бане при температуре 40°С в течение 1-2 мин, после чего криопротектор из суспензии клеток удаляли однократным центрифугированием в растворе Хенкса с 10%-м раствором сахарозы при темпе- ратуре тающего льда (0-4°С). embryonic stem cells [6] or nerve cells of embryonic brain tissue of different gestation terms [2-4]. Extended clinical application of embryonic nerve cells (ENCs) is limited by the absence of any mastered efficient standard technologies of their derivation, following culturing, statistically significant results of fundamental studies on possible consequences of their transplantation into a patient’s organism, related to the ENCs immune incompatibility [3]. The work was targeted to studying the peculiarities of histomorphological structure of transplant of cryopreserved ENCs at an experimental parkinsonism (EP) within different terms after their introduction. Materials and methods Rat ENCs of 17-18 gestation days were derived under sterile conditions from bone marrow by mechanical dispersion through nylon tissue in Hank’s solution. Obtained cell suspension was three-fold centrifuged at 1500 rot/min. Supernatant together with stroma, formed elements and damaged cells were removed. Cell amount was calculated in Goryaev’s chamber, viability was determined by supravital staining with 1% methylene blue. Final cell concen- tration made 10 mln in 1 ml of suspension, viability was 92-95%. Morphological study was carried-out under Biolam light microscope, ×200 magnification. Obtained ENCs suspension was incubated at 4°C in 15% 1,2-propane diol solution, prepared with 10% sucrose-containing Hank’s solution. Cell equilibration time with cryoprotective medium made 10 min. After incubation in cryoprotective solutions cell suspension was packed into 1 ml fluoroplastic containers of high pressure, cryopreserved with ZP-10 freezer (Ukraine). Freezing was carried-out with 10°C/min rate down to –80°C with following immersion into liquid nitrogen. Thawing was done on water bath at 40°C for 1-2 min, then a cryoprotectant was removed out of cell suspension by single centrifugation in Hank’s solution with 10% sucrose one at melting ice temperature (0-4°C). Research in animals was performed according to the “General Principles of Experiments in Animals” approved by the Ist National Congress on Bioethics (Kiev, 2001). The 250-300g’ Wistar male rats were used in the experiments. Parkinsonism model was done by bilateral anode electrolysis of substantia nigra (SN). Anode was made with 0.3 mm steel wire, iso- lated throughout the length by polyvinylformal lacquer excluding an operative part of about 1 mm length. Cathode was placed into animal’s mouth. Electrolysis was done with 12 V current and 0.3 A current intensity with 6-8 sec exposure. For exact matching with the target we used the atlas of stereotactic coordinates of 213 PROBLEMS OF CRYOBIOLOGY Vol. 16, 2006, №2 ПРОБЛЕМЫ КРИОБИОЛОГИИ Т. 16, 2006, №2 Работа на животных выполнялась в соответ- ствии с “Общими принципами экспериментов на животных”, одобренных I Национальным конгрес- сом по биоэтике (Киев, 2001 г). В экспериментах были использованы крысы-самцы линии Wistar массой 250-300 г. Модель паркинсонизма созда- вали двусторонним анодным электролизом черной субстанции (substantia nigra, SN). Анод изготав- ливали из стальной проволоки диаметром 0,3 мм, изолированной по всей длине винифлексовым лаком за исключением рабочей части длиной до 1 мм. Катод помещали в рот животного. Электро- лиз выполняли током напряжением 12 В, силой тока 0,3 А с экспозицией 6-8 с. Для точного попадания в искомую цель использовали атлас стереотаксических координат мозга крысы [7] и стереотаксический аппарат. Операцию проводили под внутривенным тиопенталовым наркозом в дозе 12 мг на 100 г массы тела животного с фиксацией животного в стереотаксической установке для микроэлектродных исследований головного и спинного мозга животных СЭЖ 3 (ОП Института физиологии им. А.