Влияние комбинированных сред на повреждение эритроцитов, замороженных с различным гематокритом
Исследовали повреждение эритроцитов, замороженных с низким (0,8%) и высоким (40%) гематокритом в средах с криопротекторами: непроникающими – полиэтиленгликоль с м.м. 1500 и 2000 (ПЭГ-1500, ПЭГ-2000), декстраны и проникающими – глицерин, диметилсульфоксид, 1,2-пропандиол, ПЭГ-400, глюкоза. Показано,...
Gespeichert in:
| Veröffentlicht in: | Проблемы криобиологии и криомедицины |
|---|---|
| Datum: | 2006 |
| 1. Verfasser: | |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | Russian |
| Veröffentlicht: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2006
|
| Schlagworte: | |
| Online Zugang: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/137090 |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Zitieren: | Влияние комбинированных сред на повреждение эритроцитов, замороженных с различным гематокритом / В.В. Рамазанов // Проблемы криобиологии. — 2006. — Т. 16, № 2. — С. 155-163. — Бібліогр.: 20 назв. — рос. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-137090 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Рамазанов, В.В. 2018-06-16T22:48:49Z 2018-06-16T22:48:49Z 2006 Влияние комбинированных сред на повреждение эритроцитов, замороженных с различным гематокритом / В.В. Рамазанов // Проблемы криобиологии. — 2006. — Т. 16, № 2. — С. 155-163. — Бібліогр.: 20 назв. — рос. https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/137090 57.043:612.111:547.422 Исследовали повреждение эритроцитов, замороженных с низким (0,8%) и высоким (40%) гематокритом в средах с криопротекторами: непроникающими – полиэтиленгликоль с м.м. 1500 и 2000 (ПЭГ-1500, ПЭГ-2000), декстраны и проникающими – глицерин, диметилсульфоксид, 1,2-пропандиол, ПЭГ-400, глюкоза. Показано, что в сахарозо-солевой среде замораживание эритроцитов с высоким гематокритом дает больший уровень повреждения клеток по сравнению с низким гематокритом. Комбинирование указанной среды с непроникающими криопротекторами не устраняет эффект “упаковки”. В то же время проникающие криопротекторы устраняют его. Полученные результаты указывают на то, что для устранения повреждения, связанного с высокой плотностью клеток в среде замораживания, необходимо комбинирование сахарозы с проникающими криопротекторами. Досліджували ушкодження еритроцитів, заморожених з низьким (0,8%) і високим (40%) гематокритом у середовищах з кріопротекторами: непроникаючими – поліетиленгліколь з м.м. 1500 та 2000 (ПЕГ-1500, ПЕГ-2000), декстрани і проникаючими – гліцерин, діметилсульфоксид, 1,2-пропандіол, ПЕГ-400, глюкоза. Доведено, що в сахарозо-сольовому середовищі при заморожуванні з високим гематокритом рівень ушкодження клітин вищий, ніж з низьким. Комбінування вказаного середовища з непроникаючими кріопротекторами не усуває ефекту „упаковки”. В той же час проникаючі кріопротектори усувають його. Отримані результати вказують на те, що для усунення пошкодження, пов’язаного з високою щільністю клітин в середовищі заморожування, потрібно комбінування сахарози та проникаючих кріопротекторів. Damage of erythrocytes, frozen with low (0.8%) and high (40%) hematocrit values in media with non-penetrative (polyethylene glycol with molecular mass of 1500 and 2000 (PEG-1500, PEG-2000), dextrans) and penetrative (glycerol, dimethylsufoxide, 1,2-propane diol, PEG-400, glucose) cryoprotectants has been studied. Freezing of erythrocytes with high hematocrit in sucrose-saline medium was demonstrated as resulting in higher cell damages if to compare with a low hematocrit. Combining this mentioned medium with non-penetrative cryoprotectant does not eliminate the “packing” effect, while the penetrative ones realise it. The results obtained indicate to the fact, that in order to eliminate the damage, relating to high cell density in freezing medium the combination of sucrose with penetrative cryoprotectants is needed. ru Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии и криомедицины Теоретическая и экспериментальная криобиология Влияние комбинированных сред на повреждение эритроцитов, замороженных с различным гематокритом Effect of combined media on damage of erythrocytes, frozen with different hematocrit values Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Влияние комбинированных сред на повреждение эритроцитов, замороженных с различным гематокритом |
| spellingShingle |
Влияние комбинированных сред на повреждение эритроцитов, замороженных с различным гематокритом Рамазанов, В.В. Теоретическая и экспериментальная криобиология |
| title_short |
Влияние комбинированных сред на повреждение эритроцитов, замороженных с различным гематокритом |
| title_full |
Влияние комбинированных сред на повреждение эритроцитов, замороженных с различным гематокритом |
| title_fullStr |
Влияние комбинированных сред на повреждение эритроцитов, замороженных с различным гематокритом |
| title_full_unstemmed |
Влияние комбинированных сред на повреждение эритроцитов, замороженных с различным гематокритом |
| title_sort |
влияние комбинированных сред на повреждение эритроцитов, замороженных с различным гематокритом |
| author |
Рамазанов, В.В. |
| author_facet |
Рамазанов, В.В. |
| topic |
Теоретическая и экспериментальная криобиология |
| topic_facet |
Теоретическая и экспериментальная криобиология |
| publishDate |
2006 |
| language |
Russian |
| container_title |
Проблемы криобиологии и криомедицины |
| publisher |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Effect of combined media on damage of erythrocytes, frozen with different hematocrit values |
| description |
Исследовали повреждение эритроцитов, замороженных с низким (0,8%) и высоким (40%) гематокритом в средах с криопротекторами: непроникающими – полиэтиленгликоль с м.м. 1500 и 2000 (ПЭГ-1500, ПЭГ-2000), декстраны и проникающими – глицерин, диметилсульфоксид, 1,2-пропандиол, ПЭГ-400, глюкоза. Показано, что в сахарозо-солевой среде замораживание эритроцитов с высоким гематокритом дает больший уровень повреждения клеток по сравнению с низким гематокритом. Комбинирование указанной среды с непроникающими криопротекторами не устраняет эффект “упаковки”. В то же время проникающие криопротекторы устраняют его. Полученные результаты указывают на то, что для устранения повреждения, связанного с высокой плотностью клеток в среде замораживания, необходимо комбинирование сахарозы с проникающими криопротекторами.
Досліджували ушкодження еритроцитів, заморожених з низьким (0,8%) і високим (40%) гематокритом у середовищах з кріопротекторами: непроникаючими – поліетиленгліколь з м.м. 1500 та 2000 (ПЕГ-1500, ПЕГ-2000), декстрани і проникаючими – гліцерин, діметилсульфоксид, 1,2-пропандіол, ПЕГ-400, глюкоза. Доведено, що в сахарозо-сольовому середовищі при заморожуванні з високим гематокритом рівень ушкодження клітин вищий, ніж з низьким. Комбінування вказаного середовища з непроникаючими кріопротекторами не усуває ефекту „упаковки”. В той же час проникаючі кріопротектори усувають його. Отримані результати вказують на те, що для усунення пошкодження, пов’язаного з високою щільністю клітин в середовищі заморожування, потрібно комбінування сахарози та проникаючих кріопротекторів.
