Факторы роста BDNF и TGF1β в ткани криоконсервированной амниотической оболочки плаценты человека после антиглаукоматозной операции
Исследовали влияние криоконсервированной амниотической оболочки плаценты человека (АОПЧ) на процесс высвобождения клеточных факторов роста BDNF и TGF1β во внешнюю среду и орган зрения в срок наблюдения до 21-х суток. Методом иммуноферментного анализа определяли содержание факторов роста клеток в т...
Gespeichert in:
| Veröffentlicht in: | Проблемы криобиологии и криомедицины |
|---|---|
| Datum: | 2016 |
| Hauptverfasser: | , , |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | Russian |
| Veröffentlicht: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2016
|
| Schlagworte: | |
| Online Zugang: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/137404 |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Zitieren: | Факторы роста BDNF и TGF1β в ткани криоконсервированной амниотической оболочки плаценты человека после антиглаукоматозной операции / И.Л. Казмирук, Ю.А. Демин, В.В. Рязанцев // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2016. — Т. 26, № 2. — С. 145–154. — Бібліогр.: 12 назв. — рос. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-137404 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Казмирук, И.Л. Демин, Ю.А. Рязанцев, В.В. 2018-06-17T10:57:59Z 2018-06-17T10:57:59Z 2016 Факторы роста BDNF и TGF1β в ткани криоконсервированной амниотической оболочки плаценты человека после антиглаукоматозной операции / И.Л. Казмирук, Ю.А. Демин, В.В. Рязанцев // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2016. — Т. 26, № 2. — С. 145–154. — Бібліогр.: 12 назв. — рос. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/137404 616.12-089.844:615.477.2 Исследовали влияние криоконсервированной амниотической оболочки плаценты человека (АОПЧ) на процесс высвобождения клеточных факторов роста BDNF и TGF1β во внешнюю среду и орган зрения в срок наблюдения до 21-х суток. Методом иммуноферментного анализа определяли содержание факторов роста клеток в тканях органа зрения после использования в качестве покрытия замороженной по 2-этапному режиму АОПЧ при антиглуакоматозной операции. Показана эффективность применения размороженной АОПЧ в отношении процесса высвобождения клеточных факторов роста после ее аппликации в зоне послеоперационного дефекта. Установлена зависимость накопления факторов роста BDNF и TGF1β от времени аппликации криоконсервированной АОПЧ, вида ткани глаза и тропности факторов роста. Досліджували вплив кріоконсервованої амніотичної оболонки плаценти людини (АОПЛ) на процес вивільнення клітинних факторів росту BDNF і TGF1β у зовнішнє середовище та орган зору в термін спостереження до 21-х діб. Методом імуноферментного аналізу визначали вміст факторів росту клітин у тканинах органа зору після використання в якості покриття замороженої за 2-етапним режимом АОПЛ при антиглуакоматозній операції. Показана ефективність застосування розмороженої АОПЛ щодо процесу вивільнення клітинних факторів росту після її аплікації у зоні післяопераційного дефекту. Встановлено залежність накопичення факторів росту BDNF і TGF1β від часу аплікації кріоконсервованої АОПЛ, виду тканини ока та тропності факторів росту. The effect of cryopreserved human placental amniotic membrane (HPAM) on the release of cell growth factors BDNF and TGF1β into both an environment and eye within the observation period of up to 21 days has been studied. By enzyme immunoassay there was investigated the content of cell growth factors in ocular tissues after use as a coating of the frozen according two-step regimen HPAM in antiglaucomatous surgery. The efficiency of using the frozen-thawed HPAM in respect of releasing the cell growth factors after its application into the post-surgery defect zone has been demonstrated. There was found the dependence of accumulation of growth factors TGF1β and BDNF on time of cryopreserved HPAM application, eye tissue type and tropism of growth factors. ru Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии и криомедицины Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Факторы роста BDNF и TGF1β в ткани криоконсервированной амниотической оболочки плаценты человека после антиглаукоматозной операции Growth factors BDNF and TGF1β in tissue of cryopreserved human placental amniotic membrane after antiglaucomatous surgery Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Факторы роста BDNF и TGF1β в ткани криоконсервированной амниотической оболочки плаценты человека после антиглаукоматозной операции |
| spellingShingle |
Факторы роста BDNF и TGF1β в ткани криоконсервированной амниотической оболочки плаценты человека после антиглаукоматозной операции Казмирук, И.Л. Демин, Ю.А. Рязанцев, В.В. Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология |
| title_short |
Факторы роста BDNF и TGF1β в ткани криоконсервированной амниотической оболочки плаценты человека после антиглаукоматозной операции |
| title_full |
Факторы роста BDNF и TGF1β в ткани криоконсервированной амниотической оболочки плаценты человека после антиглаукоматозной операции |
| title_fullStr |
Факторы роста BDNF и TGF1β в ткани криоконсервированной амниотической оболочки плаценты человека после антиглаукоматозной операции |
| title_full_unstemmed |
Факторы роста BDNF и TGF1β в ткани криоконсервированной амниотической оболочки плаценты человека после антиглаукоматозной операции |
| title_sort |
факторы роста bdnf и tgf1β в ткани криоконсервированной амниотической оболочки плаценты человека после антиглаукоматозной операции |
| author |
Казмирук, И.Л. Демин, Ю.А. Рязанцев, В.В. |
| author_facet |
Казмирук, И.Л. Демин, Ю.А. Рязанцев, В.В. |
| topic |
Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология |
| topic_facet |
Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология |
| publishDate |
2016 |
| language |
Russian |
| container_title |
Проблемы криобиологии и криомедицины |
| publisher |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Growth factors BDNF and TGF1β in tissue of cryopreserved human placental amniotic membrane after antiglaucomatous surgery |
| description |
Исследовали влияние криоконсервированной амниотической оболочки плаценты человека (АОПЧ) на процесс
высвобождения клеточных факторов роста BDNF и TGF1β во внешнюю среду и орган зрения в срок наблюдения до 21-х суток.
Методом иммуноферментного анализа определяли содержание факторов роста клеток в тканях органа зрения после
использования в качестве покрытия замороженной по 2-этапному режиму АОПЧ при антиглуакоматозной операции. Показана
эффективность применения размороженной АОПЧ в отношении процесса высвобождения клеточных факторов роста
после ее аппликации в зоне послеоперационного дефекта. Установлена зависимость накопления факторов роста BDNF и
TGF1β от времени аппликации криоконсервированной АОПЧ, вида ткани глаза и тропности факторов роста.