А. Богомольца АН УССР,1972 г) Животные были разделены на две группы: I – контрольная с двусторонней деструкцией SN (6 животных); II – группа животных с деструкцией SN и трансплантацией ЭНК (24 животных). Введение ЭНК во II группе животных произво- дили стереотаксически по описанной методике в зону анодной деструкции на 7-е сутки после операции создания ЭП. Гистологическую оценку очага анодной де- струкции у крыс I группы проводили на 10-, 30- и 50-е сутки, состояние трансплантата криокон- сервированных ЭНК у животных II группы проводили на 5-, 15-, 30- и 50-е сутки после введения. Гистологические срезы мозга окраши- вали гематоксилин-эозином и толуидиновым синим по методу Ниссля. Статистическую обработку результатов выпол- няли по методу Стьюдента. Результаты и обсуждение Проведенные исследования показали, что использованный метод криоконсервирования по двухэтапной программе с 1,2-пропандиолом в качестве криопротектора позволил сохранить 85%±5% жизнеспособных ЭНК (по окрашиванию метиленовым синим), тогда как жизнеспособ- ность до криоконсервирования составляла 92±4%. Двусторонняя деструкция SN с помощью анодно- го электролиза дала возможность получить ЭП с характерными двигательными расстройствами [4]. Гистологические исследования тканей голов- ного мозга животных после моделирования ЭП rat brain [7] and stereotactic apparatus. Operation was done under intravenous thiopental narcosis in 12 mg dose per 100 g of animal body weight with animal fixation in SEZh 3 stereotactic device for animal brain and spinal cord microelectrode studies (Experimental Unit of A.A. Bogomolets Institute of Physiology of Academy of Sciences of UkrSSR, 1972). Animals were divided into 3 groups: The Ist: control with SN bilateral destruction (6 animals); The IInd: animals with SN destruction and ENCs transplantation (24 animals). In the IInd group the ENCs were stereotactically introduced according to the described technique into the area of anode destruction to the 7th day after operation on EP formation. Histological evaluation of anode destruction focus in rats of Ist group was carried-out to the 10th, 30th and 50th days, state of cryopreserved ENCs transplant in IInd group’s animals was done to the 5th, 15th, 30th and 50th days after introduction. Histological sections of brain were stained with hematoxylin-eosin and toluidine blue by Nissl method. Results were statistically processed by Student’s method. Results and discussion The performed studies have demonstrated that the used cryopreservation method using two-step program with 1,2-propane diol as a cryoprotectant enables to preserve 85±5% of viable ENCs (by methylene-blue staining), meanwhile the viability before cryopreser- vation was 92±4%. SN bilateral destruction with anode electrolysis made it possible to induce EP with typical locomotory disorders [4]. Histological studies of animal brain tissues after EP modeling have shown distinct foci of electrolytic destruction of SN brain tissue (Fig. 1-3). Thus, 10 days after destruction in brain tissue of Ist group’s animals the phenomena of moderate pericellular oedema, diffusive lymphatic infiltration, vacuolar dystrophy and neuron necrotization are manifested (Fig. 1). No significant changes from glial cells during preparation staining with hematoxylin-eosin were observed. A complete atrophy in neurons and diffusive hyperplasia of glial cells with hyperemic dilation of surrounding vessels were observed in destruction focus of Ist group’s animals 30 days after damage (Fig. 2) . The injury focus becomes more packed, the necrotised structures are resolved and the cavity, surrounded with glial scar is formed on their place 50 days after destruction (Fig. 3). Neuron hypertrophy and diffusive hyperplasia of glial cells with slightly manifested lymphatic infiltration are noted around the destruction focus. 