Коррекция популяций ценобионтов Bifidobacterium spp. и Lactobacillus spp. у мышей с экспериментальным дисбиозом кишечника после терапии иммобилизованными на энтеросорбентах пробиотиками, хранившимися при –80 и –196°С
В работе было изучено восстановление в муцине мышей с экспериментальным дисбиозом кишечника популяций ценобионтов Bifidobacterium spp. и Lactobacillus spp. после терапии свободными и иммобилизованными на энтеросорбентах пробиотиками, хранившимися в течение года при температуре –80, –196°C. Экспери...
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Проблемы криобиологии и криомедицины |
|---|---|
| Дата: | 2015 |
| Автори: | , , , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Russian |
| Опубліковано: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2015
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/137427 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Коррекция популяций ценобионтов Bifidobacterium spp. и Lactobacillus spp. у мышей с экспериментальным дисбиозом кишечника после терапии иммобилизованными на энтеросорбентах пробиотиками, хранившимися при –80 и –196°С / И.П. Высеканцев, О.М. Бабинец, В.Ф. Марценюк, Л.Е. Шатилова, А.В. Щеглов, Ю.В. Войда // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2015. — Т. 25, № 3. — С. 267–286. — Бібліогр.: 32 назв. — рос. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-137427 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Высеканцев, И.П. Бабинец, О.М. Марценюк, В.Ф. Шатилова, Л.Е. Щеглов, А.В. Войда, Ю.В. 2018-06-17T11:12:51Z 2018-06-17T11:12:51Z 2015 Коррекция популяций ценобионтов Bifidobacterium spp. и Lactobacillus spp. у мышей с экспериментальным дисбиозом кишечника после терапии иммобилизованными на энтеросорбентах пробиотиками, хранившимися при –80 и –196°С / И.П. Высеканцев, О.М. Бабинец, В.Ф. Марценюк, Л.Е. Шатилова, А.В. Щеглов, Ю.В. Войда // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2015. — Т. 25, № 3. — С. 267–286. — Бібліогр.: 32 назв. — рос. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/137427 615.832.9:61.084:616.34:579.61 В работе было изучено восстановление в муцине мышей с экспериментальным дисбиозом кишечника популяций ценобионтов Bifidobacterium spp. и Lactobacillus spp. после терапии свободными и иммобилизованными на энтеросорбентах пробиотиками, хранившимися в течение года при температуре –80, –196°C. Экспериментальный дисбиоз кишечника вызывали пероральным введением ампициллина и метронидазола. После индукции дисбиоза мышам проводили терапию свободными клетками пробиотиков S. boulardii, B. bifidum, L.bulgaricus, смесями свободных клеток с энтеросорбентами и комплексами клеток пробиотиков, иммобилизованных на энтеросорбентах. Использовали энтеросорбенты на основе активированного угля «Сорбекс» и «СУМС-1». Установлено, что иммобилизованные пробиотики обеспечивают более быстрое и полное восстановление популяций ценобионтов. Низкотемпературное хранение в течение года (срок наблюдения) и температурный режим хранения не влияют на терапевтические свойства свободных и иммобилизованных клеток пробиотиков. Обсуждаются механизмы действия иммобилизованных пробиотиков. У роботі було вивчено відновлення в муцині мишей із експериментальним дисбіозом кишечника популяцій ценобіонтів Bifidobacterium spp. і Lactobacillus spp. після терапії вільними та іммобілізованими на ентеросорбентах пробіотиками, які зберігали протягом року за температури –80, –196°C. Експериментальний дисбіоз кишечника формували пероральним введенням ампіциліну та метронідазолу. Після індукції дисбіозу мишам проводили терапію вільними клітинами пробіотиків S. boulardii, B. bifidum, L.bulgaricus, сумішами вільних клітин із ентеросорбентами та комплексами клітин пробіотиків, іммобілізованих на ентеросорбентах. Використовували ентеросорбенти на основі активованого вугілля «Сорбекс» і «СУМС-1». Встановлено, що іммобілізовані пробіотики забезпечують швидше і повніше відновлення популяцій ценобіонтів. Низькотемпературне зберігання протягом року (термін спостереження) та температурний режим зберігання не впливають на терапевтичні властивості вільних та іммобілізованих клітин пробіотиків. Обговорюються механізми дії іммобілізованих пробіотиків. The research revealed the recovery of the Bifidobacterium spp. and Lactobacillus spp. cenobiont populations in mucin of mice with experimental intestinal dysbiosis after treatment with free and immobilized on enterosorbents probiotics, stored for a year at a temperature of –80, –196°C. Experimental intestinal dysbiosis was simulated by Ampicillin and Metronidazole oral administration. Mice with induced dysbiosis were treated with free cells of S. boulardii, B. bifidum, L. bulgaricus probiotics, the mixtures of free cells with enterosorbents as well as the complexes of probiotic cells immobilized on enterosorbents. The enterosorbents based on activated carbon Sorbex and SCMS-1 were used. Immobilized probiotics have been found to provide a more rapid and complete recovery of cenobiont populations. Low-temperature storage for a year (observation period) and temperature storage regimen did not affect the therapeutic properties of free and immobilized cells of probiotics. The mechanisms of action of immobilized probiotics are under discussion. ru Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии и криомедицины Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Коррекция популяций ценобионтов Bifidobacterium spp. и Lactobacillus spp. у мышей с экспериментальным дисбиозом кишечника после терапии иммобилизованными на энтеросорбентах пробиотиками, хранившимися при –80 и –196°С Correction of Bifidobacterium spp. and Lactobacillus spp. populations in mice with experimental intestinal dysbiosis after therapy with enterosorbent-immobilized probiotics stored at –80 and –196°C Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Коррекция популяций ценобионтов Bifidobacterium spp. и Lactobacillus spp. у мышей с экспериментальным дисбиозом кишечника после терапии иммобилизованными на энтеросорбентах пробиотиками, хранившимися при –80 и –196°С |
| spellingShingle |
Коррекция популяций ценобионтов Bifidobacterium spp. и Lactobacillus spp. у мышей с экспериментальным дисбиозом кишечника после терапии иммобилизованными на энтеросорбентах пробиотиками, хранившимися при –80 и –196°С Высеканцев, И.П. Бабинец, О.М. Марценюк, В.Ф. Шатилова, Л.Е. Щеглов, А.В. Войда, Ю.В. Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология |
| title_short |
Коррекция популяций ценобионтов Bifidobacterium spp. и Lactobacillus spp. у мышей с экспериментальным дисбиозом кишечника после терапии иммобилизованными на энтеросорбентах пробиотиками, хранившимися при –80 и –196°С |
| title_full |
Коррекция популяций ценобионтов Bifidobacterium spp. и Lactobacillus spp. у мышей с экспериментальным дисбиозом кишечника после терапии иммобилизованными на энтеросорбентах пробиотиками, хранившимися при –80 и –196°С |
| title_fullStr |
Коррекция популяций ценобионтов Bifidobacterium spp. и Lactobacillus spp. у мышей с экспериментальным дисбиозом кишечника после терапии иммобилизованными на энтеросорбентах пробиотиками, хранившимися при –80 и –196°С |
| title_full_unstemmed |
Коррекция популяций ценобионтов Bifidobacterium spp. и Lactobacillus spp. у мышей с экспериментальным дисбиозом кишечника после терапии иммобилизованными на энтеросорбентах пробиотиками, хранившимися при –80 и –196°С |
| title_sort |
коррекция популяций ценобионтов bifidobacterium spp. и lactobacillus spp. у мышей с экспериментальным дисбиозом кишечника после терапии иммобилизованными на энтеросорбентах пробиотиками, хранившимися при –80 и –196°с |
| author |
Высеканцев, И.П. Бабинец, О.М. Марценюк, В.Ф. Шатилова, Л.Е. Щеглов, А.В. Войда, Ю.В. |
| author_facet |
Высеканцев, И.П. Бабинец, О.М. Марценюк, В.Ф. Шатилова, Л.Е. Щеглов, А.В. Войда, Ю.В. |
| topic |
Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология |
| topic_facet |
Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология |
| publishDate |
2015 |
| language |
Russian |
| container_title |
Проблемы криобиологии и криомедицины |
| publisher |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Correction of Bifidobacterium spp. and Lactobacillus spp. populations in mice with experimental intestinal dysbiosis after therapy with enterosorbent-immobilized probiotics stored at –80 and –196°C |
| description |
В работе было изучено восстановление в муцине мышей с экспериментальным дисбиозом кишечника
популяций ценобионтов Bifidobacterium spp. и Lactobacillus spp. после терапии свободными и иммобилизованными на
энтеросорбентах пробиотиками, хранившимися в течение года при температуре –80, –196°C. Экспериментальный дисбиоз
кишечника вызывали пероральным введением ампициллина и метронидазола. После индукции дисбиоза мышам проводили
терапию свободными клетками пробиотиков S. boulardii, B. bifidum, L.bulgaricus, смесями свободных клеток с энтеросорбентами
и комплексами клеток пробиотиков, иммобилизованных на энтеросорбентах. Использовали энтеросорбенты
на основе активированного угля «Сорбекс» и «СУМС-1». Установлено, что иммобилизованные пробиотики обеспечивают
более быстрое и полное восстановление популяций ценобионтов. Низкотемпературное хранение в течение года (срок наблюдения)
и температурный режим хранения не влияют на терапевтические свойства свободных и иммобилизованных
клеток пробиотиков. Обсуждаются механизмы действия иммобилизованных пробиотиков.
У роботі було вивчено відновлення в муцині мишей із експериментальним дисбіозом кишечника популяцій ценобіонтів
Bifidobacterium spp. і Lactobacillus spp. після терапії вільними та іммобілізованими на ентеросорбентах пробіотиками,
які зберігали протягом року за температури –80, –196°C. Експериментальний дисбіоз кишечника формували пероральним
введенням ампіциліну та метронідазолу. Після індукції дисбіозу мишам проводили терапію вільними клітинами пробіотиків
S. boulardii, B. bifidum, L.bulgaricus, сумішами вільних клітин із ентеросорбентами та комплексами клітин пробіотиків, іммобілізованих
на ентеросорбентах. Використовували ентеросорбенти на основі активованого вугілля «Сорбекс» і «СУМС-1».
Встановлено, що іммобілізовані пробіотики забезпечують швидше і повніше відновлення популяцій ценобіонтів. Низькотемпературне
зберігання протягом року (термін спостереження) та температурний режим зберігання не впливають на терапевтичні
властивості вільних та іммобілізованих клітин пробіотиків. Обговорюються механізми дії іммобілізованих пробіотиків.
The research revealed the recovery of the Bifidobacterium spp. and Lactobacillus spp. cenobiont populations in
mucin of mice with experimental intestinal dysbiosis after treatment with free and immobilized on enterosorbents probiotics, stored for
a year at a temperature of –80, –196°C. Experimental intestinal dysbiosis was simulated by Ampicillin and Metronidazole oral
administration. Mice with induced dysbiosis were treated with free cells of S. boulardii, B. bifidum, L. bulgaricus probiotics, the
mixtures of free cells with enterosorbents as well as the complexes of probiotic cells immobilized on enterosorbents. The enterosorbents
based on activated carbon Sorbex and SCMS-1 were used. Immobilized probiotics have been found to provide a more rapid and
complete recovery of cenobiont populations. Low-temperature storage for a year (observation period) and temperature storage
regimen did not affect the therapeutic properties of free and immobilized cells of probiotics. The mechanisms of action of immobilized
probiotics are under discussion.
|
| issn |
0233-7673 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/137427 |
| citation_txt |
Коррекция популяций ценобионтов Bifidobacterium spp. и Lactobacillus spp. у мышей с экспериментальным дисбиозом кишечника после терапии иммобилизованными на энтеросорбентах пробиотиками, хранившимися при –80 и –196°С / И.П. Высеканцев, О.М. Бабинец, В.Ф. Марценюк, Л.Е. Шатилова, А.В. Щеглов, Ю.В. Войда // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2015. — Т. 25, № 3. — С. 267–286. — Бібліогр.: 32 назв. — рос. |
| work_keys_str_mv |
AT vysekancevip korrekciâpopulâciicenobiontovbifidobacteriumsppilactobacillussppumyšeiséksperimentalʹnymdisbiozomkišečnikaposleterapiiimmobilizovannyminaénterosorbentahprobiotikamihranivšimisâpri80i196s AT babinecom korrekciâpopulâciicenobiontovbifidobacteriumsppilactobacillussppumyšeiséksperimentalʹnymdisbiozomkišečnikaposleterapiiimmobilizovannyminaénterosorbentahprobiotikamihranivšimisâpri80i196s AT marcenûkvf korrekciâpopulâciicenobiontovbifidobacteriumsppilactobacillussppumyšeiséksperimentalʹnymdisbiozomkišečnikaposleterapiiimmobilizovannyminaénterosorbentahprobiotikamihranivšimisâpri80i196s AT šatilovale korrekciâpopulâciicenobiontovbifidobacteriumsppilactobacillussppumyšeiséksperimentalʹnymdisbiozomkišečnikaposleterapiiimmobilizovannyminaénterosorbentahprobiotikamihranivšimisâpri80i196s AT ŝeglovav korrekciâpopulâciicenobiontovbifidobacteriumsppilactobacillussppumyšeiséksperimentalʹnymdisbiozomkišečnikaposleterapiiimmobilizovannyminaénterosorbentahprobiotikamihranivšimisâpri80i196s AT voidaûv korrekciâpopulâciicenobiontovbifidobacteriumsppilactobacillussppumyšeiséksperimentalʹnymdisbiozomkišečnikaposleterapiiimmobilizovannyminaénterosorbentahprobiotikamihranivšimisâpri80i196s AT vysekancevip correctionofbifidobacteriumsppandlactobacillusspppopulationsinmicewithexperimentalintestinaldysbiosisaftertherapywithenterosorbentimmobilizedprobioticsstoredat80and196c AT babinecom correctionofbifidobacteriumsppandlactobacillusspppopulationsinmicewithexperimentalintestinaldysbiosisaftertherapywithenterosorbentimmobilizedprobioticsstoredat80and196c AT marcenûkvf correctionofbifidobacteriumsppandlactobacillusspppopulationsinmicewithexperimentalintestinaldysbiosisaftertherapywithenterosorbentimmobilizedprobioticsstoredat80and196c AT šatilovale correctionofbifidobacteriumsppandlactobacillusspppopulationsinmicewithexperimentalintestinaldysbiosisaftertherapywithenterosorbentimmobilizedprobioticsstoredat80and196c AT ŝeglovav correctionofbifidobacteriumsppandlactobacillusspppopulationsinmicewithexperimentalintestinaldysbiosisaftertherapywithenterosorbentimmobilizedprobioticsstoredat80and196c AT voidaûv correctionofbifidobacteriumsppandlactobacillusspppopulationsinmicewithexperimentalintestinaldysbiosisaftertherapywithenterosorbentimmobilizedprobioticsstoredat80and196c |
| first_indexed |
2025-11-26T01:42:54Z |
| last_indexed |
2025-11-26T01:42:54Z |
| _version_ |
1850605499960000512 |
| fulltext |
УДК 615.832.9:61.084:616.34:579.61
И.П. Высеканцев1, О.М. Бабинец1, В.Ф. Марценюк1*,
Л.Е. Шатилова1, А.В. Щеглов1, Ю.В. Войда2
Коррекция популяций ценобионтов Bifidobacterium spp.
