Визначення осмотично неактивного об'єму ентероцитів миші

Збережено в:

Бібліографічні деталі
Дата:	2016
Автори:	Огурцова, В.В., Коваленко, С.Є., Коваленко, І.Ф., Гордієнко, О.І.
Формат:	Стаття
Мова:	Ukrainian
Опубліковано:	Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України 2016
Назва видання:	Проблемы криобиологии и криомедицины
Теми:	Краткие сообщения
Онлайн доступ:	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/137352
Теги:	Додати тег Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
Назва журналу:	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Цитувати:	Визначення осмотично неактивного об'єму ентероцитів миші / В.В. Огурцова, С.Є. Коваленко, І.Ф. Коваленко, О.І. Гордієнко // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2016. — Т. 26, № 1. — С. 93–97. — Бібліогр.: 6 назв. — укр.

Репозитарії

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine

id	nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-137352
record_format	dspace
spelling	nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-1373522025-02-23T17:30:46Z Визначення осмотично неактивного об'єму ентероцитів миші Determination of osmotically inactive volume of murine enterocytes Огурцова, В.В. Коваленко, С.Є. Коваленко, І.Ф. Гордієнко, О.І. Краткие сообщения 2016 Article Визначення осмотично неактивного об'єму ентероцитів миші / В.В. Огурцова, С.Є. Коваленко, І.Ф. Коваленко, О.І. Гордієнко // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2016. — Т. 26, № 1. — С. 93–97. — Бібліогр.: 6 назв. — укр. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/137352 577.35 uk Проблемы криобиологии и криомедицины application/pdf Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
institution	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection	DSpace DC
language	Ukrainian
topic	Краткие сообщения Краткие сообщения
spellingShingle	Краткие сообщения Краткие сообщения Огурцова, В.В. Коваленко, С.Є. Коваленко, І.Ф. Гордієнко, О.І. Визначення осмотично неактивного об'єму ентероцитів миші Проблемы криобиологии и криомедицины
format	Article
author	Огурцова, В.В. Коваленко, С.Є. Коваленко, І.Ф. Гордієнко, О.І.
author_facet	Огурцова, В.В. Коваленко, С.Є. Коваленко, І.Ф. Гордієнко, О.І.
author_sort	Огурцова, В.В.
title	Визначення осмотично неактивного об'єму ентероцитів миші
title_short	Визначення осмотично неактивного об'єму ентероцитів миші
title_full	Визначення осмотично неактивного об'єму ентероцитів миші
title_fullStr	Визначення осмотично неактивного об'єму ентероцитів миші
title_full_unstemmed	Визначення осмотично неактивного об'єму ентероцитів миші
title_sort	визначення осмотично неактивного об'єму ентероцитів миші
publisher	Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
publishDate	2016
topic_facet	Краткие сообщения
url	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/137352
citation_txt	Визначення осмотично неактивного об'єму ентероцитів миші / В.В. Огурцова, С.Є. Коваленко, І.Ф. Коваленко, О.І. Гордієнко // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2016. — Т. 26, № 1. — С. 93–97. — Бібліогр.: 6 назв. — укр.