214 PROBLEMS OF CRYOBIOLOGY Vol. 16, 2006, №2 ПРОБЛЕМЫ КРИОБИОЛОГИИ Т. 16, 2006, №2 показали отчетливые очаги электролитической деструкции мозговой ткани SN (рис. 1-3). Так, через 10 сут после деструкции в мозговой ткани животных I группы выражены явления умерен- ного перицеллюлярного отека, диффузной лимфа- тической инфильтрации, вакуолярной дистрофии и некротизации нейронов (рис. 1). Со стороны глиальных клеток при окраске препарата гема- токсилин-эозином существенных изменений не отмечалось. Через 30 сут после повреждения (рис. 2) в очаге деструкции животных I группы заметны полная атрофия нейронов и диффузная гиперплазия глиальных клеток с гиперемической дилатацией окружающих сосудов. Через 50 сут после деструкции (рис. 3) очаг повреждения уплотняется, некротизированные структуры рассасываются и на их месте образуется полость, окруженная глиальным валом. Вокруг очага деструкции заметны гипертрофия нейронов и диффузная гиперплазия глиальных клеток со слабо выраженной лимфатической инфильтра- цией. После трансплантации ЭНК у животных II группы на 5-е сутки (рис. 4) наблюдается нерав- номерное распределение нейробластов в ткани мозга. Отчетливо видно, что нейробласты распро- страняются в одном направлении. Вероятно, это связано с интенсивностью кровоснабжения. В месте доминирующего распространения нейро- бластов отмечаются слабо выраженное уплотнение и гипертрофия глиальных клеток. Зона введения суспензии начинает ограничиваться глиальным валом. Количество мигрировавших нейробластов выше в зоне более интенсивного кровоснабжения, где образование глиального рубца отсутствует. Рис. 1. Гистоморфологические изменения участка головного мозга крыс с ЭП на 10-е сутки после электро- литической деструкции. Окраска гематоксилин- эозином, об.4, ок. 10. Fig. 1. Histomorphological changes of brain tissue area in rats with EP to the 10th day after electrolysis destruction. Haematoxylin-eosine staining, objective 4, ocular 10. Рис. 2. Гистоморфологические изменения участка головного мозга крыс с ЭП на 30-е сутки после электро- литической деструкции. Окраска гематоксилин- эозином, об. 4, ок. 10. Fig. 2. Histomorphological changes of brain tissue area in rats with EP to the 30th day after electrolysis destruction. Haematoxylin-eosine staining, objective 4, ocular 10. Рис. 3. Гистоморфологические изменения участка головного мозга крыс с ЭП на 50-е сутки после электро- литической деструкции. Окраска гематоксилин- эозином, об. 4, ок. 10. Fig. 3. Histomorphological changes of brain tissue area in rats with EP to the 50th day after electrolysis destruction. Haematoxylin-eosine staining, objective 4, ocular 10. To the 5th day following ENCs transplantation an uneven distribution of neuroblasts into brain tissue is noted in animals of the IInd group (Fig. 4). Neuroblasts are distinctively observed to be spread in one direction. This is probably related to the intensity of blood supply. In the site where neuroblast propagation predominates, a slightly manifested packing and hypertrophy of glial cells are noted. The area of suspension introduction begins to be limited by glial scar. The amount of migrated neuroblasts is higher in the area of more intensive blood supply, where no glial cicatrix is formed. To the 10th day in IInd group animals the packing of glial cells with formation of uncompacted glial cicatrix occurs around the ENCs suspension introduction area of (Fig. 5). A limited cell proliferation is seen within 215 PROBLEMS OF CRYOBIOLOGY Vol. 16, 2006, №2 ПРОБЛЕМЫ КРИОБИОЛОГИИ Т. 16, 2006, №2 На 10-e сутки у животных II группы вокруг зоны введения суспензии ЭНК происходит уплотнение глиальных клеток с образованием неплотного глиального рубца (рис. 5). В зоне введения видна ограниченная пролиферация клеток, о которой можно судить по визуальному сравнению относи- тельных размеров клеток и ядер, а