и Lactobacillus spp. у мышей с экспериментальным дисбиозом
кишечника после терапии иммобилизованными
на энтеросорбентах пробиотиками,
хранившимися при –80 и –196°С
UDC 615.832.9:61.084:616.34:579.61
I.P. Vysekantsev1, O.M. Babinets1, V.F. Martsenyuk1*,
L.Ye. Shatilova1, A.V. Scheglov1, Yu.V. Voyda2
Correction of Bifidobacterium spp. and Lactobacillus spp. Populations
in Mice with Experimental Intestinal Dysbiosis after Therapy with
Enterosorbent-Immobilized Probiotics Stored at –80 and –196°C
Реферат: В работе было изучено восстановление в муцине мышей с экспериментальным дисбиозом кишечника
популяций ценобионтов Bifidobacterium spp. и Lactobacillus spp. после терапии свободными и иммобилизованными на
энтеросорбентах пробиотиками, хранившимися в течение года при температуре –80, –196°C. Экспериментальный дисбиоз
кишечника вызывали пероральным введением ампициллина и метронидазола. После индукции дисбиоза мышам проводили
терапию свободными клетками пробиотиков S. boulardii, B. bifidum, L.bulgaricus, смесями свободных клеток с энтеро-
сорбентами и комплексами клеток пробиотиков, иммобилизованных на энтеросорбентах. Использовали энтеросорбенты
на основе активированного угля «Сорбекс» и «СУМС-1». Установлено, что иммобилизованные пробиотики обеспечивают
более быстрое и полное восстановление популяций ценобионтов. Низкотемпературное хранение в течение года (срок на-
блюдения) и температурный режим хранения не влияют на терапевтические свойства свободных и иммобилизованных
клеток пробиотиков. Обсуждаются механизмы действия иммобилизованных пробиотиков.
Ключевые слова: низкотемпературное хранение, иммобилизованные пробиотики, энтеросорбенты, дисбиоз кишечника,
ценобионты, сорбенты, мыши.
Реферат: У роботі було вивчено відновлення в муцині мишей із експериментальним дисбіозом кишечника популяцій це-
нобіонтів Bifidobacterium spp. і Lactobacillus spp. після терапії вільними та іммобілізованими на ентеросорбентах пробіоти-
ками, які зберігали протягом року за температури –80, –196°C. Експериментальний дисбіоз кишечника формували пероральним
введенням ампіциліну та метронідазолу. Після індукції дисбіозу мишам проводили терапію вільними клітинами пробіотиків
S. boulardii, B. bifidum, L.bulgaricus, сумішами вільних клітин із ентеросорбентами та комплексами клітин пробіотиків, іммо-
білізованих на ентеросорбентах. Використовували ентеросорбенти на основі активованого вугілля «Сорбекс» і «СУМС-1».
Встановлено, що іммобілізовані пробіотики забезпечують швидше і повніше відновлення популяцій ценобіонтів. Низькотем-
пературне зберігання протягом року (термін спостереження) та температурний режим зберігання не впливають на терапев-
тичні властивості вільних та іммобілізованих клітин пробіотиків. Обговорюються механізми дії іммобілізованих пробіотиків.
Ключові слова: низькотемпературне зберігання, іммобілізовані пробіотики, ентерособенти, дисбіоз кишечника, ценобіонти,
сорбенти, миші.
Abstract: The research revealed the recovery of the Bifidobacterium spp. and Lactobacillus spp. cenobiont populations in
mucin of mice with experimental intestinal dysbiosis after treatment with free and immobilized on enterosorbents probiotics, stored for
a year at a temperature of –80, –196°C. Experimental intestinal dysbiosis was simulated by Ampicillin and Metronidazole oral
administration. Mice with induced dysbiosis were treated with free cells of S. boulardii, B. bifidum, L. bulgaricus probiotics, the
mixtures of free cells with enterosorbents as well as the complexes of probiotic cells immobilized on enterosorbents. The enterosorbents
based on activated carbon Sorbex and SCMS-1 were used. Immobilized probiotics have been found to provide a more rapid and
complete recovery of cenobiont populations. Low-temperature storage for a year (observation period) and temperature storage
regimen did not affect the therapeutic properties of free and immobilized cells of probiotics. The mechanisms of action of immobilized
probiotics are under discussion.
Key words: low-temperature storage, immobilized probiotics, intestinal dysbiosis, cenobionts, sorbents, mice.
*Автор, которому необходимо направлять корреспонденцию:
ул. Переяславская, 23, г. Харьков, Украина 61015;
тел.: (+38 057) 373-31-26, факс: (+38 057) 373-30-84,
электронная почта: martsenyuk@ukr.net
*To whom correspondence should be addressed:
23, Pereyaslavskaya str., Kharkov, Ukraine 61015;
tel.:+380 57 373 3126, fax: +380 57 373 3084,
e-mail: martsenyuk@ukr.net
1Department of Long Term Preservation of Biological Objects at
Low Temperatures and Microbiology, Institute for Problems of Cryo-
biology and Cryomedicine of the National Academy of Sciences of
Ukraine, Kharkov, Ukraine
2Kharkov Medical Academy of Post-Diploma Education, Kharkov,
Ukraine
1Отдел долгосрочного хранения биологических объектов при
низких температурах и микробиологии, Институт проблем
криобиологии и криомедицины НАН Украины, г. Харьков
2Харьковская медицинская академия последипломного
образования, г. Харьков
Поступила 03.02.2015
Принята в печать 26.06.2015
Проблемы криобиологии и криомедицины. – 2015. – Т. 25, №3. – С. 267–286.
© 2015 Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины
Received February, 03, 2015
Accepted June, 26, 2015
Probl. Cryobiol. Cryomed. 2015. 25 (3): 267–286.
© 2015 Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine
оригинальное исследование research article
268 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 25, №/issue 3, 2015
Various groups of human population suffer from
dysbiosis, a clinical and laboratory syndrome charac-
terized by a changed qualitative and/or quantitative
composition of the normal intestinal flora, metabolic
and immune disorders [14, 17]. To treat and prevent
an intestinal dysbiosis and even intestinal infections one
uses probiotic preparations: probiotics, prebiotics, syn-
biotics, metabiotics [4, 6, 8, 31]. Probiotics are live
microorganisms positively affecting physiological,
biochemical and immune responses of a host body
after natural intake due to stabilizing and optimizing
the functions of the gut microbiota [6, 13, 14, 17]. There
are large amounts of probiotic products produced
worldwide possessing the clinical efficacy proved in
the randomized multicenter double-blind studies [1, 13,
14, 31]. However, the existing products do not properly
meet some clinical requirements and in this connection
there is a need in developing medications of new types,
in particular, probiotics, immobilized in polysaccharide
hydrogel carriers [7, 16] and on enterosorbents [28].
Modern pharmaceutical products being the probioticts
immobilized on sorbents (Baktistatin; Kraft, Bifidum-
bacterin forte, Ecopolis, Probifor, Partner, Ecoflor,
Vector-Bialgam, Russia) are produced by freeze-drying
and stored in a dry form [5]. The studies on creating
the liquid forms of probiotic immobilized on sorbents
and their storage are single [25].
We have obtained the experimental products of
probiotics immobilized on enterosorbents SCMS-1
(Spherical Carbon-Mineral Sorbents) and Sorbex [30].
It has been shown that immobilization on enterosor-
bents and storage at –80 and –196°C did not alter the
initial biological properties of probiotics and, during the
correction of the experimental dysbiosis in immune
suppressed mice, the products provided faster recovery
of microbiota and eradication of intestinal microflora
translocated to internal organs if compared with treat-
ment with free cells and the mixtures of free cells and
enterosorbents [2, 3]. To the date there are no compre-
hensive studies of the effect of immobilized on entero-
sorbents probiotics stored at different temperatures
rendered on the recovery of populations of cenobionts
and colonic mucosa mucin of the animals with chemo-
therapeutic dysbiosis without immune suppression.
There are no quantitative criteria of in vivo specific
activity of probiotics. Assessing of the overall thera-
peutic effect of the products allowed to establish its
dependence on the concentration and biological
properties of microbial cells that have passed through
the natural barrier of gastrointestinal tract (GIT), as
well as on the ability of cells to colonization or persis-
tence (for microorganisms, not referred to GIT micro-
biocenosis) [5, 14, 28]. Colonization of intestinal
mucosa is known to depend on adhesion properties of
microorganisms [8, 14, 15]. Adhesion of the carrier-
В настоящее время среди различных групп
населения широко распространен дисбиоз – кли-
нико-лабораторный синдром, характеризующийся
изменением качественного и/или количественного
состава нормальной микрофлоры кишечника, ме-
таболическими и имунными нарушениями [10, 21].
Для терапии и профилактики дисбиоза кишечника,
а в ряде случаев и кишечных инфекций, применяют
пробиотические препараты: пробиотики, пребио-
тики, синбиотики, метабиотики [4, 11, 23, 32]. Про-
биотики – живые микроорганизмы, оказывающие
при естественном способе введения положитель-
ное влияние на физиологические, биохимические
и имунные реакции организма хозяина за счет ста-
билизации и оптимизации функций микробиоценоза
кишечника [10, 21, 23, 27]. В мире производят
большое количество препаратов пробиотиков, кли-
ническая эффективность которых доказана в муль-
тицентровых рандомизированных исследованиях
двойным слепым методом [1, 10, 27, 32]. Однако
по ряду показателей существующие препараты
недостаточно удовлетворяют клиническим требова-
ниям, в связи с этим необходимо создание их новых
лекарственных форм, в частности пробиотиков,
иммобилизованных в носителях на основе полиса-
харидных гидрогелей [24, 28] и на энтеросорбентах
[6]. Современные фармацевтические препараты
иммобилизованных на сорбентах пробиотиков
(«Бактистатин»; «Крафт»; «Бифидумбактерин фор-
те»; «Экополис»; «Пробифор»; «Партнер»; «Эко-
флор»; «Вектор-Биальгам», Россия) производят и
хранят в лиофилизированном виде [5]. Исследова-
ния по созданию жидких форм иммобилизованных
на сорбентах пробиотиков и их хранению единичны
[19].
Нами были получены экспериментальные пре-
параты пробиотиков, иммобилизованных на
энтеросорбентах «СУМС-1» и «Сорбекс» [8]. Было
показано, что иммобилизация на энтеросорбентах
и хранение при температурах –80 и –196°C не
изменяют исходные биологические свойства про-
биотиков, а сами препараты обеспечивают более
быстрое восстановление микробиоценоза и эради-
кацию кишечной микрофлоры, которая была транс-
лоцирована во внутренние органы при коррекции
экспериментального дисбиоза у иммуносупресси-
рованных мышей по сравнению со свободными
клетками и смесями свободных клеток и энтеро-
сорбентов [2, 3]. Комплексные исследования влия-
ния иммобилизованных на энтеросорбентах про-
биотиков, хранившихся при различных темпера-
турах, на восстановление популяций ценобионтов
и муцин слизистой толстой кишки животных с
химиотерапевтическим дисбиозом без иммуносуп-
рессии не проводили.
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 25, №/issue 3, 2015
269
Количественные критерии специфической
активности пробиотиков in vivo на сегодня
отсутствуют. При оценке суммарного терапевти-
ческого эффекта препаратов установлена его за-
висимость от концентрации и биологических
свойств микробных клеток, прошедших через
естественные защитные барьеры желудочно-
кишечного тракта (ЖКТ), способности клеток к
колонизации или персистированию (для микроорга-
низмов, не относящихся к микробиоценозу ЖКТ)
[5, 6, 10]. Известно, что колонизация слизистой
кишечника во многом зависит от адгезивных
свойств микроорганизмов [10, 11, 22]. Адгезию
комплексов «носитель-клетки» к муцину кишеч-
ника ранее не изучали. На основании вышеизло-
женного целью работы было исследовать восста-
новление в муцине животных c экспериментальным
дисбиозом кишечника популяций ценобионтов
Bifidobacterium spp. и Lactobacillus spp. после
терапии свободными и иммобилизованными на
энтеросорбентах пробиотиками, хранившимися в
течение года при температуре –80 и –196°C.
Материалы и методы
Объектами исследования были дрожжи Sac-
charomyces cerevisiae, Saccharomyces boulardii,
бактерии Bifidobacterium bifidum, штамм ЛВА-3
(B. bifidum), Lactobacillus delbrueckii subspecies
bulgaricus (L. bulgaricus). Дрожжи S. boulardii
выделены из коммерческого препарата «Энтерол»
(«Biocodex», Франция). Бактерии B. bifidum полу-
чены из Всероссийской коллекции промышленных
микроорганизмов ГосНИИ генетики (Россия),
бактерии L. bulgaricus – из коллекции Санкт-Пе-
тербургского филиала ФГБНУ «НИИ хлебопекар-
ной промышленности» (Россия).
Для иммобилизации использовали энтеросор-
бенты «СУМС-1» (ОАО «Новосибхимфарм»,
Россия) и «Сорбекс» (АО «Экосорб», Украина). Эн-
теросорбент «СУМС-1» представляет собой гра-
нулы окиси алюминия, покрытые углеродной
пленкой, «Сорбекс» – гранулы активированного
угля. Иммобилизацию микробных клеток прово-
дили как описано ранее [8].
Свободные и иммобилизованные на энтеросор-
бентах микробные клетки замораживали в 5%-м
растворе сахарозы. Суспензии свободных клеток
и взвеси комплексов «носитель-клетки» помещали
в криопробирки «Corning» («Corning Inc.», США) с
рабочим объемом 1,8 мл. Часть образцов охлаж-
дали в программном замораживателе «Cryoson»
(Германия) до –40°С со скоростью 1 град/мин, за-
тем погружали в жидкий азот. Эти условия криокон-
сервирования обеспечивали высокую сохранность
комплексов «носитель-клетки» [2]. Вторую часть
cells complexes to intestinal mucin has not been
previously investigated. Based on the above, the
research aim was to investigate the recovery of the
Bifidobacterium spp. and Lactobacillus spp. ceno-
biont populations in mucin of experimental animals with
an intestinal dysbiosis after treatment with free and
enterosorbents-immobilized probiotics, stored for a year
at –80 and –196°C.