series	Проблемы криобиологии и криомедицины
work_keys_str_mv	AT ogurcovavv viznačennâosmotičnoneaktivnogoobêmuenterocitívmiší AT kovalenkosê viznačennâosmotičnoneaktivnogoobêmuenterocitívmiší AT kovalenkoíf viznačennâosmotičnoneaktivnogoobêmuenterocitívmiší AT gordíênkooí viznačennâosmotičnoneaktivnogoobêmuenterocitívmiší AT ogurcovavv determinationofosmoticallyinactivevolumeofmurineenterocytes AT kovalenkosê determinationofosmoticallyinactivevolumeofmurineenterocytes AT kovalenkoíf determinationofosmoticallyinactivevolumeofmurineenterocytes AT gordíênkooí determinationofosmoticallyinactivevolumeofmurineenterocytes
first_indexed	2025-11-24T02:34:23Z
last_indexed	2025-11-24T02:34:23Z
_version_	1849637379607887872
fulltext	УДК 577.35 В.В. Огурцова, С.Є. Коваленко, І.Ф. Коваленко, О.І. Гордієнко* Визначення осмотично неактивного об'єму ентероцитів миші UDC 577.35 V.V. Ogurtsova, S.Ye. Kovalenko, I.F. Kovalenko, O.I. Gordiyenko* Determination of Osmotically Inactive Volume of Murine Enterocytes Ключові слова: ентероцити миші, осмотичний тиск розчину, осмотично неактивний об'єм, проникність. Ключевые слова: энтероциты мыши, осмотическое давление раствора, осмотически неактивный объем, проницаемость. Key words: mice, enterocytes, osmotic pressure, osmotically inactive volume, permeability. Автор, якому необхідно надсилати кореспонденцію: вул. Переяславська, 23, м. Харків, Україна 61016; тел.: (+38 057) 373-38-71, факс: (+38 057) 373-30-84, електронна пошта: go.olga1787@yandex.ua To whom correspondence should be addressed: 23, Pereyaslavskaya str., Kharkov, Ukraine 61016; tel.:+380 57 373 3871, fax: +380 57 373 3084, e-mail: go.olga1787@yandex.ua Department of Low Temperature Preservation, Institute for Prob- lems of Cryobiology and Cryomedicine of the National Academy of Sciences of Ukraine, Kharkov, Ukraine Відділ низькотемпературного консервування, Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України, м. Харків Надійшла 20.10.2015 Прийнята до друку 25.01.2016 Проблеми кріобіології і кріомедицини. – 2016. – Т. 26, №1. – С. 93–97. © 2016 Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Received October, 20, 2015 Accepted January, 25, 2016 Probl Cryobiol Cryomed 2016; 26(1): 93–97. © 2016 Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine коротке повідомлення short communication Найбільш адекватною моделлю для дослідження адгезійних властивостей лактобактерій є епітеліальні клітини тонкого кишечника – ентероцити. Відмінності між ентероцитами різних донорів підвищують варіабельність результатів вивчення бактерійної адгезії in vitro. Тому кріоконсервування певної кількості клітин, отриманих із єдиного джерела, може бути одним із шляхів вирішення даної проблеми. Відомо, що коефіцієнти проникності мембран клітин відіграють важливу роль у процесах, що протікають за низькотемпературного консервування. Коефіцієнти проникності для молекул води значною мірою визначають оптимальні швидкості охолодження під час заморожування, а коефіцієнти проникності речовин, які використовуються як кріопротектори, – часові параметри процедури еквілібрації клітин у середовищі кріоконсервування [1]. Раніше [1, 2] був розроблений алгоритм визначення коефіцієнтів проникності клітинних мембран за змінами об’єму клітин у часі при їх вміщенні в середовище з про- никаючою речовиною. Одним із важливих параметрів для розрахунку коефіцієнтів проникності плазматичної мембрани за згаданим алгоритмом є осмотично неактивний об’єм клітини. Мета роботи – визначення осмотично неактивного об’єму ентероцитів миші. Експерименти проводили відповідно до «За- гальних принципів експериментів на тваринах», схвалених V Національним конгресом із біоетики (Київ, 2013) і узгоджених із