Damage of erythrocytes, frozen with low (0.8%) and high (40%) hematocrit values in media with non-penetrative (polyethylene glycol with molecular mass of 1500 and 2000 (PEG-1500, PEG-2000), dextrans) and penetrative (glycerol, dimethylsufoxide, 1,2-propane diol, PEG-400, glucose) cryoprotectants has been studied. Freezing of erythrocytes with high hematocrit in sucrose-saline medium was demonstrated as resulting in higher cell damages if to compare with a low hematocrit. Combining this mentioned medium with non-penetrative cryoprotectant does not eliminate the “packing” effect, while the penetrative ones realise it. The results obtained indicate to the fact, that in order to eliminate the damage, relating to high cell density in freezing medium the combination of sucrose with penetrative cryoprotectants is needed.
|
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/137090 |
| citation_txt |
Влияние комбинированных сред на повреждение эритроцитов, замороженных с различным гематокритом / В.В. Рамазанов // Проблемы криобиологии. — 2006. — Т. 16, № 2. — С. 155-163. — Бібліогр.: 20 назв. — рос. |
| work_keys_str_mv |
AT ramazanovvv vliâniekombinirovannyhsrednapovreždenieéritrocitovzamorožennyhsrazličnymgematokritom AT ramazanovvv effectofcombinedmediaondamageoferythrocytesfrozenwithdifferenthematocritvalues |
| first_indexed |
2025-11-25T21:04:07Z |
| last_indexed |
2025-11-25T21:04:07Z |
| _version_ |
1850543456789725184 |
| fulltext |
155 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 16, 2006, №2
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 16, 2006, №2
УДК: 57.043:612.111:547.422
В.В. РАМАЗАНОВ
Влияние комбинированных сред на повреждение эритроцитов,
замороженных с различным гематокритом
UDC 57.043:612.111:547.422
V.V. RAMAZANOV
Effect of Combined Media on Damage of Erythrocytes, Frozen with
Different Hematocrit Values
Исследовали повреждение эритроцитов, замороженных с низким (0,8%) и высоким (40%) гематокритом в средах с
криопротекторами: непроникающими – полиэтиленгликоль с м.м. 1500 и 2000 (ПЭГ-1500, ПЭГ-2000), декстраны и
проникающими – глицерин, диметилсульфоксид, 1,2-пропандиол, ПЭГ-400, глюкоза. Показано, что в сахарозо-солевой среде
замораживание эритроцитов с высоким гематокритом дает больший уровень повреждения клеток по сравнению с низким
гематокритом. Комбинирование указанной среды с непроникающими криопротекторами не устраняет эффект “упаковки”. В
то же время проникающие криопротекторы устраняют его. Полученные результаты указывают на то, что для устранения
повреждения, связанного с высокой плотностью клеток в среде замораживания, необходимо комбинирование сахарозы с
проникающими криопротекторами.
Ключевые слова: эритроциты, комбинированные криоконсерванты, эффект “упаковки”.
Досліджували ушкодження еритроцитів, заморожених з низьким (0,8%) і високим (40%) гематокритом у середовищах з
кріопротекторами: непроникаючими – поліетиленгліколь з м.м. 1500 та 2000 (ПЕГ-1500, ПЕГ-2000), декстрани і проникаючими –
гліцерин, діметилсульфоксид, 1,2-пропандіол, ПЕГ-400, глюкоза. Доведено, що в сахарозо-сольовому середовищі при
заморожуванні з високим гематокритом рівень ушкодження клітин вищий, ніж з низьким. Комбінування вказаного середовища
з непроникаючими кріопротекторами не усуває ефекту „упаковки”. В той же час проникаючі кріопротектори усувають його.
Отримані результати вказують на те, що для усунення пошкодження, пов’язаного з високою щільністю клітин в середовищі
заморожування, потрібно комбінування сахарози та проникаючих кріопротекторів.
Ключові слова: еритроцити, комбіновані кріоконсерванти, ефект „упаковки”.
Damage of erythrocytes, frozen with low (0.8%) and high (40%) hematocrit values in media with non-penetrative (polyethylene
glycol with molecular mass of 1500 and 2000 (PEG-1500, PEG-2000), dextrans) and penetrative (glycerol, dimethylsufoxide, 1,2-pro-
pane diol, PEG-400, glucose) cryoprotectants has been studied. Freezing of erythrocytes with high hematocrit in sucrose-saline
medium was demonstrated as resulting in higher cell damages if to compare with a low hematocrit. Combining this mentioned medium
with non-penetrative cryoprotectant does not eliminate the “packing” effect, while the penetrative ones realise it. The results obtained
indicate to the fact, that in order to eliminate the damage, relating to high cell density in freezing medium the combination of sucrose
with penetrative cryoprotectants is needed.
Key-words:erythrocytes, combined cryopreservatives, “packing” effect.
* Автор, которому необходимо направлять корреспонденцию:
Рамазанов В.В., ул. Переяславская, 23, г. Харьков, Украина
61015; тел.:+38 (057) 373-41-35, факс: +38 (057) 373-30-84,
электронная почта: cryo@online.kharkov.ua
* To whom correspondence should be addressed: Ramazanov V.V.,
23, Pereyaslavskaya str., Kharkov, Ukraine 61015; tel.:+380 57 373
4135, fax: +380 57 373 3084, e-mail: cryo@online.kharkov.ua
Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine of the Na-
tional Academy of Sciences of Ukraine, Kharkov, Ukraine
Институт проблем криобиологии и криомедицины
НАН Украины, г. Харьков
When using hydroxyethyl starch (HES) for obtaining
granulocytes and their following cryopreservation with
DMSO adding, a residual HES was found-out to
prevent cell swelling, release of lysosomal enzymes
and nucleoproteins after freeze-thawing [10]. Com-
paring bone marrow frozen cells with 10% dimethyl
sulfoxide (DMSO) and 5% DMSO+6% HES con-
centrations demonstrates that a combination of pene-
trative and non-penetrative cryoprotectants results in
an increase in cell viability and prevention of their
aggregation after freeze-thawing, as well as makes it
unnecessary to control cooling rate [6, 18, 19]. In case
of erythrocytes and hepatocytes the combination of
high-molecular polymers with penetrative cryopro-
tectants enables to reduce the concentration of latter
При использовании гидроксиэтилированного
крахмала (ГЭК) для получения гранулоцитов и их
последующего криоконсервирования с добавле-
нием ДМСО выявлено, что остаточный ГЭК
предотвращает набухание клеток, освобождение
лизосомальных ферментов и нуклеопротеинов
после размораживания [10]. Сравнение результатов
консервирования клеток костного мозга под
защитой диметилсульфоксида (ДМСО) с концент-
рацией 10% и смеси 5% ДМСО + 6% ГЭК
показывает, что комбинация проникающего и не-
проникающего криопротекторов приводит к повы-
шению жизнеспособности клеток и предотвраще-
нию их агрегации после размораживания, а также
снимает необходимость контроля скорости охлаж-
156 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 16, 2006, №2
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 16, 2006, №2
[2, 3] and augment freezing rate with no reduction in
indices of viability [1].