Досліджували вплив кріоконсервованої амніотичної оболонки плаценти людини (АОПЛ) на процес вивільнення
клітинних факторів росту BDNF і TGF1β у зовнішнє середовище та орган зору в термін спостереження до 21-х діб. Методом
імуноферментного аналізу визначали вміст факторів росту клітин у тканинах органа зору після використання в якості
покриття замороженої за 2-етапним режимом АОПЛ при антиглуакоматозній операції. Показана ефективність застосування
розмороженої АОПЛ щодо процесу вивільнення клітинних факторів росту після її аплікації у зоні післяопераційного дефекту.
Встановлено залежність накопичення факторів росту BDNF і TGF1β від часу аплікації кріоконсервованої АОПЛ, виду тканини
ока та тропності факторів росту.
The effect of cryopreserved human placental amniotic membrane (HPAM) on the release of cell growth factors BDNF
and TGF1β into both an environment and eye within the observation period of up to 21 days has been studied. By enzyme immunoassay
there was investigated the content of cell growth factors in ocular tissues after use as a coating of the frozen according two-step
regimen HPAM in antiglaucomatous surgery. The efficiency of using the frozen-thawed HPAM in respect of releasing the cell growth
factors after its application into the post-surgery defect zone has been demonstrated. There was found the dependence of accumulation
of growth factors TGF1β and BDNF on time of cryopreserved HPAM application, eye tissue type and tropism of growth factors.
|
| issn |
0233-7673 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/137404 |
| citation_txt |
Факторы роста BDNF и TGF1β в ткани криоконсервированной амниотической оболочки плаценты человека после антиглаукоматозной операции / И.Л. Казмирук, Ю.А. Демин, В.В. Рязанцев // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2016. — Т. 26, № 2. — С. 145–154. — Бібліогр.: 12 назв. — рос. |
| work_keys_str_mv |
AT kazmirukil faktoryrostabdnfitgf1βvtkanikriokonservirovannoiamniotičeskoioboločkiplacentyčelovekaposleantiglaukomatoznoioperacii AT deminûa faktoryrostabdnfitgf1βvtkanikriokonservirovannoiamniotičeskoioboločkiplacentyčelovekaposleantiglaukomatoznoioperacii AT râzancevvv faktoryrostabdnfitgf1βvtkanikriokonservirovannoiamniotičeskoioboločkiplacentyčelovekaposleantiglaukomatoznoioperacii AT kazmirukil growthfactorsbdnfandtgf1βintissueofcryopreservedhumanplacentalamnioticmembraneafterantiglaucomatoussurgery AT deminûa growthfactorsbdnfandtgf1βintissueofcryopreservedhumanplacentalamnioticmembraneafterantiglaucomatoussurgery AT râzancevvv growthfactorsbdnfandtgf1βintissueofcryopreservedhumanplacentalamnioticmembraneafterantiglaucomatoussurgery |
| first_indexed |
2025-11-24T16:26:14Z |
| last_indexed |
2025-11-24T16:26:14Z |
| _version_ |
1850482644553302016 |
| fulltext |
УДК 616.12-089.844:615.477.2
И.Л. Казмирук1, Ю.А. Демин1, В.В. Рязанцев2*
Факторы роста BDNF и TGF1βββββ в ткани криоконсервированной
амниотической оболочки плаценты человека после
антиглаукоматозной операции
UDC 616.12-089.844:615.477.2
I.L. Kazmiruk1, Yu.A. Demin1, V.V. Ryazantsev2*
Growth Factors BDNF and TGF1βββββ in Tissue of Cryopreserved
Human Placental Amniotic Membrane after Antiglaucomatous Surgery
Реферат: Исследовали влияние криоконсервированной амниотической оболочки плаценты человека (АОПЧ) на процесс
высвобождения клеточных факторов роста BDNF и TGF1β во внешнюю среду и орган зрения в срок наблюдения до 21-х суток.
Методом иммуноферментного анализа определяли содержание факторов роста клеток в тканях органа зрения после
использования в качестве покрытия замороженной по 2-этапному режиму АОПЧ при антиглуакоматозной операции. Показана
эффективность применения размороженной АОПЧ в отношении процесса высвобождения клеточных факторов роста
после ее аппликации в зоне послеоперационного дефекта. Установлена зависимость накопления факторов роста BDNF и
TGF1β от времени аппликации криоконсервированной АОПЧ, вида ткани глаза и тропности факторов роста.
Ключевые слова: амниотическая оболочка плаценты человека, криоконсервирование, проницаемость, факторы роста
клеток, антиглаукоматозная операция.
Реферат: Досліджували вплив кріоконсервованої амніотичної оболонки плаценти людини (АОПЛ) на процес вивільнення
клітинних факторів росту BDNF і TGF1β у зовнішнє середовище та орган зору в термін спостереження до 21-х діб. Методом
імуноферментного аналізу визначали вміст факторів росту клітин у тканинах органа зору після використання в якості
покриття замороженої за 2-етапним режимом АОПЛ при антиглуакоматозній операції. Показана ефективність застосування
розмороженої АОПЛ щодо процесу вивільнення клітинних факторів росту після її аплікації у зоні післяопераційного дефекту.
Встановлено залежність накопичення факторів росту BDNF і TGF1β від часу аплікації кріоконсервованої АОПЛ, виду тканини
ока та тропності факторів росту.
Ключові слова: амніотична оболонка плаценти людини, кріоконсервування, проникність, фактори росту клітин,
антиглаукоматозна операція.
Abstract: The effect of cryopreserved human placental amniotic membrane (HPAM) on the release of cell growth factors BDNF
and TGF1β into both an environment and eye within the observation period of up to 21 days has been studied. By enzyme immunoassay
there was investigated the content of cell growth factors in ocular tissues after use as a coating of the frozen according two-step
regimen HPAM in antiglaucomatous surgery. The efficiency of using the frozen-thawed HPAM in respect of releasing the cell growth
factors after its application into the post-surgery defect zone has been demonstrated. There was found the dependence of accumulation
of growth factors TGF1β and BDNF on time of cryopreserved HPAM application, eye tissue type and tropism of growth factors.
Key words: human placental amniotic membrane, cryopreservation, permeability, cell growth factors, antiglaucomatous surgery.