положеннями «Євро- пейської конвенції про захист хребетних тварин, які використовуються для експериментальних та інших наукових цілей» (Страсбург, 1986). Ентероцити виділяли з тонкого кишечника миші за методом J. Carter [4]. Тварин забивали дислокацією Small intestine epithelial cells, i. e. enterocytes are the most adequate model in studying adhesive properties of lactobacteria. Differences between enterocytes from different donors increase the variability of results, obtained when investigating bacterial adhesion in vitro. Therefore the cryopreservation of the certain amount of cells, derived from the single source may be one of the ways to solve this task. Coefficients of cell membrane permeability are known to play an important role in the processes, occur- ring under low temperature preservation. The permeabi- lity coefficients for water molecules largely determine the optimal cooling rates during freezing, and those for the substances used as cryoprotectants, greatly specify the time parameters of cell equilibration in cryopreser- vation medium [2]. There was developed previously [2, 3] the algorithm for determining the permeability coef- ficients of cell membranes by the changes in cell volume in time while placing them into the medium with a penetrating substance. The osmotically inactive cell volume is one of the important parameters to calculate the permeability coefficients of the plasma membrane according to the mentioned algorithm. The research aim was to determine the osmotically inactive volume of murine enterocytes. Experiments in animals were performed according to the General Principles of Experiments in Animals approved by the 5th National Congress in Bioethics (Kyiv, 2013) and agreed to the statements of European Con- vention for the Protection of Vertebrate Animals Used for Experimental and Other Scientific Purposes (Stras- burg, 1986). Enterocytes were isolated from murine small intestine with the Carter’s method [1]. Animals were sacrificed by cervical vertebrae dislocation. The small intestine was 94 проблемы криобиологии и криомедицины problems of cryobiology and cryomedicine том/volume 26, №/issue 1, 2016 шийних хребців. Тонку кишку видаляли на 4 см нижче пілоруса та на 5 см вище сліпої кишки, промивали розчином 0,15 М NaCl кімнатної темпе- ратури для видалення кишкового вмісту та нарізали на сегменти розміром 10 см. Сегменти вивертали за допомогою пластикового стержня і промивали в крижаному середовищі Хенкса («Biowest», Франція). Стержні з сегментами поміщали у пластиковий флакон із гіпотонічним розчином та інкубували 10 хв при 37°C. Розчин містив 65,7% середовища Дюльбеко (фосфатний буфер без Мg2+ або Ca2+, pH 7,0); 34,25% тридистильованої води і 0,94% полівінілпіролідону («Sigma», США) із середньою м. м. 40 000. Осмо- лярність розчину складала 195 мОсмоль/л. Далі розчин видаляли, до сегментів додавали 30 мл того ж розчину кімнатної температури (22...25°С) та інку- бували впродовж години з вібрацією 90–100 хв–1 на платформі шутера. Після цього суспензію клітин, які відділилися від кишкової поверхні, переливали у пробірки та осаджували центрифугуванням 10 хв при 500g. Надосад середовища видаляли, а клітини ресус- пендували в крижаному середовищі Хенкса та про- пускали через подвійний нейлоновий фільтр. Для визначення осмотично неактивного об’єму клітини вміщували у розчини непроникаючої речови- ни (NaCl) із концентраціями від 0,15 до 1,5 моль/л. Об’єм розчинів на порядок перевищував початковий об’єм клітинної суспензії. Мікроскопічне зображення клітин у цих розчинах отримували за допомогою мікроскопа «Axio Observer Z1» («Carl Zeiss», Німеч- чина) при збільшенні ×40. Об’єм клітин апроксиму- вали об’ємом зрізаного