Literature data indicate to the common reasons of
additional damage of different cells, which can be
prevented if combining protection with high-molecular
polymers and penetrative cryoprotectants. Analysis of
literature demonstrates that a high cell concentration
in cryopreservation media can be one of the reasons
of their damaging [7, 12, 15-17, 20]. At slow freezing
the erythrocytes under growing ice crystal effect are
concentrated in the frozen channels, where they are
compressed and destroyed [15]. Hematocrit decrease
in freezing medium causes a positive effect, at the
same time the one of cell concentration was established
to be stipulated by freezing and thawing rates, as well
as by glycerol concentration in a preservative medium
[7, 16, 17, 20]. Such results point to the fact that a
negative effect of cell density on their integrity at
freezing is related not only to additional effects of
solution and ice concentration, but to that of freezing
and thawing rates on sizes of liquid channels as well,
where cells have contacts with other cells and growing
ice crystals [17]. Cell preservation at a low hematocrit
mostly depends the amount of unfrozen liquid, than
salt concentration in it, meanwhile at a high hematocrit
the integrity is determined by two mentioned factors.
Considerable damage is noted under maximum
dehydration and maximally tight contact between cells,
that corresponds to salt hyperconcentration during
erythrocyte freezing with a high hematocrit [12]. At a
rapid freezing the effect time of salt high concentrations
reduces. In addition, in this case cells are dispersively
distributed inside formed ice crystals, though a nega-
tive effect of increase in cell concentration is revealed
under these conditions as well. Therefore there was
concluded about differing of the mechanism of addi-
tional increase of cell damage from the one at slow
freezing [14].
The work was aimed to determine the effect of
non-penetrative and penetrative cryoprotectants, as
well as their combination on negative effect of high
cell density (“packing” effect), found-out during
erythrocyte freezing in sucrose-saline medium. The
performed experiments demonstrated that for avoiding
additional damages during freezing, being stipulated by
a high hematocrit, a slight amount of penetrative
cryoprotectants together with sucrose was sufficient.
Materials and methods
NaCl (“chemically pure”), sucrose (“pure for ana-
lysis”), glucose (“pure for analysis”), polyethylene
glycols (PEG) with 400, 1500, 2000 molecular mass
(Merck); dextrans with 10000 (Dex-10) and 35000
(Dex-35) molecular mass (Serva); glycerol (Germany);
1,2-propane diol (1,2-PD); dimethyl sulfoxide (DMSO,
Sigma) were used in the work. Human erythrocytes
дения [6, 18, 19]. В случае эритроцитов и гепато-
цитов сочетание высокомолекулярных полимеров
с проникающими криопротекторами позволяет
снизить концентрацию последних [2, 3] и повысить
скорость замораживания без снижения показате-
лей жизнеспособности [1].
Данные литературы указывают на общие
причины дополнительного повреждения различных
клеток, которое можно предотвратить при комби-
нированной защите высокомолекулярными поли-
мерами и проникающими криопротекторами.
Анализ литературы показывает, что одной из
причин повреждения клеток может быть их высо-
кая концентрация в средах криоконсервирования
[7, 12, 15-17, 20]. При медленном замораживании
эритроциты концентрируются в каналах между
растущими кристаллами льда, где сдавливаются
и разрушаются [15]. Снижение гематокрита в
среде замораживания вызывает положительный
эффект, при этом установлено, что эффект концент-
рации эритроцитов обусловлен скоростями замора-
живания и размораживания, а также концентрацией
глицерина в консервирующей среде [7, 16, 17, 20].
Такие результаты указывают на то, что отрица-
тельное влияние высокой концентрации клеток на
их сохранность при замораживании связано не
только с дополнительными эффектами концен-
трирования раствора и образования льда, но и
влиянием скоростей замораживания и разморажи-
вания на размеры каналов, в которых клетки кон-
тактируют между собой и растущими кристалла-
ми льда [17]. При низком гематокрите сохранность
эритроцитов в большей степени зависит от коли-
чества незамерзшей жидкости, чем концентрации
солей в ней, тогда как при высоком гематокрите
сохранность определяется указанными факторами.
Значительное повреждение отмечается в условиях
максимальной дегидратации и максимально
плотных межклеточных контактов, что соответ-
ствует гиперконцентрированию солей при замора-
живании эритроцитов с высоким гематокритом
[12]. При быстром замораживании уменьшается
время воздействия высоких концентраций раство-
ренных веществ. Кроме того, в этом случае клетки
дисперсно распределены внутри образовавшихся
кристаллов льда, тем не менее отрицательное влия-
ние повышения концентрации клеток выявляется
и в этих условиях. Поэтому был сделан вывод, что
механизм дополнительного прироста повреждения
клеток при быстром замораживании отличается
от такового при медленном [14].
Цель работы – определить влияние непрони-
кающих и проникающих криопротекторов, а также
их комбинаций на отрицательный эффект высокой
концентрации клеток – эффект “упаковки”, выяв-
ленный при замораживании эритроцитов в сахарозо-
157 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 16, 2006, №2
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 16, 2006, №2
were derived from donor blood by means of four-fold
washing-out with the solution, containing 0.15 M NaCl,
10 mM Tris, pH 7.6 (medium-1). In order to obtain
solutions with different NaCl and sucrose content the
medium-1 was mixed with the solution, containing 0.3M
sucrose, 10 mM Tris, pH 7.6. At the same time the
following medium composition was obtained: 100 mM
NaCl +100 mM sucrose; 75 mM NaCl + 150 mM
sucrose; 50 mM NaCl + 200 mM sucrose; 25 mM
NaCl + 250 mM sucrose. Cryoprotectant solutions in
5, 10 or 15% concentrations were prepared on
medium-1 or the medium, containing 50 mM NaCl,
200 mM sucrose (medium-2) or 450 mM NaCl,
100 mM sucrose (medium-3), which comprised 10 mM
Tris, pH 7.6. Erythrocytes with 8% hematocrit were
incubated for 30 min at 37°C in medium-1, containing
penetrative cryoprotectants under 5% concentration.
Erythrocyte samples in plastic vials with freezing media
in 1 ml volume and 0.8 and 40% hematocrit were
immersed into liquid nitrogen and exposed for 15 min,
then transferred on water bath at 40°C (rapid freeze-
thawing procedure). Samples after freeze-thawing
were centrifuged, hemolysis extent was spectropho-
tometrically determined at 543 nm wavelength.
Basing on the results obtained in erythrocytes of
five donors the mathematical expectation and standard
dispersion were calculated.
