Влияние инкубации с криопротекторами на присутствие эпитопа Gal-alpha-1,3-Gal в клетках линии PK-15
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Проблемы криобиологии и криомедицины |
|---|---|
| Дата: | 2016 |
| Автори: | , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Russian |
| Опубліковано: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2016
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/137451 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Влияние инкубации с криопротекторами на присутствие эпитопа Gal-alpha-1,3-Gal в клетках линии PK-15 / К.И. Богуславский, Н.М. Алабедалькарим, А.В. Пахомов, Г.А. Божок // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2016. — Т. 26, № 2. — С. 191. — рос. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-137451 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Богуславский, К.И. Алабедалькарим, Н.М. Пахомов, А.В. Божок, Г.А. 2018-06-17T11:52:08Z 2018-06-17T11:52:08Z 2016 Влияние инкубации с криопротекторами на присутствие эпитопа Gal-alpha-1,3-Gal в клетках линии PK-15 / К.И. Богуславский, Н.М. Алабедалькарим, А.В. Пахомов, Г.А. Божок // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2016. — Т. 26, № 2. — С. 191. — рос. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/137451 ru Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии и криомедицины Тезисы Влияние инкубации с криопротекторами на присутствие эпитопа Gal-alpha-1,3-Gal в клетках линии PK-15 Effect of incubation of PK-15 cells with cryoprotectants on presence of Gal-alpha-1,3-Gal epitope Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Влияние инкубации с криопротекторами на присутствие эпитопа Gal-alpha-1,3-Gal в клетках линии PK-15 |
| spellingShingle |
Влияние инкубации с криопротекторами на присутствие эпитопа Gal-alpha-1,3-Gal в клетках линии PK-15 Богуславский, К.И. Алабедалькарим, Н.М. Пахомов, А.В. Божок, Г.А. Тезисы |
| title_short |
Влияние инкубации с криопротекторами на присутствие эпитопа Gal-alpha-1,3-Gal в клетках линии PK-15 |
| title_full |
Влияние инкубации с криопротекторами на присутствие эпитопа Gal-alpha-1,3-Gal в клетках линии PK-15 |
| title_fullStr |
Влияние инкубации с криопротекторами на присутствие эпитопа Gal-alpha-1,3-Gal в клетках линии PK-15 |
| title_full_unstemmed |
Влияние инкубации с криопротекторами на присутствие эпитопа Gal-alpha-1,3-Gal в клетках линии PK-15 |
| title_sort |
влияние инкубации с криопротекторами на присутствие эпитопа gal-alpha-1,3-gal в клетках линии pk-15 |
| author |
Богуславский, К.И. Алабедалькарим, Н.М. Пахомов, А.В. Божок, Г.А. |
| author_facet |
Богуславский, К.И. Алабедалькарим, Н.М. Пахомов, А.В. Божок, Г.А. |
| topic |
Тезисы |
| topic_facet |
Тезисы |
| publishDate |
2016 |
| language |
Russian |
| container_title |
Проблемы криобиологии и криомедицины |
| publisher |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Effect of incubation of PK-15 cells with cryoprotectants on presence of Gal-alpha-1,3-Gal epitope |
| issn |
0233-7673 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/137451 |
| citation_txt |
Влияние инкубации с криопротекторами на присутствие эпитопа Gal-alpha-1,3-Gal в клетках линии PK-15 / К.И. Богуславский, Н.М. Алабедалькарим, А.В. Пахомов, Г.А. Божок // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2016. — Т. 26, № 2. — С. 191. — рос. |
| work_keys_str_mv |
AT boguslavskiiki vliânieinkubaciiskrioprotektoraminaprisutstvieépitopagalalpha13galvkletkahliniipk15 AT alabedalʹkarimnm vliânieinkubaciiskrioprotektoraminaprisutstvieépitopagalalpha13galvkletkahliniipk15 AT pahomovav vliânieinkubaciiskrioprotektoraminaprisutstvieépitopagalalpha13galvkletkahliniipk15 AT božokga vliânieinkubaciiskrioprotektoraminaprisutstvieépitopagalalpha13galvkletkahliniipk15 AT boguslavskiiki effectofincubationofpk15cellswithcryoprotectantsonpresenceofgalalpha13galepitope AT alabedalʹkarimnm effectofincubationofpk15cellswithcryoprotectantsonpresenceofgalalpha13galepitope AT pahomovav effectofincubationofpk15cellswithcryoprotectantsonpresenceofgalalpha13galepitope AT božokga effectofincubationofpk15cellswithcryoprotectantsonpresenceofgalalpha13galepitope |
| first_indexed |
2025-11-24T16:26:14Z |
| last_indexed |
2025-11-24T16:26:14Z |
| _version_ |
1850482649973391360 |
| fulltext |
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 26, №/issue 2, 2016
191
Влияние инкубации с криопротекторами на присутствие эпитопа
Gal-alpha-1,3-Gal в клетках линии PK-15
К.И. Богуславский, Н.М. Алабедалькарим, А.В. Пахомов, Г.А. Божок
Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины, г. Харьков
Effect of Incubation of PK-15 Cells with Cryoprotectants
on Presence of Gal-alpha-1,3-Gal Epitope
K.I. Bohuslavskyi, N.M. Alabedalkarim, A.V. Pakhomov, G.A. Bozhok
Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine
of the National Academy of Sciences of Ukraine, Kharkiv, Ukraine
Эпитоп Gal-alpha-1,3-Gal (α-Gal) – это углеводная
структура, которая экспрессируется в организме млеко-
питающих, кроме человека и некоторых видов обезьян.