конуса. Лінійні розміри клітин (висоту, малий та великий діаметри зрізаного конуса) визначали за допомогою програми «AxioVision Rel. 4.6» («Carl Zeiss»). Кількість виміряних клітин у кожному розчині в експерименті становила n ≥ 45. Експериментальні дослідження теоретично обґрун- товані наступним чином. У випадку двокомпонентного розчину непроникаючої (k-ої) речовини рівняння, що описує зміну клітинного об’єму у часі (t), має вигляд [2]: ( )       − α− α− τ = in k out k w n n y dt/dy 0 11 , (1) де 0V Vy ≡ – відносний об’єм клітини (V0 – початковий об’єм клітини); 1 0 0 −     π=τ pw L V S – характерний час проникання молекул води крізь мембрану (S – площа поверхні плазматичної мембрани клітини; Lp – кое- фіцієнт фільтрації клітинної мембрани; π0 – початкове значення осмотичного тиску внутрішньоклітинного і позаклітинного розчинів, тобто осмотичний тиск фізіологічного розчину, який дорівнює 7,8×105 Н/м2); ( )∑ ≠= υ=α n s,wkk kk N V 1 0 0 1 – осмотично неактивний об’єм removed 4 cm below the pylorus and 5 cm above the cecum, then washed with 0.15 M NaCl solution of room temperature for intestinal content removal, and cut into 10 cm segments. They were next turned inside out using a plastic rod and washed in ice Hanks’ solution (Biowest, France). Rods with the segments were placed into a plastic bottle with hypotonic solution and incubated for 10 min at 37°C. The solution contained 65.7% Dul- becco’s medium (phosphate buffer without Mg2+ or Ca2+, pH 7.0); 34.25% tridistilled water and 0.94% polyvinyl- pyrrolidone (Sigma, USA), average molecular weight of 40000. The solution osmolarity was 195 mOsm/l. The solution was then removed, the segments were supple- mented with 30 ml of the same solution of room tem- perature (22...25°C) and incubated for 1 hr with vibration of 25–100 min–1 on a shaker platform. Afterwards the suspension of the cells, detached from intestinal surface, was poured into vials and precipitated by centrifugation for 10 min at 500g. The medium supernatant was remo- ved and cells were resuspended in ice Hanks’ solution and passed through a double nylon filter. To specify the osmotically inactive volume the cells were placed into the non-penetrating substance (NaCl) solution with concentrations ranging from 0.15 to 1.5 mol/l. The volume of solutions exceeded by an order the initial volume of cell suspension. The cells in the solutions were microscopically imaged with microscope Axio Observer Z1 (Carl Zeiss, Germany) using power 40 magnification. Cell volume was approximated with that of a truncated cone. Cell linear dimensions (height, small and large diameters of a truncated cone) were determined using AxioVision Rel. 4.6 software (Carl Zeiss). A number of measured cells in each solution in the experiment was n ≥ 45. Experimental investigations were theoretically sub- stantiated as follows. In case of the two-component solution of non-penetrating (k-th) substance the equation, describing the change in cell volume in time (t), takes the following form [3]: ( )       − α− α− τ = in k out k w n n y dt/dy 0 11 , (1) where 0V Vy ≡ – relative cell volume (V0 – initial cell volume); 1 0 0 −     π=τ pw L V S – characteristic time of water molecules penetration through the membrane (S – surface area of cell plasma membrane; Lp – filtration coefficient of the cell membrane; π0 – initial value of osmotic pres- sure of intracellular and extracellular solutions, i. e. osmo- tic pressure of physiological saline equals to 7.8×105 H/m2); ( )∑ ≠= υ=α n s,wkk kk N V 1 0 0 1 – osmotically inactive cell volume (υk – partial molar volume of k-th substance); проблемы криобиологии и криомедицины problems of cryobiology and cryomedicine том/volume 