Results and discussion
Decrease in NaCl concentration when substituting
it to sucrose results in a reduction of hemolysis rate
(Fig. 1), that is apparently related to less intensive
increase in salt hyperconcentration and sucrose
stabilising effect on membrane under freezing condi-
tions [5]. A degree of damage during freezing with
low hematocrit is less than if using a high one, at the
same time the difference of degree of damage is higher
with lower salt concentration. This can be related to
an increase in effects of solution concentration and
ice amount, which is additionally formed during freezing
with high hematocrit [12, 16]. Osmotic influence of
sucrose on cell density effect during freezing should
be taken into account [13]. The presence of polymer
or penetrative cryoprotectants in freezing medium
results in a decrease in degree of cell damage during
freezing. However for penetrative cryoprotectants a
significant difference between the levels of erythro-
cytes hemolysis during their freezing with low and high
hematocrit values is no longer revealed (Fig. 2). In
addition, penetrative cryoprotectants eliminate a ne-
gative effect of high cell density in the media with
polymers (Fig. 3-4). This result confirms an additional
augmentation of damages under conditions of high
hematocrit apparently related to destabilisation of
intracellular structural components of membrane. Modi-
fication of interactions between cytoskeletal proteins
солевой среде. Проведенные эксперименты пока-
зали, что для избежания дополнительных повреж-
дений при замораживании, обусловленных высоким
гематокритом, необходимо присутствие в среде
замораживания проникающих криопротекторов в
сочетании с сахарозой.
Материалы и методы
В работе использовали NaCl (х.ч.), сахарозу
(ч.д.а.), глюкозу (ч.д.а.); полиэтиленгликоли (ПЭГ)
с молекулярными массами 400, 1500, 2000 (Merck);
декстран с молекулярными массами 10000 (Декс-
10) и 35000 (Декс-35, Serva); глицерин (Германия),
1,2-пропандиол (1,2-ПД), ДМСО (Sigma). Эритро-
циты человека получали из донорской крови четы-
рехкратным отмыванием раствором, содержащим
0,15 М NaCl, 10 мМ трис, рН 7,6 (среда 1). Для по-
лучения растворов с различным содержанием
NaCl и сахарозы среду 1 смешивали с раствором,
содержащим 0,3 М сахарозы, 10 мМ трис, рН 7,6.
При этом получали следующий состав среды:
100 мМ NaCl +100 мМ сахарозы; 75 мМ NaCl +
150 мМ сахарозы; 50 мМ NaCl + 200 мМ сахарозы,
25 мМ NaCl + 250 мМ сахарозы. Растворы крио-
протекторов в концентрациях 5, 10 или 15% готови-
ли на среде 1 или среде с 50 мМ NaCl, 200 мМ
сахарозы (среда 2) или 450 мМ NaCl, 100 мМ саха-
розы (среда 3), которые включали 10 мМ трис, рН
7,6. Эритроциты с гематокритом 8% инкубировали
30 мин при 37°С в среде 1, содержащей проникаю-
щие криопротекторы в концентрации 5%. Образцы
эритроцитов в пластиковых пробирках со средами
замораживания объемом 1 мл и гематокритом 0,8
и 40% погружали в жидкий азот и выдерживали 15
мин, затем переносили на водяную баню при 40°С
(процедура быстрого замораживания и размора-
живания). После размораживания образцы центри-
фугировали, степень гемолиза определяли спектро-
фотометрически при длине волны 543 нм.
На основании результатов, полученных на эрит-
роцитах от пяти доноров, рассчитывали матема-
тическое ожидание и дисперсию случайной вели-
чины.
Результаты и их обсуждение
Снижение концентрации NaCl при ее замещении
на сахарозу приводит к уменьшению степени
гемолиза (рис. 1), что, видимо, связано с менее
интенсивным нарастанием концентрации NaCl и
стабилизирующим воздействием сахарозы на
мембрану в условиях замораживания [5]. Степень
повреждения при замораживании с низким гемато-
критом ниже, чем с высоким, при этом разница
степени повреждения тем больше, чем ниже кон-
центрация NaCl в растворе. Это может быть связа-
но с ростом эффектов концентрирования раствора
158 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 16, 2006, №2
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 16, 2006, №2
0
20
40
60
80
100
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
0
20
40
60
80
100
1 2 3 4 5 6
Рис. 2. Влияние различных криопротекторов (концентра-
ция 5%) при замораживании эритроцитов с различным
гематокритом ( – 0,8%; – 40%) в среде 2: 1 – контроль;
2 – ПЭГ-1500; 3 – ПЭГ-2000; 4 –Декс-10; 5 – Декс-35; 6 –
глюкоза; 7 – ПЭГ-400; 8 – 1,2-ПД; 9 – ДМСО; 10 –
глицерин.
Fig. 2. Influence of cryoprotectants (concentration of 5%)
at freezing erythrocytes with different hematocrit values
( – 0.8%; – 40%) in medium 2: 1 – control; 2 – PEG-1500;
3 – PEG-2000; 4 – Dex-10; 5 – Dex-35; 6 – glucose; 7 – PEG-
400; 8 – 1,2-PD; 9 – DMSO; 10 – glycerol.
Рис. 3. Влияние проникающих криопротекторов (кон-
центрация 5%) при замораживании эритроцитов с раз-
личным гематокритом ( – 0,8%; – 40%) в среде-2 с
ПЭГ-2000: 1 – контроль; 2 – глюкоза; 3 – ПЭГ-400; 4 –
1,2-ПД; 5 – ДМСО; 6 – глицерин.
Fig. 3. Influence of penetrative cryoprotectants (concen-
tration of 5%) at freezing erythrocytes with different
hematocrit values ( – 0.8%; – 40%) in medium-2 with
PEG-2000: 1 – control; 2 – glucose; 3 – PEG-400; 4 – 1,2-PD;
5 – DMSO; 6 – glycerol.
or between cytoskeleton and membrane was shown
to significantly increase the erythrocyte sensitivity to
post-thaw resuspension [4]. Development of additional
damages at freezing with high hematocrit can be
avoided during cell stabilising with membrane reagents
or augmenting glycerol concen-tration up to 40% [20].
When studying freezing process using differential
0
20
40
60
80
100
0 25 50 75 100 125 150
Рис. 1. Повреждение эритроцитов при замораживании
в изоосмотических сахарозо-солевых средах (см. “Мате-
риалы и методы”) с различным гематокритом (1 – 0,8%;
2 – 40%).
Fig. 1. Erythrocyte damage at freezing in isoosmotic sucrose-
saline media (see “Materials and methods”) with different
hematocrit values (1 – 0.8%; 2 – 40%).
и количества льда, который дополнительно обра-
зуется при замораживании с высоким гемато-
критом [12, 16]. Следует учитывать влияние осмо-
тического воздействия сахарозы на эффект кон-
центрации клеток при замораживании [13]. Присут-
ствие в среде замораживания полимерных или
проникающих криопротекторов приводит к сниже-
нию степени повреждения клеток при заморажи-
вании. Однако для проникающих криопротекторов
уже не выявляется существенной разницы между
уровнями гемолиза эритроцитов при их заморажи-
вании с низким и высоким гематокритом (рис. 2).