*Автор, которому необходимо направлять корреспонденцию:
ул. Переяславская, 23, г. Харьков, Украина 61016;
тел.: (+38 057) 373-30-34, факс: (+38 057) 373-30-84,
электронная почта: vvryaz@i.ua
*To whom correspondence should be addressed:
23, Pereyaslavskaya str., Kharkiv, Ukraine 61016;
tel.:+380 57 373 3034, fax: +380 57 373 3084,
e-mail: vvryaz@i.ua
1Kharkiv Medical Academy of Post-Diploma Education, Kharkov,
Ukraine
2Department of Cryocytology, Institute for Problems of Cryobiology
and Cryomedicine of the National Academy of Sciences of Ukraine,
Kharkiv, Ukraine
1Харьковская медицинская академия последипломного образо-
вания, г. Харьков
2Отдел криоцитологии, Институт проблем криобиологии и
криомедицины НАН Украины, г. Харьков
Поступила 09.09.2014
Принята в печать 30.03.2016
Проблемы криобиологии и криомедицины. – 2016. – Т. 26, №2. – С. 145–154.
© 2016 Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины
Received September, 09, 2014
Accepted March, 30, 2016
Probl. Cryobiol. Cryomed. 2016. 26(2): 145–154.
© 2016 Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine
оригинальное исследование research article
В настоящее время актуальной медико-
социальной проблемой является рост численности
населения с заболеваниями органа зрения, свя-
занными с глаукоматозным состоянием [3]. Тра-
диционно при данной патологии показан хирурги-
ческий метод лечения, однако известно [2], что в
послеоперационном периоде, а именно в момент
выраженного рубцевания ткани, возможно разви-
тие воспалительного процесса. Поэтому для
коррекции послеоперационного дефекта применяют
биологические тканевые покрытия, в частности
For now, a growing number of patients with eye
diseases related to glaucomatous condition is a vital
medical and social issue [4]. Treatment of this
pathology usually includes a surgery, which is often
accompanied with an inflammation [1] in the post-
surgery period, mostly during an expressed tissue
scarring. One of the methods to control the post-surgery
course is the application of biological tissue coatings,
in particular, human placental amniotic membrane
(HPAM) into the post-surgery defect area [8]. Using
this treatment in medical practice is stipulated by the
146 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 26, №/issue 2, 2016
амниотическую оболочку плаценты человека
(АОПЧ) [6]. Такой метод лечения используют в
медицинской практике, поскольку в АОПЧ
отмечается большое количество факторов кле-
точного роста (BDNF и TGF1β), она обладает
минимальной иммуногенностью (клетки эпителия
на поверхности ткани практически не имеют
маркеров HLA 1-го типа и HLA-DR 2-го типа),
антимикробным эффектом (за счет лизоцима,
трансферрина и лактоферрина), противоспалитель-
ным действием (обеспечивается цитокинами ИЛ-
6 и ИЛ-8), а также в ней содержатся ингибиторы
тканевых протеаз (ТIMP- 1, 2, 3, 4) [10].
Криоконсервирование АОПЧ позволяет созда-
вать запасы ткани для дальнейшего ее использова-
ния по мере необходимости при антиглаукоматоз-
ных операциях (АГО). Однако на сегодняшний
день отсутствуют достоверные данные о поступ-
лении биологически активных веществ и нейропро-
текторов в ткани глаза из амниона, покрывающего
раневой дефект, in situ до 21-х суток послеопера-
ционного периода.
Ранее для замораживания ткани плаценты
человека применяли 2-этапный режим, который
обеспечивал высокий показатель структурной со-
хранности ткани [7]. В данной работе показана
эффективность использования этого режима замо-
раживания в отношении процесса высвобождения
из размороженной АОПЧ клеточных факторов
роста после аппликации на ткани органа зрения.
Целью работы было определение содержания
факторов роста в тканях глаза в период использо-
вания в качестве биологического покрытия при
антиглаукоматозной операции замороженной по
2-этапному режиму амниотической оболочки пла-
центы человека. Эффективность режима криокон-
сервирования оценивали по выходу из криоконсер-
вированной АОПЧ (кАОПЧ) факторов роста
клеток в ткани глаза после операции: нейротро-
фического фактора мозгового происхождения
(BDNF) и трансформирующего фактора роста
клеток (TGF1β). Нами была поставлена задача
после размораживания кАОПЧ получить ткань с
минимально возможной проницаемостью для этих
маркеров и использовать такой режим заморажи-
вания, который бы обеспечивал наиболее дли-
тельное (до 21-х суток) высвобождение нейротро-
фических и клеточных факторов из кАОПЧ в
органе зрения.
Материалы и методы
Эксперименты проводили на кроликах породы
Шиншилла (n = 25), которых содержали в условиях
вивария при соответствующем освещении на
presence of large amounts of cell growth factors
(BDNF and TGF1β) in HPAM, its minimal immuno-
genicity (tissue surface epithelial cells virtually do not
have HLA type 1 and HLA-DR type 2 markers),
antimicrobial effect (due to lysozyme, lactoferrin and
transferrin), anti-inflammatory action (ensured by
cytokines (IL-6, IL-8)) and inhibitors of tissue proteases
(TIMP- 1, 2, 3, 4) as well [4].
Cryopreservation of HPAM allows to create the
stocks of the tissue for future application in antiglauco-
matous surgery (AGS) when needed. However, there
are no valid data on releasing the biologically active
substances and neuroprotectors into an ocular tissue
from the covering the wound defect amnion in situ to
the 21st day of post-surgery period.
Two-step protocol was used to freeze the human
placental tissue previously, providing a high rate of the
tissue structure preservation [9]. This paper will
demonstrate an effective freezing regimen in respect
of the release of cell growth factors from the frozen-
thawed HPAM after application to an ocular tissue.
The research goal was to determine the content of
growth factors in eye tissues in case of using in
antiglaucomatous surgeries a biological coating of
cryopreserved HPAM (cHPAM), frozen according to
two-step protocol. Efficiency of the cryopreservation
regimen was assessed by release of cell growth factors
from cryopreserved HPAM (cHPAM) in eye tissue
after surgery, i. e. neurotrophic factor of cerebral origin
(BDNF) and transforming growth factor of cells
(TGF1β). We planned to procure cHPAM which would
have a minimal permeability of these markers after
thawing of the tissue and to use such freezing regimen,
which would provide the longest release (up to 21 days)
of neurotrophic and cellular factors of cHPAM in an
eye.
Materials and methods
Experiments were carried out in Chinchilla rabbits
(n = 25) kept in the animal house conditions with appro-
priate light regimen and the standard diet. Adrenaline
was administered to simulate eye glaucoma in animals
[5, 7].
The work was performed in accordance with the
General Principles of Experiments in Animals, approved
by the 5th National Congress in Bioethics (Kiev, 2013)
and consistent with the statements of the European
Convention for the Protection of Vertebrate Animals
Used for Experimental and Other Scientific Purposes
(Strasbourg, 1986).