26, №/issue 1, 2016 95 клітини (υk – парціальний молярний об’єм k-ої речовини); ∑ = = n i i k k N Nn 1 – мольна частка k-го компонента в розчині (Nk – кількість молів k-го компонента в розчині; out kn – мольна частка розчиненої у позаклітинному розчині k-ої речовини); in kn 0 – початкове значення мольної частки розчиненої у внутрішньоклітинному розчині речовини. Осмотичний тиск k-го компонента розчину визначається як w k k RTn υ =π , де υw – парціальний молярний об’єм води. При t →∞ (тобто t >> τw) зміна відносного об’єму клітини в розчині непроникаючої речовини 0→ dt dy , отже отримуємо ( ) 011 0 =      − α− α− τ in k out k w n n y , ( ) ( ) in k out k n ny 0 1 α−=α− ∞ (2) або ( ) ( )xy out k in k α−+α= π πα−+α=∞ 11 0 , (3) де out k in kx π π= 0 . Таким чином, визначаючи об’єм клітин за t >> τw у серії розчинів непроникаючої речовини зі зростаю- чою концентрацією, знаходимо залежність асимптотич- ного відносного об’єму від оберненого приведеного осмотичного тиску розчину, що дозволяє визначити осмотично неактивний об’єм клітин. Усереднені за даними чотирьох експериментів розміри ентероцитів у розчинах непроникаючої речовини (NaCl) зі зростаючою концентрацією та значення осмотичного тиску розчинів подано в таблиці, залежність асимптотичного відносного об’єму клітин від оберненого приведеного осмо- тичного тиску – на рисунку. Для визначення осмотично неактивного об’єму ентероцитів миші експериментальні дані апроксиму- вали рішенням рівняння (3) методом найменших квад- ратів. Умова мінімального відхилення експеримен- тальних точок від лінійної залежності (2) має вигляд: [0,79 – α – (1 – α)x0,3M]2 + [0,7 – α – – (1 – α)x0,5M]2 + [0,63 – α – – (1 – α)x0,8M]2 +[0,57 – α – (1 – α)x1,0M]2+ (4) +[0,56 – α – (1 – α)x1,2M]2 + +[0,54 – α – (1 – α)x1,5M]2 = min. Здійснюємо диференціювання за α: 2[0,79 – α – (1 – α)x0,3M](x0,3M – 1) + 2[0,7 – α – – (1 – α)x0,5M](x0,5M – 1) + 2[0,63 – α – – (1 – α)x0,8M](x0,8M – 1)+ 2[0,57 – α – (5) – (1 – α)x1,0M](x1,0M – 1) + 2[0,56 – α – – (1 – α)x1,2M](x1,2M – 1) + 2[0,54 – α – – (1 – α)x1,5M](x1,5M – 1) = 0. ∑ = = n i i k k N Nn 1 – mole fraction of k-th component in so- lution; Nk – number of moles of k-th component in solu- tion; out kn – mole fraction of k-th substance dissolved in extracellular solution; in kn 0 – initial value of mole fraction of the substance, dissolved in extracellular solution. Osmotic pressure of k-th component of the solution is determined as w k k RTn υ =π , where υw is a partial molar volume of water. At the t →∞ (i.e. t >> τw) a change in relative cell volume in the non-penetrating substance solution is 0→ dt dy , therefore we obtain ( ) 011 0 =      − α− α− τ in k out k w n n y , ( ) ( ) in k out k n ny 0 1 α−=α− ∞ (2) or ( ) ( )xy out k in k α−+α= π πα−+α=∞ 11 0 , (3) where out k in kx π π= 0 . Thus, when assuming a cell volume as t >> τw in a series of non-penetrating substance solutions with increasing concentration, we get the dependence of asymptotic relative volume vs. the reciprocal normalized osmotic pressure of the solution, that enables determining the osmotically inactive cell volume. The dimensions of enterocytes in non-penetrating substance (NaCl) solutions with increasing concentration and the values of osmotic pressure of the solutions, averaged by the data of four experiments, are shown in the Table, the dependence of asymptotic relative cell volume vs. the reciprocal normalized osmotic pressure is done in Figure. To determine an osmotically inactive volume of muri- ne enterocytes the experimental data were approximated by solving the equation (3) using the method of the least squares. The condition of the minimum deviation of expe- rimental points from the linear dependence (2) is as follows: [0.79 – α – (1 – α)x0.3M]2 + [0.7 – α – – (1 – α)x0.5M]2 + [0.63 – α – – (1 – α)x0.8M]2 + [0.57 – α – (1 – α)x1.0M]2 + (4) +[0.56 – α – (1 – α)x1.2M]2 + +[0.54 – α – (1 – α)x1.5M]2 = min. If differentiating by α, we get: 2[0.79 – α – (1 – α)x0.3M](x0.3M – 1) + 2[0.7 – α – – (1 – α)x0.5M](x0.5M – 1) + 2[0.63 – α – – (1 – α)x0.8M](x0.8M – 1)+ 2[0.57 – α – (5) – (1 – α)x1.0M](x1.0M – 1) + 2[0.56 – α – – (1 – α)x1.2M](x1.2M – 1) + 2[0.54 – α – – (1 – α)x1.5M](x1.5M – 1) = 0. яіцартнецноK M,lCaN ,noitartnecnoclCaN M нитілкмє'бО 01,їізнепсусу 3 мкм 3 nisllecfoemuloV 01,noisnepsus 3 µm3 мє'бойинсондіВ нитілк emulovllecevitaleR кситйинчитомсО л/мсОм,уничзор foerusserpcitomsO l/lomsOm,noitulos йинедевирП кситйинчитомсо citomsodezilamroN erusserp йиненребО йинедевирп кситйинчитомсо lacorpiceR citomsodezilamron erusserp 51,0 58,0±46,8 1 772 1 1 3,0 85,0±28,6 97,0 455 2 5,0 5,0 7,0±50,6 7,0 129 19423,3 3,0 8,0 7,0±4,5 36,0 7741 1233,5 91,0 1 6,0±49,4 75,0 6481 62466,6 51,0 2,1 7,0±8,4 65,0 6122 8 521,0 5,1 7,0±56,4 45,0 3672 7479,9 1,0 96 проблемы криобиологии и криомедицины problems of cryobiology and cryomedicine том/volume 26, №/issue 1, 2016 Підставляємо в рівняння значення x, які відпо- відають різним концентраціям розчинів NaCl (0,3; 0,5; 0,8; 1,2 та 1,5 М) (таблиця) та отримуємо 2[0,79 – α – (1 – α)0,5](0,5 – 1) + 2[0,7 – α – – (1 – α)0,3](0,3 – 1) + 2[0,63 – α – – (1 – α)0,19](0,19 – 1) + 2[0,57 – α – – (1 – α)0,15](0,15 – 1) + (6) + 2[0,56 – α – (1 – α)0,125](0,125 – 1) + + 2[0,54 – α – (1 – α)0,1](0,1 – 1) = 0, звідки α = 0,51. За перетином апроксимованої прямої з віссю ординат на рисунку або з рівняння (6) отримуємо значення осмотично неактивного об’єму α = 0,51 для ентероцитів миші. За аналогічними розрахунками для When entering the x values into the obtained equation, corresponding to different concentrations of NaCl solutions (0.3, 0.5, 0.8, 1.2 and 1.5 M) (Table), we obtain the following equation: 2[0.79 – α – (1 – α)0.5](0.5 – 1) + 2[0.7 – α – – (1 – α)0.3](0.3 – 1) + 2[0.63 – α – – (1 – α)0.19](0.19 – 1) + 2[0.57 – α – – (1 – α)0.15](0.15 – 1) + (6) + 2[0.56 – α – (1 – α)0.125](0.125 – 1) + + 2[0.54 – α – (1 – α)0.1](0.1 – 1) = 0, where from α = 0.51. According to the intersection of approximation straight line with the ordinate axis in the Figure or from the equation (6) we obtain the values of osmotically Розміри ентероцитів у розчинах NaCl та значення осмотичного тиску розчинів Enterocyte dimensions in NaCl solutions and values of osmotic pressure for solutions Залежність асимптотичного (за t >> tw) відносного об’єму клітин від оберненого приведеного осмотичного тиску розчину хлориду натрію (усереднені дані). Перетин апроксимованої прямої з віссю ординат на рівні 0,51. Dependency of asymptotic (at t >> tw) relative volume of cells vs. reciprocal normalized osmotic pressure of NaCl solution (averaged data). Intersection of approximation straight line with the ordinate axis makes 0.51. y = 0,5052x + 0,5136 R2 = 0,9768 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 Ві дн ос ни й об ’є м к лі ти н C el l r el at iv e vo lu m e Обернений приведений осмотичний тиск Reciprocal normalized osmotic pressure проблемы криобиологии и криомедицины problems of cryobiology and cryomedicine том/volume 26, №/issue 1, 2016 97 Література 1. Гордиенко Е.А., Пушкарь Н.С. Физические основы низко- температурного консервирования клеточных суспензий // К.: Наук. думка, 1994. – 144 с. 2. Гордієнко Є.О., Гордієнко О.І., Марущенко В.В., Сакун О.В. Удосконалена модель пасивного масопереносу крізь плаз- матичну мембрану клітини // Біофізичний вісник. – 2008. – Вип. 2 (21). – С. 75–80. 3. Сакун О.В., Коваленко І.Ф., Сіренко А.