Морфологические и фенотипические особенности цитосфер, формирующихся в культуре клеток надпочечников неонатальных поросят в обычных и низкоадгезивных условиях
Gespeichert in:
| Datum: | 2015 |
|---|---|
| Hauptverfasser: | , , |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | Russian |
| Veröffentlicht: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2015
|
| Schriftenreihe: | Проблемы криобиологии и криомедицины |
| Schlagworte: | |
| Online Zugang: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/137127 |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Zitieren: | Морфологические и фенотипические особенности цитосфер, формирующихся в культуре клеток надпочечников неонатальных поросят в обычных и низкоадгезивных условиях / Е.М. Плаксина, О.С. Сидоренко, Г.А. Божок // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2015. — Т. 25, № 2. — С. 190. — рос. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-137127 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-1371272025-02-23T17:48:30Z Морфологические и фенотипические особенности цитосфер, формирующихся в культуре клеток надпочечников неонатальных поросят в обычных и низкоадгезивных условиях Morphological and phenotypic peculiarities of cytospheres forming in adrenal cell cultures of neonatal piglets in normal and low adhesive conditions Плаксина, Е.М. Сидоренко, О.С. Божок, Г.А. Тезисы 2015 Article Морфологические и фенотипические особенности цитосфер, формирующихся в культуре клеток надпочечников неонатальных поросят в обычных и низкоадгезивных условиях / Е.М. Плаксина, О.С. Сидоренко, Г.А. Божок // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2015. — Т. 25, № 2. — С. 190. — рос. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/137127 ru Проблемы криобиологии и криомедицины application/pdf Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Russian |
| topic |
Тезисы Тезисы |
| spellingShingle |
Тезисы Тезисы Плаксина, Е.М. Сидоренко, О.С. Божок, Г.А. Морфологические и фенотипические особенности цитосфер, формирующихся в культуре клеток надпочечников неонатальных поросят в обычных и низкоадгезивных условиях Проблемы криобиологии и криомедицины |
| format |
Article |
| author |
Плаксина, Е.М. Сидоренко, О.С. Божок, Г.А. |
| author_facet |
Плаксина, Е.М. Сидоренко, О.С. Божок, Г.А. |
| author_sort |
Плаксина, Е.М. |
| title |
Морфологические и фенотипические особенности цитосфер, формирующихся в культуре клеток надпочечников неонатальных поросят в обычных и низкоадгезивных условиях |
| title_short |
Морфологические и фенотипические особенности цитосфер, формирующихся в культуре клеток надпочечников неонатальных поросят в обычных и низкоадгезивных условиях |
| title_full |
Морфологические и фенотипические особенности цитосфер, формирующихся в культуре клеток надпочечников неонатальных поросят в обычных и низкоадгезивных условиях |
| title_fullStr |
Морфологические и фенотипические особенности цитосфер, формирующихся в культуре клеток надпочечников неонатальных поросят в обычных и низкоадгезивных условиях |
| title_full_unstemmed |
Морфологические и фенотипические особенности цитосфер, формирующихся в культуре клеток надпочечников неонатальных поросят в обычных и низкоадгезивных условиях |
| title_sort |
морфологические и фенотипические особенности цитосфер, формирующихся в культуре клеток надпочечников неонатальных поросят в обычных и низкоадгезивных условиях |
| publisher |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| publishDate |
2015 |
| topic_facet |
Тезисы |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/137127 |
| citation_txt |
Морфологические и фенотипические особенности цитосфер, формирующихся в культуре клеток надпочечников неонатальных поросят в обычных и низкоадгезивных условиях / Е.М. Плаксина, О.С. Сидоренко, Г.А. Божок // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2015. — Т. 25, № 2. — С. 190. — рос. |
| series |
Проблемы криобиологии и криомедицины |
| work_keys_str_mv |
AT plaksinaem morfologičeskieifenotipičeskieosobennosticitosferformiruûŝihsâvkulʹturekletoknadpočečnikovneonatalʹnyhporosâtvobyčnyhinizkoadgezivnyhusloviâh AT sidorenkoos morfologičeskieifenotipičeskieosobennosticitosferformiruûŝihsâvkulʹturekletoknadpočečnikovneonatalʹnyhporosâtvobyčnyhinizkoadgezivnyhusloviâh AT božokga morfologičeskieifenotipičeskieosobennosticitosferformiruûŝihsâvkulʹturekletoknadpočečnikovneonatalʹnyhporosâtvobyčnyhinizkoadgezivnyhusloviâh AT plaksinaem morphologicalandphenotypicpeculiaritiesofcytospheresforminginadrenalcellculturesofneonatalpigletsinnormalandlowadhesiveconditions AT sidorenkoos morphologicalandphenotypicpeculiaritiesofcytospheresforminginadrenalcellculturesofneonatalpigletsinnormalandlowadhesiveconditions AT božokga morphologicalandphenotypicpeculiaritiesofcytospheresforminginadrenalcellculturesofneonatalpigletsinnormalandlowadhesiveconditions |
| first_indexed |
2025-11-24T04:32:38Z |
| last_indexed |
2025-11-24T04:32:38Z |
| _version_ |
1849644818644336640 |
| fulltext |
Морфологические и фенотипические особенности цитосфер,
формирующихся в культуре клеток надпочечников неонатальных
поросят в обычных и низкоадгезивных условиях
Е.М. Плаксина, О.С. Сидоренко, Г.А. Божок
Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины, г. Харьков
Morphological and Phenotypic Peculiarities of Cytospheres Forming in Adrenal Cell
Cultures of Neonatal Piglets in Normal and Low Adhesive Conditions
E.M. Plaksina, O.S. Sidorenko, G.A. Bozhok
Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine
of the National Academy of Sciences of Ukraine, Kharkov, Ukraine
Ранее было установлено, что в надпочечниках
человека [Santana M.M. и соавт., 2012], быка [Chung K.F.