To prepare HPAM we have used the same tech-
nique as for the medical immune biological product
‘Plateks-amniotic membrane for ophthalmology’
(registration certificate Nr. 734/08-300 200 000,
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 26, №/issue 2, 2016
147
стандартном рационе питания. Для формирования
глаукомы глаз животным вводили адреналин [3, 5].
Работу выполняли в соответствии с «Общими
принципами экспериментов на животных», одоб-
ренными V Национальным конгрессом по биоэтике
(Киев, 2013) и согласованными с положениями
«Европейской конвенции по защите позвоночных
животных, используемых для экспериментальных
и других научных целей» (Страсбург, 1986).
Для приготовления препарата АОПЧ использо-
вали такую же технологию, как и при создании
медицинского иммуно-биологического препарата
«Платекс-амниотическая оболочка для офтальмо-
логии» (Регистрационное свидетельство №734/08-
300200000 до 09.07.2013 г.), с соблюдением условий
Хельсинской декларации.
Перед замораживанием фрагменты АОПЧ
инкубировали в растворе криоконсерванта диме-
тилсульфоксида (ДМСО) с конечной концент-
рацией 10% (Корпорация «Артериум», Украина) в
течение 18–20 мин, затем каждый фрагмент
помещали в стерильный одноразовый контейнер
(«Nunc», Германия), герметизировали и маркиро-
вали. Образцы замораживали по 2-этапной прог-
рамме: охлаждение до –40°С со скоростью от 3
до 5 град/мин и дальнейшее погружение в жидкий
азот (–196°С). После замораживания контейнеры
с материалом переносили в низкотемпературный
банк для хранения при температуре –196°С.
После формирования в течение 2-х месяцев у
лабораторных животных глаукомы проводили
АГО, затем в зоне послеоперационного дефекта
использовали кАОПЧ сразу после ее разморажи-
вания [1]. Операцию выполняли в любом из
свободных секторов глазного яблока между пря-
мыми мышцами. У лимба, после предварительного
определения проекции канала Шлемма, иссекали
глубокие слои фильтрующей зоны вместе с сину-
сом и трабекулой в виде треугольника. Скле-
ральный лоскут фиксировали у его вершины к
выпуклой части склеры одним П-образным швом
и узловыми швами с каждой стороны с одномо-
ментным захватом кАОПЧ. Для заживления на
конъюнктивальную рану накладывали непрерыв-
ный шов.
Освобожденный от дебриса гомогенат из на-
тивной и замороженной ткани АОПЧ, а также
других тканей глаза лабораторных животных
готовили следующим образом. Из жидкого азота
извлекали одну дозу кАОПЧ, в части экспери-
ментов содержание факторов роста определяли в
незамороженной АОПЧ или здоровой ткани (рого-
вица, сетчатка, глазной нерв и склера) из локуса
АГО. Гомогенат получали из 100 мг ткани АОПЧ
или ткани глаза, которую измельчали в пробирке
09/07/2013), the procedure complied with the
conditions of the Declaration of Helsinki.
Prior to freezing the HPAM fragments were
incubated in dimethyl sulfoxide (DMSO) cryoprotectant
solution at a final concentration of 10% (Arterium
Corporation, Ukraine) for 18–20 min, then each
fragment was placed into a sterile disposable container
(Nunc, Germany), sealed and marked. The samples
were frozen according to the two-step program: cooling
down to –40°C at a rate of 3 to 5 deg/min and further
immersion into liquid nitrogen (–196°C). After freezing
the containers with the material were transferred to
the Low Temperature Bank for storage at liquid nitro-
gen temperature.
Within 2 months after simulation of glaucoma the
laboratory animals were subjected to AGS, during which
the cHPAM was applied in a zone of post-surgery
defect right after thawing [12]. The surgery was per-
formed in any of the eyeball free sectors between the
rectus muscles. Near the limb, after a preliminary
determination of the projection of Schlemm’s canal,
we have dissected the deep layers of filter area with a
sinus and trabeculae as a triangle. The scleral flap was
fixed at its top to the convex part of the sclera by
means of one U-shaped suture and interrupted sutures
on each side with a simultaneous capture of cHPAM.
Conjunctival wound was closed with a continuous
suture.
Debris-free homogenate from native and frozen
tissue of HPAM, as well as other eye tissues of
laboratory animals were prepared as follows. A single
dose of amniotic membrane was taken from liquid
nitrogen, in some experiments the content of growth
factors was determined in the non-frozen amniotic
membrane or in healthy tissue (cornea, retina, optic
nerve and sclera) from the locus of AGS. The
homogenate was derived from 100 mg HPAM tissue
or eye tissue which were ground in a 1.5 ml tube using
a Potter micro-homogenizer in phosphate based
physiological saline pH 7.4, supplemented with 1 mM
protease inhibitor phenyl-methylsulfonilfluoride in 1:9
ratio. The resulted homogenate was cleared of debris
by centrifugation at 1000g for 10 min. The supernatant
was collected into separate tubes for the measurement
of cell growth factors and neurotrophins.
To assess the yield of growth factors BDNF and
TGF1β the frozen-thawed cHPAM tissue was incuba-
ted in a sterile physiological saline. The cHPAM tissue
(100 mg) was placed into 1 ml solution at 37°C and
after 1, 3, 6, 9 hrs the supernatant was collected for
measurement of growth factors.
Content of TGF1β, BDNF growth factors (human)
was measured by highly sensitive test systems from
DRG (USA; sensitivity 2 pg/ml) and R&D Systems
(USA, sensitivity 20 pg/ml), respectively. Measure-
148 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 26, №/issue 2, 2016
объемом 1,5 мл с помощью микрогомогенизатора
Поттера в физиологическом растворе на фосфат-
ном буфере рН 7,4 с добавлением 1 ммоль ингиби-
тора протеаз фенилметилсульфонилфлуорида в
соотношении 1:9. Полученный гомогенат освобож-
дали от дебриса центрифугированием при 1000g в
течение 10 мин. Надосадок отбирали в отдельную
пробирку для измерения содержания факторов
роста клеток и нейротрофинов.
Для оценки выхода факторов роста BDNF и
TGF1β размороженную ткань кАОПЧ инкубиро-
вали в стерильном физиологическом растворе.
Ткань кАОПЧ (100 мг) помещали в 1 мл раствора
(37°С) и через 1, 3, 6, 9 ч отбирали надосадок для
измерения содержания факторов роста.
