Использование антиоксиданта N-ацетил-L-цистеина при криоконсервировании ядросодержащих клеток кордовой крови
Saved in:
| Published in: | Проблемы криобиологии и криомедицины |
|---|---|
| Date: | 2016 |
| Main Authors: | , , |
| Format: | Article |
| Language: | Russian |
| Published: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2016
|
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/137433 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Использование антиоксиданта N-ацетил-L-цистеина при криоконсервировании ядросодержащих клеток кордовой крови / Е.Е. Макашова, О.Л. Зубова, П.М. Зубов // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2016. — Т. 26, № 2. — С. 183. — рос. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1860187944294285312 |
|---|---|
| author | Макашова, Е.Е. Зубова, О.Л. Зубов, П.М. |
| author_facet | Макашова, Е.Е. Зубова, О.Л. Зубов, П.М. |
| citation_txt | Использование антиоксиданта N-ацетил-L-цистеина при криоконсервировании ядросодержащих клеток кордовой крови / Е.Е. Макашова, О.Л. Зубова, П.М. Зубов // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2016. — Т. 26, № 2. — С. 183. — рос. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Проблемы криобиологии и криомедицины |
| first_indexed | 2025-12-07T18:05:10Z |
| format | Article |
| fulltext |
Использование антиоксиданта N-ацетил-L-цистеина при
криоконсервировании ядросодержащих клеток кордовой крови
Е.Е. Макашова, О.Л. Зубова, П.М. Зубов
Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины, г. Харьков
Use of N-Acetyl-L-Cysteine Antioxidant in Cryopreservation
of Cord Blood Nucleated Cells
E.Ye. Makashova, O.L. Zubova, P.M. Zubov
Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine
of the National Academy of Sciences of Ukraine, Kharkiv, Ukraine
Использование клеточных препаратов кордовой
крови (КК) в клинической практике вызывает необходи-
мость их долгосрочного хранения. Общепринятым
криопротектором для криоконсервирования ядросодер-
жащих клеток (ЯСК) кордовой крови является ДМСО,
который при определенных условиях может оказывать
токсический эффект, в частности нарушать оксидантно-
прооксидантное равновесие, усиливать образование
активных форм кислорода (АФК), способствовать разви-
тию окислительного стресса и гибели клеток [Fry L.J.,
2015]. Для предотвращения избыточного накопления
содержания АФК в клетках перспективным направле-
нием может оказаться добавление в криозащитную среду
антиоксидантов, одним из которых является N-ацетил-L-
цистеин (АЦ) [Chaudhari A.A., 2007].
Цель данной работы – определение количества ЯСК
КК с избыточным содержанием АФК и их жизнеспособ-
ности на разных этапах криоконсервирования в криопро-
текторных растворах, содержащих разные концентрации
ДМСО и АЦ.
В работе использовали КК человека. Фракцию ЯСК
КК выделяли седиментацией с использованием 6%-го
раствора полиглюкина. Суспензию клеток обрабатывали
25%-м раствором ДМСО до конечных концентраций 5;
7,5; 10% и охлаждали со скоростью 1–3 град/мин до
–80°С с последующим погружением в жидкий азот.
N-ацетил-L-цистеин присутствовал в средах криоконсер-
вирования в концентрациях 5, 10, 15 и 30 ммоль. Коли-
чество клеток с избыточным содержанием АФК опре-
деляли методом проточной цитофлуориметрии по
накоплению 2',7'-дихлорфлуресцеина. Жизнеспособ-
ность клеток оценивали с помощью ДНК-красителя 7-AAD.
После размораживания препаратов ЯСК КК было
выявлено, что добавление 5 ммоль раствора АЦ в крио-
протекторные среды не приводило к значимым измене-
ниям количества клеток с избыточным содержанием
АФК. N-ацетил-L-цистеин в концентрации 30 мМ также
не проявлял антиоксидантного действия, а в некоторых
случаях даже наблюдался его прооксидантный эффект.
Добавленный в среду криоконсервирования АЦ в кон-
центрации 10–15 мМ способствовал значимому умень-
шению количества клеток с избыточным содержанием
АФК после размораживания. При этом наименьшее
количество ЯСК КК с избыточным содержанием АФК
отмечалось при использовании 10 мМ АЦ в сочетании с
7,5% (8,7 ± 1,5 (без АЦ – 20,6 ± 3,2)) и 10% ДМСО (8,3 ± 0,9
(без АЦ – 21,2 ± 1,9)). Жизнеспособность клеток при этом
возросла на 7–14% по сравнению с соответствующими
контрольными группами без АЦ.
Таким образом, добавление в суспензию клеток АЦ
в концентрации 10–15 мМ способствует снижению
уровня АФК, а значит – предотвращению развития окис-
лительного стресса и, тем самым, повышению эффектив-
ности криоконсервирования.
The use of cord blood (CB) cell preparations in clinical
practice necessitates their long-term storage. DMSO is
traditionally used as cryoprotective agent to cryopreserve
the nucleated cells (NCs) of cord blood. DMSO can be toxic
under certain conditions, in particular, it can break the oxi-
dant-prooxidant balance, enhance the formation of reactive
oxygen species (ROS), contribute to the development of
oxidative stress and cell death [Fry L.J., 2015]. An excessive
accumulation of ROS in cells could be prevented by supple-
mentation of antioxidants to cryoprotective media
[Chaudhari A.A., 2007]. One of those is N-acetyl-L-cysteine
(NAC).