Materials and methods
The research objects were Saccharomyces cere-
visiae, Saccharomyces boulardii, bacteria Bifido-
bacterium bifidum, LVA-3 strain (B. bifidum),
Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus (L.
bulgaricus). S. boulardii yeasts were isolated from
Enterol commercial drug (Biocodex, France). B. bifi-
dum bacteria were obtained from the All-Russian Col-
lection of Industrial Microorganisms of Research
Institute for Genetics (Russian Federation), L. bulga-
ricus bacteria were from the collection of Saint-
Petersburg Branch of the Research Institute of the
Bakery Industry (Russia).
For immobilization we used SCMS-1 (Novosibkhim-
farm, Russia) and Sorbex (Ecosorb, Ukraine)
enterosorbents. SCMS-1 enterosorbent represents the
aluminum oxide granules coated with a carbon film,
Sorbex consists of activated carbon granules. Microbial
cells were immobilized as described previously [30].
Free and immobilized on enterosorbents microbial
cells were frozen in 5% sucrose solution. Suspensions
of free cells and the carrier-cells complexes were pla-
ced into Corning cryovials (Corning Incorporated, USA)
with 1.8 ml handling volume. The part of the samples
was cooled in a programmable freezer Cryoson (Ger-
many) down to –40°C with the rate of 1 deg/min, follo-
wed by the immersion into liquid nitrogen. These cryo-
preservation conditions ensured a high preservation rate
of the carrier-cells complexes [2]. The second part of
the samples was placed into low-temperature chamber
Jouan VX380 (France) with temperature of (–80 ±
4)°C. The samples were stored for a year at –196 and
(–80 ± 4)°C, and were thawed in a water bath at 30°C.
The experiments were carried out in accordance
with the General Principles of Experiments in Animals
approved by the 5th National Congress in Bioethics
(Kiev, 2013) and consistent with the statements of the
European Convention for the Protection of Vertebrate
Animals Used for Experimental and Other Scientific
Purposes (Strasbourg, 1986).
Experimental dysbiosis was simulated in white 7–
8-month-old outbred laboratory mice of 18–20 g weight.
Dysbiosis in animals was initiated by oral adminis-
tration for 3 days of Ampicillin (Kyivmedpreparat,
Ukraine) and Metronidazole (Unique Pharmaceutical
Laboratories, India) [9] dissolved in a distilled water
270 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 25, №/issue 3, 2015
by 5 and 2 mg of pure substance, respectively. There
have been performed three series of experiments in
which the animals were administered with the entero-
sorbents and preparations of B. bifidum cells (1st series),
L. bulgaricus (2nd series), S. boulardii (3rd series).
The groups of animals are specified in Tables 1–4.
Each of control and experimental groups consisted of
10 animals. Groups were formed from the same batch
of animals randomly. The microbiological status of all
mice before experiments was defined as improved-
conventional (category 2). The diet basis was a stan-
dard feed mixture. Maintaining, nutrition and care of
the animals were in accordance to the special require-
ments and under the similar conditions (temperature,
humidity, light, diet) [32]. The animals were ether pre-
medicated for anesthesia when perished.
In 48 hrs after the last administration of medications
(observation day 1) the mice were also orally (with
enteral feeding tube) administered within 12 days (once
a day) the preparations of probiotics and enterosorbents
(free cells, a mixture of free cells with enterosorbents,
and immobilized probiotics). Daily doses of probiotics
and enterosorbents were calculated by weight of the
animals in accordance with the application instructions
of the products. For free S. boulardii cells they were
1.6×104, for B. bifidum the number was 2.5×106 and
2.5×105 CFU for L. bulgaricus. The daily dose of
SCMS-1 was 0.02 g, and 0.01 for Sorbex. Taking into
account the established previously survival of the
complexes of immobilized cells after low temperature
storage their therapeutic doses were twice increased.
To days 5, 12 of a dysbiosis therapy (observation
days 5, 12), and in 5, 10 days after the last treatment
with probiotics (observation days 17, 22) the colon
mucin samples were collected for microscopic and
microbiological examinations [6, 11]. To do this, diffe-
rent parts of the colon were dissected in two adjacent
fragments of 5 cm length. Chyme was removed by
washing the intestine fragments with 4°C Ringer’s
solution (pH 7.0–7.4), then the fragments were twisted
by plastic rods with mucosa outside, then placed into
the vessels with chilled Ringer’s solution (5 ml) and
shaken for 10 min, afterwards the removed with a
spatula mucin was placed into the solution.
The content in mucin of Bifidobacterium and
Lactobacillus bacteria was examined according to
the guidelines [24], the content of the S. boulardii cells
was found with Koch plate techniques [20]. For this
aim the mucin serial dilutions were plated on Sabouraud
agar medium supplemented with Chloramphenicol
(0.05 g/l) [23]. Mucin preparations for light microscopy
were stained according Gram and Romanovsky-Giem-
sa [18]. Enterosorbents granules were additionally
fixed by coating the surface with 1% agar gel solution
in phosphate buffer (pH 7.2–7.4) [22]. Mucin prepa-
rations were examined using Zeiss Primo Star micro-
образцов помещали на полки низкотемпературной
камеры «Jouan VX380» (Франция) с температурой
(–80 ± 4)°С. Образцы хранили в течение года при
температуре –196 и (–80 ± 4)°С, отогревали на во-
дяной бане при 30°С.
Эксперименты проводили в соответствии с
«Общими принципами экспериментов на живот-
ных», одобренными V Национальным конгрессом
по биоэтике (Киев, 2013) и согласованными с поло-
жениями «Европейской конвенции о защите позво-
ночных животных, используемых для экспери-
ментальных и других научных целей» (Страсбург,
1986).
Экспериментальный дисбиоз воспроизводили у
белых 7–8-месячных беспородных лабораторных
мышей массой 18–20 г. Для формирования дисбио-
за животным вводили перорально в течение 3-х
суток «Ампициллин» (ОАО «Київмедпрепарат», Ук-
раина) и «Метронидазол» («Unique Pharmaceutical
Laboratories», Индия) [12] соответственно в 5 и 2 мг
чистого вещества, растворенного в дистиллирован-
ной воде. Были проведены три серии эксперимен-
тов, в которых животным вводили энтеросорбенты
и препараты клеток B.bifidum (1-я серия), L. bul-
garicus (2-я серия), S.boulardii (3-я серия). Описа-
ние групп животных приведено в табл. 1–5. Каждая
контрольная и опытная группы включала по 10 жи-
вотных. Группы формировали из животных одной
партии методом случайной выборки. Микробиоло-
гический статус всех мышей до экспериментов
определялся как улучшенно-конвенциальный
(II категория). Основу рациона составляла кормо-
вая смесь. Содержание, питание и уход за живот-
ными соответствовали специальным требованиям
при сходных условиях (температура, влажность,
освещение, рацион питания) [13]. Забой животных
проводили с премедикацией эфиром для наркоза.
Через 48 ч после последнего введения химио-
препаратов (1-е сутки наблюдения) мышам также
перорально (с помощью зонда) вводили в течение
12 суток (раз в сутки) препараты пробиотиков и
энтеросорбентов (свободные клетки, смеси сво-
бодных клеток с энтеросорбентами, иммобилизо-
ванные пробиотики). Суточные дозы пробиотиков
и энтеросорбентов рассчитывали по массе живот-
ных в соответствии с инструкциями по использо-
ванию препаратов. Для свободных клеток S. bou-
lardii они составляли 1,6×104, B.bifidum – 2,5×106,
L.bulgaricus – 2,5×105 КОЕ. Суточная доза
«СУМС-1» соответствовала 0,02 г, «Сорбекс» –
0,01 г. С учетом установленной ранее сохранности
комплексов иммобилизованных клеток после
низкотемпературного хранения их дозы увеличи-
вали в 2 раза.
На 5-, 12-е сутки терапии дисбиоза (5-, 12-е
сутки наблюдения) и через 5, 10 суток после по-
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 25, №/issue 3, 2015
271
scope (Germany) and AxioVision 4 software (Zeiss,
Germany).
For statistical analysis of the results the Student
t-test and SPSS 17.0 (IBM, USA) software were used.
The threshold of statistical error was set at 5%.
Results and discussion
To day 3 after the Ampicillin and Metronidazole
treatment the animals got the symptoms of intestinal
dysbiosis: polyfekalia, diarrhea and constipation inter-
change, altered stool consistency, appetite and weight
loss by (3.5 ± 0.5) g. In 48 hrs after administration of
medications the colon mucin had number of lg CFU/g
of Bifidobacterium spp. and Lactobacillus spp. bacteria
decreased from 7.4 down to 2.0 and from 8.1 down to
2.3, respectively (Tables 1 and 2).
During 17 days the content of Bifidobacterium spp.
and Lactobacillus spp. bacteria in parietal mucin of
the animals non-treated with probiotics and enterosor-
bents was not changed. To observation day 22 the
content of these bacteria in mucin was significantly
increased, but it was still lower than in the control. All
the animals of these groups had the mentioned above
clinical manifestations of gastrointestinal tract digestive
functions disorders during the entire period of obser-
vation.
In the animals of groups 1–3, treated with native or
stored at –80, –196°C free B. bifidum cells, the total
number of Bifidobacterium spp. bacteria in mucin
was significantly increased to day 12 of therapy as
compared with the values after administration of
chemical drugs (see Table 1). To day 5 after the
treatment (observation day 17) the total number of
Bifidobacterium spp. bacteria decreased if compared
to day 12 of B. bifidum receiving. To day 10 after the
end of therapy course (observation day 22) the total
number of Bifidobacterium spp. bacteria increased
again and exceeded the value corresponding to day 12
of the treatment. For all the terms of observation
(during therapy and 10 days after its finishing) the total
number of Bifidobacterium spp. bacteria in mucin
was lower than before the dysbiosis induction.
In the animals of groups 4–9 the therapy was per-
formed using the mixtures of enterosorbents SCMS-1,
Sorbex with free native or stored at –80 and –196°C
B. bifidum cells (see Table 1). In the animals of these
groups, as well as in those of groups 1–3, a significant
increase of the total number of Bifidobacterium spp.
bacteria in mucin was observed to days 5–12 of treat-
ment. The number of bifidobacteria in mucin within
10 days after the therapy stop did not change and was
significantly lower than before the dysbiosis induction.
The animals of groups 10–15 were treated with
the enterosorbent-immobilized B. bifidum cells (see
следнего приема пробиотиков (17-, 22-е сутки
наблюдения) забирали пробы муцина толстой киш-
ки для микробиологического и микроскопического
исследования [7, 12]. Для этого из разных отделов
толстой кишки иссекали по два смежных фраг-
мента длиной 5 см. Химус удаляли промыванием
фрагментов кишки охлажденным до 4°С раствором
Рингера (рН 7,0–7,4), затем пластиковыми стер-
жнями фрагменты выворачивали слизистой обо-
лочкой наружу, помещали в сосуды с охлажденным
раствором Рингера (5 мл) и встряхивали в течение
10 мин, после чего в этот же раствор помещали
муцин, который снимали с помощью шпателя.
Содержание в муцине бактерий родов Bifido-
bacterium и Lactobacillus определяли в соответ-
ствии с методическими рекомендациями [14],
содержание клеток S. boulardii – «чашечным ме-
тодом» Коха [15]. Для этого серийные разведения
муцина высевали на агаризованную среду Сабуро
с добавлением хлорамфеникола (0,05 г/л) [18].
Препараты муцина для проведения световой мик-
роскопии окрашивали по Граму и Романовскому-
Гимзе [16]. Для дополнительной фиксации гранул
энтеросорбентов поверхность препаратов покрыва-
ли 1%-м агаровым гелем на растворе фосфатного
буфера (рН 7,2–7,4) [17]. Препараты муцина иссле-
довали с помощью микроскопа «Zeiss Primo Star»
(Германия) с программным обеспечением «Axio
Vision 4» («Zeiss», Германия).
Для статистического анализа полученных ре-
зультатов использовали t-тест Стьюдента и пакет
программ «SPSS 17.0» («IBM», США). Порог
статистической погрешности был установлен на
уровне 5%.
Результаты и обсуждение
На 3-и сутки после введения ампициллина и
метронидазола у животных отмечали симптомы
дисбиоза кишечника: полифекалию, чередование
диареи и запоров, изменение консистенции стула,
ухудшение аппетита, снижение массы тела на (3,5 ±
0,5) г. Через 48 ч после введения химиопрепаратов
в муцине толстого кишечника было установлено
снижение числа lg КОЕ/г бактерий Bifidobacterium
spp. и Lactobacillus spp. с 7,4 до 2,0 и с 8,1 до 2,3
соответственно (см. табл. 1, 2).
В течение 17 суток содержание бактерий
Bifidobacterium spp. и Lactobacillus spp. в присте-
ночном муцине животных, не получавших терапию
пробиотиками и энтеросорбентами, не изменялось.
На 22-е сутки наблюдения содержание данных
бактерий в муцине значимо повышалось, но было
ниже контрольного. У всех животных этих групп в
течение всего срока наблюдения отмечали описан-
272 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 25, №/issue 3, 2015
Table 1). To day 5 of therapy, the total number of Bifi-
dobacterium spp. bacteria in mucin was significantly
increased. To day 12 of therapy and during the next
10 days (observation days 17–22), the total number of
Bifidobacterium spp. bacteria in mucin did not differ
from the one prior to the dysbiosis induction.
In all the groups of experimental animals we found
no differences in recovery of the total amount of
Bifidobacterium spp. in mucin after administration
of free and immobilized B. bifidum cells stored or not
stored at low temperatures. There were no differences
in therapeutic effect of B.bifidum products stored at
either –80 and –196°C as well.
After treatment of intestinal dysbiosis with free and
immobilized L. bulgaricus bacteria the results similar
to the ones when using B.bifidum were obtained. The
total amount of Lactobacillus spp. bacteria in mucin
of the animals treated with free cells and the mixtures
of free cells with enterosorbents significantly increased
to day 12 of administration (see Table 2: groups 1–3
and 4–9). In 5 days after the treatment the index
declined and 10 days later it again increased to the
values close to the ones prior to the dysbiosis induction.
In the groups of animals treated with immobilized
L. bulgaricus cells, the total amount of Lactobacillus
spp. bacteria in mucin started rising to observation
day 5 (Table 2: groups 10–15), and to day 22 it restored
to the control values.
In mucin of the animals treated with L. bulgaricus
products stored and not stored at low temperatures
the amount of Lactobacillus spp bacteria did not differ
like in previous experiments. There were no differences
in therapeutic effect of L.bulgaricus stored at –80
and –196°C as well.