Кроме того, проникающие криопротекторы уст-
раняют отрицательное влияние высокой концентра-
ции клеток в средах с полимерами (рис. 3, 4). Такой
результат указывает на то, что дополнительное
увеличение повреждений в условиях высокого
гематокрита, видимо, связано с дестабилизацией
внутриклеточных структурных составляющих
мембраны. Было показано, что модификация
взаимодействий между белками цитоскелета или
цитоскелетом и мембраной значительно повышает
чувствительность эритроцитов к ресуспендирова-
нию после замораживания [4]. Развития дополни-
тельных повреждений при замораживании с высо-
ким гематокритом можно избежать при стабилиза-
ции клеток мембранными реагентами или повыше-
нии концентрации глицерина до 40% [20]. Исследуя
процесс замораживания дифференциальной скани-
рующей калориметрией, установили, что присут-
ствие мембранотропных реагентов не уменьшает
Ге
м
ол
из
,
%
H
em
ol
ys
is
,
%
Ге
м
ол
из
,
%
H
em
ol
ys
is
,
%
Ге
м
ол
из
,
%
H
em
ol
ys
is
,
%
Концентрация сахарозы, мМ
Sucrose concentration, mM
250 200 150 100 50 0
2
1
Концентрация NaCl, мM
NaCl concentration, mM
159 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 16, 2006, №2
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 16, 2006, №2
0
20
40
60
80
100
1 2 3 4 5 6
Рис. 4. Влияние проникающих криопротекторов (кон-
центрация 5%) при замораживании эритроцитов с
различным гематокритом ( – 0,8%; – 40%) в среде-2
с Декс-10 (10%): 1– контроль; 2 – глюкоза; 3 – ПЭГ-400;
4 – 1,2-ПД; 5-ДМСО; 6 – глицерин.
Fig. 4. Influence of penetrative cryoprotectants (concen-
tration of 5%) at freezing erythrocytes with different
hematocrit values ( – 0.8%; – 40%) in medium 2 with
Dex-10 (10%): 1 –control; 2 – glucose; 3 – PEG-400; 4 –
1,2-PD; 5 – DMSO; 6 – glycerol.
Рис. 5. Влияние концентрации NaCl и полимеровпри
замораживании эритроцитов с различным гематокритом
( – 0,8%; – 40%) в растворах: 1– среда-2 + ПЭГ-2000
(концентрация 5%); 2 – среда-2 + Декс-10 (10%); 3 –
среда-1 + ПЭГ-2000 (5%); 4 – среда-1 + Декс-10 (10%); 5 –
среда-1+ ПЭГ-2000 (10%); 6 – среда-1+ Декс-10 (15%).
Fig. 5. Influence of NaCl concentration and polymers at
freezing erythrocytes with different hematocrit values ( –
0.8%; – 40%) in solutions: 1 – medium 2+PEG-2000
(concentration of 5%); 2 – Dex-10 (10%); 3 – medium-1 +
PEG-2000 (5%); 4 – medium- 1 + Dex-10 (10%); 5 – medium-1 +
PEG-2000 (10%); 6 – medium-1 + Dex-10 (15%).
scanning calorimetry the presence of membrane-tropic
reagents was established as not reducing the enthalpy
of ice formation, being typical at glycerol concentration
increase. It was proceeded that a protective effect of
membrane-tropic reagents during freezing with high
hematocrit was not related to changes in ice number,
энтальпию образования льда, характерную при
повышении концентрации глицерина. Из этого
заключили, что защитный эффект мембранотроп-
ных реагентов при замораживании с высоким
гематокритом не связан с изменениями количест-
ва льда, а обусловлен непосредственным дейст-
вием реагентов на мембрану [20]. Показано, что
при комбинации полимерных и проникающих
криопротекторов наблюдается положительный
эффект в отношении сохранности при заморажива-
нии эритроцитов [1, 2], гепатоцитов [3], гранулоци-
тов [6, 10] и нефракционированных клеток костного
мозга [18, 19]. При добавке полимеров существен-
но снижается концентрация проникающих криопро-
текторов без изменения структурно-функциональ-
ных показателей клеток после замораживания-
оттаивания [1-3, 6, 19], что свидетельствует о боль-
шей криопротекторной эффективности комбиниро-
ванных консервантов. В указанных работах не
обсуждались причины удовлетворительной сохран-
ности клеток, однако полученные результаты (см.
рис. 2-4) свидетельствуют о том, что комбиниро-
ванная защита приводит к блокированию развития
дополнительных повреждений клеточной мембра-
ны при замораживании, которые определяются
высокой концентрацией клеток. Учитывая невысо-
кие концентрации проникающих криопротекторов
в сочетании с полимерами (см. рис. 3, 4) и описан-
ную выше способность мембранотропных реаген-
тов снимать эффект концентрации клеток [20], мож-
но предположить, что блокирование отрицатель-
ного эффекта высокой концентрации клеток связано
с непосредственным взаимодействием компонен-
тов комбинированных сред с различными структу-
рами клеточной мембраны.
Повышение концентрации NaCl до 0,15 М
приводит к усилению гемолиза при замораживании
с устранением эффекта высокой концентрации
клеток. Дополнительное увеличение количества
полимеров в среде замораживания вызывает сни-
жение степени повреждения эритроцитов с выявле-
нием эффекта “упаковки” (рис. 5). Таким образом,
эффект концентрации клеток зависит от количества
NaCl или полимера в среде замораживания. В
средах с высоким гематокритом внутриклеточная
вода существенно влияет на образование внекле-
точного льда [12]. При быстром размораживании
в условиях высокого гематокрита плавление льда
приведет к более интенсивному разведению внеш-
ней среды [9]. Это указывает на то, что будет про-
исходить дополнительный прирост постгиперто-
нического воздействия.
При замораживании клеток в среде с высокой
концентрацией NaCl наблюдается практически пол-
ный лизис для суспензий с низким гематокритом,
однако в случае высокого гематокрита существен-
ная часть клеток (до 30%) не гемолизирует (рис. 6).
Ге
м
ол
из
,
%
H
em
ol
ys
is
,
%
Ге
м
ол
из
,
%
H
em
ol
ys
is
,
%
0
20
40
60
80
100
1 2 3 4 5 6
160 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 16, 2006, №2
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 16, 2006, №2
but stipulated by a direct action of reagents on mem-
brane [20]. Combination of polymer and penetrative
cryoprotectants was shown as causing a positive effect
in respect to integrity when freezing erythrocytes [1,
2], hepatocytes [3], granulocytes [6, 10] and non-
fractionated bone marrow cells [18, 19]. There is a
considerable decrease in concentration of penetrative
cryoprotectants at addition of polymers, as a result the
structural and functional cell indices remain unchanged
after freezing [1, 3, 6, 19]. This testifies to higher
cryoprotective efficiency of combined preservatives.
The causes of satisfactory cell integrity were not
discussed in the mentioned works, but the results
obtained (see Fig. 2-4) testified to the fact, that a
combined protection resulted in blocking development
of additional damages in cell membrane at freezing,
determined by a high cell density. Taking into
consideration low concentrations of penetrative cryo-
protectants in combination with polymers (see Fig. 3,
4) and described above capability of membrane-tropic
reagents to eliminate the effect of cell density [20],
we can assume that blocking of negative effect of cell
high density is related to a direct interaction of compo-
nents of combined media with various structures of
cell membrane.
Increase in NaCl concentration up to 0.15 M results
in hemolysis strengthening during freezing with
eliminating cell high concentration effect. Additional
augmentation of polymer amount in freezing medium
causes a decrease in erythrocyte damage degree with
“packing effect” revealing (Fig. 5). Thus, cell density
effect depends on NaCl or polymer amount in freezing
medium. In media with high hematocrit an intracellular
water significantly affects the extracellular ice
formation [12]. At rapid freeze-thawing under high
hematocrit the ice melting will result in more intensive
dilution of outer medium [9]. This points to the fact,
that an additional growth of post-hypertonic effect will
occur.