и соавт., 2009], мыши [Debatin K.M., 2013] присутствуют
стволовые/прогениторные клетки, формирующие хро-
мосферы, несущие специфические маркеры производ-
ных нервного гребня и обладающие способностью
дифференцироваться в хромаффинные клетки и ней-
роны. Нами была предпринята попытка получения по-
добных клеток из надпочечников свиней. Стандартный
протокол выделения и экспансии нервных стволовых
клеток включает культивирование в бессывороточной
среде с определенным набором ростовых факторов и
использование низкоадгезивных поверхностей.
Целью представленной работы являлось сравни-
тельное изучение морфологических и фенотипических
особенностей цитосфер, формирующихся при культиви-
ровании клеток надпочечников неонатальных поросят
как в обычных условиях, так и в условиях, разработанных
для получения хромосфер.
Клеточную суспензию получали из надпочечных же-
лез ферментативным методом. Клетки высевали в кон-
центрации 1–2×105 кл/мл, культивировали при 37°С в
атмосфере с 5% СО2 в чашках Петри с низкоадгезивной
поверхностью в среде DMEM/F12 и добавляли 2% B27,
20 нг/мл EGF, 20 нг/мл bFGF, 10 Ед/мл гепарина и анти-
биотиков (бессывороточная среда). Осуществляли заме-
ну половины среды раз в 4–5 суток. Для сравнения клетки
культивировали в среде DMEM/F12 с 10%-й фетальной
телячьей сывороткой в культуральной посуде с нормаль-
ной или низкоадгезивной поверхностью. Экспрессию
хромогранина А в клетках исследовали методами про-
точной цитофлуориметрии и иммуноцитохимии с по-
мощью первичных поликлональных антител кролика
(«Abcam», Великобритания, 1:100) и вторичных антикро-
личьих AlexaFluor488-конъюгированных антител («Ab-
cam», 1:500).
Формирование флотирующих цитосфер установлено
на 5-е сутки при культивировании в низкоадгезивных
условиях в сывороткосодержащей и бессывороточной
средах. Наблюдалось постепенное увеличение размера
цитосфер в течение 28 суток культивирования. Способ-
ность цитосфер к прикреплению и дальнейшей пролифе-
рации изучали при их переносе на подложки с адгезив-
ной поверхностью (культуральный планшет, коллаген,
фибронектин) и культивировании на среде с 10% ФТС.
Различия в экспрессии хромогранина А и морфологи-
ческие особенности клеток, выселяющихся из цитосфер,
позволили сделать вывод о том, что состав среды и сте-
пень адгезивности поверхности являются факторами,
определяющими клеточный состав и дифференциро-
вочный потенциал цитосфер.
It was previously reported that adrenal glands of human
[Santana M.M. et al., 2012], bovine [Chung K.F. et al., 2009]
and mice [Debatin KM, 2013] contain stem/progenitor cells
forming the chromospheres carrying specific markers of
neural crest derivatives and able of differentiation into
chromaffin cells and neurons. We have attempted to derive
these cells from the adrenal glands of pigs. A standard
protocol for isolation and expansion of neural stem cells
comprises culturing in a serum-free medium with a particular
set of growth factors and use of low adhesive surfaces.
The aim of the research presented was to compare
morphological and phenotypic features of the cytospheres
forming in cultures of new-born piglet adrenal cells both in
normal conditions and in the environment specific for the
obtaining chromospheres.
The cell suspension was derived from adrenal glands
by enzymatic method. Cells were seeded in a concentration
of 1–2×105 cells/ml and cultured at 37°C in atmosphere with
5% CO2 in Petri dishes with low adhesive surface in DMEM/
F12 supplemented with 2% B27, 20 ng/ml EGF, 20 ng/ml
bFGF, 10 IU/ml heparin and antibiotics (serum-free medium).
A half of the medium was replaced every 4–5 days. To make
the comparison samples the cells were cultured in DMEM/
F12 with 10% fetal bovine serum in culture dishes with either
normal or low adhesive surface. Expression of chromogranin
A in cells was examined by flow cytometry and immune
cytochemistry using primary polyclonal rabbit antibodies
(Abcam, UK, 1: 100) and anti-rabbit secondary antibody
conjugated to AlexaFluor488 (Abcam, 1: 500).
Formation of floating cytospheres was found to day 5
in culture with low adhesive conditions in serum containing
and serum-free media. A gradual increase in the dimensions
of cytospheres was observed within 28 days of culturing.
The ability of cytospheres to adhesion and subsequent
proliferation was studied following their transfer to the
substrates with an adhesive surface (culture plate, collagen,
fibronectin) and culturing in the media supplemented with
10% FBS. The differences in chromogranin A expression
and morphological characteristics of the cells migrating from
cytospheres, allowed to conclude that the composition of
medium and adhesive properties of surfaces were the factors
determining the cell composition and differentiation
potential of cytospheres.
190 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 25, №/issue 2, 2015
|