In the third set of experiments we examined the
persistence of S.boulardii yeast in the colon mucin
and recovery of Bifidobacterium spp. and Lactoba-
cillus spp. bacteria populations after introduction of
free and immobilized S. boulardii cells. Saccharo-
myces spp. cells were absent in mucin of the animals
before dysbiosis induction and 48 hrs later administering
the chemical drugs. To days 5 and 12 of treatment
(observation day 5 and 12) the equal amounts of
Saccharomyces spp. cells were isolated from the
mucin of the animals treated with S.boulardii cells
and mixtures of free cells with enterosorbents, i. e.
from 3.5 to 4.4 lg CFU/g (Table 3: Groups 1–9). In
5 days after the treatment (observation day 17) only
single Saccharomyces spp. cells were identified in
mucin of the animals of these groups, and 10 days
later (observation day 22) the yeast cells were absent
in mucin. During the whole period of treatment with
the enterosorbent-immobilized S .boulardii cells and
5 days later the equal amounts of yeast cells were
isolated from the mucin, which were significantly higher
ные выше клинические проявления нарушений
пищеварительных функций ЖКТ.
У животных групп 1–3, которым вводили
нативные и хранившиеся при температуре –80,
–196°C свободные клетки B. bifidum, суммарное
количество бактерий Bifidobacterium spp. в
муцине на 12-е сутки курса терапии значимо
повышалось по сравнению с данным показателем
после введения химиопрепаратов (см. табл. 1). На
5-е сутки после лечения (17-е сутки наблюдения)
суммарное количество бактерий Bifidobacterium
spp. снижалось по сравнению с 12-ми сутками
приема B. bifidum. На 10-е сутки после окончания
курса терапии (22-е сутки наблюдения) суммарное
количество бактерий Bifidobacterium spp. снова
увеличилось и превысило показатель, соответ-
ствующий 12-м суткам приема препаратов. На
всех сроках наблюдения (во время терапии и
череза 10 суток после ее окончания) суммарное
количество бактерий Bifidobacterium spp. в му-
цине было ниже показателя до индукции дисбиоза.
Животным групп 4–9 терапию проводили с ис-
пользованием смесей энтеросорбентов «СУМС-1»,
«Сорбекс» со свободными нативными и хранивши-
мися при температурах –80 и –196°C клетками
B. bifidum (см. табл. 1). У животных из этих групп,
как и в группах 1–3, значимое повышение суммар-
ного количества бактерий Bifidobacterium spp. в
муцине наблюдалось на 5–12-е сутки лечения. Ко-
личество бифидобактерий в муцине в течение
10 суток после окончания курса терапии не изменя-
лось и было значимо ниже показателя до индукции
дисбиоза.
Животным групп 10–15 вводили препараты
иммобилизованных на энтеросорбентах клеток
B. bifidum (см. табл. 1). Уже на 5-е сутки терапии
значимо увеличилось суммарное количество бак-
терий Bifidobacterium spp. в муцине. На 12-е сутки
терапии и в течение последующих 10 суток (17–
22-е сутки наблюдения) суммарное количество
бактерий Bifidobacterium spp. в муцине не отлича-
лось от данного показателя для бифидобактерий
до индукции дисбиоза.
Во всех группах экспериментальных животных
различия показателей восстановления в муцине
суммарного количества Bifidobacterium spp. пос-
ле введения свободных и иммобилизованных
клеток B. bifidum до и после хранения при низких
температурах отсутствовали. Также не были ус-
тановлены различия и в терапевтическом эффекте
препаратов B.bifidum, хранившихся при темпе-
ратурах –80 и –196°C.
После лечения дисбиоза кишечника свобод-
ными и иммобилизованными бактериями L. bulga-
ricus были получены результаты, сходные с данны-
)ытараперпясеишвидовв(хынтовижыппурГ
)snoitaraperpdecudortni(slaminafospuorG
оД
иицкудни
азоибсид
erofeB
sisoibsyd
noitcudni
елсопч84
иицкудни
азоибсид
иктусе-1(
)яинедюлбан
tsoph84
sisoibsyd
noitcudni
1( ts foyad
)noitavresbo
иктусе-5
амеирп
вотараперп
иктусе-5(
)яинедюлбан
5 ht foyad
tnemtaert
5( ht foyad
)noitavresbo
иктусе-21
амеирп
вотараперп
иктусе-21(
)яинедюлбан
21 ht foyad
tnemtaert
21( ht foyad
)noitavresbo
иктусе-5
соп ел
амеирп
вотараперп
иктусе-71(
)яинедюлбан
5 ht tsopyad
tnemtaert
71( ht foyad
)noitavresbo
иктусе-01
елсоп
амеирп
вотараперп
иктусе-22(
)яинедюлбан
01 ht tsopyad
tnemtaert
22( dn foyad
)noitavresbo
яинечелзебеынтовиЖ
tnemtaerttuohtiwslaminA
4,0±4,7 *6,0±0,2
*4,0±8,2 *5,0±0,3 а *3,0±1,3 а *4,0±0,4 а
mudifib.BиктелкеындобовС.1
sllecmudifib.BeerF.1 *5,0±4,2 *4,0±6,4 а *5,0±9,3 bа *4,0±4,5 bа
,mudifib.BиктелкеындобовС.2
С°08–ирпясеишвинарх
С°08–taderots,sllecmudifib.BeerF.2
*1,0±5,2 *3,0±8,4 а *4,0±8,3 bа *3,0±5,5 bа
,mudifib.BиктелкеындобовС.3
С°691–ирпясеишвинарх
С°691–taderots,sllecmudifib.BeerF.3
*5,0±4,2 *4,0±7,4 а *3,0±9,3 bа *4,0±6,5 bа
»1-СМУС«+mudifib.BиктелкеындобовС.4
1-SMCS+sllecmudifib.BeerF.4 *4,0±0,3 а *5,0±5,5 а *4,0±9,5 а *3,0±8,5 а
»скеброС«+mudifib.BиктелкеындобовС.5
xebroS+mudifib.BeerF.5 *3,0±9,2 а *5,0±1,5 а *2,0±7,5 а *3,0±8,5 а
,mudifib.BиктелкеындобовС.6
»1-СМУС«+,С°08–ирпясеишвинарх
1-SMCS+,С°08–taderots,sllecmudifib.BeerF.6
*3,0±1,3 а *4,0±0,5 а *2,0±6,5 а *5,0±7,5 а
,mudifib.BиктелкеындобовС.7
»скеброС«+,С°08–ирпясеишвинарх
xebroS+,С°08–taderots,sllecmudifib.BeerF.7
*4,0±0,3 а *5,0±2,5 а *5,0±7,5 а *3,0±9,5 а
,mudifib.BиктелкеындобовС.8
»1-СМУС«+,С°691–ирпясеишвинарх
1-SMCS+,С°691–taderots,sllecmudifib.BeerF.8
*4,0±4,3 а *3,0±1,5 а *4,0±5,5 а *4,0±8,5 а
,mudifib.BиктелкеындобовС.9
»скеброС«+,С°691–ирпясеишвинарх
xebroS+,С°691–taderots,sllecmudifib.BeerF.9
*4,0±3,3 а *4,0±0,5 а *3,0±6,5 а *5,0±9,5 а
еыннавозилибоммИ.01
mudifib.Bиктелк»1-СМУС«ан
sllecmudifib.B1-SMCShtiwdezilibommI.01
*4,0±5,4 а 3,0±0,7 а 5,0±0,7 а 3,0±1,7 а
еыннавозилибоммИ.11
mudifib.Bиктелк»ескеброС«ан
sllecmudifib.BxebroShtiwdezilibommI.11
*3,0±4,4 а 4,0±1,7 а 4,0±0,7 а 4,0±2,7 а
»1-СМУС«анеыннавозилибоммИ.21
С°08–ирпясеишвинарх,mudifib.Bиктелк
1-SMCShtiwdezilibommI.21
С°08–taderots,sllecmudifib.B
*5,0±5,4 а 5,0±9,6 а 4,0±1,7 а 2,0±1,7 а
»ескеброС«анеыннавозилибоммИ.31
С°08–ирпясеишвинарх,mudifib.Bиктелк
xebroShtiwdezilibommI.31
С°08–taderots,sllecmudifib.B
*4,0±4,4 а 3,0±0,7 а 4,0±1,7 а 3,0±2,7 а
»1-СМУС«анеыннавозилибоммИ.41
С°691–ирпясеишвинарх,mudifib.Bиктелк
1-SMCShtiwdezilibommI.41
С°691–taderots,sllecmudifib.B
*3,0±6,4 а 4,0±0,7 а 2,0±2,7 а 4,0±1,7 а
»ескеброС«анеыннавозилибоммИ.51
С°691–ирпясеишвинарх,mudifib.Bиктелк
xebroShtiwdezilibommI.51
С°691–taderots,sllecmudifib.B
*5,0±2,4 а 3,0±9,6 а 4,0±1,7 а 3,0±3,7 а
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 25, №/issue 3, 2015
273
Таблица 1. Содержание Bifidobacterium spp. в пристеночном муцине толстой кишки
мышей с химиотерапевтическим дисбиозом кишечника после введения свободных
и иммобилизованных клеток B. bifidum и энтеросорбентов, lg КОЕ/г, x ± Sx
Table 1. Content of Bifidobacterium spp. in parietal mucin colon of mice with chemotherapeutical
intestinal dysbiosis after injection of free and immobilized B. bifidum cells and enterosorbents, lg CFU/g, x ± Sx
Примечание: * – статистически значимые отличия по сравнению с контролем (р < 0,05); а – данными после индукции
дисбиоза; b – данными на 12-е сутки терапии.
Note: * – statistically significant changes (p < 0.05) if compared with control (before dysbiosis); а – after induction of dysbiosis; b – 12th
day of therapy.
274 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 25, №/issue 3, 2015
ми для B.bifidum. Суммарное количество в муцине
бактерий Lactobacillus spp. в группах животных,
которым вводили свободные клетки и смеси сво-
бодных клеток с энтеросорбентами, значимо повы-
шалось на 12-е сутки введения (см. табл. 2: группы
1–3 и 4–9). Через 5 суток после лечения указанный
показатель снижался, а через 10 суток снова повы-
шался до значений, близких к показателям до ин-
дукции дисбиоза. В группах животных, которым
вводили иммобилизованные клетки L. bulgaricus,
суммарное количество в муцине бактерий Lacto-
bacillus spp. начинало увеличиваться к 5-м суткам
наблюдения (см. табл. 2: группы 10–15), а на
22-е сутки восстановилось до контрольных значений.
В муцине животных, получавших препараты
L. bulgaricus, до и после хранения при низких тем-
пературах количество бактерий Lactobacillus spp.,
как и в предыдущих экспериментах, не отличалось.
Отсутствовали и различия в терапевтическом
действии препаратов L. bulgaricus, хранившихся
при температурах –80 и –196°C.
В третьей серии экспериментов исследовали
персистенцию в муцине толстой кишки дрожжей
S. boulardii и восстановление популяций бактерий
Bifidobacterium spp. и Lactobacillus spp. после
приема свободных и иммобилизованных клеток
S. boulardii. В муцине животных до индукции
дисбиоза и через 48 ч после окончания введения
химиопрепаратов клетки Saccharomyces spp. отсут-
ствовали. Из муцина животных, которым вводили
свободные клетки S.boulardii и смеси свободных
клеток с энтеросорбентами, на 5- и 12-е сутки
лечения (5- и 12-е сутки наблюдения) выделяли
одинаковое количество клеток Saccharomyces spp. –
от 3,5 до 4,4 lg КОЕ/г (см. табл. 3: группы 1–9).
Через 5 суток после лечения (17-е сутки наблюде-
ния) в муцине животных этих групп были обнаруже-
ны единичные клетки Saccharomyces spp., а через
10 суток (22-е сутки наблюдения) дрожжевые
клетки в муцине отсутствовали. На протяжении
всего периода приема препаратов иммобилизован-
ных на энтеросорбентах клеток S.boulardii и через
5 суток после лечения из муцина выделяли также
одинаковое количество дрожжевых клеток, которое
было значимо выше, чем в группах 1–9. На 22-е
сутки наблюдения количество дрожжевых клеток
в муцине животных групп 10–15 значимо снижа-
лось по сравнению с результатами 15–17-х суток.
Хранение свободных и иммобилизованных на
энтеросорбентах клеток S. boulardii в течение
года при –80 и –196°C не влияло на их способность
к персистенции в муцине мышей. Температура
хранения не оказывала значимого влияния на
способность дрожжевых клеток к персистенции
в слизистой толстой кишки мышей.
than in groups 1–9. To observation day 22 the amounts
of yeast cells in mucin of the animals in groups 10–15
were significantly lower if compared with those of days
15–17.
Storage of free and enterosorbent-immobilized
S. boulardii cells within a year at –80 and –196°C
did not affect their ability to persistence in the mucin
of mice. Storage temperature had no significant effect
on the ability of yeast cells to persistence in the colon
mucosa of mice.
In addition to the testing the persistence of yeast
cells in mucin the groups of the S. boulardii treated
animals were assessed for the presence of Bifido-
bacterium spp. and Lactobacillus spp. bacteria.
Before the dysbiosis induction the animals of these
groups had the number of lg CFU/g for bifidobacteria
of 7.6 ± 0.5, for lactobacilli this was 8.0 ± 0.4, and 48
hrs later the administration of chemodrugs the amounts
were 2.1 ± 0.4 and 2.4 ± 0.5, respectively. In mucin of
the animals of groups 1–3 (Table 4, 5) to day 12 day of
therapy the number of lg CFU/g for bifidobacteria was
3.3, for lactobacilli this was 4.2. In 10 days after the
therapy termination, when the yeast cells were already
absent in mucin, the amount of bifidobacteria was
increased up to 4.3 lg CFU/g and the one of lactobacilli
enhanced up to 4.8 lg CFU/g. Similar results were
observed in the groups 4–9, where the animals were
treated with the mixture of S. boulardii cells and
enterosorbents. In groups 10–15 of the animals treated
with preparations of S. boulardii cells immobilized on
enterosorbents, the number of lg CFU/g of bifidobac-
teria and lactobacilli were higher than in groups 1–9.
In 10 days after treatment, the number of yeast cells
in mucin of mice of groups 10–15 decreased and the
number of bifidobacteria and lactobacilli increased if
compared to the last day of therapy.
Storage of free and immobilized S. boulardii cells
throughout the year at –80 and –196°C did not affect
their ability of recovering the Bifidobacterium spp.
and Lactobacillus spp. cenobiont populations.
The increase of the numbers of bifido- and lacto-
bacteria in mucin after receiving the non-stored and
stored at low temperatures free or immobilized probio-
tics correlated with a decrease in clinical manifestations
of disorders in gastrointestinal tract digestive functions.