Quite a complete lysis for suspensions with low
hematocrit is observed at cell freezing in the media
with high NaCl concentration, but in case of a high
hematocrit a considerable part of cells (upto 30%) does
not hemolyze (Fig. 6).
This result is probably related to the fact that at
low hematocrit cells are subjected to greater salt
concentration gradient at freezing, meanwhile at high
hematocrit even prior to freezing cell dehydration will
result in a decrease in dissolved substance concen-
tration in outer medium and some reduction of post-
hypertonic effect, because the initial dehydration
constricts the limits of change in cell volume in freeze-
thawing cycle.
Negative effect of increased hematocrit on the
integrity was established to be dependent on freeze-
thawing rates. A minimum amount of erythrocyte
Такой результат, вероятно, связан с тем, что при
низком гематокрите клетки подвергаются боль-
шему градиенту концентрации солей при замо-
раживании, тогда как при высоком гематокрите
дегидратация клеток еще до замораживания приве-
дет к уменьшению концентрации растворенных
веществ во внешней среде, а также снижению
постгипертонического воздействия, так как пред-
варительная дегидратация сужает диапазон изме-
нения объема клетки в цикле замораживания-раз-
мораживания.
Установлено, что отрицательное влияние повы-
шенного гематокрита на сохранность зависит от
скоростей замораживания и размораживания. При
сбалансированных скоростях наблюдается мини-
мальное количество повреждений эритроцитов, и
значительной разницы между сохранностью кле-
ток после замораживания с низким и высоким ге-
матокритом не выявляется [17].
При высоком гематокрите, когда клетки зани-
мают значительную часть объёма среды замора-
живания, промерзающие каналы включают в себя
больше клеток и поэтому эритроциты более подвер-
жены механическому разрушению кристаллами
льда в условиях включения внутриклеточной воды
во внеклеточный лёд [12]. Вероятность внутрикле-
точного замерзания будет увеличиваться в суспен-
зии с высоким гематокритом, так как в плотной
суспензии клеток относительный размер внекле-
точного пространства уменьшается [16]. К тому
же агрегация клеток в промерзающих каналах
вызывает торможение дегидратации, что приводит
к повышению температуры внутриклеточного
замерзания [8]. При размораживании суспензий с
высоким гематокритом клетки в различных облас-
тях будут подвергаться гипертоническому или
гипотоническому воздействию [16]. На конечной
стадии быстрого размораживания клетки могут
испытывать кратковременный гипотонический шок
[9], что дополнительно вносит вклад в общее пост-
гипертоническое повреждение.
Таким образом, отрицательное влияние повы-
шения гематокрита в среде замораживания на
сохранность клеток можно объяснить допол-
нительным приростом эффектов концентрирования
раствора и льда во вне- и внутриклеточной среде.
Чем может определяться эффект концентрации
клеток в средах с NaCl-сахароза или с NaCl-
полимер (см. рис. 1, 5) при быстром заморажива-
нии и размораживании? В данных условиях время
действия высококонцентрированных растворов
солей ограничено, а в замороженном состоянии
эритроциты дисперсно распределены внутри
кристаллов льда, поэтому в момент замораживания
не подвергаются действию эффектов плотных
межклеточных контактов [14]. В условиях высокой
161 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 16, 2006, №2
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 16, 2006, №2
damages is observed at balanced rates, where no
significant difference between cell integrity after
freezing with low and high hematocrit is revealed [17].
At high hematocrit when cells occupy a significant
part of freezing medium volume, the frozen channels
comprise more cells and therefore erythrocytes are
much more subjected to mechanical destruction by ice
crystals under conditions of intracellular water inclusion
into extracellular ice [12]. The probability of intra-
cellular freezing will augment in suspension with a high
hematocrit because in dense cell suspension a relative
size of extracellular space reduces [16]. In addition,
cell aggregation in frozen channels causes a dehyd-
ration inhibition, resulting in temperature increase of
intracellular freezing [8]. When freeze-thawing the
suspension with high hematocrit cells in different
ranges will undergo hypertonic or hypotonic effect [16].
Cells can undergo a short-term hypotonic shock at a
final stage of rapid freeze-thawing [19], that additionally
contributes to total post-hypertonic damaging.
Thus, a negative effect of hematocrit increase in
freezing medium on cell integrity can be explained by
additional growth of concentration effects of solution
and ice in extra- and intracellular media.
What can determine the effect of cell density in
media with NaCl-sucrose or NaCl-polymer (see Fig.
1, 5) during rapid freezing and thawing? Under these
conditions the effect time of salt hyperconcentrative
solutions is limited, but in a frozen state erythrocytes
are dispersially distributed incide ice crystals, therefore
in the moment of freezing they are not affected by
tight cell-cell contacts [14]. Under conditions of high
cell concentration the inclusion of intracellular water
into extracellular ice would be higher if to compare
with low hematocrit, therefore at freeze-thawing more
intensive dilution of outer medium and even hypotonic
shock are possible [9]. When using polymers or
penetrative cryoprotectants in low concentrations (see
Fig. 2) no significant cell dehydration occurs. Polymer
presence in freezing medium does not eliminate a
negative effect of high hematocrit on the integrity, while
the penetrative cryoprotectants block it (see Fig. 2).
We can assume that the reason is not in substitution of
a part of water in cells with penetrative cryoprotectant,
but in membrane stabilisation internally to additional
growth of post-hypertonic effect. Similar stabilisation
with membrane-tropic reagents was noted to eliminate
a negative effect of cell density during freezing [20].
In the model experiments the reduction of NaCl
concentration in frozen channel has been demonstrated
as resulted in a greater augmentation of cell integrity,
being frozen with low hematocrit, than with a high one,
but a post-hypertonic lysis is less manifested during
freezing of high-hematocrit suspensions under
conditions of initial dehydration [11]. Less manifested
influence of salt concentration in dense cell suspen-
0
20
40
60
80
100
1 2
Рис.6. Степень повреждения эритроцитов с различным
гематокритом ( – 0,8%; – 40%) при замораживании
в среде 3, содержащей: 1 – ПЭГ-2000(концентрация 5%);
2–Декс-10 (10%).
Fig. 6. Damage rate of erythrocytes with different hematocrit
values ( – 0.8%; – 40%) at freezing in medium-3, con-
taining: 1 – PEG-2000 (concentration of 5%), 2 – Dex-10
(10%): ( – 0.8%; – 40%).