Содержание факторов роста BDNF и TGF1β
(человека) измеряли высокочувствительными
тест-системами «DRG» (США; чувствительность
2 пг/мл) и «R&D Systems» (США; чувствительность
20 пг/мл) соответственно. Измерения проводили
согласно инструкции к данным тест-системам
методом иммуноферментного анализа на полу-
автоматическом спектрофотометре для 96-луноч-
ных планшетов с вертикальным лучом «StatFax
2400» (США).
Данные статистически обрабатывали методом
Стьюдента и представляли на рисунках как сред-
ние значения М ± m. Различия считали значимыми
при р < 0,05.
Результаты и обсуждение
В результате проведенных исследований уста-
новлено, что через 7, 14, 21 суток после наложения
на место послеоперационного шва кАОПЧ, замо-
роженной по 2-этапной программе, быстрее
восстанавливалась ткань глаза и формировался
мягкий шов.
Один из наиболее важных показателей струк-
турной целостности ткани АОПЧ после замора-
живания-отогрева – способность удерживать
внутриклеточные вещества. Достаточно распро-
страненным является измерение выхода внутри-
клеточных веществ из ткани, концентрацию
которых принято определять сразу после размора-
живания биообъекта. Однако при таком методи-
ческом подходе остается неясным, как аппликация
кАОПЧ в зоне послеоперационного шва спустя
значительное время после размораживания может
повлиять на ее сохранность. С целью наиболее
объективной оценки структурной целостности
кАОПЧ и моделирования реальных условий ее
нахождения в органе зрения после размораживания
ткань помещали в физиологический раствор, затем
измеряли выход факторов роста клеток BDNF и
TGF1β в надосадок.
ments were carried out by ELISA with StatFax 2400
semiautomatic spectrophotometer (USA) with a
vertical beam in 96-well plates according to the
manufacturers’ instructions.
The data were statistically processed by the Student
test and represented in the Figures as M ± m. The
differences were considered as significant at p < 0.05.
Results and discussion
The findings allowed to establish that to days 7, 14,
and 21 after application of cHPAM, frozen-thawed
by two-step program, to the site of post-surgery suture
the ocular tissue recovered more quickly and a soft
suture formed.
One of the most important indices of HPAM tissue
structure preservation after freeze-thawing could be
the ability to keep the intracellular substances. Quite
common is the measurement of intracellular substances
release from a tissue, which concentration is usually
determined immediately after thawing of biological
object. However we believe such a methodical
approach could not to provide a true information, since
it has remained unclear how cHPAM application in
the post-surgery suture zone could affect its safety in
a considerable time after thawing. In order to more
objectively assess the structural integrity of cHPAM
and to simulate the real conditions of its being in an
eye after thawing the tissue was placed in a physiologi-
cal saline, and afterwards the release of growth factors
BDNF and TGF1β into a supernatant was measured .
After using two-step protocol of HPAM freezing
in 10% DMSO solution the yield of growth factors
within one hour was considerably lower than that with
no cryoprotectant used during freezing. The findings
suggested the higher preservation rate of the cells and
tissues as well as their structural integrity, which were
supported by the data of morphological studies [6].
After one-hour incubation of unfrozen HPAM
tissue (control) in a physiological saline an insignificant
release of BDNF and TGF1β growth factors was
observed, after freezing according to two-step protocol
a moderate yield was found (in average by 20% higher
than the control) and a significant loss of cell contents
was noticed in negative control (freeze-thawing with
no cryoprotectant). Incubation of HMAP in physiolo-
gical saline could simulate the coating of a wound
surface of conjunctiva with the HPAM, i. e. we can
conclude a release of the growth factors during healing
(Fig. 1). Therefore, the effective healing of post-
surgery suture wound will be largely determined by
the durable release of biologically active substances
from the cHPAM into an eye.
After incubation of the HPAM tissue in physiological
solution we determined the remaining amount of BDNF
and TGF1β in the cHPAM tissue, since it was important
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 26, №/issue 2, 2016
149
После использования 2-этапного режима замо-
раживания АОПЧ в 10%-м растворе ДМСО выход
факторов роста в течение часа был существенно
меньше, чем при замораживании без криопро-
тектора. Полученные данные свидетельствуют о
большей сохранности клеток и структурной целост-
ности ткани и подтверждаются данными проведен-
ного морфологического исследования [4].
В незамороженной ткани АОПЧ (контроль)
после инкубации (1 ч) в физиологическом растворе
наблюдался незначительный выход факторов роста
BDNF и TGF1β, после замораживания по 2-этапно-
му режиму – их умеренный выход (в среднем на
20% выше контроля), а в отрицательном контроле
(замораживание без криопротектора) – значитель-
ная потеря клеточного содержимого. Таким обра-
зом, результаты инкубации АОПЧ в физиологичес-
ком растворе, моделирующей пребывание кАОПЧ
на раневой поверхности конъюнктивы, показывают
что в процессе заживления ткань высвобождает
факторы роста (рис. 1). Поэтому эффективность
заживления послеоперационного шва будет в боль-
шой степени определяться наиболее продолжи-
тельным поступлением биологически активных
веществ из кАОПЧ в орган зрения.
После инкубации ткани АОПЧ в физиологичес-
ком растворе мы определяли оставшееся в ткани
кАОПЧ количество BDNF и TGF1β, поскольку
важно было изучить содержание факторов роста
не только в надосадке, но и в самой ткани кАОПЧ
(рис. 2). Показано, что через 9 ч после разморажи-
вания кАОПЧ (замораживание по 2-этапному
режиму) сохраняется 65–75% клеточных ростовых
факторов, в то время как при неоптимальных
условиях замораживания уже через 3 ч после ото-
грева их содержание составило не более 10–15%
от первоначального. Этот эффект объясняется уве-
личением степени разрушения клеток ткани
кАОПЧ после замораживания при погружении в
жидкий азот и, напротив, при 2-этапном режиме
замораживания в 10%-м растворе ДМСО сохра-
няется целостность клеток АОПЧ и миними-
зируется потеря клеточных факторов роста после
размораживания ткани кАОПЧ.
В дальнейшем важно было оценить поступление
и распределение факторов роста в разных тканях
органа зрения при использовании кАОПЧ после
АГО. Для этого в месте операционного вмеша-
тельства мы исследовали ткань роговицы, сет-
чатки, глазного нерва и склеры. В этих тканях в
разные сроки после проведения операции было
измерено содержание факторов роста BDNF и
TGF1β. На рис. 3 показано, что в ткань роговицы
на 1-е и 3-и сутки из кАОПЧ, по сравнению с неза-
мороженной, более интенсивно поступают факторы
0
200
400
600
800
1000
1200
1400
1600
0 1 3 6 9
0
50
100
150
200
250
300
350
400
0 1 3 6 9
Время инкубации, ч
Incubation term, hrs
Рис. 1. Содержание факторов роста BDNF (А) и TGF1β
(B) в физиологическом растворе после их выхода из
криоконсервированной АОПЧ, подвергнутой гипотер-
мическому хранению после размораживания: –
контроль; – замораживание без криопротектора;
– замораживание в 10% ДМСО.