In the groups of mice treated with immobilized pro-
biotics no clinical manifestations were found to obser-
vation day 22. In 30% of the animals treated with
a mixture of free cells and enterosorbents the polyfe-
calia was kept, thereat the animals treated with free
probiotic cells had just some clinical manifestations less
pronounced than in the animals non-treated with pro-
biotics and enterosorbents after the dysbiosis induction.
A comparative microscopic investigation of colon
mucin in the animals of all the groups was performed
)ытараперпясеишвидовв(хынтовижыппурГ
)snoitaraperpdecudortni(slaminafospuorG
оД
иицкудни
азоибсид
erofeB
sisoibsyd
noitcudni
елсопч84
иицкудни
азоибсид
иктусе-1(
)яинедюлбан
tsoph84
sisoibsyd
noitcudni
1( ts foyad
)noitavresbo
иктусе-5
амеирп
вотараперп
иктусе-5(
)яинедюлбан
5 ht foyad
tnemtaert
5( ht foyad
)noitavresbo
иктусе-21
амеирп
вотараперп
иктусе-21(
)яинедюлбан
21 ht foyad
tnemtaert
21( ht foyad
)noitavresbo
иктусе-5
соп ел
амеирп
вотараперп
иктусе-71(
)яинедюлбан
5 ht tsopyad
tnemtaert
71( ht foyad
)noitavresbo
иктусе-01
елсоп
амеирп
вотараперп
иктусе-22(
)яинедюлбан
01 ht tsopyad
tnemtaert
22( dn foyad
)noitavresbo
яинечелзебеынтовиЖ
tnemtaerttuohtiwslaminA
4,0±1,8 *4,0±3,2
*5,0±3,2 *3,0±6,2 *4,0±0,3 *3,0±8,3 a
suciraglub.LиктелкеындобовС.1
sllecsuciraglub.LeerF.1 *3,0±5,2 *4,0±1,5 a *3,0±0,4 a 3,0±2,7 ba
,suciraglub.LиктелкеындобовС.2
С°08–ирпясеишвинарх
С°08–taderots,sllecsuciraglub.LeerF.2
*4,0±4,2 *4,0±3,5 a *3,0±0,4 a 3,0±0,7 ba
,suciraglub.LиктелкеындобовС.3
С°691–ирпясеишвинарх
С°691–taderots,sllecsuciraglub.LeerF.3
*4,0±5,2 *4,0±2,5 a *3,0±1,4 a 3,0±2,7 ba
»1-СМУС«+suciraglub.LиктелкеындобовС.4
1-SMCS+sllecsuciraglub.LeerF.4 *3,0±1,3 *3,0±0,6 a *4,0±2,5 a 4,0±4,7 ba
»скеброС«+suciraglub.LиктелкеындобовС.5
xebroS+suciraglub.LeerF.5 *4,0±3,3 *3,0±1,6 a *3,0±4,5 a 4,0±4,7 ba
,suciraglub.LиктелкеындобовС.6
»1-СМУС«+,С°08–ирпясеишвинарх
1-SMCS+,С°08–taderots,sllecsuciraglub.LeerF.6
*4,0±4,3 *3,0±3,6 a *4,0±2,5 a 4,0±5,7 ba
иктелкеындобовС.7 suciraglub.L ,
»скеброС«+,С°08–ирпясеишвинарх
xebroS+,С°08–taderots,sllecsuciraglub.LeerF.7
*3,0±1,3 *4,0±3,6 a *3,0±4,5 a 4,0±3,7 ba
иктелкеындобовС.8 suciraglub.L ,
»1-СМУС«+,С°691–ирпясеишвинарх
1-SMCS+,С°691–taderots,sllecsuciraglub.LeerF.8
*4,0±3,3 *4,0±2,6 a *3,0±4,5 a 3,0±4,7 ba
иктелкеындобовС.9 suciraglub.L ,
»скеброС«+,С°691–ирпясеишвинарх
xebroS+,С°691–taderots,sllecsuciraglub.LeerF.9
*3,0±2,3 *3,0±3,6 a *4,0±2,5 a 4,0±5,7 ba
еыннавозилибоммИ.01
иктелк»1-СМУС«ан suciraglub.L
1-SMCShtiwdezilibommI.01 suciraglub.L sllec
ba*3,0±0,4 3,0±8,7 а 3,0±2,7 а 4,0±6,7 а
еыннавозилибоммИ.11
иктелк»ескеброС«ан suciraglub.L
xebroShtiwdezilibommI.11 suciraglub.L sllec
ba*3,0±1,4 4,0±9,7 а 3,0±2,7 а 4,0±6,7 а
»1-СМУС«анеыннавозилибоммИ.21
иктелк suciraglub.L С°08–ирпясеишвинарх,
1-SMCShtiwdezilibommI.21
suciraglub.L С°08–taderots,sllec
ba*4,0±1,4 3,0±8,7 а 4,0±3,7 а 4,0±6,7 а
»ескеброС«анеыннавозилибоммИ.31
иктелк suciraglub.L С°08–ирпясеишвинарх,
xebroShtiwdezilibommI.31
suciraglub.L С°08–taderots,sllec
ba*4,0±2,4 4,0±7,7 а 4,0±2,7 а 4,0±8,7 а
»1-СМУС«анеыннавозилибоммИ.41
иктелк suciraglub.L С°691–ирпясеишвинарх,
1-SMCShtiwdezilibommI.41
suciraglub.L С°691–taderots,sllec
ba*4,0±1,4 4,0±7,7 а 4,0±2,7 а 4,0±7,7 а
»ескеброС«анеыннавозилибоммИ.51
иктелк suciraglub.L С°691–ирпясеишвинарх,
xebroShtiwdezilibommI.51
suciraglub.L С°691–taderots,sllec
ba*4,0±0,4 3,0±8,7 а 3,0±3,7 а 4,0±9,7 а
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 25, №/issue 3, 2015
275
Таблица 2. Содержание Lactobacillus spp. в пристеночном муцине толстой кишки
мышей с химиотерапевтическим дисбиозом кишечника после введения свободных
и иммобилизованных клеток L. bulgaricus и энтеросорбентов, lg КОЕ/г, x ± Sx
Table 2. Content of Lactobacillus spp. in parietal mucin colon of mice with chemotherapeutical
intestinal dysbiosis after injection of free and immobilized L. bulgaricus cells and enterosorbents, lg CFU/g, x ± Sx
Примечание: * – статистически значимые отличия по сравнению с контролем (р < 0,05); а – данными после индукции
дисбиоза; b – данными на 12-е сутки терапии.
Note: * – statistically significant changes (p < 0.05) if compared with control (before dysbiosis); а – after induction of dysbiosis; b – 12th
day of therapy.
)ытараперпясеишвидовв(хынтовижыппурГ
)snoitaraperpdecudortni(slaminafospuorG
оД
иицкудни
азоибсид
erofeB
sisoibsyd
noitcudni
елсопч84
иицкудни
азоибсид
иктусе-1(
)яинедюлбан
tsoph84
sisoibsyd
noitcudni
1( ts foyad
)noitavresbo
иктусе-5
амеирп
вотараперп
иктусе-5(
)яинедюлбан
5 ht foyad
tnemtaert
5( ht foyad
)noitavresbo
иктусе-21
амеирп
вотараперп
иктусе-21(
)яинедюлбан
21 ht foyad
tnemtaert
21( ht foyad
)noitavresbo
иктусе-5
соп ел
амеирп
вотараперп
иктусе-71(
)яинедюлбан
5 ht tsopyad
tnemtaert
71( ht foyad
)noitavresbo
иктусе-01
елсоп
амеирп
вотараперп
иктусе-22(
)яинедюлбан
01 ht tsopyad
tnemtaert
22( dn foyad
)noitavresbo
яинечелзебеынтовиЖ
tnemtaerttuohtiwslaminA
тюувтстусто
tnesba
тюувтстусто
tnesba
тюувтстусто
tnesba
тюувтстусто
tnesba
тюувтстусто
tnesba
тюувтстусто
tnesba
iidraluob.SиктелкеындобовС.1
slleciidraluob.SeerF.1 3,0±0,4 3,0±1,4 40,0±7,0 c тюувтстусто
tnesba
,iidraluob.SиктелкеындобовС.2
С°08–ирпясеишвинарх
С°08–taderots,slleciidraluob.SeerF.2
3,0±8,3 3,0±9,3 20,0±5,0 c тюувтстусто
tnesba
,iidraluob.SиктелкеындобовС.3
С°691–ирпясеишвинарх
С°691–taderots,slleciidraluob.SeerF.3
3,0±9,3 2,0±0,4 30,0±6,0 c тюувтстусто
tnesba
»1-СМУС«+iidraluob.SиктелкеындобовС.4
1-SMCS+slleciidraluob.SeerF.4 2,0±5,3 4,0±9,3 30,0±9,0 c тюувтстусто
tnesba
»скеброС«+iidraluob.SиктелкеындобовС.5
xebroS+iidraluob.SeerF.5 3,0±7,3 2,0±0,4 30,0±9,0 c тюувтстусто
tnesba
,iidraluob.SиктелкеындобовС.6
»1-СМУС«+,С°08–ирпясеишвинарх
eerF.6 iidraluob.S 1-SMCS+,С°08–taderots,sllec
3,0±1,4 4,0±2,4 30,0±8,0 c тюувтстусто
tnesba
,iidraluob.SиктелкеындобовС.7
»скеброС«+,С°08–ирпясеишвинарх
eerF.7 iidraluob.S xebroS+,С°08–taderots,sllec
2,0±9,3 5,0±3,4 30,0±7,0 c тюувтстусто
tnesba
,iidraluob.SиктелкеындобовС.8
»1-СМУС«+,С°691–ирпясеишвинарх
eerF.8 iidraluob.S 1-SMCS+,С°691–taderots,sllec
4,0±9,3 4,0±2,4 30,0±9,0 c тюувтстусто
tnesba
,iidraluob.SиктелкеындобовС.9
»скеброС«+,С°691–ирпясеишвинарх
eerF.9 iidraluob.S xebroS+,С°691–taderots,sllec
4,0±8,3 3,0±4,4 30,0±8,0 c тюувтстусто
tnesba
еыннавозилибоммИ.01
iidraluob.Sиктелк»1-СМУС«ан
slleciidraluob.S1-SMCShtiwdezilibommI.01
3,0±4,6 3,0±7,6 2,0±1,6 2,0±0,3 c
еыннавозилибоммИ.11
iidraluob.Sиктелк»ескеброС«ан
iidraluob.SxebroShtiwdezilibommI.11 sllec
5,0±7,6 4,0±8,6 4,0±0,6 4,0±1,3 c
»1-СМУС«анеыннавозилибоммИ.21
С°08–ирпясеишвинарх,iidraluob.Sиктелк
1-SMCShtiwdezilibommI.21
С°08–taderots,slleciidraluob.S
4,0±2,6 3,0±5,6 4,0±0,6 4,0±9,2 c
»ескеброС«анеыннавозилибоммИ.31
С°08–ирпясеишвинарх,iidraluob.Sиктелк
xebroShtiwdezilibommI.31
С°08–taderots,slleciidraluob.S
3,0±3,6 2,0±6,6 53,0±2,6 3,0±0,3 c
»1-СМУС«анеыннавозилибоммИ.41
С°691–ирпясеишвинарх,iidraluob.Sиктелк
1-SMCShtiwdezilibommI.41
С°691–taderots,slleciidraluob.S
5,0±0,6 4,0±5,6 64,0±9,5 3,0±0,3 c
»ескеброС«анеыннавозилибоммИ.51
С°691–ирпясеишвинарх,iidraluob.Sиктелк
xebroShtiwdezilibommI.51
С°691–taderots,slleciidraluob.S
4,0±1,6 3,0±6,6 52,0±1,6 4,0±8,2 c
276 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 25, №/issue 3, 2015
Таблица 3. Содержание Saccharomyces spp. в пристеночном муцине толстой кишки мышей
с химиотерапевтическим дисбиозом кишечника после введения свободных
и иммобилизованных S. boulardii и энтеросорбентов, lg КОЕ/г, x ± Sx
Table 3. Content of Saccharomyces spp. in parietal mucin colon of mice with chemotherapeutical intestinal
dysbiosis after injection of free and immobilized S. boulardii cells and enterosorbents, lg CFU/g, x ± Sx
Примечание: c – статистически значимые отличия с данными животных, получавших препараты свободных клеток (р < 0,05).
Note: c – statistically significant changes with data of animals, which received free cells preparations (p < 0.05).
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 25, №/issue 3, 2015
277
В группах животных, получавших препараты
S.boulardii, одновременно с персистенцией дрож-
жевых клеток в муцине оценивали наличие бакте-
рий Bifidobacterium spp. и Lactobacillus spp. До
индукции дисбиоза у животных этих групп коли-
чество lg КОЕ/г для бифидобактерий составляло
7,6 ± 0,5, для лактобактерий – 8,0 ± 0,4, а через 48 ч
после окончания введения химиопрепаратов –
2,1 ± 0,4 и 2,4 ± 0,5 соответственно. В муцине жи-
вотных групп 1–3 (см. табл. 4, 5) на 12-е сутки те-
рапии количество lg КОЕ/г для бифидобактерий
составляло 3,3, для лактобактерий – 4,2. Через
10 суток после окончания курса терапии, когда в
муцине дрожжевые клетки уже отсутствовали,
количество бифидобактерий повысилось до 4,3 lg
КОЕ/г, а лактобактерий – до 4,8 lg КОЕ/г. Анало-
гичные результаты наблюдали и у животных групп
4–9, которым вводили смеси клеток S.boulardii
с энтеросорбентами. У животных групп 10–15,
получавших препараты иммобилизованных на
энтеросорбентах клеток S. boulardii, количество lg
КОЕ/г бифидо- и лактобактерий было выше, чем
в группах 1–9. Через 10 суток после лечения
количество дрожжевых клеток в муцине мышей
групп 10–15 снизилось, а количество бифидо- и
лактобактерий повысилось по сравнению с послед-
ними сутками терапии.
Хранение свободных и иммобилизованных кле-
ток S.boulardii в течение года при температурах
–80 и –196°С не влияло на их способность вос-
станавливать популяции ценобионтов Bifidobac-
terium spp. и Lactobacillus spp.
Повышение в муцине количества бифидо- и
лактобактерий после приема нативных и хранив-
шихся при низких температурах свободных и им-
мобилизованных пробиотиков коррелировало с
уменьшением клинических проявлений нарушений
пищеварительных функций ЖКТ. В группах мышей,
получавших иммобилизованные пробиотики,
к 22-м суткам наблюдения клинические проявле-
ния отсутствовали. У 30% животных, получавших
смеси свободных клеток и энтеросорбентов, со-
хранялась полифекалия, а у получавших свобод-
ные клетки пробиотиков – отдельные клинические
проявления, которые были менее выражены, чем
у животных, не получавших после индукции
дисбиоза препараты пробиотиков и энтеросорбен-
тов.