концентрации клеток включение внутриклеточной
воды во внеклеточный лед будет большим по
сравнению с низким гематокритом, поэтому при
быстром размораживании возможны более интен-
сивное разведение внешней среды и гипотоничес-
кий шок [9]. При использовании невысоких
концентраций полимеров или проникающих крио-
протекторов (см. рис. 2) не произойдет значи-
тельной дегидратации клеток. Присутствие поли-
меров в среде замораживания не снимает отрица-
тельного эффекта высокого гематокрита на сохран-
ность, в то же время проникающие криопротекторы
блокируют его (см. рис. 2). Можно предположить,
что причиной этого является не замещение части
воды в клетках с проникающими криопротек-
торами, а стабилизация мембраны совместным
действием проникающего и непроникающего
криопротекторов к дополнительному приросту
постгипертонического воздействия. Было отме-
чено, что подобная стабилизация мембранотроп-
ными реагентами снимает отрицательный эффект
плотности клеток при замораживании [20]. В
модельных экспериментах показано, что снижение
концентрации NaCl в промерзающих каналах
приводит к повышению сохранности клеток, замо-
роженных с низким гематокритом в большей сте-
пени, чем с высоким, а постгипертонический лизис
менее выражен при замораживании высокоге-
матокритных суспензий в условиях изначальной
дегидратации [11]. Не исключено, что менее выра-
женное влияние концентрации солей в плотных
суспензиях клеток связано с эффектом разведения
внешней среды внутриклеточной водой. Дегид-
Ге
м
ол
из
,
%
H
em
ol
ys
is
,
%
162 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 16, 2006, №2
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 16, 2006, №2
sions is not excluded to be associated with the effect
of extracellular dilution with intracellular water.
Dehydration before freezing, excluding significant
changes in cell volume during cryopreservation [11],
causes considerable reduction of erythrocyte damage
level in high-hematocrit suspension (see Fig. 6). A
decrease in the factor of post-hypertonic damage at
freezing with high-hematocrit suspension under condi-
tions of initial dehydration with high NaCl concentrations
in cryoprotective medium is explained by a decrease
in ratio of extracellular medium to that of intracellular
medium and a significant reduction of cell volume
change limits at freeze-thawing [11]. Thus, the
preliminary cell dehydration with high NaCl concentra-
tions in cryoprotective medium changes the extent of
salt damage during concentrated cell suspension
freezing. The same occurs in the results presented in
Fig. 5 and 6.
An opposite positive effect of increase in cell
concentration on their preservation is observed under
preliminary dehydration before freezing (see Fig. 6).
Basing on this we can assume that a negative influence
of hematocrit increase on integrity is related to
dehydration and rehydration during rapid freeze-
thawing. Constriction of range of cyclical change of
cell volume due to preliminary dehydration causes a
change in effect direction of high cell concentration
(see Fig. 5, 6), consequently a negative effect of high
concentration is determined by strengthening of post-
hypertonic stress during freeze-thawing.
Conclusions
The usage of combination of sucrose and penetra-
tive cryoprotectants in preservation medium eliminates
negative effect of cell high concentration because of
the blocking of osmotic mechanisms of membrane
damage and thereby protecting them against additional
post-hypertonic effect under freeze-thawing conditions.
The usage of composite media, when combining
traditional cryoprotectants (glycerol, DMSO, 1,2-PD)
with synthetic polymers is the most perspective
approach to preserve different cells.
ратация перед замораживанием, которая исклю-
чает значительные изменения объёма клеток в
цикле криоконсервирования [11], может вызывать
существенное снижение уровня повреждения
эритроцитов в высокогематокритной суспензии (см.
рис. 6). Уменьшение влияния фактора постгипер-
тонического повреждения при замораживании
высокогематокритной суспензии в условиях пред-
варительной дегидратации высокими концентра-
циями NaCl в криозащитной среде объясняется
значительным уменьшением диапазона изменения
объема клетки в цикле замораживания-разморажи-
вания. Таким образом, предварительная дегидра-
тация клеток высокими концентрациями NaCl в
криозащитной среде изменяет степень солевого
повреждения при замораживании концентрирован-
ной суспензии клеток. По-видимому, дегидратация
вызывает разведение соли во внешней среде. По-
добная ситуация имеет место в представленных
результатах на рис. 5 и 6.
В условиях предварительной дегидратации
перед замораживанием наоборот наблюдается
положительное влияние повышения концентрации
клеток на их сохранность (см. рис. 6). Исходя из
этого, можно предположить, что отрицательное
влияние повышения гематокрита на сохранность
связано с дегидратацией и регидратацией в цикле
быстрого замораживания-оттаивания. Сужение
диапазона циклического изменения объёма клетки
за счёт предварительной дегидратации вызывает
изменение направленности влияния высокой
концентрации клеток (см. рис. 5, 6), следовательно,
отрицательный эффект высокой концентрации опре-
деляется усилением постгипертонического стресса
при размораживании.
Выводы
Использование сочетания сахарозы и проникаю-
щих криопротекторов в консервирующей среде
устраняет отрицательный эффект высокой концен-
трации клеток за счет блокирования осмотических
механизмов повреждения мембран и, тем самым
защищает их от дополнительного постгипертони-
ческого воздействия в условиях размораживания.
Использование комбинированных сред при
сочетании традиционных криопротекторов (гли-
церин, ДМСО, 1,2-ПД) с синтетическими полиме-
рами является наиболее перспективным подходом
при консервировании самых различных клеток.
References
Mezhidov S.Kh., Belyaeva I.M., Vorotilin A.M., Moiseyev V.A.
Effect of a combination of polyvinyl pyrrolidone and 1,2-
propanediol on the survival of RBC during cryopreservation //
Problems of Cryobiology.– 1996.– N2.– P. 22-25.
Mezhidov S.Kh., Moiseyev V.A. Effect of combined treatment
by highly molecular cryoprotectants and 1,2-propanediol on
survival of red blood cells during cryopreservation // Problems
of Cryobiology.– 1995.– N3.– P. 46-48.
Petrenko Yu.A. Cryopreservation of human embryonic liver
cells using DMSO and high molecular weight polymers //
Problems of Cryobiology.– 2003.– N3.– P. 80-87.
Ramazanov V.V., Olejnik O.A., Bondarenko V.A. Cryoprotection
of modified erythrocytes with polyethylene glycol and dextran //
Problems of Cryobiology.– 2005.– N4.– P.622-629.
1.
2.
3.
4.
Литература
Межидов С.Х., Беляева И.М., Воротилин А.М., Моисеев В.А.
Влияние сочетания поливинилпирролидона и 1,2-пропан-
диола на сохранность эритроцитов при криоконсервиро-
вании // Пробл. криобиологии.– 1996.– №2.– C. 22-25.
1.
163 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 16, 2006, №2
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 16, 2006, №2
Brearley C.A., Hodges N.A., Olliff C.J. Nonmonotonic trends
in electrolyte-induced injury to rapidly cooled erythrocytes //
Cryobiology.– 1992.– Vol. 29.– N2.– P. 175-182.
Clapisson G., Salinas C., Malacher P. et al. Cryopreservation
with hydroxyethylstarch (HES) + dimethylsulphoxide (DMSO)
gives better results than DMSO alone // Bull. Cancer.– 2004.–
Vol. 91, N4.– P. 97-102.
Dalgliesh R.J. Effect of an interaction between haematocrit
and cryoprotectant concentration on freeze-thaw haemolysis
of bovine erythrocytes // Cryobiology.– 1976.– Vol. 13, N2.–
P. 254-257.
Levin R.L., Cravalho E.G., Huggins C.E. Water transport in a
cluster of closely packed erythrocytes at subzero
temperatures// Cryobiology.– 1977.– Vol. 14, N5.– P. 549-558.