также характер- ному расположению хроматина. За пределами глиального рубца определяется диффузная проли- ферация имплантированных клеток, мигриро- вавших из зоны введения (рис. 5). На 30-е сутки после трансплантации ЭНК отмечаются участки приживления трансплантата, визуализируются группы нейробластов, окружен- ные глиальными клетками, заметно увеличение количества нейробластов в каждой группе клеток (рис. 6). На 50-е сутки в зоне имплантации ЭНК видны группы нейробластов, окруженные диффузно расположенными глиальными клетками (рис. 7). За пределами неплотного вала из глиальных клеток были выявлены отдельные нейробласты, что не исключает возможности протекания дальнейших процессов миграции трансплантируемого мате- риала. Выводы Двусторонний анодный электролиз SN позво- ляет получить ЭП с характерной гистологической картиной очага анодной деструкции, характери- зующейся некротизацией нейронов, их атрофией, гиперплазией глиальных клеток с дилатацией кровеносных сосудов и лимфатической инфиль- трацией. Рис. 4. Гистоморфологические изменения участка головного мозга крыс с ЭП на 5-е сутки после транс- плантации криоконсервированных ЭНК. Окраска толуидиновым синим по Нисслю, об. 10, ок. 10. Fig. 4. Histomorphological changes of brain tissue area in rats with EP to the 5th day after transplantation of cryopre- served ENCs. Haematoxylin-eosine staining, objective 4, ocular 10. Рис. 5. Гистоморфологические изменения участка головного мозга крыс с ЭП на 10-е сутки после транс- плантации криоконсервированных ЭНК. Окраска толуидиновым синим по Нисслю, об. 10, ок. 10. Fig. 5. Histomorphological changes of brain tissue area in rats with EP to the 10th day after transplantation of cryopre- served ENCs. Haematoxylin-eosine staining, objective 4, ocular 10. the introduction area, that can be judged by visual comparing the relative sizes of cells and nuclei, as well as by typical chromatin location. Beyond the glial cicatrix a diffusive proliferation of implanted cells, migrated from introduction area is determined (Fig. 5). To the 30th day after ENCs transplantation there are noted the sites of transplant’s engraftment, the groups of neuroblasts, surrounded with glial cells are visualized, an increase in neuroblast amount in each group of cells is noticeable (Fig. 6). To the 50th day in the area of ENCs implantation the groups of neuroblasts, surrounded with diffusely located glial cells are seen (Fig. 7). Certain neuroblasts Рис. 6. Гистоморфологические изменения участка головного мозга крыс с ЭП на 30-е сутки после трансплантации криоконсервированных ЭНК. Окраска толуидиновым синим по Нисслю, об.10, ок. 10. Fig. 6. Histomorphological changes of brain tissue area in rats with EP to the 30th day after transplantation of cryo- preserved ENCs. Haematoxylin-eosine staining, objective 4, ocular 10. 216 PROBLEMS OF CRYOBIOLOGY Vol. 16, 2006, №2 ПРОБЛЕМЫ КРИОБИОЛОГИИ Т. 16, 2006, №2 Гистоморфологические исследования динами- ки изменения состояния пересаженных криокон- сервированных ЭНК у крыс с ЭП свидетельствуют о пролиферации нейробластов как в зоне пере- садки, так и за пределами рубцового вала, сформированного глиальными клетками. Наличие отдельных нейробластов за пределами неплотного вала из глиальных клеток не исключает возможности распространения имплантированных нейробластов за пределы очага пролиферации. Рис. 7. Гистоморфологические изменения участка головного мозга крыс с ЭП на 50-е сутки после транс- плантации криоконсервированных ЭНК. Окраска толуидиновым синим по Нисслю, об.10, ок. 10. Fig. 7. Histomorphological changes of brain tissue area in rats with EP to the 10th day after transplantation of cryopre- served ENCs. Haematoxylin-eosine staining, objective 4, ocular 10. Литература Гринберг Д., Аминофф М., Саймон Р. Клиническая неврология.– М., 2004.– 512 с. Бровина Н.Н. Гордиенко Ж.П., Берченко О.