Параллельно с исследованиями по восстанов-
лению популяций ценобионтов Bifidobacterium spp.
и Lactobacillus spp. было проведено сравнительное
микроскопическое изучение муцина толстой кишки
животных всех групп. При микроскопическом ана-
лизе препаратов муцина мышей после индукции
дисбиоза наблюдали характерную картину микро-
simultaneously with studies on the recovery of Bifido-
bacterium spp. and Lactobacillus spp. populations.
Microscopic analysis of the mucin preparations of mice
after dysbiosis induction revealed a characteristic
microbiota of wall layer of the colon, i. e. presence of
single gram-positive and gram-negative bacterial cells
of different structures and a small amount of mucus in
the vision field (Figure 1). Mucin microscopic prepa-
rations did not differ in case of treatments with cells
stored and non-stored at –80 and –196°C, so thereafter
the data for the cells stored at –80°C are provided.
The colon mucin in mice of groups 1–15 to day 12
of treatment (observation day 22) had increased
number of cells, similar in morphology to those of
Bifidobacterium spp. and Lactobacillus spp. (Fig. 2–
4). Some preparations contained the particles of entero-
sorbents.
The yeast cells, bifidobacteria and lactobacilli were
observed in the animals treated with free cells of the
S. boulardii probiotic (groups 1–3) and a mixtures of
yeast cells with enterosorbents (groups 4–9) to day 12
after treatment and in 5 days after finishing the course.
In 5 days after treatment the number of yeast cells
decreased. In 10 days, the yeast cells in mucin were
absent (Fig. 5).
Throughout the observation period, mucin of animals
of the groups of 10–15 treated with immobilized S.
boulardii cells contained yeast cells, enterosorbent
granules without cells and the ones with immobilized
yeast cells, as well as the bifidobacteria and lactobacilli.
The number of yeast cells in mucin in 10 days after
the therapy end was insignificant.
The research results suggest a more pronounced
therapeutic effect of enterosorbent-immobilized
probiotics if compared to free cells. Studying internal
and external mechanisms of formation and preservation
of intestinal natural bacterial homeostasis revealed that
aggregation of microbial cells into conglomerates
(microcolonies) of different size contributed to a suc-
cessful transfer of eubiotics from an external envi-
ronment to a recipient and subsequent formation of
intestinal microbiocenosis [25].
The conglomerates of microbial cells are formed
due to co-adhesion (immobilization of cells on carriers
which do not originate from living tissues). In biological
aspect the colonies originated from conglomerates,
unlike the clones generated from single free cells, are
characterized by heterogenic population and higher
probability of preserving the viability as a part of the
conglomerate when exposed to damaging physical and
chemical factors [11, 26]. Developed experimental
products of enterosorbent-immobilized probiotics are
also conglomerates with an amount of cells on their
surface capable of reproduction in the local site of
biotope. After adhesion of the carrier-cells complexes
Таблица 4. Содержание Bifidobacterium spp. в пристеночном муцине толстой кишки мышей
с химиотерапевтическим дисбиозом кишечника после введения свободных
и иммобилизованных S. boulardii и энтеросорбентов, lg КОЕ/г, x ± Sx
Table 4. Content of Bifidobacterium spp. in parietal mucin colon of mice with chemotherapeutical intestinal
dysbiosis after injection of free and immobilized S. boulardii cells and enterosorbents, lg CFU/g, x ± Sx
Примечание: b – статистически значимые отличия по сравнению с данными на 12-е сутки терапии (р < 0,05).
Note: b – statistically significant changes if compared with data on 12th day of treatment (p < 0.05).
278 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 25, №/issue 3, 2015
)ытараперпясеишвидовв(хынтовижыппурГ
)snoitaraperpdecudortni(slaminafospuorG
иицкудниоД
азоибсид
sisoibsyderofeB
noitcudni
елсопч84
иицкудни
азоибсид
иктусе-1(
)яинедюлбан
tsoph84
sisoibsyd
noitcudni
1( ts foyad
)noitavresbo
иктусе-21
амеирп
вотараперп
иктусе-21(
)яинедюлбан
21 ht foyad
21(tnemtaert ht
foyad
)noitavresbo
иктусе-01
амеирпелсоп
вотараперп
иктусе-22(
)яинедюлбан
01 ht tsopyad
22(tnemtaert dn
foyad
)noitavresbo
яинечелзебеынтовиЖ
tnemtaerttuohtiwslaminA
5,0±6,7 4,0±1,2
3,0±8,2 4,0±6,3 b
iidraluob.SиктелкеындобовС.1
slleciidraluob.SeerF.1 5,0±5,3 4,0±3,4 b
,iidraluob.SиктелкеындобовС.2
С°08–ирпясеишвинарх
С°08–taderots,slleciidraluob.SeerF.2
4,0±3,3 3,0±3,4 b
,iidraluob.SиктелкеындобовС.3
С°691–ирпясеишвинарх
С°691–taderots,slleciidraluob.SeerF.3
5,0±3,3 5,0±5,4 b
»1-СМУС«+iidraluob.SиктелкеындобовС.4
1-SMCS+slleciidraluob.SeerF.4 4,0±8,3 3,0±9,4 b
»скеброС«+iidraluob.SиктелкеындобовС.5
xebroS+iidraluob.SeerF.5 5,0±8,3 4,0±9,4 b
,iidraluob.SиктелкеындобовС.6
»1-СМУС«+,С°08–ирпясеишвинарх
1-SMCS+,С°08–taderots,slleciidraluob.SeerF.6
3,0±8,3 3,0±9,4 b
,iidraluob.SиктелкеындобовС.7
»скеброС«+,С°08–ирпясеишвинарх
xebroS+,С°08–taderots,slleciidraluob.SeerF.7
3,0±8,3 5,0±0,5 b
,iidraluob.SиктелкеындобовС.8
»1-СМУС«+,С°691–ирпясеишвинарх
1-SMCS+,С°691–taderots,slleciidraluob.SeerF.8
4,0±9,3 3,0±9,4 b
,iidraluob.SиктелкеындобовС.9
»скеброС«+,С°691–ирпясеишвинарх
xebroS+,С°691–taderots,slleciidraluob.SeerF.9
5,0±8,3 4,0±19,4 b
еыннавозилибоммИ.01
iidraluob.Sиктелк»1-СМУС«ан
slleciidraluob.S1-SMCShtiwdezilibommI.01
4,0±1,4 3,0±3,5 b
еыннавозилибоммИ.11
iidraluob.Sиктелк»ескеброС«ан
slleciidraluob.SxebroShtiwdezilibommI.11
3,0±2,4 4,0±3,5 b
»1-СМУС«анеыннавозилибоммИ.21
С°08–ирпясеишвинарх,iidraluob.Sиктелк
1-SMCShtiwdezilibommI.21
С°08–taderots,slleciidraluob.S
4,0±3,4 3,0±3,5 b
»ескеброС«анеыннавозилибоммИ.31
С°08–ирпясеишвинарх,iidraluob.Sиктелк
xebroShtiwdezilibommI.31
С°08–taderots,slleciidraluob.S
4,0±3,4 3,0±4,5 b
»1-СМУС«анеыннавозилибоммИ.41
С°691–ирпясеишвинарх,iidraluob.Sиктелк
1-SMCShtiwdezilibommI.41
С°691–taderots,slleciidraluob.S
5,0±1,4 4,0±5,5 b
»ескеброС«анеыннавозилибоммИ.51
С°691–ирпясеишвинарх,iidraluob.Sиктелк
xebroShtiwdezilibommI.51
С°691–taderots,slleciidraluob.S
3,0±3,4 3,0±4,5 b
Таблица5. Содержание Lactobacillus spp. в пристеночном муцине толстой кишки мышей
с химиотерапевтическим дисбиозом кишечника после введения свободных
и иммобилизованных S. boulardii и энтеросорбентов, lg КОЕ/г, x ± Sx
Table 5. Content of Lactobacillus spp. in parietal mucin colon of mice with chemotherapeutical intestinal dysbiosis
after injection of free and immobilized S. boulardii cells and enterosorbents, lg CFU/g, x ± Sx
Примечание: b – статистически значимые отличия по сравнению с данными на 12-е сутки терапии (р < 0,05).
Note: b – statistically significant changes if compared with data on 12th day of treatment (p < 0.05).
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 25, №/issue 3, 2015
279
)ытараперпясеишвидовв(хынтовижыппурГ
)snoitaraperpdecudortni(slaminafospuorG
иицкудниоД
азоибсид
sisoibsyderofeB
noitcudni
елсопч84
иицкудни
азоибсид
иктусе-1(
)яинедюлбан
tsoph84
sisoibsyd
noitcudni
1( ts foyad
)noitavresbo
иктусе-21
амеирп
вотараперп
иктусе-21(
)яинедюлбан
21 ht foyad
21(tnemtaert ht
foyad
)noitavresbo
иктусе-01
амеирпелсоп
п вотарапер
( иктусе-22
)яинедюлбан
01 ht tsopyad
22(tnemtaert dn
foyad
)noitavresbo
яинечелзебеынтовиЖ
tnemtaerttuohtiwslaminA
4,0±0,8 5,0±4,2
3,0±3,2 4,0±0,3 b
iidraluob.SиктелкеындобовС.1
slleciidraluob.SeerF.1 4,0±2,4 4,0±8,4 b
,iidraluob.SиктелкеындобовС.2
С°08–ирпясеишвинарх
С°08–taderots,slleciidraluob.SeerF.2
4,0±1,4 4,0±8,4 b
,iidraluob.SиктелкеындобовС.3
С°691–ирпясеишвинарх
С°691–taderots,slleciidraluob.SeerF.3
3,0±3,4 5,0±9,4 b
»1-СМУС«+iidraluob.SиктелкеындобовС.4
1-SMCS+slleciidraluob.SeerF.4 4,0±5,4 3,0±2,5 b
»скеброС«+iidraluob.SиктелкеындобовС.5
xebroS+iidraluob.SeerF.5 4,0±6,4 3,0±3,5 b
,iidraluob.SиктелкеындобовС.6
»1-СМУС«+,С°08–ирпясеишвинарх
1-SMCS+,С°08–taderots,slleciidraluob.SeerF.6
4,0±5,4 4,0±4,5 b
,iidraluob.SиктелкеындобовС.7
»скеброС«+,С°08–ирпясеишвинарх
xebroS+,С°08–taderots,slleciidraluob.SeerF.7
3,0±5,4 3,0±3,5 b
,iidraluob.SиктелкеындобовС.8
»1-СМУС«+,С°691–ирпясеишвинарх
1-SMCS+,С°691–taderots,slleciidraluob.SeerF.8
3,0±4,4 4,0±3,5 b
,iidraluob.SиктелкеындобовС.9
»скеброС«+,С°691–ирпясеишвинарх
xebroS+,С°691–taderots,slleciidraluob.SeerF.9
4,0±5,4 3,0±4,5 b
еыннавозилибоммИ.01
iidraluob.Sиктелк»1-СМУС«ан
slleciidraluob.S1-SMCShtiwdezilibommI.01
4,0±9,4 3,0±9,5 b
еыннавозилибоммИ.11
iidraluob.Sиктелк»ескеброС«ан
slleciidraluob.SxebroShtiwdezilibommI.11
4,0±9,4 4,0±0,6 b
»1-СМУС«анеыннавозилибоммИ.21
С°08–ирпясеишвинарх,iidraluob.Sиктелк
1-SMCShtiwdezilibommI.21
С°08–taderots,slleciidraluob.S
4,0±9,4 3,0±9,5 b
»ескеброС«анеыннавозилибоммИ.31
С°08–ирпясеишвинарх,iidraluob.Sиктелк
xebroShtiwdezilibommI.31
С°08–taderots,slleciidraluob.S
3,0±5,4 3,0±9,5 b
»1-СМУС«анеыннавозилибоммИ.41
С°691–ирпясеишвинарх,iidraluob.Sиктелк
1-SMCShtiwdezilibommI.41
С°691–taderots,slleciidraluob.S
4,0±0,5 4,0±0,6 b
»ескеброС«анеыннавозилибоммИ.51
С°691–ирпясеишвинарх,iidraluob.Sиктелк
xebroShtiwdezilibommI.51
С°691–taderots,slleciidraluob.S
4,0±1,5 5,0±2,6 b
280 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 25, №/issue 3, 2015
биоты пристеночного слоя толстой
кишки – наличие в поле зрения единич-
ных грамположительных и грамотрица-
тельных микробных клеток разного
строения и небольшое количество слизи
(рис. 1). Микроскопические препараты
муцина после терапии нативными и
хранившимися при температуре –80 и
–196°C клетками не отличались, поэто-
му далее приводятся данные для кле-
ток, которые хранились при –80°C .
В муцине толстой кишки мышей
групп 1–15 на 12-е сутки приема
препаратов (22-е сутки наблюдения)
отмечали увеличение количества кле-
ток, по морфологии сходных с клетками
Bifidobacterium spp. и Lactobacillus
spp. (рис. 2–4). В некоторых препара-
тах присутствовали частицы энтеро-
сорбентов.
У животных, получавших свобод-
ные клетки пробиотика S. boulardii
(группы 1–3) и смеси дрожжевых кле-
ток с энтеросорбентами (группы 4–9),
на 12-е сутки терапии и через 5 суток
после окончания курса наблюдали
дрожжевые клетки, клетки бифидо- или
лактобактерий. Через 5 суток после
окончания лечения количество дрожже-
вых клеток уменьшилось. Через 10 су-
ток дрожжевые клетки в муцине отсут-
ствовали (рис. 5).
В муцине животных групп 10–15, по-
лучавших препараты иммобилизован-
ных клеток S. boulardii, на протяжении
всего срока наблюдений выявлялись
дрожжевые клетки, гранулы энтеросор-
бентов без клеток и с иммобилизован-
ными дрожжевыми клетками, а также
клетки бифидо- или лактобактерий.
Количество дрожжевых клеток в муци-
не через 10 суток после окончания
курса терапии было незначительным.
Результаты исследования позволяют
сделать вывод о более выраженном
терапевтическом действии иммобили-
зованных на энтеросорбентах пробио-
тиков по сравнению со свободными
to the intestinal mucosa the microcolonies are formed
with a specific architecture: probiotic cells – entero-
sorbent granule – mucin – epithelium. During the
reproduction the probiotic cells colonize the adjacent
mucosa areas. In the adhesion sites of the complexes
their metabolites are accumulated which inhibit the
growth of opportunistic pathogenic and pathogenic
microflora, and intra- and inter-species cooperative
Рис. 1. Муцин толстой кишки мышей: A – до индукции дисбиоза;
B – после индукции дисбиоза. ×400.