Levin R.L. The limiting effects of heat and mass transfer on
the osmotic behavior of cells during freezing and thawing //
Cryobiology.– 1982.– Vol. 19, N 6.– P. 669.
Lionetti F.J., Hunt S.M., Gore J.M., Curby W.A. Cryopreser-
vation of human granulocytes // Cryobiology.– 1975.– Vol. 12,
N3.– P. 181-191.
Mazur P., Cole K.W. Roles of unfrozen fraction, salt
concentration, and changes in cell volume in the survival of
frozen human erythrocytes // Cryobiology.– 1989.– Vol. 26,
N1.– P. 1-29.
Mazur P., Cole K.W. Influence of cell concentration on the
contribution of unfrozen fraction and salt concentration to
the survival of slowly frozen human erythrocytes //
Cryobiology.– 1985.– Vol. 22, N6.– P. 509-536.
Meryman H.T., Williams R.J., Douglas M.S. Freezing injury
from “solution effects” and its prevention by natural or artificial
cryoprotection. // Cryobiology.– 1977.– Vol. 14, N3.–
P. 287-302.
Nei T. Effect of initial of cell concentration of the post-thaw
hemolysis of frozen erythrocytes // Cryobiology.– 1976.–
Vol. 13, N6.– P. 651.
Nei T. Mechanism of freezing injury to erythrocytes: effect
of initial cell concentration on the post-thaw hemolysis //
Cryobiology.– 1981.– Vol. 18, N3.– P. 229-237.
Pegg D.E. The effect of cell concentration on the recovery
of human erythrocytes after freezing and thawing in the
presence of glycerol // Cryobiology.– 1981.– Vol. 18, N3.–
P. 221-228.
Pegg D.E., Diaper M.P., Skaer H.L., Hunt C.J. The effect of
cooling rate and warming rate on the packing effect in human
erythrocytes frozen and thawed in the presence of 2 M
glycerol // Cryobiology.– 1984.– Vol. 21, N5.– P. 491-502.
Stiff P.J., Koester A.R., Weidner M.K. et al. Autologous bone
marrow transplantation using unfractionated cells cryo-
preserved in dimethylsulfoxide and hydroxyethyl starch
without controlled-rate freezing // Blood.–1987.– Vol. 70, N4.–
P. 974-978.
Stiff P.J., Murgo A.J., Zaroulis C.G. et al. Unfractionated human
marrow cell cryopreservation using dimethylsulfoxide and
hydroxyethyl starch // Cryobiology.-1983.– Vol. 20, N1.–
P. 17-24.
Wagner C.T., Burnett M.B., Livesey S.A., Connor J. Red blood
cell stabilization reduces the effect of cell density on recovery
following cryopreservation // Cryobiology.– 2000.– Vol. 41,
N3.– P. 178-194.
Accepted in 01.03.22005
Межидов С.Х., Моисеев В.А. Влияние сочетания
высокомолекулярных криопротекторов с 1,2-пропан-
диолом на сохранность эритроцитов при криоконсерви-
ровании // Пробл. криобиологии.– 1995.– №3.– С.46-48.
Петренко Ю.А. Криоконсервирование клеток эмбрио-
нальной печени человека с использованием ДМСО и
высокомолекулярных полимеров // Пробл. криобио-
логии.– 2003.– №3.– С. 80-87.
Рамазанов В.В., Олейник О.А., Бондаренко В.А. Криопро-
текция полиэтиленгликолем и декстраном модифици-
рованных эритроцитов // Пробл. криобиологии.– 2005.–
№4.– С. 622-629.
Brearley С.A., Hodges N.A., Olliff C.J. Nonmonоtonic trends
in electrolyte-induсed injury to rapidly cooled erythrocytes //
Cryobiology.– 1992.– Vol. 29, N2.– P. 175-182.
Clapisson G., Salinas C., Malacher P. et al. Cryopreservation
with hydroxyethylstarch (HES) + dimethylsulphoxide (DMSO)
gives better results than DMSO alone // Bull. Cancer.– 2004.–
Vol. 91, N4.– P. 97-102.
Dalgliesh R.J. Effect of an interaction between haematocrit
and cryoprotectant concentration on freeze-thaw haemolysis
of bovine erythrocytes // Cryobiology.– 1976.– Vol. 13, N2.–
P. 254-257.
Levin R.L., Cravalho E.G., Huggins C.E. Water transport in a
cluster of closely packed erythrocytes at subzero
temperatures// Cryobiology.– 1977.– Vol. 14, N5.– P. 549-558.
Levin R.L. The limiting effects of heat and mass transfer on
the osmotic behavior of cells during freezing and thawing //
Cryobiology.– 1982.– Vol. 19, N 6.– P. 669.
Lionetti F.J., Hunt S.M., Gore J.M., Curby W.A. Cryopreser-
vation of human granulocytes // Cryobiology.– 1975.– Vol. 12,
N3.– P. 181-191.
Mazur P., Cole K.W. Roles of unfrozen fraction, salt
concentration, and changes in cell volume in the survival of
frozen human erythrocytes // Cryobiology.– 1989.– Vol. 26,
N1.– P. 1-29.
Mazur P., Cole K.W. Influence of cell concentration on the
contribution of unfrozen fraction and salt concentration to
the survival of slowly frozen human erythrocytes //
Cryobiology.– 1985.– Vol. 22, N6.– P. 509-536.
Meryman H.T., Williams R.J., Douglas M.S. Freezing injury
from “solution effects” and its prevention by natural or artificial
cryoprotection. // Cryobiology.– 1977.– Vol. 14, N3.–
P. 287-302.
Nei T. Effect of initial of cell concentration of the post-thaw
hemolysis of frozen erythrocytes // Cryobiology.– 1976.–
Vol. 13, N6.– P. 651.
Nei T. Mechanism of freezing injury to erythrocytes: effect
of initial cell concentration on the post-thaw hemolysis //
Cryobiology.– 1981.– Vol. 18, N3.– P. 229-237.
Pegg D.E. The effect of cell concentration on the recovery
of human erythrocytes after freezing and thawing in the
presence of glycerol // Cryobiology.– 1981.– Vol. 18, N3.–
P. 221-228.
Pegg D.E., Diaper M.P., Skaer H.L., Hunt C.J. The effect of
cooling rate and warming rate on the packing effect in human
erythrocytes frozen and thawed in the presence of 2 M
glycerol // Cryobiology.– 1984.– Vol. 21, N5.– P. 491-502.
Stiff P.J., Koester A.R., Weidner M.K. et al. Autologous bone
marrow transplantation using unfractionated cells cryo-
preserved in dimethylsulfoxide and hydroxyethyl starch
without controlled-rate freezing // Blood.–1987.– Vol. 70, N4.–
P. 974-978.
Stiff P.J., Murgo A.J., Zaroulis C.G. et al. Unfractionated human
marrow cell cryopreservation using dimethylsulfoxide and
hydroxyethyl starch // Cryobiology.-1983.– Vol. 20, N1.– P.
17-24.
Wagner C.T., Burnett M.B., Livesey S.A., Connor J. Red blood
cell stabilization reduces the effect of cell density on recovery
following cryopreservation // Cryobiology.– 2000.– Vol. 41,
N3.– P. 178-194.
Поступила 01.03.2005
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
|