Ю. та ін. Коефіцієнти проникності мембран дріжджів Saccharomyces cerevisiae для води і кріопротекторів // Вісник ХНУ ім. В.Н. Каразіна. Серія: біологія. – 2008. – Вип. 7, №814. – С. 140–146. 4. Carter J.H., Carter H., Nussbaum J., Eichholz A. Isolation of hamster intestinal epithelial cells using hypoosmotic media and PVP // J. Cell Physiol. – 1982. – Vol. 111, №1. – P. 55–67. 5. Solomon A.K., Toon M.R., Dix J.A.Osmotic properties of human red cells // J. Membr. Biol. – 1986. – Vol. 91. – P. 259–273. 6. Weiser M.M., Noumeir M.M., Quaroni A., Kirsh K. Synthesis of plasmalemmal glycoproteins in intenstinal epithelial cells // J. Cell. Biol. – 1978. – Vol. 77. – P. 722–734. кожного окремого експерименту були отримані наступні значення осмотично неактивного об’єму α: 0,59; 0,53; 0,46; 0,48. Виходячи з цих даних, маємо середнє значення α = 0,51 ± 0,06. Отримане значення осмотично неактивного об’єму ентероцитів є більшим ніж, наприклад, еритроцитів людини (α = 0,43) [5] або дріжджоподібних клітин Saccharomyces cerevisiae (α = 0,27) [3]. Очевидно це пов’язано з розвиненою мережею мембранних систем усередині ентероцитів (багато мітохондрій, синтетич- ний апарат – рибосоми і гранулярна ендоплазматична мережа, велике ядро) [6] та тим, що частину їх об’єму визначають мікроворсинки, що є виростами плазмо- леми ентероцитів, всередині яких містяться філаменти і мікротрубочки актиноміозинового комплексу. Таким чином, у роботі отримано значення осмо- тично неактивного об’єму ентероцитів миші, яке буде використано для розрахунку коефіцієнтів проникності їх мембран для води та кріопротекторів. inactive volume α for murine enterocytes, making α = 0.51. By the similar calculations for each experiment the following values of osmotically inactive volume α were obtained: 0.59; 0.53; 0.46; 0.48. Proceeding from these data we have the average value of α = 0.51 ± 0.06. The obtained value of osmotically inactive volume of enterocytes is higher than, e. g., for human erythro- cytes (α = 0,43) [5] or Saccharomyces cerevisiae yeast- like cells (α = 0,27) [4]. This is apparently due to an extensive network of membrane systems inside the enterocytes (many mitochondria, synthetic apparatus: ribosomes and granular endoplasmic reticulum, large nucleus) [6], as well as to the fact that a part of their volume is determined by microvilli, being the processes of enterocyte plasma membrane, inside of which there are filaments and microtubules of actin-myosin complex. Thus, we obtained here the value of osmotically inactive volume of murine enterocytes to be used for calculating the permeability coefficients of their mem- branes for water and cryoprotectants. References 1. Carter J.H., Carter H., Nussbaum J., Eichholz A. Isolation of hamster intestinal epithelial cells using hypoosmotic media and PVP. J Cell Physiol 1982; 111(1): 55–67. 2. Gordiyenko Ye.O., Pushkar N.S. Physical basis for low tempe- rature preservation of cell suspensions. Кyiv: Naukova dumka; 1994. 3. Gordiyenko Ye.О., Gordiyenko О.І., Maruschenko V.V., Sa- kun O.V. Improved model for the passive mass transfer through the cell plasma membrane. Biophys Bull 2008; 21(2): 75–80. 4. Sakun O.V., Kovalenko I.F., Sirenko A.Yu. et al. Membrane per- meability coefficients of yeast Saccharomyces cerevisiae to water and cryoprotectants. V.N. Karazin KhNU Bull Series Biol 2008; 7(814): 140–146. 5. Solomon A.K., Toon M.R., Dix J.A. Osmotic properties of human red cells. J Membr Biol 1986; 91: 259–273. 6. Weiser M.M., Noumeir M.M., Quaroni A., Kirsh K. Synthesis of plasmalemmal glycoproteins in intenstinal epithelial cells. J Cell Biol 1978; 77: 722–734.

Визначення осмотично неактивного об'єму ентероцитів миші

Репозитарії

Схожі ресурси