Fig. 1. Murine colon mucin: A – before dysbiosis induction; B – after
dysbiosis induction. ×400.
A B
Рис. 2. Муцин толстой кишки мышей с дисбиозом после терапии
препаратами свободных клеток B.bifidum (B) и L. bulgaricus (L),
хранившимися при –80°C: B1, L1 – 12-е сутки терапии; B2, L2 –
через 10 суток после окончания терапии; ×400.
Fig. 2. Colon mucin of mice with dysbiosis after treatment with prepara-
tions of free cells B. bifidum (B) and L. bulgaricus (L), stored at –80°C:
B1, L1 – day 12 of therapy; B2, L2 – in 10 days after therapy end; ×400.
клетками. При изучении внешних и внутренних
механизмов формирования и сохранения естест-
венного бактериального гомеостаза кишечника ус-
тановлено, что успешному переносу эубиотиков из
внешней среды реципиенту и последующему
формированию кишечного микробиоценоза спо-
собствует агрегирование микробных клеток в раз-
ные по размеру конгломераты (микроколонии) [9].
B1 B2
L1 L2
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 25, №/issue 3, 2015
281
Известно, что конгломераты мик-
робных клеток формируются за счет
ко- или соадгезии (иммобилизация кле-
ток на носителях, не являющихся
структурными компонентами живых
тканей). В биологическом плане обра-
зованные из конгломератов колонии, в
отличие от клонов, происходящих от
единичных свободных клеток, характе-
ризуются гетерогенностью популяции
и бoльшей вероятностью сохранения
жизнеспособности при воздействии по-
вреждающих физико-химических фак-
торов в составе конгломерата [9, 20].
Разработанные экспериментальные
препараты иммобилизованных на энтеро-
сорбентах пробиотиков также являют-
ся конгломератами, в которых на по-
верхности носителей находится доза
клеток, способных к репродукции в
локальном участке биотопа. После ад-
гезии комплексов «носитель-клетки»
к слизистой кишечника формируются
микроколонии со специфической архи-
тектоникой: клетки пробиотиков –
гранула энтеросорбента – муцин – эпи-
телий слизистой. По мере репродукции
клетки пробиотиков заселяют приле-
гающие участки слизистой. В зоне
адгезии комплекса накапливаются их
метаболиты, подавляющие рост услов-
но-патогенной и патогенной микрофлоры,
и устанавливаются внутри- и межвидо-
вые кооперативные связи с другими
эубиотическими сочленами кишечного
микробиоценоза. По мере освобожде-
ния от иммобилизованных клеток про-
биотиков энтеросорбент может реали-
зовать и детоксикационную функцию,
адсорбируя из кишечника токсины. Все
перечисленные процессы способст-
вуют восстановлению популяций цено-
бионтов. При этом речь не идет о се-
лективном заселении муцина штамма-
ми пробиотиков, которые вводили в
кишечник. В экспериментах с пробио-
тиками B. bifidum и L. bulgaricus (см.
табл. 1, 2) мы не имели технической
возможности идентифицировать виды
и штаммы бифидо- или лактобактерий
из биоптатов слизистой животных
через 10 суток после окончания тера-
пии. Популяции Bifidobacterium spp. и
Lactobacillus spp. могут восстановить-
ся за счет как вводимых штаммов, так
B1 B2
B3 B4
Рис. 3. Муцин толстой кишки мышей с дисбиозом после терапии
cмесями энтеросорбентов и клеток, хранившихся при –80°С : В1 –
B. bifidum +«Сорбекс» (12-е сутки терапии); В2 – B.bifidum + «Сор-
бекс» (через 10 суток после окончания терапии); В3 – B. bifidum +
«СУМС-1» (12-е сутки терапии); В4 – B. bifidum + «СУМС-1» (через
10 суток после окончания терапии); L1 – L. bulgaricus + «Сорбекс»
(12-е сутки терапии); L2 – L. bulgaricus + «Сорбекс» (через 10 суток
после окончания терапии); L3 – L. bulgaricus + «СУМС-1» (12-е
сутки терапии); L4 – L. bulgaricus + «СУМС-1» (через 10 суток после
окончания терапии); ×400.
Fig. 3. Colon mucin of mice with dysbiosis after treatment with mix-
tures of enterosorbents and the cells stored at –80°C: B1 – B. bifidum
+ Sorbex ( day 12 of therapy); B2 – B. bifidum + Sorbex (10 days later
the therapy end); B3 – B. bifidum + SCMS-1 (day 12 of therapy); B4 –
B. bifidum + SCMS-1 (10 days later the therapy end); L1 – L. bulgaricus
+ Sorbex (day 12 of therapy); L2 – L. bulgaricus + Sorbex (10 days later
the therapy end); L3 – L. bulgaricus + SCMS-1 (day 12 of treatment);
L4 – L. bulgaricus + SCMS-1 (10 days later the therapy end ); ×400.
L1 L2
L3 L4
282 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 25, №/issue 3, 2015
и других видов этих бактерий, которые сохранились
в кишечнике после индукции дисбиоза. Существует
другой более вероятный вариант, поскольку цено-
бионты (представители аутомикрофлоры) имеют
больше преимуществ при установлении симбиоти-
ческих отношений с организмом хозяина [10, 21, 22].
Дрожжи S.cerevisiae не относятся к микробиоте
теплокровных животных и не способны адгезиро-
relationships are established with other eubiotic co-
members of intestinal microbiocenosis. With the release
of immobilized cells of probiotics the enterosorbent
could realize its detoxification function as well, by
adsorbing toxins from the intestines. All these proces-
ses contribute to the restoration of cenobiont popula-
tions. Nevertheless, there is no selective populating of
mucin with the strains of probiotics which were
B1 B2
Рис. 4. Муцин толстой кишки мышей с
дисбиозом после терапии препаратами
пробиотиков, иммобилизованных на энте-
росорбентах: В1 – B. bifidum – «Сорбекс»
(12-е сутки терапии); В2 – B. bifidum – «Сор-
бекс» (через 10 суток после окончания
терапии); В3 – B. bifidum – «СУМС-1» (12-е
сутки терапии); В4 – B. bifidum – «СУМС-1»
(через 10 суток после окончания терапии);
L1 – L. bulgaricus – «Сорбекс» (12-е сутки
терапии); L2 – L. bulgaricus – «Сорбекс»
(через 10 суток после оконча-ния терапии);
L3 – L. bulgaricus – «СУМС-1» (12-е сутки
терапии); L4 – L. bulgaricus – «СУМС-1»
(через 10 суток после окончания терапии);
×400.
Fig. 4. Colon mucin of mice with dysbiosis
after therapy with probiotics immobilized on
enterosorbents: B1 – B. bifidum – Sorbex
(day 12 of therapy); B2 – B. bifidum – Sorbex
(10 days later the therapy); B3 – B. bifidum –
SCMS-1 ( day 12 of therapy); B4 – B. bifidum –
SCMS-1 (10 days later the therapy end); L1 –
L. bulgaricus – Sorbex (day 12 of therapy);
L2 – L. bulgaricus – Sorbex (10 days later the
therapy); L3 – L. bulgaricus – SCMS-1 (day
12 of therapy); L4 – L. bulgaricus – SCMS-1
(10 days later the therapy); ×400.
B3 B4
L1 L2
L3 L4
вать к слизистой кишечника [26, 27, 31], однако
клиническая эффективность их применения для
лечения ряда патологий взрослых и острых гаст-
роэнтеритов, а также предотвращения антибиотик-
связанной диареи у детей описана в ряде исследо-
ваний и метаанализах [25, 26, 30]. Применение
S. cerevisiae рекомендовано Европейским общест-
вом детской гастроэнтерологии, гепатологии и
питания (ESPGHAN) и Европейским обществом
детских инфекций [31].
В данной работе показано, что введение живот-
ным с экспериментальным дисбиозом свободных
клеток S.boulardii, смесей свободных клеток с
энтеросорбентами и клеток, иммобилизованных на
энтеросорбентах, способствовало повышению в
муцине количества бифидо- и лактобактерий
(см. табл. 4). При этом на 22-е сутки наблюдения
концентрация бифидо- или лактобактерий была
близка к значениям до формирования дисбиоза.
introduced into the intestine. In the experiments with
B. bifidum and L. bulgaricus probiotics (see Table 1
and 2) we had no technical possibilities to identify the
species and strains of bifidobacteria or lactobacilli in
the mucosal biopsies of the animals 10 days later the
end of therapy. The populations of Bifidobacterium
spp. and Lactobacillus spp. could recover both due
to the strains introduced and as well as other types of
bacteria surviving in the gut after dysbiosis induction.
The second option is more likely because cenobionts
(automicroflora representatives) have more advan-
tages in establishing a symbiotic relationship with the
host body [14, 15, 17].
S. cerevisiae yeasts are not referred to microbiota
of homoiothermal animals and are not able to adhere
to intestinal mucosa [12, 13, 27], but their clinical
efficacy during treatment of several pathologies in
adults, as well as acute gastroenterites and prevention
of antibiotic-associated diarrhea in children is described
Рис. 5. Муцин толстой кишки мышей с
дисбиозом после терапии препаратами
S. boulardii, иммобилизованных на энтеро-
сорбентах после хранения при –80°C : S1 –
S. boulardii – «Сорбекс» (12-е сутки
терапии); S2 – S. boulardii – «Сорбекс»
(через 5 суток после окончания терапии);
S3 – S. boulardii – «Сорбекс» (через 10 суток
после окончания терапии); S4 – S. boular-
dii – «СУМС-1» (12-е сутки терапии); S5 –
S. boulardii – «СУМС-1» (через 5 суток пос-
ле окончания терапии); S6 – S. boulardii –
«СУМС-1» (через 10 суток после окончания
терапии); ×400.
Fig. 5. Colon mucin of mice with dysbiosis
after therapy with S. boulardii preparations,
immobilized on enterosorbents after storage
at –80°C: S1 – S. boulardii – Sorbex (day 12
of therapy); S2 – S. boulardii – Sorbex (5 days
later the therapy end); S3 – S. boulardii –
Sorbex (10 days later the therapy end); S4 –
S. boulardii – SCMS-1 (day 12 of therapy);
S5 – S. boulardii – SCMS-1 (5 days later the
therapy end); S6 – S. boulardii – SCMS-1 (10
days later the therapy end); ×400.
S3 S4
S1 S2
S5 S6
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 25, №/issue 3, 2015
283
В работе также отмечена роль комплексов «носи-
тель-клетки» как депо «транзиторного» пробиоти-
ка, который элиминирует из кишечника через
определенное время после введения. Комплексы
адгезируют к муцину слизистой оболочки поверх-
ностью носителя. В этом локусе микроколония
дрожжевых клеток, иммобилизованных на носите-
ле, благодаря своим специфическим свойствам [29]
подавляет условно-патогенную и патогенную мик-
рофлору, создает условия для заселения слизистой
бифидо- или лактобактериями и их дальнейшей
репродукции. Под действием продвигающегося по
просвету кишечника химуса происходит десорбция
дрожжевых клеток с носителей и последующая их
элиминация. Об этом свидетельствует снижение
концентрации дрожжевых клеток через 10 суток
после окончания курса терапии на 2,8–3,1 lg КОЕ/г
в муцине животных групп 10–15.
Хранение препаратов при температурных режи-
мах –80 и –196°C не влияет на колонизационные
свойства бифидо-, лактобактерий и способность
носителей-энтеросорбентов адгезировать к слизис-
той кишечника. В отличие от препаратов свобод-
ных клеток пробиотиков и частиц или гранул
энтеросорбентов комплексы «носитель-клетки»
представляют собой качественно новый препарат,
имеющий преимущества при введении в ЖКТ.
Данные исследования могут быть использованы
в разработке новых классов коммерческих препа-
ратов пробиотиков.
Выводы
Препараты пробиотиков, иммобилизованных на
энтеросорбентах, обеспечивают более быстрое и
полное восстановление популяций ценобионтов
Bifidobacterium spp. и Lactobacillus spp. у живот-
ных с экспериментальным дисбиозом кишечника
по сравнению с препаратами свободных клеток и
смесей свободных клеток с энтеросорбентами.
Выраженный терапевтический эффект иммобили-
зованных на энтеросорбентах пробиотиков связан
с тем, что они представляют собой конгломераты,
в которых на поверхности носителя находится
репродуктивная доза клеток. Комплексы «носи-
тель-клетки» адгезируют к муцину слизистой, а
сформировавшиеся в этих локусах микроколонии
пробиотиков создают условия, необходимые для
восстановления популяций ценобионтов.
Хранение при температуре –80, –196°C в тече-
ние года не влияло на колонизационные свойства
бактерий B. bifidum, L. bulgaricus и на способ-
ность дрожжей S.boulardii к персистенции в му-
цине слизистой. Данные температурные режимы
можно использовать для долгосрочного хранения
жидких форм пробиотических препаратов, иммоби-
лизованных на сорбентах.
in several studies and meta-analyzes [10, 12, 21]. Appli-
cation of S. cerevisiae is recommended by the Euro-
pean Society of Pediatric Gastroenterology, Hepatology
and Nutrition (ESPGHAN) and the European Society
for Paediatric Infectious Diseases [27].
This study demonstrates that the animals with
experimental dysbiosis treated with free S.boulardii
cells, mixtures of free cells with enterosorbents and
the ones immobilized on enterosorbents had an increa-
sed amount of bifidobacteria and lactobacilli in mucin
(see Table 4). The concentration of bifidobacteria or
lactobacilli to observation day 22 was close to the va-
lues prior to the dysbiosis formation. The carrier-cells
complexes served also as as a depot of ‘transient’ pro-
biotic, leaving the intestine in a certain time after
introduction. The complexes adhered to the mucous
membrane mucin by the carrier surface. Due to its
specific properties [19] the microcolony of yeast cells
immobilized on a carrier, suppressed opportunistic
pathogenic and pathogenic microflora, provided the
conditions for populating mucosa with bifidobacteria
or lactobacilli and their subsequent reproduction. Under
the influence of chyme advancing through the intestine
lumen there was a desorption of yeast cells from the
carriers and their following elimination. This was evi-
denced by a reduced concentration of yeast cells
10 days later the therapy end by 2.8–3.1 lg CFU/g in
mucin of the animals of groups 10–15.