Для получения и хранения животного биоматериала,
предназначенного для изготовления биопротезов, при-
меняются технологии низкотемпературного хранения.
Однако сведения о его влиянии на присутствие α-Gal
практически отсутствуют.
Цель данной работы – изучение влияния инкубации
с криопротекторами диметилсульфоксидом (ДМСО) и
оксиэтилированным глицерином (ОЭГ) как первого эта-
па криоконсервирования на присутствие α-Gal в культуре
клеточной линии свиного происхождения PK-15.
Линию клеток PK-15 поддерживали в стандартных
условиях с использованием среды DMEM/F12, обогащен-
ной антибиотиками и 10% фетальной телячьей сыворот-
кой. Для эксперимента клеточный монослой открепляли
от подложки с помощью смеси 0,5% трипсина и раствора
Версена (1:1). После отмывки от фермента клетки ресус-
пендировали и инкубировали в растворах, содержащих
ДМСО в концентрации 5, 7,5 и 10% или ОЭГ (n = 5) в
концентрации 5, 10 и 15%. После отмывания от криопро-
тектора клетки окрашивали с помощью FITC-конъюгиро-
ванного изолектина BSI-B4, который добавляли к пробам
в разведениях 1:150, 1:250 и 1:500. Клетки анализировали
на проточном цитофлуориметре «FACS Calibur» («BD»,
США) с использованием программного обеспечения
«CellQuestPro» (США) и «WinMDI 2.8» (США).
С помощью метода цитофлуориметрии в культуре
PK-15 выявлены две субпопуляции клеток (R1 и R2),
обладающие разными параметрами прямого (FSC) и
бокового (SSC) светорассеяния. Установлено, что клетки
R1 связывали изолектин BSI-B4 в меньшей степени, чем
клетки R2. В связи с этим в дальнейших экспериментах
клетки анализировали по двум отдельным регионам как
имеющие низкую BSI-B4low (R1) и высокую BSI-B4high (R2)
интенсивность флуоресценции.
После инкубации с ДМСО во всех концентрациях
количество BSI-B4-позитивных клеток в обоих регионах
значимо не отличалось от контроля. После инкубации с
ОЭГ во всех концентрациях наблюдалось увеличение
количества BSI-B4-позитивных клеток в R1, тогда как в
клетках R2 не было обнаружено значимой разницы по
сравнению с контрольными значениями.
Результаты работы свидетельствуют о возможности
модификации клеточной поверхности в присутствии
криопротекторов. Предположительно, это может проис-
ходить за счет нескольких факторов: структурных или
конформационных изменений эпитопа α-Gal, что влияет
на связывание антител с ним; увеличения доступности
эпитопов α-Gal для связывания с антителами.
The Gal-alpha-1,3-Gal (α-Gal) epitope is a carbohydrate
structure, expressing in mammalian body, except human and
some monkey species. Procurement and storage of animal
biomaterial for bioprostheses manufacture involves low
temperature storage technologies. However, the information
about their effects on α-Gal presence is poor.
This research aim was to study the effect of incubation
with dimethyl sulfoxide (DMSO) and oxyethylated glycerol
(OEG) cryoprotectants as the first stage of cryopreservation
on α-Gal presence in PK-15 cell line culture of porcine origin.
The PK-15 cell line was maintained under the standard
conditions using DMEM/F12, supplemented with antibio-
tics and 10% fetal calf serum. Before the experiment the cell
monolayer was detached from the substrate with a mixture
of 0.5% trypsin and Versene solutions (1:1). After enzymes
washing-out the cells were resuspended and incubated in
the solutions containing either 5, 7.5 and 10% DMSO or 5,
10 and 15% OEG (n = 5). After washing of cryoprotectants
the cells were stained with FITC-conjugated isolectin BSI-
B4, added to the samples at 1:150, 1:250 and 1:500 dilutions.
Cells were analyzed with BD FACS Calibur flow cytometer
(USA) using CellQuestPro (USA) and WinMDI 2.8 (USA)
softwares.
Two cell subpopulations (R1 and R2) with different
parameters of direct (FSC) and side (SSC) light scattering
were revealed in PK-15 culture using flow cytometry. The
R1 cells were established to bind isolectin BSI-B4 in a lower
degree than R2 ones. Due to this fact in further experiments
we analyzed the cells by two separate regions with low and
high intensities of fluorescence BSI-B4low (R1) BSI-B4high
(R2).
After incubation with DMSO in all the concentrations a
number of BSI-B4-positive cells in both regions was not
significantly different from the control. After incubation
with OEG in all the concentrations we observed an increased
number of BSI-B4-positive cells in R1, meanwhile in R2 cells
no significant difference as compared to the control values
were revealed.
Our findings testify to the possibility of modifying the
cell surface in the presence of cryoprotectants. This can
presumably occur due to either structural or conformational
changes in α-Gal epitope, affecting the binding of anti-
bodies; or due to an increased α-Gal epitope availability to
antibodies.
|