Г. Морфо- функциональные особенности головного мозга крыс при трансплантации специфической эмбриональной нервной ткани на модели экстрапирамидных нарушений // В сб.: Актуальные вопросы репродуктологии и криомедицины.– Харьков, 1998. – С. 189-193. Чехонин В.П., Лебедев С.В., Дмитриева Т.Б. и др. Критерии эффективности трансплантации препаратов эмбриональной нервной ткани у крыс с повреждением дофаминэргической нигростриарной системы 6-гидро- оксидофамином (6-OHDA) // Патол. физиология и эксперим. терапия. – 2002.– №3.– С. 19-22. Чехонин В.П., Лебедев С.В., Дмитриева Т.Б. и др. Сравнение эффективности клеточных препаратов из эмбрионального вентрального мезенцефалона различных сроков пренатального периода при интрастриарной трансплантации крысам с 6-OHDA-паркинсонизмом // Бюл. эксперим. биол.– 2002.– Т. 133, №6.– С. 701-706. Экстрапирамидные расстройства. Руководство по диагностике и лечению // Под ред. В.Н.Штока, И.А. Ива- новой-Смоленской, О.С.Левина.– М., 2002.– 606 с. Bjorklund L.M., Sanchez-Pernaute R., Chung S. et al. Embryonic stem cells develop into functional dopaminergic neurons after transplantation in a Parkinson rat model // PNAS USA.– 2002.– Vol. 99, N4.– P. 1755-1757. Fifkova E., Marsala J. Stereotaxic atlases for the cat, rabbit and rat / In: Electrophysiological Methods in Biological Research / Eds: J. Bures, M. Petran, and J. Zachar.– New York: Academic Press, 1967.– P. 653-731. Поступила 29.09.2006 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. were revealed beyond an uncompacted scar of glial cells, that did not exclude a possible migration of transplanted material. Conclusions SN bilateral anode electrolysis enables the EP induction with a typical histological picture of anode destruction focus, characterizing by nectrotization of neurons, their atrophy, hyperplasia of glial cells with blood vessel dilation and lymphatic infiltration. Histomorphological studies of the dynamics of change in the engrafted cryopreserved ENCs state in EP rats testify to the proliferation of neuroblasts both in the engraftment area and beyond the scar, formed by glial cells. Presence of certain neuroblasts beyond uncom- pacted scar of glial cells does not exclude the possibility of implanted neuroblast propagation beyond the proliferation focus. References Greenberg D., Aminoff M., Simon R. Clinical neurology.– Moscow, 2004.– 512 p. Brovina N.N., Gordienko Zh.P., Berchenko O.G. Morpho- functional peculiarities of rat brain at transplantation of specific embryonic nerve tissue in the model of extrapyramidal disorders // In: Actual Problems of Reproductology and Cryomedicine.– Kharkov, 1998.– P. 189-193. Chekhonin V.P., Lebedev S.V., Dmitrieva T.B. et al. Criteria of transplantation efficiency of embryonic nerve tissue preparations in rats with damage of dopaminergic nigrostriar system by 6-hydroxydopamine (6-OHDA) // Patol. Fiziologiya i Eksperim. Terapiya.– 2002.– N3.– P. 19-22. Chekhonin V.P., Lebedev S.V., Dmitrieva T.B. et al. Comparison of efficiency of cell preparations of embryonic ventral mesencephalon of different terms of prenatal period at intrastrial transplantation to rats with 6-OHDA-parkinso- nism // Bull. Eksperim. Biol.– 2002.– Vol. 133, N6.– P. 701-706. Extrapyramidal disorders. Manual on diagnosis and treatment / Eds: V.N. Shtok, I.A. Ivanova-Smolenskaya, O.S. Levin.– Moscow, 2002.– 606 p. Bjorklund L.M., Sanchez-Pernaute R., Chung S. et al. Embryonic stem cells develop into functional dopaminergic neurons after transplantation in a Parkinson rat model // PNAS USA.– 2002.– Vol. 99, N4.– P. 1755-1757. Fifkova E., Marsala J. Stereotaxic atlases for the cat, rabbit and rat / In: Electrophysiological Methods in Biological Research / Eds: J. Bures, M. Petran, and J. Zachar.– New York: Academic Press, 1967.– P. 653-731. Accepted in 29.09.2006 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.

Репозитарії

Схожі ресурси