Fig. 1. Content in the physiological saline of BDNF (A) and
TGF1β (B) growth factors released from HPAM stored
hypothermically after thawing: – control; – freeze-
thawing without cryoprotectant; – freeze-thawing with
10% DMSO.
Время инкубации, ч
Incubation term, hrs
to examine the content of growth factors not only in
the supernatant, but in the cHPAM tissue itself (Fig. 2).
It has been shown that 9 hrs later thawing the cHPAM
(frozen-thawed according to two-step protocol) has
retained 65–75% cell growth factors, while under non-
optimal conditions of freezing their content was not
more than 10–15% of the initial one already 3 hrs later
thawing. This effect could be associated with the
increased cell destruction in cHPAM tissue after
A
B
С
од
ер
жа
ни
е
BD
N
F
пг
/м
л
BD
N
F
co
nt
en
t,
p
g/
m
l
С
од
ер
жа
ни
е
TN
F1
β,
п
г/м
л
TN
F1
β
co
nt
en
t,
p
g/
m
l
150 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 26, №/issue 2, 2016
роста, что, возможно, связано с выходом из части
поврежденных клеток кАОПЧ внутриклеточного
содержимого. По сравнению с контролем этот
показатель был больше на 60%. В эти же сроки
(например, в первые сутки) поступление фактора
роста BDNF в ткань сетчатки и глазного нерва
превышало данный показатель незамороженной
АОПЧ на 100%. Такая же тенденция сохранялась
в отношении глазного нерва, в котором на 7-е сутки
содержание фактора роста BDNF было на 30%
выше, чем в незамороженной АОПЧ. Следует
отметить, что выход нейротрофина BDNF в ткань
сетчатки и роговицы сравним с поступлением из
незамороженной АОПЧ. Для склеры отмечалось
недостаточное поступление BDNF, как можно
предположить, из поврежденных клеток ткани
кАОПЧ как на начальных сроках, так и после 7,
14, 21 суток наблюдения.
Установлено, что основное количество фактора
роста клеток TGF1β накапливается в ткани рого-
вицы в первые сутки аппликации кАОПЧ (рис. 4),
незначительное – в глазном нерве, сетчатке и
склере. При этом действие незамороженной и
криоконсервированной АОПЧ было сходным [9,
12]. На поздних сроках наблюдения содержание
TGF1β, превышающее контрольное, отмечалось
только в роговице, значимых различий в ткани
сетчатки, глазном нерве и склере при использо-
вании кАОПЧ по сравнению с незамороженной
АОПЧ выявлено не было. Однако в ткани склеры
наблюдалась тенденция к снижению содержания
TGF1β.
0
500
1000
1500
2000
2500
3000
0 1 3 6 9
0
200
400
600
800
1000
0 1 3 6 9
Рис. 2. Содержание факторов роста BDNF (А) и TGF1β (B) в ткани АОПЧ после криоконсервирования и
гипотермического хранения: – контроль; – замораживание без криопротектора; – замораживание в 10%
ДМСО.
Fig. 2. Content of BDNF (A) and TGF1β (B) growth factors in the HPAM tissue following cryopreservation and hypothermic
storage: – control; – freeze-thawing without cryoprotectant; – freeze-thawing with 10% DMSO.
С
од
ер
жа
ни
е
BD
N
F
пг
/м
л
BD
N
F
co
nt
en
t,
p
g/
m
l
С
од
ер
жа
ни
е
TN
F1
β,
п
г/м
л
TN
F1
β
co
nt
en
t,
p
g/
m
l
Время инкубации, ч
Incubation term, hrs
Время инкубации, ч
Incubation term, hrs
freezing by immersion into liquid nitrogen unlike the
two-step protocol of freezing in 10% DMSO solution,
when the integrity of HPAM cells was preserved and
the loss of cell growth factors was minimal after
thawing of cHPAM tissue.
Afterwards it was of an importance to assess the
delivery and distribution of growth factors in different
ocular tissues when using cHPAM after the AGS. To
do this we investigated the tissues of cornea, retina,
optic nerve and sclera in the site of surgery. At
different post surgery terms we measured the content
of growth factors BDNF and TGF1β in these tissues.
Fig. 3 shows that there was more intense release of
growth factors from the cHPAM into the corneal tissue
to days 1 and 3 if compared with unfrozen one, that
might be associated with releasing of intracellular
content from some damaged cells of the frozen
HPAM. The index was higher than 60% if compared
to the control. At the same time period (e.g. during
the first 24 hrs) the entering of BDNF growth factor
into retina and optic nerve tissue exceeded by 100%
this index for an unfrozen HPAM. The same tendency
was found in the optic nerve, wherein to day 7 the
growth factor BDNF content was 30% higher than in
unfrozen HPAM. It should be noted that the release
of BDNF neurotrophin into retinal and corneal tissues
was similar to the one in unfrozen HPAM. For sclera
there was found a poor BDNF release from the
cHPAM tissue both at initial terms and after days 7,
14, 21 of observation period.
Major amount of the cell growth factor TGF1β has
been found to be accumulated in the corneal tissue
A B
0
200
400
600
800
1000
1 3 7 14 21
0
200
400
600
800
1000
1 3 7 14 21
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 26, №/issue 2, 2016
151
Следует отметить, что через 7 суток содер-
жание BDNF и TGF1β в роговице после апплика-
ции как нативной, так и кАОПЧ было практически
одинаковым, что по-видимому, связано с высво-
бождением факторов роста не из поврежденных
замораживанием, а из целых клеток, которые в
нативной и криоконсервированной АОПЧ присут-
ствуют в значительном количестве.