Storage of the products at temperatures of –80 and
–196°C did not affect the colonization properties of
bifidobacteria, lactobacilli and the ability of the carriers-
enterosorbents to adhere to intestinal mucosa. Unlike
the preparations of free cells of probiotics and particles
or granules of enterosorbents the carrier-cells comple-
xes are a novel medical prodcut providing the benefits
when administered into a digestive tract. These studies
can be used when developing new classes of probiotic
commercial products.
Conclusions
The preparations of probiotics immobilized on
enterosorbents provide a rapid and complete recovery
of Bifidobacterium spp. and Lactobacillus spp.
cenobiont populations in animals with experimental
intestinal dysbiosis compared to the preparations of
free cells and the mixtures of free cells with entero-
sorbents. A significant therapeutic effects of enterosor-
bent-immobilized probiotics is due to the fact that they
are conglomerates representing a carrier with a
reproductive dose of cells on its surface. The carrier-
cells complexes adhere to mucosal mucin and the
microcolonies of probiotics formed in these loci provide
the conditions which are necessary for the recovery
of cenobiont populations.
Storage at –80, –196°C for one year did not affect
the colonizing properties of B. bifidum, L. bulgaricus
284 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 25, №/issue 3, 2015
Литература
1. Ардатская М.Д. Пре- и пробиотики в коррекции микроэко-
логических нарушений кишечника // Фарматека. – 2011. –
Т. 225, №12. – С. 62–68.
2. Бабинец О.М. Коррекция экспериментального дисбиоза
препаратами пробиотиков, иммобилизованными на энте-
росорбентах, после их низкотемпературного хранения //
Вісник проблем біології і медицини. – 2012. – Вип. 4, Т. 1,
Ч. 2. – С. 72–78.
3. Бабинец О.М. Оценка свойств пробиотиков, иммобили-
зованных на энтеросорбентах, после низкотемператур-
ного хранения // Вісник проблем біології і медицини. –
2012. – Вип. 3, Ч. 2. – С. 48–53.
4. Бондаренко А.В. Корекція дисбіотичних станів і стабілізація
мікробіоти // Проблеми безперевної мед. освіти та науки. –
2014. – №2. – С. 77–80.
5. Бондаренко В.М. Обоснование и тактика назначения в ме-
дицинской практике различных форм пробиотических пре-
паратов // Фарматека. – 2012. – Т. 246, №13. – С. 77–87.
6. Волков М.Ю. Эффективные формы пробиотиков, иммоби-
лизованных на природных адсорбентах // Пищевые ингре-
диенты. Сырье и добавки. – 2007. – №1. – С. 48–51.
7. Воробьев А.А., Несвижский Ю.В., Буданова Е.В., Зуден-
ков А.Е. Сравнительное изучение пристеночной и про-
светной микрофлоры толстой кишки в эксперименте на
мышах // Журнал микробиологии, эпидемиологии и имму-
нобиологии. – 2001. – №1. – С. 62–67.
8. Высеканцев И.П., Бабинец О.М., Марценюк В.Ф., Шатило-
ва Л.Е. Сравнительное изучение адсорбции стандартных
маркеров и пробиотиков Saccharomyces boulardii и Bifido-
bacterium bifidum на энтеросорбентах // Вісник проблем
біології і медицини. – 2011. – Вип. 1. – С. 58–62.
9. Григорьев А.В. Общие принципы формирования кишечного
микробиоценоза человека // Мед. всесвіт. – 2002. – №1–2. –
С. 168–173.
10.Дисбиоз кишечника. Руководство по диагностике и лече-
нию. – 2-е изд., испр. и доп. / Под ред. Е.И. Ткаченко,
А.Н. Суворова. – СПб: Информ Мед, 2009. – 276 с.
11.Дранник Г.Н., Курченко А.И., Дранник А.Г. Иммунная сис-
тема слизистых, физиологическая микрофлора и пробио-
тики. – К.: Полиграф Плюс, 2009. – 143 с.
12.Ермоленко Е.И., Донец В.Н., Дмитриева Ю.В. и др. Влияние
пробиотических энтерококков на функциональные харак-
теристики кишечника крыс при дисбиозе, индуцированном
антибиотиками // Вестник Санкт-Петербург. ун-та. –
2009. – Сер. 11: Медицина, №1. – С. 157–167.
13.Западнюк И.П., Западнюк В.И., Захария Е.А., Запад-
нюк Б.В. Лабораторные животные. Разведение, содержа-
ние, использование в эксперименте.– 3-е изд., перераб.
и доп. – К.: Вища шк., 1983. – 383 с.
14.Клинические аспекты диагностики и лечения дисбиоза
кишечника в общетерапевтической практике: Учеб.-
метод. пособие / Под ред. В.И. Симаненко. – СПб, 2003. –
36 с.
15.Луста К.А., Фихте Б.А. Методы определения жизнеспособ-
ности микроорганизмов. – Пущино: ОНТИ НЦБИ АН СССР,
1990. – 186 с.
16.Медицинская микробиология. Ч. 1 / Под ред. А.М. Королюка,
В.Б. Сбойчакова. – СПб: ЭЛБИ–СПб, 2002. – 267 с.
17.Морозов И.А. Проблемы морфологической диагностики
Helicobacter pylori в желудке // Рос. журнал гастроэнтеро-
логии. – 1999. – №2. – С. 46–48.
18.Поляк М.С., Сухаревич В.И., Сухаревич М.Э. Питательные
среды для медицинской микробиологии. – СПб, 2008. –
С. 53–56.
19.Соловьева И.В., Точилина А.Г., Белова И.В. и др. Конст-
руирование иммобилизованной формы жидкого пробио-
тика // Вестник Нижегород. ун-та им. Н.И. Лобачевского:
Микробиология и эпидемиология. – 2012. – №2, Ч. 3. –
С. 85–92.
References
1. Ardatskaya M.D. Prebiotics and probiotics in correction of
microecological violations of intestinal tract. Pharmateca 2011;
225(12): 62–68.
2. Babinets O.M. Correction of dysbiosis by preparations of
probiotics immobilized on enterosorbents after their low-
temperature storage. Visnyk Problem Biologii i Meditsyny 2012;
Issue 4, 1 (96): 72–78.
3. Babinets O.M. Estimation of properties of probiotics immobilized
on enterosorbents after low-temperature storage. Visnyk
Problem Biologii i Meditsyny 2012; (3, Part 2): 48–53.
4. Bondarenko A.V. Correction of dysbiotic states and stabilizing
of microbiota. Problemy Bezperervnoyi Med Osvity ta Nauky
2014; (2): 77–80.
5. Bondarenko V.M. Substantiation and tactics of administration
of different forms of probiotic preparations in medical practice.
Pharmateca. 2012; 246 (13): 77–87.
6. Collins M.D., Gibson G.R. Probiotics, prebiotics, and synbiotics:
approaches for modulating the microbial ecology of the gut.
Am J Clin Nutr 1999; 69 (5): 1052S–1057S.
7. Ding W.K., Shah N.P. Effect of various encapsulating materials
on the stability of probiotic bacteria. J Food Sci 2009;
74(2):100–107.
8. Dranik G.N., Kurchenko A.I., Dranik A.G. Mucosal immune
system, the physiological microflora and probiotics. Kiev:
Poligraf plus; 2009.
9.Ermolenko E.I., Donets V.N., Dmitrieva Yu.V. et al. Effect of
probiotic enterococci on the functional characteristics of the
rat intestinal dysbiosis when induced by antibiotics. Vestnik of
St. Petersburg University, Ser. 11: Medicine 2009; (1): 157–167.
10.Floch M.H. Recommendations for probiotic use in humans – A
2014 update. Pharmaceuticals 2014; 7 (10): 999–1007.
11.Grigoryev A.V. General principles of the human intestinal
microbiota. Med Vsesvit 2002; (1–2): 168–173.
12.Guarner F., Khan A.G., Garisch J. et al. World Gastroenterology
Organisation Global Guidelines: probiotics and prebiotics,
october 2011. J Clin Gastroenterol 2012; 46 (6): 468–481.
13.Guidelines for the evaluation of probiotics in food: Report of a
joint FAO/WHO working group on drafting guidelines for the
evaluation of probiotics in food. London, Ontario, Canada;
2002.
14.Intestinal dysbiosis. Guidelines for the diagnosis and treatment.
St. Petersburg: InformMed; 2009.
15.Jankowski D.S. Microbial ecology of man: contemporary pos-
sibilities of its maintenance and recovery. Kiev: Expert LTD;
2005.
16.Kailasapathy K. Microencapsulation of Probiotic Bacteria:
Technology and potential applications. Curr Issues Intest Micro-
biology 2002; 3 (2): 39–48.
17.Kharchenko N.V., Chernenko V.V., Yankovsky D.S.,
Dyment G.S. Role of the intestinal microflora in the development
of chronic diseases of the gastrointestinal tract. Zhurnal
Praktychnogo Likarya 2003; (4): 20–27.
18.Korolyuk A.M., Sboychakov V.B., editors. Medical microbiology.
Part 1. St.-Petersburg: Meditsyna; 2002.
19.Krasowska A., Murzyn A., Dyjankiewicz A. et al. The anta-
gonistic effect of Saccharomyces boulardii on Candida albi-
cans filamentation, adhesion and biofilm formation. FEMS Yeast
Research 2009; 9(8): 1312–1321.
20.Lusta K.A., Fichte B.A. Methods for determining the viability of
microorganisms. Pushchino; 1990.
bacteria and the ability of the S. boulardii yeast to
persistence in the mucosa mucin. These temperature
conditions can be used for long-term storage of liquid
forms of sorbent-immobilized probiotic preparations.
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 25, №/issue 3, 2015
285
20.Тутченко Л.І., Отт В.Д., Марушко Т.Л. та ін. Особливості
формування системи мікробіоценозу у новонароджених
та немовлят та шляхи його оптимізації // Журнал практич-
ного лікаря. – 2003. – №5. – С. 24–30.
21.Харченко Н.В., Черненко В.В., Янковский Д.С., Дымент Г.С.
Роль кишечной микрофлоры в развитии хронических забо-
леваний желудочно-кишечного тракта // Журнал практич-
ного лікаря. – 2003. – №4. – С. 20–27.
22.Янковский Д.С. Микробная экология человека: современ-
ные возможности ее поддержания и восстановления. –
К.: Эксперт Лтд, 2005. – 362 с.
23.Collins M.D., Gibson G.R. Probiotics, prebiotics, and synbiotics:
approaches for modulating the microbial ecology of the gut //
Am. J. Clin. Nutr. – 1999. – Vol. 69, №5. – P. 1052S–1057S.
24.Ding W.K., Shah N.P. Effect of various encapsulating materials
on the stability of probiotic bacteria // J. Food Sci. – 2009.–
Vol. 74, №2. – P. 100–107.
25.Floch M.H. Recommendations for probiotic use in humans –
A 2014 Update // Pharmaceuticals. – 2014. – Vol. 7, №10. –
P. 999–1007.
26. Guarner F., Khan A.G., Garisch J. et al. World Gastroenterology
Organisation Global Guidelines: probiotics and prebiotics,
October 2011 // J. Clin. Gastroenterol. – 2012. – Vol. 46, №6. –
P. 468–481.
27.Guidelines for the evaluation of probiotics in food: Report of a
joint FAO/WHO working group on drafting guidelines for the
evaluation of probiotics in food. – London, Ontario, Canada,
2002. – 11 p.
28.Kailasapathy K. Microencapsulation of probiotic bacteria:
technology and potential applications // Curr. Issues Intest.
Microbiology. – 2002. – Vol. 3, №2. – Р. 39–48.
29.Krasowska A., Murzyn A., Dyjankiewicz A. et al. The antago-
nistic effect of Saccharomyces boulardii on Candida albicans
filamentation, adhesion and biofilm formation // FEMS Yeast
Research. – 2009. – Vol. 9, №8. – P. 1312–1321.
30.Micklefield G. Saccharomyces boulardii in the treatment and
prevention of antibiotic-associated diarrhea // MMW Fortschr.
Med. – 2014. – Vol. 156, №13. – P. 61.
31.Vandenplas Y., Brunser O., Szajewska H. Saccharomyces
boulardii in childhood // Eur. J. Pediatr. – 2009. – Vol. 168,
№3. – P. 253–265.
32.Williams N.T. Probiotics // Am. J. Health Sys. Pharm. – 2010. –
Vol. 67, №6. – P. 449–458.
21.Micklefield G. Saccharomyces boulardii in the treatment and
prevention of antibiotic-associated diarrhea. MMW Fortschr
Med 2014; 156 (13): 61.
22.Morozov I.A. Problems of Helicobacter pylori morphological
diagnosis in the stomach. Russian Journal of Gastroente-
rology 1999; (2): 46–48.
23.Polyak M.S., Sukharevich M.E., Sukharevich V.I. Culture media
for medical microbiology. SPb; 2008: 53–56.
24.Simanenko V.I., editor. Clinical aspects of diagnosis and
treatment of intestinal dysbiosis in general therapeutic
practice. St. Petersburg; 2003.
25.Solovyeva I.V., Tochilina A.G., Belova I.V. et al. Construction
of an immobilized form of the liquid probiotic. Vestnik of Nizhny
Novgorod University named after N.I. Lobachevsky: Micro-
biology and Epidemiology 2012; (2, part 3): 85–92.
26.Tutchenko L.I., Ott V.D., Marushko T.L. et al. Peculiarities of
microbiocenosis formation process in infants and newborns
and the ways of its optimization. Zhurnal Praktychnogo Likarya
2003; (5): 24–30.
27.Vandenplas Y., Brunser O., Szajewska H. Saccharomyces
boulardii in childhood. Eur J Pediatr 2009; 168 (3): 253–265.
28.Volkov M.Yu. Effective forms of probiotics immobilized on
natural adsorbents. Pischevye Ingredienty. Syrio i Dobavki
2007; (1): 48–51.
29.Vorob'ev A.A., Nesvizhskii Iu.V., Zudenkov A.E., Budano-
va E.V. Comparative study of parietal and lumen microflor in
the large intestine in experiments on mice. Zhurnal Mikrobiologii,
Epidemiologii i Immunologii 2001 Jan–Feb; (1): 62–67.
30.Vysekantsev I.P., Babinets O.M., Martsenyuk V.P., Shatilo-
va L.E. Comparative study of adsorption of standard markers
and Saccharomyces boulardii, Bifidobacterium bifidum pro-
biotics on enterosorbents. Visnyk Problem Biologii i Meditsyny
2011; Issue 1: 58–62.
31.Williams N.T. Probiotics. Am J Health Sys Pharm 2010; 67(6):
449–458.
32.Zapadnyuk I.P., Zapadnyuk V.I., Zacharias E.A., Zapad-
nyuk B.V. Laboratory animals. Breeding, keeping and use in
experiment. Kiev: Vyshcha shkola, 1983: 383.
286 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 25, №/issue 3, 2015
|