This research was aimed to determine the content of CB
NCs with an excessive ROS content and their viability at
different stages of cryopreservation in cryoprotective solu-
tions containing different concentrations of DMSO and
NAC.
In the research we used human CB. The fraction of CB
NCs was isolated by sedimentation using 6% Polyglucinum
solution. The cell suspension was supplemented with 25%
DMSO solution up to its final concentrations of 5; 7.5; 10%,
cooled at 1–3 deg/min down to –80°C, and then immersed
into liquid nitrogen. N-acetyl-L-cysteine was added to
cryopreservation media up to the concentrations of 5, 10,
15 and 30 mM. The number of cells with excessive ROS was
determined by flow cytometry by accumulation of 2',7'-
dichlorofluorescein. Cell viability was assessed by 7-AAD
DNA dye.
After thawing of the CB NCs preparations it was revea-
led that presence of 5 mM NAC solution in cryoprotective
media did not lead to significant changes in the number of
cells with excessive ROS content. N-acetyl-L-cysteine in
concentration of 30 mM also did not demonstrate any anti-
oxidant activity, and in some cases there was even observed
a prooxidant effect. Presence of 10–15 mM NAC in cryopre-
servation medium resulted in a sharp decrease in the cell
number with excessive ROS after thawing. As well the least
number of CB NCs with an excessive ROS content was
observed when 10 mM NAC was in combination with 7.5%
(8.7 ± 1.5 (without NAC 20.6 ± 3.2)) and 10% DMSO (8 3 ±
0.9 (without NAC 21.2 ± 1.9)). Herewith, cell viability
increased by 7–14% if compared with the corresponding
control groups without NAC.
Thus, supplementation of cell suspension with NAC in
concentration of 10–15 mM contributed to the reduction of
ROS level and consequently to the prevention of oxidative
stress, thereby to enhancing the efficiency of cryopre-
servation.
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 26, №/issue 2, 2016
183
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-137433 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7673 |
| language | Russian |
| last_indexed | 2025-12-07T18:05:10Z |
| publishDate | 2016 |
| publisher | Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Макашова, Е.Е. Зубова, О.Л. Зубов, П.М. 2018-06-17T11:20:20Z 2018-06-17T11:20:20Z 2016 Использование антиоксиданта N-ацетил-L-цистеина при криоконсервировании ядросодержащих клеток кордовой крови / Е.Е. Макашова, О.Л. Зубова, П.М. Зубов // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2016. — Т. 26, № 2. — С. 183. — рос. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/137433 ru Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии и криомедицины Тезисы Использование антиоксиданта N-ацетил-L-цистеина при криоконсервировании ядросодержащих клеток кордовой крови Use of N-acetyl-L-cysteine antioxidant in cryopreservation of cord blood nucleated cells Article published earlier |
| spellingShingle | Использование антиоксиданта N-ацетил-L-цистеина при криоконсервировании ядросодержащих клеток кордовой крови Макашова, Е.Е. Зубова, О.Л. Зубов, П.М. Тезисы |
| title | Использование антиоксиданта N-ацетил-L-цистеина при криоконсервировании ядросодержащих клеток кордовой крови |
| title_alt | Use of N-acetyl-L-cysteine antioxidant in cryopreservation of cord blood nucleated cells |
| title_full | Использование антиоксиданта N-ацетил-L-цистеина при криоконсервировании ядросодержащих клеток кордовой крови |
| title_fullStr | Использование антиоксиданта N-ацетил-L-цистеина при криоконсервировании ядросодержащих клеток кордовой крови |
| title_full_unstemmed | Использование антиоксиданта N-ацетил-L-цистеина при криоконсервировании ядросодержащих клеток кордовой крови |
| title_short | Использование антиоксиданта N-ацетил-L-цистеина при криоконсервировании ядросодержащих клеток кордовой крови |
| title_sort | использование антиоксиданта n-ацетил-l-цистеина при криоконсервировании ядросодержащих клеток кордовой крови |
| topic | Тезисы |
| topic_facet | Тезисы |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/137433 |
| work_keys_str_mv | AT makašovaee ispolʹzovanieantioksidantanacetillcisteinaprikriokonservirovaniiâdrosoderžaŝihkletokkordovoikrovi AT zubovaol ispolʹzovanieantioksidantanacetillcisteinaprikriokonservirovaniiâdrosoderžaŝihkletokkordovoikrovi AT zubovpm ispolʹzovanieantioksidantanacetillcisteinaprikriokonservirovaniiâdrosoderžaŝihkletokkordovoikrovi AT makašovaee useofnacetyllcysteineantioxidantincryopreservationofcordbloodnucleatedcells AT zubovaol useofnacetyllcysteineantioxidantincryopreservationofcordbloodnucleatedcells AT zubovpm useofnacetyllcysteineantioxidantincryopreservationofcordbloodnucleatedcells |