Аналогичная закономерность наблюдается при
исследовании тканевой тропности поступления
фактора роста клеток BDNF в сетчатку и глазной
нерв. С 1-х по 3-и сутки аппликации кАОПЧ в зоне
операционного дефекта содержание нейротрофина
BDNF увеличивалось как в сетчатке, так и глазном
нерве, поскольку эти ткани обогащены нервными
клетками. Наибольшее содержание TGF1β в этот
срок отмечалось в роговичной ткани. Характерно,
0
200
400
600
800
1000
1 3 7 14 21
С
од
ер
жа
ни
е
BD
N
F
пг
/м
л
BD
N
F
co
nt
en
t,
p
g/
m
l
Период наблюдения, сут
Observation period, day
Ткань роговицы
Corneal tissue
С
од
ер
жа
ни
е
BD
N
F
пг
/м
л
BD
N
F
co
nt
en
t,
p
g/
m
l
Период наблюдения, сут
Observation period, day
Ткань сетчатки
Retinal tissue
С
од
ер
жа
ни
е
BD
N
F
пг
/м
л
BD
N
F
co
nt
en
t,
p
g/
m
l
Период наблюдения, сут
Observation period, day
Ткань глазного нерва
Optic nerve tissue
С
од
ер
жа
ни
е
BD
N
F
пг
/м
л
BD
N
F
co
nt
en
t,
p
g/
m
l
Период наблюдения, сут
Observation period, day
Ткань склеры
Scleral tissue
0
200
400
600
800
1000
1 3 7 14 21
Рис. 3. Содержание ростового фактора BDNF в различных тканях органа зрения после применения АОПЧ в
разные сроки после АГО: – контроль; – замораживание-отогрев в 10% ДМСО.
Fig. 3. Content of BDNF growth factor in various tissues of eye in different terms after applying the HPAM during
antiglaucomatous surgery: – control; – freeze-thawing in 10% DMSO.
within the first 24 hrs of cHPAM application (Fig. 4),
an insignificant content was found in the ophthalmic
nerve, retina and sclera. Herewith the action of
cryopreserved and unfrozen HPAM was similar [3,
11]. At late observation terms the TGF1β content,
exceeding the control, was observed only in cornea,
and no statistically significant differences were found
in retinal tissue, ophthalmic nerve and sclera after using
cHPAM if compared with unfrozen HPAM. However,
there was a tendency to decrease the TGF1β content
in sclera tissue.
It should be noted that in 7 days the BDNF and
TGF1β content in cornea after the application of both
native and cHPAM was virtually the same, which was
likely due to the release of growth factors from the
cells not damaged by freezing, which amount was large
both in native and cryopreserved HPAM.
0
50
100
150
200
250
300
1 3 7 14 21
152 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 26, №/issue 2, 2016
С
од
ер
жа
ни
е
TN
F1
β,
п
г/м
л
TN
F1
β
co
nt
en
t,
p
g/
m
l
Период наблюдения, сут
Observation period, day
Ткань роговицы
Corneal tissue
С
од
ер
жа
ни
е
TN
F1
β,
п
г/м
л
TN
F1
β
co
nt
en
t,
p
g/
m
l
Период наблюдения, сут
Observation period, day
Ткань сетчатки
Retinal tissue
С
од
ер
жа
ни
е
TN
F1
β,
п
г/м
л
TN
F1
β
co
nt
en
t,
p
g/
m
l
Период наблюдения, сут
Observation period, day
Ткань глазного нерва
Optic nerve tissue
С
од
ер
жа
ни
е
TN
F1
β,
п
г/м
л
TN
F1
β
co
nt
en
t,
p
g/
m
l
Период наблюдения, сут
Observation period, day
Ткань склеры
Scleral tissue
0
50
100
150
200
250
300
1 3 7 14 21
0
50
100
150
200
250
300
1 3 7 14 21
0
50
100
150
200
250
300
1 3 7 14 21
Рис. 4. Содержание ростового фактора TGF1β в различных тканях органа зрения после применения АОПЧ в
разные сроки после АГО: – контроль; – замораживание-отогрев в 10% ДМСО.
Fig. 4. Content of TGF1β growth factor in various tissues of eye in different terms after applying the HPAM during
antiglaucomatous surgery: – control; – freeze-thawing in 10% DMSO.
A similar regularity was observed in the study of
the tissue tropism associated with the entering of BDNF
growth factor into retina and ophthalmic nerve. From
the day 1 to day 3 following cHPAM application in
the zone of surgery defect the BDNF neurotrophin
content was increased in retina and in optic nerve, since
these tissues were enriched with nerve cells. The
highest content of TGF1β in this term was noted in
corneal tissue. Interestingly, that the largest amount
of neuroprotective growth factor BDNF was revealed
in retina and optic nerve, which was higher than in
cornea (in average by 100%) and if compared to
unfrozen HPAM. Within the period from day 7 to 21
of observation the delivery of growth factors into retina
and optic nerve was stabilized and approached to the
control, which was in consistence with our previous
data [6]. Morphological analysis enabled to establish
что в сетчатке и глазном нерве выявлено наиболь-
шее количество нейропротекторного фактора роста
BDNF, которое выше, чем в роговице (в среднем
на 100%), по сравнению с незамороженной АОПЧ.
В срок от 7-и до 21-х суток поступление факторов
роста в сетчатку и глазной нерв стабилизируется
и выравнивается по сравнению с контролем, что
совпадает с ранее полученными данными [4].
В результате морфологического анализа было
установлено, что при формировании глаукомы в
первую очередь гибели и атрофии подвергались
мелкие и средние ганглиозные клетки сетчатой
оболочки. Количество крупных клеток статисти-
чески значимо уменьшалось, но их процентное
содержание по отношению к общему количеству
клеток увеличивалось [4, 8]. Поэтому наибольшее
количество биологически активных веществ, как
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 26, №/issue 2, 2016
153
Литература
1. Золотарев А.В., Милюдин Е.С. Хирургическое лечение
рецидивирующего птеригиума с пластикой силико-
высушенной амниотической мембраной // Вестник оф-
тальмологии. – 2007. – Т. 123, №1. – С. 39–42.
2. Кривошеина О.П. Пролиферативная витреоретинопатия:
факторы патогенеза и закономерности развития //
Вестник офтальмологии. – 2003. – №3. – С. 47–50.
3. Липовецкая Е.М. Развитие экспериментальной глаукомы
при длительном внутривенном введении адреналина //
Офтальмолог. журнал. – 1966. – №3.– С. 221–223.
4. Малова Н.Г., Демин Ю.А., Казмирук И.Л. Интрасклераль-
но-супроцилиарная имплантация криоконсервированного
амниона с нейропротекторной целью при эксперимен-
тальной адреналин-индуцированной глаукоме // Мир
медицины и биологии. – 2013. – Т. 9, №1–4. – С. 71–75.
5. Михейцева И.Н. Модели глаукомы, преимущества и
недостатки. Адреналин-индуцированная глаукома как
адекватная модель глаукомного процесса человека //
Офтальмолог. журнал. – 2011. – №3. – С. 89–92.
6. Плацента: криоконсервирование, структура, свойства и
перспективы клинического применения / Под ред. В.И. Гри-
щенко, Т.Н. Юрченко. – Харьков, 2011. – 292 с.
7. Прокопюк В.Ю., Прокопюк О.С. Оценка сохранности
эксплантов плаценты, пуповины и плодных оболочек
после криоконсервирования // Клітинна та органна
трансплантологія. – 2015. – Т. 3, №1. – С. 29–33.
8. Самусенко И.А., Алексеев В.Н., Абузайед В.Н. Морфологи-
ческие проявления лечебного патоморфоза глаукоматоз-
ной оптической нейропатии при экспериментальной
глаукоме // Глаукома. – 2003. – №4. – С. 21–32.
References
1. Grischenko V.I., Yurchenko T.N., editors. Placenta: cryopre-
servation, structure, properties and perspectives of clinical
applications. Kharkov; 2011.
2. Krivosheina O.P. Proliferative vitreoretinopathy: factors of
pathogenesis and development regularit ies. Vestnik
Ofthalmologii 2003; (3): 47–50.
3. Limb G.A., Chignell A.H., Green W. et al. Distribution of TGF and
its reactive vascular adhesion molecules in fibrovascular
membranes of proliferative diabetic retinopathy. Br J
Ophthalmol 1996; 80(2): 168–173.
4. Limb G.A., Little B.C., Meager A. et al. Cytokines in proliferative
vitreoretinopathy Eye 1991; 5(6): 686–693.
5. Lipovetskaya E.M. Development of experimental glaucoma with
prolonged intravenous administration of adrenaline. Journal
of Ophthalmology (Ukraine) 1966; (3): 221–223.
6. Malova N.G., Demin Yu.A, Kazmiruk I.L. Intrascleral supracilliar
implantation of cryopreserved amnion with neuroprotective
aim in experimental adrenaline induced glaucoma. Mir
Meditsyny i Biologii 2013; 9(4): 71–75.
7. Mikheytseva I.H. Glaucoma models, advantages and
disadvantages. Adrenaline-induced glaucoma as an adequate
model of human glaucoma process. Journal of Ophthalmology
(Ukraine) 2011; (3): 89–92.
8. Mori K., Duh E., Gehlbach P. et al. Pigment epithelium-derived
factor inhibits retinal and choroidal neovascularization J Cell
Physiol 2002; 188(2): 253–263.
9. Prokopyuk V.Yu., Prokopyuk O.S. Evaluation of the safety of
placental explants, umbilical cord and membranes after
cryopreservation cryopreservation. Klitynna ta Organna
Transplantologіya 2015; 3(1): 29–33.
мы предполагаем, поступает в наиболее повреж-
денные в результате глаукомы клетки. Возможно
существует качественная и количественная зави-
симость накопления факторов роста клеток, опре-
деляемая видом ткани глаза и тропностью фактора
роста. Поскольку именно в тканях глаза, повреж-
денных глаукомой, по-видимому, имеются дефект-
ные рецепторные и ганглиозные нервные клетки, в
которые из кАОПЧ в значимых количествах
поступает обладающий выраженным нейропротек-
торным действием фактор роста BDNF [11].
Выводы
Таким образом, в зоне проведения антиглауко-
матозной операции после аппликации кАОПЧ,
замороженной по 2-этапной программе в растворе
10%-го ДМСО, установлено увеличение содержа-
ния факторов роста BDNF и TGF1β в тканях глаза
(до 7-ми суток) и их стабильный уровень на про-
тяжении всего послеоперационного срока наблю-
дения (до 21-х суток). При использовании эффек-
тивного режима замораживания АОПЧ в месте
послеоперационного дефекта обеспечивается
более длительное высвобождение факторов роста
BDNF и TGF1β в органе зрения.
that experimental glaucoma was accompanied
primarily with the death and atrophy of small and
medium sized ganglion cells of retina. Number of large
cells was significantly decreased, but their proportion
in the total number of cells increased [6, 10]. Therefore
we believe the largest amount of biologically active
substances to enter the cells mostly damaged by
glaucoma. There is likely a qualitative and quantitative
dependence of cell growth factors accumulation,
determined by the type of an ocular tissue and growth
factor tropism. Since the very in the damaged by
glaucoma ocular tissues there are likely defective
receptor and ganglion nerve cells, whereto from
cHPAM in considerable amounts the BDNF having a
pronounced neuroprotective effect is released [8].
Conclusions
Thus, application of HPAM, frozen-thawed
according to the two-step program in 10% DMSO
solution in the AGS zone resulted in an increased
content of BDNF and TGF1β growth factors in ocular
tissues (up to 7 days’ observation term) and stable
level over the postoperative observation period (up to
21 days observation term). An effective freeze-
thawing regimen for HPAM provided a sustained
release of BDNF and TGF1β growth factors in an
eye from the site of post-surgery defect.
154 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 26, №/issue 2, 2016
9. Limb G.A., Chignell A.H., Green W. et al. Distribution of TGF and
its reactive vascular adhesion molecules in fibrovascular
membranes of proliferative diabetic retinopathy // Br. J.
Ophthalmol. – 1996. – Vol. 80, №2. – P. 168–173.
10. Limb G.A., Little B.C., Meager A. et al. Cytokines in proliferative
vitreoretinopathy // Eye. – 1991. – Vol. 5, №6. – P. 686–693.
11. Mori K., Duh E., Gehlbach P. et al. Pigment epithelium–derived
factor inhibits retinal and choroidal neovascularization // J. Cell.
Physiol. – 2002. – Vol. 188, №2. – P. 253–263.
12. Yam H.F., Pang C.P., Fan D.S. et al. Growth factor changes in
ex vivo expansion of human limbal epithelial cells on human
amniotic membrane // Cornea. – 2002. – Vol. 21, №1. – Р. 101–
105.
10. Samusenko I.A., Alekseev V.N., Abuzayed V.N. Morphological
manifestations of therapeutic pathomorphism of glaucomatous
optic neuropathy in experimental glaucoma. Glaukoma 2003;
4(21): 32.
11. Yam H.F., Pang C.P., Fan D.S. et al. Growth factor changes in
ex vivo expansion of human limbal epithelial cells on human
amniotic membrane Cornea 2002; 21(1): 101–105.
12. Zolotarev A.V., Milyudin E.S. Surgical treatment of recurrent
pterygium with plastics by silico-dried amniotic membrane.
Vestnik Oftalmologii 2007; 123(1): 39–42.
|